摄涕止鼽颗粒对变应性鼻炎患者IL-5和NF-κB p-p65的影响

目的：观察摄涕止鼽颗粒对肺肾气虚型AR患者血清IL-5和鼻腔黏膜NF-κB p-p65表达的影响,揭示摄涕止鼽颗粒治疗AR的作用机制。方法：选择肺肾气虚型AR患者为研究对象,分为试验组和安慰剂组,试验组予摄涕止鼽颗粒治疗,安慰剂组予安慰剂治疗。ELISA检测治疗前后血清IL-5水平,免疫组化、Western Blot检测鼻腔黏膜NF-κB p-p65的表达。结果：试验组治疗后血清IL-5水平及鼻腔黏膜NF-κB p-p65水平比试验组治疗前低,试验组治疗后血清IL-5水平及鼻腔黏膜NF-κB p-p65水平比安慰剂组治疗后低。结论：摄涕止鼽颗粒能降低鼻腔黏膜NF-κB p65蛋白的磷酸化水平,抑制Th2细胞因子IL-5的表达,纠正AR患者Th1/Th2细胞因子网络的失衡状态。

清湿化瘀法对子宫腺肌病小鼠雌激素效应因子PTEN、P-P65的时空变化影响

目的在以清湿化瘀为治法的内异康复片被广泛应用于治疗子宫腺肌病(AM)和前期实验研究的基础上,运用同种异体垂体植入子宫的方法建立AM实验模型,采用免疫组化的技术检测PTEN、P-P65在AM治疗前后各组小鼠在位及异位子宫内膜上的表达差异,探究AM的发病机制。方法采用异体垂体移植法造模,随机设内异康复片低、中、高剂量组,孕三烯酮组,丹莪妇康煎膏组,模型组。饲养3月后分别灌胃3月治疗,免疫组化法观察治疗前后在位、异位子宫内膜上PTEN、P-P65差异。结果不同方法治疗后PTEN表达均增高,显著高于模型组(P<0.001),内异康复片高剂量组优于其他各治疗组(P<0.001);P-P65表达均下降,显著低于模型组(P<0.001),内异康复片高剂量组优于其他各治疗组(P<0.001)。结论内异康复片可上调PTEN,下调P-P65的表达,从而达到控制和治疗子宫腺肌病及其临床症状的目的。

补阳还五汤调控NF-κB-P65及P-P65治疗脑出血大鼠的作用机制研究

动态观察补阳还五汤对脑出血(ICH)大鼠脑组织的NF-κB-P65,P-P65表达及改良大鼠神经功能严重程度评分(mNSS)影响,探讨其机制。方法:(1)建立胶原酶来诱导的大鼠脑出血模型;(2)60只SD大鼠随机分为假手术组(Sham,n=15),模型组(ICH,n=15)、补阳还五汤组(BYHWT,n=15)、米诺环素组(MHC,n=15),每日1次灌胃,2mL/次,分别在3、7、14d,观察各组mNSS评分及NF-κB-P65、P-P65表达。结果:(1)BYHWT、MHC分别与Sham、ICH组比较,在3、7、14d的mNSS比较差异有统计学(P<0.05),而BYHWT组及MHC组间比较差异无统计学意义(P>0.05);(2)BYHWT与ICH比较,在7d的P-P65的表达差异无统计学意义(P>0.05),而其而余时间点NF-κB-P65、P-P65的表达比较差异有统计学意义(P<0.05);MHC与ICH比较,在3天、7天、14天的NF-κB-P65及P-P65的表达比较差异有统计学(P<0.05);BYHWT与MHC比较,在7天、14天的P-P65的表达比较差异有统计学(P<0.05)。结论:补阳还五汤通过调控ICH大鼠脑组织NF-κB-P65及P-P65的表达,发挥脑保护作用。

芪红散对巨噬细胞分化及炎症水平的影响

目的 研究芪红散对巨噬细胞分化及炎症水平的影响及其机制。方法 将单核细胞在PKC激活剂(PMA)的诱导下转化为巨噬细胞。仅使用PMA诱导的细胞定义为M0组,使用脂多糖(LPS)和γ干扰素(IFN-γ)诱导处理的细胞定义为M1组,在使用LPS和IFN-γ诱导处理的基础上加入低剂量以及高剂量芪红散进行干预的两组分别定义为M1+芪红散-L组以及M1+芪红散-H组。分别采用细胞计数试剂-8(CCK-8)法、流式细胞术、酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫印迹试验(WB)检测4组细胞的增殖、凋亡、迁移情况和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)、p50、p-p65水平。结果 与M0对比,M1组增殖、迁移、CD86^(+)分化比例、TNF-α、IL-6、p50及p-p65水平显著增加(P均<0.05),CD206^(+)分化比例、IL-10水平显著降低(P均<0.05)。与M1组比较,M1+芪红散-L组与M1+芪红散-H组CD86^(+)分化比例、TNF-α、IL-6表达水平均降低(P<0.05),且M1+芪红散-H组TNF-α及IL-6表达水平明显低于M1+芪红散-L组(P<0.05),IL-10表达水平明显高于M1+芪红散-L组(P<0.05)。与M1组比较,M1+芪红散-H组p50及p-p65表达水平均降低(P<0.05),M1+芪红散-L组206^(+)分化显著升高(P<0.05)。结论 芪红散可有效地减少巨噬细胞的CD86^(+)型分化,抑制炎症信号通路核因子-κB(Nuclearfactor kappaB,NF-κB)的激活从而降低炎症因子的表达,减轻炎症反应。

PKGIα通路抑制剂DT-3对胃癌细胞增殖和迁移的影响

目的:探讨PKGIα信号通路特异性抑制剂DT-3对胃癌细胞增殖和迁移的影响。方法:利用生物信息学分析,基于GEO、TCGA、HPA、Kaplan-Meier plotter数据库和GEPIA在线分析网站对PKGI在组织中的表达进行差异分析并探讨PKGI和PKGIα在胃癌患者中的预后情况。采用CCK-8、克隆形成实验检测DT-3对细胞增殖的影响,划痕愈合实验观察DT-3对细胞迁移的影响;Western blot-ting法验证PKGIα的蛋白表达和相关性分析。结果:胃腺癌组织中PKGI mRNA表达增高,在42种胃癌细胞株里有27种能检测到PKGI mRNA的表达,高表达PKGIαmRNA的胃癌组织更具肿瘤侵袭性;免疫组织化学(IHC)结果展示PKGI蛋白表达情况,12例胃癌组织中观察到6例存在中、高强度的细胞质染色阳性反应;PKGI和CDH1的表达呈负相关(r=-0.74,P<0.05);生存分析显示PKGI和PKGIαmRNA高表达对胃腺癌患者的总生存期(OS)有统计学意义(HR>1,logrank P<0.05)。实验结果表明PKGIα蛋白在人胃癌细胞株AGS中的表达增加;DT-3抑制细胞增殖迁移(P<0.05),使NF-κB磷酸化p65表达降低,且PKGI和NF-κB p-p65的表达呈极强正相关(r=0.957,P<0.05)。结论:通过抑制PKGIα信号通路,可以有效抑制胃癌细胞增殖迁移。

E2F-1、NF-κB/P65、P-gp在弥漫性大B细胞淋巴瘤中的表达及意义

目的研究E2F-1、NF-κB/P65和P-gp在弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)中的表达及意义。方法应用免疫组织化学SP法检测E2F-1、NF-κB/P65和P-gp在61例DLBCL和15例反应性增生淋巴结中的表达,分析E2F-1、NF-κB/P65、P-gp表达与DLBCL临床病理特征和预后的关系。结果①61例DLBCL中,E2F-1表达的阳性率为42.6%,明显低于反应性增生的淋巴结(P<0.05);NF-κB/P65和P-gp表达的阳性率分别为52.5%和54.1%,均高于淋巴结反应性增生(P<0.05)。②61例DLBCL中,E2F-1的表达与NF-κB/P65和P-gp的表达呈负相关,NF-κB/P65和P-gp的表达呈正相关。③在DLBCL中,E2F-1的表达与患者的性别、年龄、Ann Arbor分期、IPI评分、LDH值及B症状均无关(P>0.05);NF-κB/P65的表达与患者的Ann Arbor分期及IPI评分有关(P<0.05),与患者的性别、年龄、LDH值及B症状无关(P>0.05);P-gp的表达与患者的IPI评分有关(P<0.05),而与患者的性别、年龄、Ann Arbor分期、LDH值及B症状无关(P>0.05)。④E2F-1阳性表达者5年生存率明显高于E2F-1阴性表达者,差异有统计学意义(P=0.03);NF-κB/P65阳性表达者5年生存率明显低于NF-κB/P65阴性表达者,差异有统计学意义(P=0.01);P-gp阳性表达者5年生存率虽然低于P-gp阴性表达者,但差异无统计学意义(P=0.12)。结论①部分DLBCL患者存在原发性多药耐药。②在DLBCL中,E2F-1、NF-κB/P65和P-gp之间存在相关性,提示三者在弥漫性大B细胞淋巴瘤中可能存在一定的相互作用,共同参与了肿瘤耐药。③E2F-1低表达和NF-κB/P65高表达是DLBCL预后不良的指标。

磷酸化ERK1/2对MPTP帕金森病模型小鼠黑质NF-κB p65表达的影响

目的研究磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)所致帕金森病(PD)小鼠模型黑质NF-κB p65的表达调控作用。方法应用MPTP建立PD小鼠模型,观察小鼠行为学变化;采用免疫组织化学和免疫蛋白印迹法观察小鼠黑质抗酪氨酸羟化酶(TH)、NF-κB p65及p-ERK1/2的表达变化;并观察给予ERK特异性抑制剂U0126后对上述变化的影响。结果模型组小鼠于MPTP第3次注射后1h,黑质区p-ERK1/2阳性细胞数多于NF-κB p65阳性细胞,第5次注射后24h,NF-κB阳性细胞增多,p-ERK1/2阳性细胞减少,同时伴有TH阳性神经元丢失;给予ERK特异性抑制剂U0126后,上述变化明显减轻。结论在MPTP所致PD小鼠模型中ERK1/2信号通路可能通过调控NF-κB p65活化从而导致多巴胺能神经元变性丢失。

清肺通络敷胸膏对流感病毒肺炎大鼠肺组织ERK/NF-κB p65蛋白表达的影响

目的探讨清肺通络膏对流感病毒诱导的肺炎大鼠肺组织中ERK/NF-κB p65信号通路的调控机制。方法将30只Wister大鼠随机分为正常组、模型组、清肺通络敷胸膏组,每组10只。除正常组外,采用鼻腔接种流感病FM1株诱导Wister幼龄大鼠肺炎,在感染后各治疗组采用清肺通络膏贴敷于大鼠背部肺脏投影区治疗。观察各组大鼠的一般状态(饮食量、进水量、毛发、活动量、精神状态、呼吸频率);光镜下观察肺组织形态学;采用免疫组织化学法检测各组大鼠肺组织磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK),核转录因子(NF-κB p65)的表达水平。结果与正常组相比,模型组大鼠肺组织中p-ERK,NF-κB p65蛋白表达显著增高,差异有统计学意义(P<0.05),清肺通络膏组p-ERK、NF-κB p65蛋白的表达较模型组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论清肺通络膏通过抑制ERK磷酸化,使NF-κB p65表达降低,从而减轻了肺组织的病理损伤,达到治疗目的。

健脾补土法组方含药血清对体外嗅鞘细胞低氧/复氧损伤模型P65、P50及磷酸化IκBα表达的影响

目的探讨健脾补土法组方含药血清对体外嗅鞘细胞低氧/复氧损伤模型核因子KB(nuclear factor-kappa B,NFKB)的亚单位P65、P50及NF-KB抑制蛋白(P-IκBα)表达的影响。方法将原代培养的嗅鞘细胞分为5组:正常血清对照组、正常血清+低氧组、低氧+依达拉奉含药血清组、低氧+健脾补土法组方含药血清组、正常血清+低氧+NF-KB抑制剂/抗氧化剂(PDTC,50μmol/L)组,采用微需氧袋低氧/复氧的方法诱导嗅鞘细胞形成脑缺血再灌注损伤样模型,用Western blot法检测嗅鞘细胞胞浆P65、P50、P-IκBα和胞核P65、P50的含量。结果与正常血清对照组比较,正常血清+低氧组胞浆和胞核P65、P50,胞浆P-IκBα表达均显著升高,差异有统计学意义(P<0.01);与正常血清+低氧组比较,低氧+依达拉奉组、低氧+健脾补土组、正常血清+低氧+PDTC组、低氧+健脾补土+PDTC组胞浆和胞核P65、P50,胞浆P-IκBα表达均降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论健脾补土法组方能通过抑制嗅鞘细胞缺氧/复氧损伤后P65、P50、P-IκBα的过度表达,对NF-κB通路的活化具有抑制作用。

猪舍空气细颗粒物对猪肺泡巨噬细胞精氨酸代谢和糖酵解的影响

[目的]本试验旨在探究猪舍空气细颗粒物(PM_(2.5))对猪肺泡巨噬细胞极化相关的精氨酸代谢和糖酵解以及TLR4-NF-κB信号通路的影响。[方法]选用猪肺泡巨噬细胞系(3D4/21)作为细胞模型,设置不同质量浓度(0、25、50和100μg·mL^(-1))的PM2.5和不同处理时间(4、8、12、16、20和24 h)处理细胞,收集细胞测定精氨酸代谢、糖酵解以及TLR4-NF-κB信号通路相关指标。[结果]PM_(2.5)处理细胞12 h后,细胞上清液中一氧化氮(NO)浓度随PM2.5处理浓度的升高而逐渐上升,当PM_(2.5)浓度大于50μg·mL^(-1)时,NO浓度极显著升高(P<0.01)。以50μg·mL^(-1)PM_(2.5)处理细胞培养不同时间,发现PM_(2.5)处理16 h内细胞上清液中NO浓度逐渐升高;随着细胞处理时间的延长,PM_(2.5)对细胞的影响逐渐减轻。此外,不同浓度PM_(2.5)处理12 h,细胞内精氨酸酶活性降低,其中,50μg·mL^(-1)PM_(2.5)处理组与对照组相比差异极显著(P<0.01)。同时,随着PM_(2.5)浓度的升高,细胞内乳酸生成量/葡萄糖消耗量(L/G)值升高(P<0.05),标志着细胞内葡萄糖向乳酸转化的比率增高,糖酵解相关基因GLUT-1和GAPDH mRNA表达水平显著提高(P<0.05);100μg·mL^(-1)PM_(2.5)处理显著提高了细胞内IL-1β mRNA表达水平(P<0.01);50μg·mL^(-1)PM_(2.5)处理后M2巨噬细胞标志物CD206 mRNA表达水平显著降低(P<0.05),100μg·mL^(-1)PM_(2.5)显著增加细胞TLR4和MyD88 mRNA表达水平(P<0.05)和p-p65蛋白表达水平(P<0.05),激活TLR4-NF-κB信号通路。[结论]猪舍空气PM_(2.5)能够诱导猪肺泡巨噬细胞发生炎症反应,促进细胞内精氨酸和葡萄糖代谢向M1表型特征的代谢转换。

舌鳞状细胞癌中DKK1的表达及分子机制

目的应用生物信息学和分子生物学实验探讨Dickkopf相关蛋白1(DKK1)在舌鳞状细胞癌(TSCC)中的表达及分子机制。方法从TCGA-TSCC数据库下载患者信息,利用NetworkAnalysed网站筛选正常组织和癌组织间的差异表达基因,通过Kaplan-Meier分析和Lasson回归法寻找关键基因及临床预后,应用GO和KEGG分析差异表达基因的功能和通路,应用UALCAN数据库和免疫组化实验分析DKK1蛋白在TSCC中的表达,并分析其与临床病理特征的关系,应用Western blot实验检测DKK1在TSCC细胞中的表达,利用siRNA敲低Cal27细胞中DKK1蛋白的表达。结果NetworkAnalysed、Kaplan-Meier分析和Lasson回归法筛选出的3个关键基因DKK1、CYP19A1和IRX4在TSCC中高表达,且高表达组的患者生存率差。UALCAN数据库分析显示DKK1的mRNA水平在TSCC组织中高于正常组织,其高表达与TSCC患者的临床分期、组织学分级和淋巴结转移相关。免疫组化实验显示,DKK1蛋白在临床分期Ⅲ+Ⅳ期TSCC组织中的阳性率高于Ⅰ+Ⅱ期TSCC组织。与癌旁组织相比,DKK1蛋白在TSCC组织中的表达水平升高。Western blot实验显示DKK1蛋白在TSCC细胞Cal27中的表达高于正常口腔上皮细胞HOEC。在TSCC细胞Cal27中敲低DKK1的表达后,β-catenin、p-p65和p65蛋白表达量减少。结论DKK1在TSCC组织和细胞中高表达且发挥重要作用,其可能作为TSCC早期诊断和药物治疗的新靶点。

逆萎康方剂治疗慢性萎缩性胃炎效果观察

目的观察逆萎康治疗慢性萎缩性胃炎(CAG)的效果,并探讨其作用机制。方法 CAG患者88例,随机分为逆萎康组48例和胃复春组40例。逆萎康组给予逆萎康治疗,1剂/d,饭前30 min服用;胃复春组口服胃复春片治疗,4片/次,3次/d,饭前30 min服用。3个月为1个疗程,两组均治疗1个疗程。采用ELISA法检测血清环氧化酶2(COX-2)、Bcl-2,Western blotting法检测胃黏膜组织P-p65,比较治疗前后血清COX-2、Bcl-2水平及胃黏膜组织P-p65表达,评价临床效果。结果逆萎康组痊愈6例、显效17例、有效16例、无效9例,有效率为81.25%;胃复春组分别为5、15、12、8例,有效率为80.00%;两组有效率比较差异无统计学意义(P>0.05)。逆萎康组及胃复春组治疗后血清COX-2、Bcl-2水平及胃黏膜组织P-p65表达均较治疗前下降(P均<0.05)。两组治疗前后血、尿、便常规,肝、肾功能及心电图检查均未见明显异常。结论逆萎康治疗CAG安全、有效,降低胃黏膜组织NF-κB表达及血清COX-2、Bcl-2水平可能是其作用机制之一。

栀子柏皮汤及含栀子配伍组对免疫性肝损伤小鼠的保护作用

目的探讨栀子柏皮汤各及含栀子配伍组对刀豆蛋白(ConA)诱导免疫性损伤小鼠的保护作用及可能作用机制。方法观察栀子柏皮汤及各含栀子配伍组对尾静脉注射刀豆蛋白(ConA,20 mg·kg^(-1))诱发的免疫性肝损伤小鼠肝脏病理变化及血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性、肝匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量的影响。酶联免疫吸附实验(ELISA)测定血清中干扰素γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-4(IL-4)和白细胞介素-6(IL-6)的水平。Western blot法检测与免疫炎症相关的NF-κB-p65的蛋白表达情况。结果栀子柏皮汤及各含栀子配伍组均能够降低血清ALT、AST及肝组织中MDA的含量;提高肝组织中SOD活性;降低NF-κB-p65及NF-κB-p-p65的表达,其中栀子柏皮汤全方组对免疫性肝损伤小鼠保护作用最佳。结论栀子柏皮汤对ConA诱导的免疫性肝损伤小鼠具有保护作用,其作用机制可能与调控免疫反应的NF-κB通路有关。

淫羊藿苷对自发性高血压大鼠肾损伤的改善作用及机制研究

目的:观察淫羊藿苷(ICA)对自发性高血压大鼠(SHR)肾组织病理损伤的影响,并基于核因子κB(NF-κB)信号通路研究其作用机制。方法:将21只SHR随机均分为模型组和ICA低、高剂量组(20、40 mg/kg,记为ICA-L、ICA-H组),另取7只同源京都大鼠(WKY)为对照组。各组大鼠ig给药,每日2次,连用11周;对照组和模型组大鼠ig等体积双蒸水。观察各组大鼠肾组织病理学变化;蛋白质印迹法检测肾组织磷酸化NF-κB-p65(p-NF-κB-p65)、NF-κB抑制蛋白(IκB)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)蛋白的表达。结果:与对照组比较,模型组大鼠肾结构出现紊乱,肾小球囊腔狭窄且不规则;IκB蛋白的表达明显下调,p-NF-κB-p65、TNF-α蛋白的表达均明显上调(P<0.01)。与模型组比较,ICA-L、ICA-H组大鼠肾组织上述病理变化有所改善;ICA-L、ICA-H组IκB蛋白的表达均明显上调(P<0.05或P<0.01),ICA-H组大鼠p-NF-κB-p65、TNF-α蛋白的表达均明显下调(P<0.01),ICA-L组大鼠p-NF-κB-p65蛋白表达明显下调(P<0.05),而ICA-L组大鼠TNF-α蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论:ICA具有改善SHR肾病理性损伤的作用,其机制可能与抑制NF-κB信号通路相关。

Th17通过NF-κB和P38调控急性脑梗死大鼠炎性损伤的实验研究

目的探讨Th17对急性脑梗死大鼠炎症损伤的调控作用。方法手术制备急性脑梗死大鼠(MCAO 24 h,MCAO 72 h)模型,通过评价各组小鼠神经行为学情况进行模型鉴定,符合急性脑梗死大鼠模型者继续进行后续实验。通过流式细胞术检测外周血Th17细胞数量; Western blot检测NF-κB P65和p-P38的蛋白表达。结果与假手术组(Sham)相比,MCAO 24 h和MCAO 72 h组外周血中的Th17细胞数量显著增加,且呈时间依赖性[(0. 73±0. 17),(10. 83±0. 69),(14. 47±1. 30)]; NF-κB P65和p-P38蛋白表达均明显增加,但与作用时间没有明显的相关性[(1±0),(1. 74±0. 16),(1. 93±0. 2)][(1±0),(1. 29±0. 12),(1. 32±0. 05)]。结论 Th17是参与脑梗死发生后脑炎症反应的重要细胞。其作用机制可能与诱导NF-κB P65和p-P38的活化,而引起下游多种免疫细胞的成熟和活化,通过促炎性因子等引起组织炎性细胞浸润并导致组织破坏。因此Th17细胞及其效应分子也许可以为急性脑梗死后继发性脑水肿和脑损伤的预防/治疗提供新的方法。

远志对Aβ25-35诱导AD模型大鼠海马区NF-κB活化研究

目的:观察远志对双侧海马注射Aβ25-35建立的AD模型大鼠海马区NF-κB p65的活化、P-IκB、IκB表达的影响,从NF-κB信号转导通路调控机制探讨远志对AD可能的防治作用途径。方法:将96只大鼠随机分为正常对照组,假手术组,模型组,远志低、中、高剂量组共6组,每组16只。采用双侧海马注射β淀粉样多肽25-35片断(Aβ25-35)制作大鼠AD模型;连续给药4周后采用免疫荧光法检测各组大鼠NF-κB p65活化;免疫组化法观察P-IκB、IκB在大鼠海马区的表达。结果:远志能抑制AD模型大鼠海马区NF-κB p65活化。结论:远志能够抑制AD模型大鼠海马区NFκB p65活化,这种作用主要是通过抑制IκB a磷酸化降解而不是通过刺激IκB a蛋白合成增加来实现的。

八宝丹抑制TNF-α诱导C2C12成肌细胞Atrogin-1表达的研究

目的研究八宝丹(BBD)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的C2C12成肌细胞中核因子κB(NF-κB)通路及下游通路UPS系统中萎缩相关基因1(Atrogin-1)的作用。方法①筛选BBD干预浓度实验:取对数生长期C2C12成肌细胞分别予0、0.125、0.25、0.5、0.75、1 mg/mL不同浓度BBD干预48 h,采用MTT法检测细胞活力;②筛选TNF-α刺激细胞的浓度和时间实验:取对数生长期C2C12成肌细胞,分别予0、1、10、50 ng/mL TNF-α蛋白液刺激C2C12成肌细胞,Westernblot法检测p-P65、Atrogin-1蛋白表达以筛选出TNF-α刺激细胞的最佳浓度;再根据TNF-α刺激细胞的最佳浓度干预C2C12成肌细胞0 min、8 min、15 min、30 min、1 h、4 h,West⁃ernblot法检测p-P65、Atrogin-1蛋白筛选出TNF-α刺激细胞的最佳时间;③BBD干预实验:将C2C12成肌细胞随机分为空白对照组、药物对照组、模型组、八宝丹组,药物对照组和八宝丹组分别加入BBD预处理2 h,再根据筛选的TNF-α刺激细胞最佳浓度和时间,于模型组和八宝丹组中加入TNF-α刺激细胞,Westernblot法检测p-P65、Atrogin-1的蛋白表达水平。结果①筛选BBD干预浓度实验结果表明,不同浓度BBD对C2C12成肌细胞活力无影响(P>0.05),根据本课题组前期研究结果,最终选取0.75 mg/mL作为BBD干预细胞浓度;②筛选TNF-α刺激细胞的浓度和时间实验结果表明,10 ng/mL TNF-α刺激C2C12成肌细胞8 min后p-P65蛋白表达明显升高(P<0.05),10 ng/mLTNF-α刺激C2C12成肌细胞4 h后Atrogin-1蛋白表达水平明显升高(P<0.01);③BBD干预实验结果表明,与空白对照组比较,模型组p-P65、Atrogin-1蛋白表达显著上调(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,八宝丹组p-P65、Atrogin-1蛋白表达显著下调(P<0.05,P<0.01)。结论BBD可抑制TNF-α诱导的NF-κB信号通路中NF-κB的磷酸化水平及下游通路Atrogin-1蛋白表达。

消痰和胃方干预胃癌前病变大鼠NF-κB通路的研究

目的:检测消痰和胃方对胃癌前病变大鼠胃黏膜组织NF-κB通路的影响,探讨该方干预胃癌前病变的机制。方法:清洁级Wistar雄性大鼠,空白对照组和模型组,模型组采用以化学干预为主的多因素造模方法,共32周。模型组再分为模型对照组、维酶素组、消痰和胃方组。干预6周后采用Western blot检测大鼠胃黏膜组织中p-NF-κB p65蛋白表达的差异。结果:与模型对照组相比,消痰和胃方组p-NF-κB p65表达降低(P<0.05),维酶素组无统计学意义(P>0.05),并且消痰和胃方能改善胃癌前病变大鼠整体情况,较维酶素更优。结论:消痰和胃方防治胃癌前病变的机制有可能通过干预NF-κB通路实现的,值得进一步深入研究。

CEBPs在阿霉素肾病中表达及作用机制研究

目的:研究CEBPs各亚型在慢性肾损伤动物模型中的表达情况,探讨CEBPs在慢性肾脏疾病中可能作用机制,为阻断或延缓慢性肾损伤提供新的靶点。方法:建立阿霉素肾病(ADR)模型,制作各时间点肾组织切片及留取肾组织标本。利用免疫荧光染色和western blot检测CEBPs亚型(CEBP-β/CEBP-δ)在ADR肾病模型中表达情况。结果:(1)免疫荧光染色检测发现CEBP-β转录因子主要表达在肾小球及肾间质细胞核中,在ADR模型中阳性部位随着慢性肾损伤加重表达量逐渐下降。(2)western blot检测发现CEBP-β在ADR模型的4周和8周组较正常组相比表达量下降,且差异有统计学意义(P<0.05)。(3)western blot检测发现磷酸化的CEBP-β(p-CEBP-β)在ADR模型的4周和8周组较正常组相比表达量升高,与CEBP-β表达趋势相反。(4)western blot检测发现CEBP-δ在ADR模型4周组和8周组较正常组相比表达量升高,且差异具有统计学意义(P<0.05)。(5)NF-κBp65在ADR肾病模型4周组及8周组表达升高,较正常组比较差异有统计学意义(P<0.05)。且NF-κBp65表达趋势与CEBP-δ表达趋势相同,与CEBP-β表达趋势相反。结论:(1)CEBP-β/CEBP-δ可作为肾损伤的生物学标记物,参与慢性肾脏疾病的发生发展。(2)CEBP-β参与肾损伤机制可能与其磷酸化激活下游因子相关。(3)阻断CEBP-β/CEBP-δ转录因子的激活可能缓解肾脏炎症反应和纤维化反应的发生。(4)CEBP-β/CEBP-δ转录因子信号通路可能与NF-κB信号通路存在相互关联作用。

盆炎净片对苯酚胶浆致大鼠盆腔炎性疾病后遗症的影响

目的研究盆炎净片对苯酚胶浆诱导的盆腔炎性疾病后遗症(SPID)大鼠的治疗作用及相关机制。方法采用苯酚胶浆诱导SPID大鼠模型。将30只雌性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、妇科千金片组(656 mg·kg^(-1))、醋酸地塞米松片组(0.31 mg·kg^(-1))和盆炎净片低、高剂量组(388、775 mg·kg^(-1)),每日1次,连续灌胃给药21 d后取材。观察大鼠子宫解剖形态学的改变,并根据Philips评分标准进行盆腔粘连程度评分;采用苏木精-伊红(HE)染色观察子宫组织病理学形态;采用蛋白质免疫印迹法(Western Blot)检测子宫组织磷酸化-核转录因子κB-p65(p-NF-κB-p65)的蛋白表达;采用免疫组化法(IHC)检测子宫组织细胞间黏附分子1(ICAM-1)的蛋白表达。结果与模型组比较,盆炎净片低、高剂量组的大鼠子宫形态得到改善,盆腔粘连评分明显降低(P<0.05),子宫组织的慢性炎症病理形态减轻,子宫组织的p-NF-κB-p65、ICAM-1蛋白表达明显下调(P<0.05,P<0.01)。结论盆炎净片可能通过下调子宫组织的p-NF-κB-p65、ICAM-1蛋白表达来发挥对SPID大鼠的治疗作用。