穿龙薯蓣皂苷抑制再生障碍性贫血p-mTOR/p-S6的机制研究

目的:探讨穿龙薯蓣皂苷对再障小鼠p-m TOR、p-S6基因及其蛋白表达的影响,解析其治疗再障的机制。方法:健康BALB/c小鼠按随机数字表法分为7组(正常组、模型组、西药对照环孢菌素组、中药对照雷公藤多苷组、穿龙薯蓣皂苷低、中、高剂量组),建立再障小鼠模型,连续给药14 d,全自动生化仪测血常规,分离培养骨髓单个核细胞,应用实时定量基因扩增荧光检测系统(QPCR)检测p-m TOR、p-S6的基因表达;应用Western Blot技术检测p-m TOR、p-S6的蛋白表达。结果:与正常对照组比较,模型组WBC、HGB、PLT计数均显著降低,治疗后各治疗组血象均不同程度上升,与模型组比较,模型组小鼠的p-m TOR、p-S6基因及蛋白表达显著上调,各组均明显高于正常组,治疗后各组均下调。穿龙薯蓣皂苷中、高剂量治疗组、Cs A组p-m TOR基因及蛋白表达与模型组比较差异有统计学意义,穿龙薯蓣皂苷组以中剂量组p-S6基因表达下调最多,疗效最好,优于中药对照雷公藤组,次于西药对照环孢菌素A组,差异有统计学意义。结论:穿龙薯蓣皂苷能下调再障小鼠p-m TOR、p-S6基因及蛋白表达,从而抑制T淋巴细胞的异常激活,发挥免疫抑制作用,改善骨髓造血功能。

P-S6K1在肺癌的表达及其意义

目的检测磷酸化核糖体40S小亚基S6蛋白激酶(phosphorylation of p70 S6 kinase,P-S6K1)在肺癌中的表达状况,探讨影响P-S6K1表达的相关病理特征及临床意义。方法使用免疫组化En Vision法检测100例肺癌组织P-S6K1的表达,20例正常肺组织为对照。统计分析P-S6K1的表达与临床病理特征的关系。结果17/21例(81.0%)小细胞肺癌P-S6K1表达阳性,45/79例(57.0%)非小细胞肺癌P-S6K1表达阳性。3/20例(15%)正常肺组织P-S6K1表达为阳性。P-S6K1的表达与肺癌的病理分型、组织分化程度有关(P<0.05),与性别、肿瘤的解剖部位、淋巴结转移状态、肿瘤的大小、肿瘤TNM分期无关(P>0.05)。结论P-S6K1在肺癌中高表达,其中小细胞肺癌表达较非小细胞肺癌高。P-S6K1可作为鉴别肺癌与肺部良性疾病的一个新指标。

IL-17、p-S6在狼疮性肾炎患者肾脏组织中的表达

目的研究IL-17及mTOR信号途径下游的靶蛋白磷酸化S6核糖体蛋白(p-S6)在狼疮性肾炎(LN)肾脏组织中的表达情况及与LN的分型、活动度的相关性。方法采用免疫组化双染技术检测35例LN患者肾组织中IL-17、p-S6的表达水平,显微图像软件采集图像,IPP(Image-Pro Plus 6.0)软件半定量分析,结果用累积光密度IOD值表示。用SPSS 17.0软件包进行统计学分析。结果 LN肾脏组织中IL-17及p-S6表达水平分别为(4311.6392±3082.1136)和(577.0585±399.8158),二者的表达呈正相关关系(r=0.800,P<0.01);p-S6表达水平与肾脏病理活动指数存在负相关关系(r=-0.432,P<0.05);与LN肾脏病理分型也不全相同,即Ⅲ型>Ⅵ型>Ⅳ型(P<0.01);肾外活动组p-S6的表达水平低于肾外稳定组(P<0.05)。结论 LN患者肾脏组织中存在IL-17、p-S6高表达,mTOR信号通路活化;对于SLEDAI评分低、LN持续不缓解的患者,mTOR信号通路抑制剂雷帕霉素治疗可能更有意义。

萝卜硫素通过p-mTOR/p-S6信号通路增强CD8^+记忆细胞前体细胞的分化

目的:检测萝卜硫素(sulforaphane, SFN)对CD8^+T细胞分化、表型及胞内因子分泌的影响并探讨其可能的调控机制。方法:在体外培养实验中,按照SFN处理的剂量分为对照(0 mmol/L)组、SFN 10 mmol/L组、SFN 20 mmol/L组。采用流式细胞术检测SFN对CD8^+T细胞分化、表型及胞内因子分泌的影响以及mTOR siRNA对CD8^+T细胞CD127和LKRG1表达的影响;采用q RT-PCR检测抗凋亡因子Bcl-2和Bcl-6的表达水平,Annexin-V/PI双染法检测SFN对CD8^+T细胞凋亡的影响,Western blotting检测信号通路蛋白p-mTOR、p-S6以及内参b-actin蛋白的表达。结果:SFN促进CD8^+记忆细胞前体细胞的形成、显著降低CD8^+T细胞PD-1和Tim-3的表达水平(P<0.01)。同时,SFN处理后抗凋亡基因Bcl-2和Bcl-6的表达显著增加、CD8^+T细胞的凋亡受到显著抑制,p-mTOR和p-S6蛋白表达水平也显著降低(P<0.05或P<0.01)。此外,SFN能够增加促炎性细胞因子IL-2、IFN-g、TNF-a的分泌(P<0.05)。mTOR siRNA能够显著增加CD127表达及降低LKRG1表达水平(均P<0.01)。结论:SFN可能通过抑制pmTOR信号通路促进CD8^+记忆细胞前体细胞的形成,获得更多年轻化的T细胞,为临床免疫细胞治疗提供新的思路。

乳腺癌中LAT1和p-s6的表达及其意义

目的探讨L型氨基酸转运子1(LAT1)和磷酸化s6(phospho-s6,p-s6)核糖体蛋白在乳腺癌组织中的表达、意义及两者的相关性。方法采用免疫组化En Vision两步法检测178例乳腺癌组织和78例乳腺良性病变组织中LAT1蛋白和p-s6蛋白的表达,分析两者的表达与乳腺癌临床病理特征的关系。结果乳腺癌组织中LAT1的阳性率为36.5%,显著高于乳腺良性病变组织(23.1%,P<0.05);p-s6在乳腺癌组织中的阳性率为33.2%,显著高于乳腺良性病变组织(12.8%,P<0.05);乳腺癌组织中LAT1蛋白和p-s6蛋白的表达呈正相关(r=0.345,P<0.05)。乳腺癌中LAT1蛋白表达与肿瘤直径、腋窝淋巴结转移、TNM分期和HER-2水平相关(P均<0.05),与患者年龄、组织学分级、ER、PR水平均无关(P均>0.05);p-s6蛋白表达与腋窝淋巴结转移、TNM分期、患者年龄、ER水平相关(P均<0.05);与肿瘤直径、组织学分级、PR、HER-2水平等无关(P均>0.05)。多因素分析显示:LAT1蛋白表达与肿瘤直径、HER-2表达水平有关;p-s6蛋白表达与腋窝淋巴结转移有关。结论LAT1蛋白和p-s6蛋白在乳腺癌中表达上调,且两者的表达呈正相关,提示LAT1和p-s6在乳腺癌发生、发展的过程可能发挥一定的协同作用。

p-mTOR、p-4EBP1及p-S6K1在结直肠腺癌组织中的表达及临床意义

目的研究p-mTOR、p-4EBP1及p-S6K1在结直肠腺癌发生、发展过程中可能的作用及临床意义。方法应用免疫组化检测60例结直肠腺癌组织及40例癌旁正常组织中p-mTOR、p-4EBP1及p-S6K1的表达情况,比较各组差异,分析其与相关临床病理特征的关系,阳性率间相关性分析采用Spearman相关分析检验,检验水准α=0.05。结果p-mTOR、p-4EBP1及p-S6K1在结直肠腺癌组织中表达水平均高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。p-mTOR的表达与患者的淋巴结转移、TNM分期及分化程度有关(P<0.05)。p-S6K1的表达与患者的TNM分期及分化程度有关(P<0.05)。p-mTOR与p-4EBP1在结直肠腺癌组织中的表达有一定的正相关性(P<0.05)。p-mTOR与p-S6K1在结直肠腺癌组织中的表达有明显的正相关性(P<0.05)。结论p-mTOR、p-4EBP1及p-S6K1在结直肠腺癌粘膜组织中过度表达可能是结直肠腺癌发生的重要机制之一,此三种磷酸化蛋白与结直肠腺癌的发生发展存在某种内在关联。

乳腺癌p-Akt、p-S6K1和ER表达对雷帕霉素治疗敏感性的预测

目的:研究对mTOR信号通路抑制剂雷帕霉素敏感的乳腺癌的临床病理特征。方法:免疫组织化学方法检测乳腺癌60例石蜡包埋组织中p-Akt、p-S6K1和雌激素受体的表达。以p-Akt或p-S6K1表达预测对雷帕霉素敏感,并探讨这部分病例的临床病理特征。结果:乳腺癌60例中,p-Akt阳性表达25例(41.7%),p-S6K1阳性表达21例(35.0%)。预测乳腺癌32例(53.3%)对雷帕霉素治疗敏感。具有雷帕霉素敏感表达特征的乳腺癌常常同时表达雌激素受体。结论:约半数乳腺癌病例可能对雷帕霉素敏感,且是雌激素受体表达阳性病例。

p-mTOR、p-4EBP1及p-S6K1在甲状腺乳头状癌组织中的表达及临床意义

目的研究p-mTOR、p-4EBP1及p-S6K1在甲状腺乳头状癌及癌旁(肿瘤边缘2 cm)组织中的表达;分析它们的表达情况,探讨它们在甲状腺乳头状癌发生、发展过程中可能的作用及临床意义。方法收集2017年12月—2019年6月包头市肿瘤医院60例甲状腺乳头状癌组织为观察组,40例癌旁(肿瘤边缘2 cm)组织为对照组,应用免疫组化的实验方法检测两组研究对象中的p-mTOR、p-4EBP1及p-S6K1的表达情况。结果p-mTOR阳性率:观察组76.7%;对照组47.5%;(χ^2=8.970,P<0.05)。p-4EBP1阳性率:观察组38.3%;对照组15.0%(χ^2=6.350,P<0.05)。p-S6K1阳性率:观察组48.3%;对照组20.0%(χ^2=8.270,P<0.05)。p-mTOR、p-4EBP1及p-S6K1在甲状腺乳头状癌组织中表达水平均高于癌旁组织(P<0.05)。结论p-mTOR、p-4EBP1及p-S6K1在甲状腺乳头状癌组织中过度表达可能是甲状腺乳头状癌发生发展的重要机制之一,此3种磷酸化蛋白可能与甲状腺乳头状癌的发生发展存在某种内在关联。

补肾健脾化瘀中药对难治/复发再生障碍性贫血患者骨髓CD3^(+)T淋巴细胞内p-mTOR、p-S6、IFN-γ表达的影响

目的:探讨补肾健脾化瘀中药对难治/复发再生障碍性贫血(aplastic anemia,AA)患者骨髓CD3^(+)T淋巴细胞内磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(phosphorylated mammalian target of rapamycin,p-mTOR)、磷酸化核糖体蛋白S6(phosphorylated ribosomal protein S6,p-S6)及干扰素γ(interferon-γ,IFN-γ)的影响,解析其治疗难治/复发AA的机制。方法:采集初发AA 13例、难治/复发AA 15例及对照组14例研究者的骨髓液,分别加入补肾健脾化瘀中药、雷帕霉素进行孵育,运用流式细胞术检测药物处理前后各组CD3^(+)T淋巴细胞胞质内p-mTOR、p-S6与IFN-γ表达水平。结果:药物处理前,复发/难治AA患者CD3^(+)T淋巴细胞p-mTOR、p-S6、IFN-γ表达均高于初发AA与对照组(P<0.01);初发AA患者与对照组比较p-mTOR、p-S6表达差异无统计学意义(P>0.05);初发AA患者IFN-γ表达高于对照组(P<0.01)。药物处理后,复发/难治AA组中,补肾健脾化瘀中药及雷帕霉素均能降低CD3^(+)T淋巴细胞p-mTOR、p-S6与IFN-γ表达(P<0.01),雷帕霉素与补肾健脾化瘀中药组比较各指标水平差异无统计学意义(P>0.05);初发AA与对照组中,雷帕霉素、补肾健脾化瘀中药不能明显降低CD3^(+)T淋巴细胞p-mTOR、p-S6表达(P>0.05);初发AA组中,雷帕霉素、补肾健脾化瘀中药能降低CD3^(+)T淋巴细胞IFN-γ表达(P<0.01);对照组中,雷帕霉素、补肾健脾化瘀中药不能降低CD3^(+)T淋巴细胞IFN-γ表达(P>0.05)。结论 :补肾健脾化瘀中药通过抑制难治/复发AA患者CD3^(+)T淋巴细胞内p-mTOR、p-S6、IFN-γ表达,进而抑制T淋巴细胞的异常激活,改善骨髓造血功能。

基于mTOR/p-S6K1探讨加味附子理中汤干预UC大鼠肠黏膜炎症反应的效应机制

目的:探讨加味附子理中汤治疗溃疡性结肠炎(UC)模型大鼠的疗效及相关作用机制。方法:选用72只雄性SD大鼠,分为正常组,模型组,柳氮磺胺嘧啶组(0.5 g·kg^-1),加味附子理中汤高、中、低剂量组(23.62,11.81,5.91 g·kg^-1)。运用2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)-乙醇复合造模法复制UC大鼠模型,连续灌胃治疗2周,观察各组大鼠一般情况,大鼠麻醉后腹主动脉采血,取结肠组织。运用结肠黏膜损伤指数(CMDI)半定量评分,苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠结肠组织病理学改变,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测大鼠血清白细胞介素(IL)-4,IL-6,IL-10,肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;免疫组化和蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测结肠黏膜组织哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)及磷酸化核糖体蛋白S6激酶1(p-S6K1)蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠CMDI评分显著升高(P<0.01),血清IL-4,IL-10含量显著下降,IL-6,TNF-α含量显著上升(P<0.01),结肠黏膜组织mTOR,p-S6K1蛋白表达水平显著上调(P<0.01);与模型组比较,加味附子理中汤高剂量组大鼠CMDI评分明显下降(P<0.05),高、中剂量组大鼠血清促炎因子IL-6,TNF-α显著降低(P<0.01),抗炎因子IL-4,IL-10明显升高(P<0.05,P<0.01);加味附子理中汤高剂量大鼠mTOR,p-S6K1的蛋白表达水平明显下调(P<0.05,P<0.01)。结论:加味附子理中汤高剂量组可显著减轻UC结肠黏膜充血水肿、炎性细胞浸润、腺体扭曲、排列紊乱等病理表现,其机制可能与其下调mTOR/p-S6K1信号、调控炎症因子的分泌有关。

p-S6在干燥综合征患者唇腺组织中的表达

目的探讨哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin, mTOR)信号通路的下游靶蛋白——磷酸化S6核糖体蛋白(phosphorylated S6 ribosomal protein, p-S6RP/rp-S6/p-S6)在干燥综合征(Sj?gren′s syndrome, SS)患者唇腺组织中的表达情况。方法将36例SS患者的唇腺组织作为患者组,按病因分为原发组(14例)及继发组(22例);按病理灶性指数(FS)分为患1组(25例)、患2组(7例)、患3组(4例)、患4组(0例);9例正常的唇腺组织作为对照组。采用夹心法和免疫组织化学技术两种方法检测唇腺组织中的p-S6表达水平。结果 ELISA方法检测p-S6表达,患者组为(0.98±0.48)mg/mL,明显高于对照组的(0.37±0.14)mg/mL,差异有统计学意义(P<0.01);原发组与继发组相比差异无统计学意义(P>0.05);患1、2、3组表达水平分别为(0.78±0.15)、(1.03±0.22)和(2.03±0.79)mg/mL,患1组表达低于患3组,差异有统计学意义(P<0.01),患1组与患2组、患2组与患3组差异无统计学意义(P>0.05)。免疫组织化学测定p-S6的表达,患者组IOD值为20 981.47±12 067.31,明显高于对照组的1 885.18±1 771.46,差异有统计学意义(P<0.01);原发组与继发组相比差异无统计学意义(P>0.05);患1、2、3组表达水平(IOD值)分别为14 282.33±5 231.89、27 470.73±8 261.55和44 900.64±9 106.17,患1组表达水平明显低于患2、患3组(P<0.01),患2组与患3组差异无统计学意义(P>0.05)。p-S6主要表达在唇腺组织浸润淋巴细胞胞浆,部分腺泡上皮细胞胞浆也有少许表达。ELISA与免疫组织化学法检测p-S6在患者组唇腺组织中表达水平均与血清免疫球蛋白IgM存在正相关关系(r=0.35,0.35;P<0.05)。结论 p-S6在SS患者唇腺组织浸润细胞中高表达,且表达水平与唇腺组织灶性指数和血清免疫球蛋白IgM的浓度呈正相关关系,mTOR信号通路可能参与了SS的发病。

6-(P-2P-S)并联机器人误差分析及参数优化

介绍了一种新型6-(P-2P-S)并联机器人,为提高其终端平台的定位精度,对该并联机器人进行误差分析。首先采用矩阵法建立了该并联机器人的误差模型,将奇异值分解理论应用于误差分析,得到并联机构输入误差与输出误差的关系;然后依据雅可比矩阵定义了误差方向敏感度和误差绝对敏感度评价指标,并绘制了两个评价指标在姿态空间的分布图;最后基于全域综合位置误差评价指标对结构参数进行了优化设计,为该并联机器人的设计和应用奠定了基础。

新型6-(P-2P-S)并联机器人逆动力学仿真分析

针对一种新型6-(P-2P-S)并联机器人,介绍了该并联机器人初始正交位姿部分运动解耦的结构特点,推导出广义速度和系统内各刚体运动速度的运动学传递关系。应用拉格朗日方法分别对运动平台、连杆和驱动杆进行动力学计算,建立了该并联机器人的动力学模型。该并联机器人动力学模型是一个多变量、变参数的非线性系统,完整编写了该动力学模型的仿真程序,进行了逆动力学仿真实例分析,研究了驱动力变化规律,验证了该机构部分运动解耦的结构特点,进而为该并联机器人的控制策略研究提供参考。

6-(P-2P-S)并联宏动平台的轨迹跟踪控制

提出了一种新型6-(P-2P-S)并联宏动平台,应用凯恩方法建立了该机构的刚体动力学模型。采用分散控制策略对各分支独立控制,建立了单通道驱动关节空间的CARIMA模型,并针对广义预测控制(GPC)计算量大的缺陷,提出了一种模糊自适应直接广义预测控制(FDGPC)方法,该方法利用模糊逻辑系统直接设计预测控制器,并基于广义误差估计值对控制器参数和广义误差估计值中的未知向量进行自适应调整,轨迹跟踪控制仿真结果验证了该方法具有很强的鲁棒性,可实现并联宏动平台的高速高精度定位。

P-6对人骨髓间充质干细胞黏附和增殖特性的影响

目的 :探讨 6肽 (P - 6 )对人骨髓间充质干细胞 (mesenchymalstemcells,MSCs)黏附和增殖特性的影响。 方法 :将在体外分离培养的人骨髓间充质干细胞中分别加入 5、10、5 0、10 0、2 0 0、30 0、4 0 0ng/mL系列浓度的P - 6作为实验组 ,不含P - 6的培养基作为对照组 ,用图像分析系统计算接种后 1、2、4、8、12h各个时间点黏附细胞数 ;用MTT法分析培养第 2、4天细胞增殖活性。结果 :不同浓度P - 6组细胞黏附数无明显差异 (P >0 .0 5 ) ;5 0～ 2 0 0ng/mL的P - 6能促进MSCs增殖 ,其中以 5 0ng/mLP - 6培养 4 8h后 ,细胞增殖活性最强 (P <0 .0 5 )。 结论 :P -6对MSCs细胞黏附性无明显影响 ,5 0～ 2 0 0ng/mL的P -

一种新型3P-6SS并联机构的运动控制

提出了一种新型的3P-6SS并联机构,计算了其运动学反解。制作了这种并联机构的实物样机,并搭建了该并联机构的控制系统。基于数字信号处理器(DSP)编写了控制程序,并使用3P-6SS并联机构的实物样机进行了实验。在无抬笔、落笔控制的情况下,该并联机构写出了有联笔的字母"BUPT";在有抬笔、落笔控制时,该机构写出了无连笔的数字"2008"。实验结果表明了反解算法的正确性和控制系统的有效性。

P-6/ABM复合物促进骨缺损修复的初步实验研究

目的 :研究细胞结合肽 (P - 6肽 )与无机骨粒 (ABM)复合物在骨缺损修复中的作用。方法 :将P - 6 /ABM复合物植入兔颅骨缺损区 ,分别于 2、4、8周进行X线、组织学观察 ,以ABM植入组为对照 ,评价其骨修复能力。结果 :结果表明X线、组织学检查P - 6 /ABM组较ABM组有更多新骨形成。结论 :P - 6 /ABM复合材料具有较强的促进骨缺损修复作用。

mTOR/p-4EBn,p-p70S6k信号通路对绒癌细胞株JEG-3的作用

目的:运用雷帕霉素对mTOR的特异性抑制作用,探讨mTOR信号通路对人绒癌细胞株JEG-3的作用的分子机制。方法:运用RTPCR检测雷帕霉素对其靶点mTOR的mRNA表达量的影响;用western-blot检测雷帕霉素处理后mTOR及调控的下游蛋白p-4EBP1和p-P70S6K的蛋白表达量的变化。结果:绒癌细胞JEG-3中mTOR/p-4EBP1,p-P70S6k信号通路对绒癌细胞的增殖起着重要作用。

新型血栓溶解剂P-6A类似物的合成研究

报道在液相中用混合酸酐法合成了新型的 6个P 6A的五肽类似物 .通过定向分步递进 ,采用反应活性较高的混合酸酐合成法 ,以氯甲酸异丁酯作活化剂 ,以THF和DMF作溶剂 ,使每一步合成收率均高于 60 % .对所合成的 6个P 6A类似物进行了光学测定 ,元素分析和MS谱图分析确证 .

mTOR信号通路中p-p70s6k与结肠癌的研究进展

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mamalian target of rapamycin,mTOR)信号通路在细胞生长、增殖、分化、细胞周期调控等多个方面起到重要作用。核糖体蛋白S6激酶是该通路中的重要成分,磷酸化核糖体蛋白S6激酶是其活化形式。该分子在众多癌组织中异常表达。了解其在结肠癌组织中的表达情况,可能成为治疗结肠癌的潜在靶点,无疑对结肠癌治疗具有重要意义。