人静脉移植物eNOS和P-eNOS的表达

目的检测人静脉移植物中eNOS的表达及其活性。方法应用免疫荧光组织化学技术对30个静脉移植物再狭窄标本中eNOS的表达进行了检测,用抗磷酸化的eNOS抗体(P-eNOS)检测eNOS的活性。用激光共聚焦显微镜拍片,图片用Silicon Graphics Octane进行处理。结果在正常静脉血管中,eNOS在内皮细胞不表达;在病变静脉血管,在内膜增生早期,eNOS在管腔面内皮细胞的表达明显上调,在外膜小血管的表达也增加,随着内膜增生的不断发展,eNOS在管腔面内皮细胞的表达明显下降,外膜小血管逐渐从外膜向中膜延伸。免疫双重染色证实eNOS和p-eNOS的表达共同定位于内皮细胞。结论eNOS在静脉移植物中的表达模式提示其可能参与了中膜毛细血管的生成以及新内膜的形成。

苦参碱对p-eNOS/eNOS和RhoA/ROCK1的调控及对异丙肾上腺素致大鼠慢性心力衰竭的保护作用

目的:研究苦参碱对异丙肾上腺素(ISO)致大鼠慢性心力衰竭的保护作用及其对p-eNOS/eNOS和RhoA/ROCK1的调控作用。方法:SD雄性大鼠皮下注射ISO(5 mg·kg-1·d-1)共7 d,建立慢性心力衰竭模型。苦参碱(50,100,200 mg·kg-1)于ISO注射前1 h灌胃给药,共7d。观察不同剂量苦参碱对ISO致心肌组织病理损伤的抑制作用,以及其对左心室p-eNOS、eNOS、RhoA和ROCK1蛋白表达的影响。结果:苦参碱(100,200 mg·kg-1)可减轻ISO致大鼠慢性心力衰竭性细胞坏死、炎细胞浸润及心肌组织间质水肿程度等心肌病理学结构的异常变化,增加左心室p-eNOS(Ser1177)和eNOS蛋白表达,并降低RhoA和ROCK1蛋白表达。苦参碱(50 mg·kg-1)对ISO致慢性心力衰竭大鼠的心肌p-eNOS(Ser1177)/eNOS和RhoA蛋白表达无显著影响;单用苦参碱(200 mg·kg-1)对正常大鼠心肌结构及左心室p-eNOS(Ser1177)/eNOS和RhoA/ROCK1蛋白表达无影响。结论:苦参碱对ISO致大鼠慢性心力衰竭具有保护作用,其机制与调控p-eNOS/eNOS和RhoA/ROCK1有关。

Genistein后处理通过激活eNOS保护缺血后海马CA1区神经元

目的研究Genistein后处理(GPC)对脑缺血再灌注后大鼠海马CA1区神经元的神经保护作用,及其对eNOS磷酸化水平的影响。方法建立大鼠4动脉结扎全脑缺血模型,实验动物随机分为假手术组、缺血再灌注(I/R)组、GPC组(尾静脉注射)、抑制剂L-NAME组(脑室注射)、溶剂对照组。采用Western blot法检测大鼠海马CA1区eNOS、p-eNOS的表达;NeuN染色和TUNEL法分别观察海马CA1区神经元的存活和凋亡样损伤。结果与I/R组相比,GPC后再灌注30 min和3 d p-eNOS水平显著升高(P<0.001),而eNOS蛋白表达在各个时间点没有明显变化。激光扫描共聚焦结果显示,GPC组与I/R组相比较,海马CA1区存活的神经元明显增加(213.0±21.0 vs 45.0±15.0,P<0.05),而凋亡样损伤的神经元显著减少(29.0±6.0 vs 192.0±31.0,P<0.05);NOS抑制剂L-NAME不但可显著减弱GPC诱导的神经保护作用(P<0.05),而且有效降低p-eNOS水平(1.149±0.218 vs 1.583±0.155,P<0.001)。结论 Genistein后处理可抑制大鼠海马CA1区神经元凋亡,其机制可能与p-eNOS表达上调有关。

辛伐他汀通过Akt/eNOS途径改善心肌梗死后急性期心功能

目的探讨辛伐他汀(simvastatin,Sim)对急性心肌梗死后心肌内源性抗氧化系统的影响及其潜在机制。方法应用结扎大鼠冠状动脉左前降支的方法模拟急性心肌梗死(AMI),随机分为心肌梗死组(MI)组和辛伐他汀组(Sim,20mg·kg-1·d-1),另设假手术组(Sham组)。Sim组连续灌胃7 d,MI组和Sham组给予等剂量的生理盐水灌胃。7 d后,观察心肌血流动力学参数变化;检测血脂及心肌坏死标记物肌钙蛋白I(c-Tn I)和乳酸脱氢酶(LDH)变化;ELISA法检测心肌抗氧化系统超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(GP)水平。Western blot检测心肌p-Akt/p-e NOS蛋白表达变化。结果急性心肌梗死明显降低心肌血流动力学参数,增加血清c-Tn I和LDH水平,降低SOD及GP水平,降低p-Akt和p-e NOS蛋白表达。Sim组能明显改善急性期心功能恶化,减低血清c-Tn I和LDH水平,增加SOD及GP水平,增加p-Akt和p-e NOS蛋白表达。结论急性心肌梗死后早期应用Sim能明显改善心功能,增加心肌抗氧化系统活性,减少心肌坏死,这可能与提高p-Akt和p-e NOS蛋白表达有关。

蟾蜍皮肤提取物QUB2419的降压作用及机制初探

目的:考察QUB2419对高血压大鼠的降压作用及其作用机制。方法:采用自发性高血压大鼠(SHR)和肾性高血压大鼠(RHR),尾静脉注射给药,观察给药前后血压的变化;采用血管平滑肌细胞(VSMCs),考察QUB2419对血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)诱导VSMCs增殖的抑制作用;采用人脐静脉内皮细胞(HUVECs),Western Blot方法考察QUB2419对细胞中内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、蛋白激酶B (AKT)蛋白磷酸化的影响。结果:QUB2419给药后2 min即显著降低SHR和RHR的血压,且降压作用呈剂量依赖性。QUB2419能够显著抑制PDGF-BB诱导的VSMCs的增殖。QUB2419能够显著增加HUVECs中p-eNOS,p-AMPK和p-AKT的蛋白表达。结论:QUB2419可显著降低高血压大鼠的血压,并抑制血管平滑肌细胞的增殖,其降压机制可能与增加HUVECs中p-eNOS,p-AMPK和p-AKT的蛋白表达相关。