BDNF/TrkB/Akt/p-RPS6信号通路在口腔上皮牙源性病变患儿中的作用及免疫反应分析

目的:分析BDNF/TrkB/Akt/p-RPS6信号通路在儿童口腔上皮牙源性病变中的作用及免疫反应。方法:以2018年6月—2020年6月间本院收治的50例口腔上皮牙源性病变患儿的口腔上皮病变组织标本(病例组)和50例健康儿童的口腔上皮组织标本(对照组)为研究对象,均行BDNF/TrkB/Akt/p-RPS6信号通路蛋白检测、免疫功能T细胞亚群(CD3^(+)、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+))检测和免疫球蛋白指标(IgG、IgA、IgM)检测,对比对照组和病例组上述指标的差异,并采用Pearson相关性分析法分析BDNF/TrkB/Akt/p-RPS6信号通路蛋白与免疫功能相关指标的相关性。结果:病例组的脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)、酪氨酸激酶受体B(tyrosine kinase receptor B,TrkB)、蛋白激酶B(protein kinase B,PkB,又称Akt)、磷酸化S6核糖体蛋白抗体(anti-phospho-S6 ribosoma protein,p-RPS6)的平均光密度值均高于对照组(P<0.05)。病例组的免疫功能T亚群细胞(CD3^(+)、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+))、免疫球蛋白指标(IgG、IgA、IgM)数据值均低于对照组(P<0.05)。BDNF、TrkB、Akt、P-RPS6的平均光密度值与免疫功能T细胞亚群(CD3^(+)、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+))数据值、免疫球蛋白指标(IgG、IgA、IgM)数据值呈负相关(均P<0.05)。结论:口腔上皮牙源性病变患儿存在明显的BDNF/TrkB/Akt/p-RPS6信号通路相关蛋白表达异常和免疫功能抑制,且免疫功能抑制与BDNF/TrkB/Akt/p-RPS6信号通路蛋白异常表达相关。

戊四氮点燃大鼠海马脑源性神经营养因子受体TrKB、P^(75NTR)表达的变化

目的:探讨戊四氮点燃大鼠海马脑源性神经营养因子(BDNF)受体TrKB、P75NTR表达的变化。方法:40只成年健康雄性SD大鼠随机分为实验组和对照组,实验组采用戊四氮点燃法制备癫模型,对照组不做处理。第2周及第4周,2组各取10只大鼠,采用免疫组织化学方法观察海马结构内TrKB、P75NTR的表达水平。结果:第2周及第4周,对照组大鼠海马CA1、CA3区锥体细胞层及齿状回和门区可见TrKB阳性神经元和纤维;CA1、CA3区锥体细胞层、齿状回及门区可见大量P75NTR阳性神经元。与对照组比较,实验组海马相应部位TrKB的表达升高(P<0.05),P75NTR的表达降低(P<0.05)。结论:在癫形成过程中,BDNF的2类受体TrKB、P75NTR可能参与了癫后海马异常苔藓纤维出芽及突触重建过程;2类受体可能相互拮抗。

对香豆酸对慢性束缚应激诱导小鼠抑郁样行为的作用

目的:探索对香豆酸(p-CA)对慢性束缚应激(CRS)诱导小鼠抑郁样行为的作用。方法:实验分两批进行,第一批小鼠随机分成对照组(Control),慢性束缚应激组(CRS)和慢性束缚应激+p-CA组(CRS+p-CA),每组8只,其中慢性束缚应激小鼠每天接受4 h的束缚应激,连续束缚21 d,而对照组小鼠留在笼中不被打扰。第22日小鼠腹腔注射溶媒(10%吐温80)或p-CA(100 mg/kg),注射后1 h进行自发活动测试(LMA),注射后4 h进行强迫游泳测试(FST),注射后24 h进行悬尾测试。第二批小鼠随机分成慢性束缚应激组(CRS),慢性束缚应激+ANA-12(原肌球蛋白激酶B拮抗剂)组(CRS+ANA-12)和慢性束缚应激+p-CA组(CRS+p-CA)慢性束缚应激+p-CA+ANA-12组(CRS+p-CA+ANA-12),每组8只,4组小鼠每天接受4 h的束缚应激,连续束缚21 d。第22日小鼠腹腔注射溶媒(10%吐温80)或p-CA(100 mg/kg),ANA-12(0.5 mg/kg)在p-CA注射前30 min给药。注射后1 h进行自发活动测试(LMA),注射后2 h进行强迫游泳测试(FST),注射后24 h进行悬尾测试。结果:①在实验一中,与Control组相比,CRS组小鼠强迫游泳和悬尾测试中不动时间显著性增多(P<0.05);而与CRS组相比,CRS+p-CA组小鼠不动时间显著性减少(P<0.05,P<0.01)。②在实验二中,与CRS组相比,CRS+p-CA组小鼠强迫游泳和悬尾测试中不动时间显著性减少(P<0.05);而与CRS+p-CA组相比,CRS+p-CA+ANA-12组小鼠强迫游泳和悬尾测试中不动时间显著性增多(P<0.05)。结论:P-CA改善慢性束缚应激诱导小鼠抑郁样行为,TrkB受体可能介导了此作用。

基于BDNF/TrkB/p-CREB信号通路探讨血府逐瘀胶囊促进神经再生防治卒中后抑郁的作用及机制

目的探讨血府逐瘀胶囊对卒中后抑郁(post-stroke depression,PSD)大鼠抑郁症状的改善作用,并基于神经再生关键通路脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)/酪氨酸激酶受体B(tyrosine kinase receptor,TrkB)/磷酸化环腺苷酸应答元件结合蛋白(phosphorylated cAMP response element-binding protein,p-CREB)探讨其机制。方法采用短暂大脑中动脉梗塞(transient middle cerebral artery occlusion,tMCAO)复合慢性不可预知应激(chronic unpredictable mild stimulation,CUMS)方法复制PSD大鼠模型。大鼠随机分为假手术组、模型组及血府逐瘀低、高剂量(0.43、0.86 g/kg)组和氟西汀(1.8 mg/kg)组,每组18只。连续给予药物干预28 d,利用神经功能评分、糖水偏好实验、旷场实验、强迫游泳实验考察血府逐瘀胶囊对PSD大鼠神经功能损伤以及抑郁症状的改善作用;高效液相色谱-电化学检测法检测额叶皮质及海马神经递质多巴胺(dopamine,DA)和5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)含量;免疫荧光染色检测海马5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-bromo-2-deoxyuridine,BrdU)、双皮质素(doublecortin,DCX)和巢蛋白(neuroepithelial stem cell protein,Nestin)表达评价神经再生情况;Western blotting检测海马BDNF/TrkB/p-CREB蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠神经功能评分显著提高(P<0.001),糖水偏好率显著下降(P<0.05),强迫游泳不动时间显著增长(P<0.05);前额叶皮质、海马组织DA以及海马组织5-TH含量明显减少(P<0.05);BrdU、DCX阳性细胞数量明显降低(P<0.05、0.01),Nestin阳性细胞数量减少;海马BDNF、TrkB、p-CREB表达显著降低(P<0.05、0.01)。与模型组比较,血府逐瘀胶囊组神经功能评分显著降低(P<0.01),糖水偏好率明显升高(P<0.05),强迫游泳的不动时间明显减少(P<0.05、0.01);前额叶皮质和海马DA、5-TH含量均显著增加(P<0.05、0.01);BrdU、Nestin、DCX阳性细胞数量明显增加(P<0.05、0.01);海马BDNF表达有增加的趋势,TrkB、p-CREB表达均明显增加(P<0.05)。结论血府逐瘀胶囊可通过BDNF/TrkB/p-CREB通路促进神经再生进而发挥治疗PSD作用。

氯化锂对脊髓损伤模型大鼠运动功能的作用和机制

[目的]观察氯化锂对脊髓损伤后BDNF/TrkB信号表达的作用,探讨其对脊髓损伤大鼠肢体运动功能恢复的作用和机制。[方法]36只SD大鼠随机分为假手术组(12例)、对照组(12例)、氯化锂组(12例),假手术组仅行椎板切除术,对照组和氯化锂组采用NYU脊髓打击器建立脊髓损伤模型,术后第1、3、5 d和第7 d行BBB肢体运动功能评分。干预7 d后取材,采用尼氏染色光镜观察神经元形态,免疫荧光定位BDNF阳性细胞,并计数进行半定量分析,Western blot检测BDNF蛋白、TrkB蛋白和p-TrkB蛋白表达。[结果]在脊髓损伤后肢体运动功能方面,自干预后第3 d起,氯化锂组BBB评分高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05),至术后第5 d,两组间BBB评分差异更加明显(P<0.01)。尼氏染色提示氯化锂组脊髓损伤后神经元的形态优于对照组。氯化锂组脊髓损伤后脊髓前角运动神经元BDNF阳性细胞数高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.01);Western blot检测表明氯化锂组的BDNF蛋白和p-TrkB蛋白表达高于对照组,两组间差异有统计学意义(P<0.05),但两组间TrkB蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。[结论]氯化锂能促进脊髓损伤对照大鼠肢体运动功能恢复,其机制可能与其促进脊髓损伤后脊髓前角运动神经元分泌BDNF,促进TrkB受体磷酸化,从而上调BDNF/TrkB信号表达,促进脊髓损伤后神经元存活、再生和轴突再生、再髓鞘化有关。

活血通督汤对脊髓损伤后BDNF/TrkB信号表达的影响

目的:观察活血通督汤对脊髓损伤后脑源性神经营养因子/酪氨酸蛋白激酶受体B(BDNF/TrkB)信号表达的作用,探讨其对脊髓损伤后肢体运动功能恢复的作用和机制。方法:54只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、活血通督汤组,每组18只,造模后每日行BBB肢体运动功能评分,干预7d后取材,采用尼氏染色观察神经元形态,电镜观察脊髓微观结构,免疫荧光定位BDNF阳性细胞,Western blot检测BDNF、TrkB和p-TrkB蛋白表达。结果:干预后第3天起,活血通督汤组BBB评分显著高于模型组(P<0.05);尼氏染色和电镜提示活血通督汤可改善脊髓损伤后神经元和髓鞘的结构和形态;活血通督汤可促进脊髓损伤后脊髓前角细胞分泌BDNF,与模型组比较,差异具有统计学意义(P<0.05);活血通督汤可显著促进BDNF蛋白和p-TrkB蛋白表达(P<0.01),但对TrkB蛋白表达无显著作用。结论:活血通督汤促进脊髓损伤后脊髓前角细胞分泌BDNF,促进TrkB受体磷酸化,从而上调BDNF/TrkB信号表达,促进脊髓损伤后神经元存活、再生和轴突再生、再髓鞘化。