青蒿素调控Cav1.2/CaM/CaMKⅡ通路对心房纤颤模型大鼠的治疗作用

目的:分析青蒿素通过调节Cav1.2/钙调蛋白(calmodulin,CaM)/2型钙调蛋白激酶(Ca^2+/calmodulin-dependent protein kinaseⅡ,CaMKⅡ)通路对心房纤颤(atrial fibrillation,AF)大鼠模型的治疗作用。方法:从60只SD大鼠中随机挑选出50只尾静脉注射乙酰胆碱(acetyl choline,Ach)和氯化钙(CaCl 2)混合液建立大鼠AF模型。建模成功后随机分为模型组、阳性对照组、青蒿素高剂量组、青蒿素中剂量组、青蒿素低剂量组,剩余10只为空白组。阳性对照组以维拉帕米6.36 mg溶于2 mL生理盐水后灌胃,每天1次;青蒿素高剂量组、青蒿素中剂量组和青蒿素低剂量组分别以青蒿素8 mg、4 mg和2 mg溶于2 mL生理盐水后灌胃,每天1次;模型组和空白组给予2 mL生理盐水灌胃。每天1次,连续给药28 d。大鼠给药期间继续尾静脉注射Ach-CaCl 2。给药后使用生物机能系统记录大鼠肢体Ⅱ导联心电图测AF持续时间;给药后使用Landendrff设备检测大鼠心房肌有效不应期;HE染色观察大鼠心房肌组织病理变化;RT-qPCR检测Cav1.2、CaM、CaMKⅡ、2型兰尼碱受体(ryanodine recepyor 2,RyR2)mRNA表达;通过蛋白免疫印迹法检测Cav1.2、CaM、CaMKⅡ、RyR2蛋白表达及2型兰尼碱受体磷酸化(phosphorylated-ryanodine recepyor 2,p-RyR2)水平。结果:AF持续时间比较:模型组大鼠AF持续时间显著长于空白组(P<0.05),阳性对照组和青蒿素各剂量组短于模型组且长于空白组(P<0.05),青蒿素高剂量组、青蒿素中剂量组短于阳性对照组、青蒿素低剂量组(P<0.05),青蒿素高剂量组短于模型组(P<0.05)。有效不应期比较:模型组显著短于空白组(P<0.05),阳性对照组、青蒿素各剂量组均长于模型组且短于空白组(P<0.05),其中青蒿素高剂量组、青蒿素中剂量组长于阳性对照组、青蒿素低剂量组(P<0.05),青蒿素高剂量组长于模型组(P<0.05)。HE染色结果:模型组心肌细胞病变严重,阳性对照组、青蒿素各剂量组病变程度均有所减轻,青蒿素高剂量组与空白组结果相近。Cav1.2 mRNA和蛋白表达比较:模型组Cav1.2 mRNA和蛋白表达显著低于空白组(P<0.05),阳性对照组、青蒿素各剂量组均高于模型组且低于空白组(P<0.05),青蒿素高剂量组、青蒿素中剂量组高于阳性对照组、青蒿素低剂量组(P<0.05),青蒿素高剂量组高于模型组(P<0.05)。CaM、CaMKⅡmRNA和蛋白表达及p-RyR2水平比较:模型组CaM、CaMKⅡmRNA和蛋白表达及p-RyR2水平高于空白组(P<0.05),阳性对照组、青蒿素各剂量组均低于模型组且高于空白组(P<0.05),青蒿素高剂量组、青蒿素中剂量组低于阳性对照组、青蒿素低剂量组(P<0.05),青蒿素高剂量组低于模型组(P<0.05)。结论:青蒿素能显著延长心房有效不应期,缩短大鼠AF持续时间,推测青蒿素通过上调Cav1.2钙离子通道表达水平,下调CaM和CaMKⅡ的表达水平,导致p-RyR2水平被抑制,从而对大鼠AF起到治疗效果。