通过建立鱼类主要过敏原小清蛋白(parvalbumin,PV)磷酸化反应的条件,研究磷酸化对PV的抗原性及结构影响。将PV和葡萄糖-6-磷酸二钠盐(D-glucose-6-phosphate disodium salt hydrate,G6P-Na2)混合,在不同质量比、反应时间以及反应温度条...通过建立鱼类主要过敏原小清蛋白(parvalbumin,PV)磷酸化反应的条件,研究磷酸化对PV的抗原性及结构影响。将PV和葡萄糖-6-磷酸二钠盐(D-glucose-6-phosphate disodium salt hydrate,G6P-Na2)混合,在不同质量比、反应时间以及反应温度条件下进行干法磷酸化反应。采用Tricine-十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和Dot-blotting检验其聚合类型以及抗原性变化。通过扫描电镜对聚合物的微观结构进行分析,利用圆二色谱仪和ANS探针法分析磷酸化产物的二级结构和疏水性变化。结果显示,在PV与G6P-Na2质量比为1∶4、反应温度80℃、反应时间80 min条件下生成的磷酸化产物的抗原性最低。磷酸化反应后,产物呈现聚集状态,其二级结构变化较为明显,疏水性明显提高。磷酸化反应对蛋白结构的改变可能是影响PV抗原性降低的主要原因。展开更多
土壤磷酸酶对有机磷的矿化及植物的磷素营养有重要影响。目前测定土壤磷酸酶活性采用的基质主要有磷酸苯二钠(CAS编号:3279-54-7)和对硝基苯磷酸二钠(CAS编号:4264-83-9)两种。国际上对土壤磷酸酶活性的测定普遍采用对硝基苯磷酸二钠,...土壤磷酸酶对有机磷的矿化及植物的磷素营养有重要影响。目前测定土壤磷酸酶活性采用的基质主要有磷酸苯二钠(CAS编号:3279-54-7)和对硝基苯磷酸二钠(CAS编号:4264-83-9)两种。国际上对土壤磷酸酶活性的测定普遍采用对硝基苯磷酸二钠,而国内大部分学者主要采用磷酸苯二钠。由于不同类型的基质对磷酸酶活性的测定结果有很大影响,所以选择适宜的基质种类对磷酸酶活性进行测定有很大的不确定性。为探讨碱性磷酸酶活性的测定方法,以磷酸苯二钠和对硝基苯磷酸二钠为基质,选用酸性、中性和碱性土壤各10个土样,比较了依据《土壤酶及其研究法》(DPP1),《Method in Soil Biology》(DPP2)和《Methods of Soil Enzymology》(PNPP)书中所介绍的测定方法所获结果之间的差异。结果表明:三种方法所测的三种类型土壤磷酸酶活性的变化趋势基本一致,但不同土壤之间差异性的变化幅度有明显不同。在酸性土壤和碱性土壤中,DPP1和DPP2所测十个土样碱性磷酸酶活性之间的变异系数属于中度变异,而PNPP则属于高度变异;在中性土壤中,DPP1和DPP2属于低度变异,PNPP属于中度变异。总的来看,PNPP比DPP1和DPP2敏感。此外,由于PNPP具有高精确度、培养时间短和实验操作简便等优点,我们建议采用PNPP进行碱性磷酸酶活性的测定。展开更多
文摘通过建立鱼类主要过敏原小清蛋白(parvalbumin,PV)磷酸化反应的条件,研究磷酸化对PV的抗原性及结构影响。将PV和葡萄糖-6-磷酸二钠盐(D-glucose-6-phosphate disodium salt hydrate,G6P-Na2)混合,在不同质量比、反应时间以及反应温度条件下进行干法磷酸化反应。采用Tricine-十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和Dot-blotting检验其聚合类型以及抗原性变化。通过扫描电镜对聚合物的微观结构进行分析,利用圆二色谱仪和ANS探针法分析磷酸化产物的二级结构和疏水性变化。结果显示,在PV与G6P-Na2质量比为1∶4、反应温度80℃、反应时间80 min条件下生成的磷酸化产物的抗原性最低。磷酸化反应后,产物呈现聚集状态,其二级结构变化较为明显,疏水性明显提高。磷酸化反应对蛋白结构的改变可能是影响PV抗原性降低的主要原因。
文摘土壤磷酸酶对有机磷的矿化及植物的磷素营养有重要影响。目前测定土壤磷酸酶活性采用的基质主要有磷酸苯二钠(CAS编号:3279-54-7)和对硝基苯磷酸二钠(CAS编号:4264-83-9)两种。国际上对土壤磷酸酶活性的测定普遍采用对硝基苯磷酸二钠,而国内大部分学者主要采用磷酸苯二钠。由于不同类型的基质对磷酸酶活性的测定结果有很大影响,所以选择适宜的基质种类对磷酸酶活性进行测定有很大的不确定性。为探讨碱性磷酸酶活性的测定方法,以磷酸苯二钠和对硝基苯磷酸二钠为基质,选用酸性、中性和碱性土壤各10个土样,比较了依据《土壤酶及其研究法》(DPP1),《Method in Soil Biology》(DPP2)和《Methods of Soil Enzymology》(PNPP)书中所介绍的测定方法所获结果之间的差异。结果表明:三种方法所测的三种类型土壤磷酸酶活性的变化趋势基本一致,但不同土壤之间差异性的变化幅度有明显不同。在酸性土壤和碱性土壤中,DPP1和DPP2所测十个土样碱性磷酸酶活性之间的变异系数属于中度变异,而PNPP则属于高度变异;在中性土壤中,DPP1和DPP2属于低度变异,PNPP属于中度变异。总的来看,PNPP比DPP1和DPP2敏感。此外,由于PNPP具有高精确度、培养时间短和实验操作简便等优点,我们建议采用PNPP进行碱性磷酸酶活性的测定。