mTOR/p-4EBn,p-p70S6k信号通路对绒癌细胞株JEG-3的作用

目的:运用雷帕霉素对mTOR的特异性抑制作用,探讨mTOR信号通路对人绒癌细胞株JEG-3的作用的分子机制。方法:运用RTPCR检测雷帕霉素对其靶点mTOR的mRNA表达量的影响;用western-blot检测雷帕霉素处理后mTOR及调控的下游蛋白p-4EBP1和p-P70S6K的蛋白表达量的变化。结果:绒癌细胞JEG-3中mTOR/p-4EBP1,p-P70S6k信号通路对绒癌细胞的增殖起着重要作用。

结肠癌中p-mTOR、p-p70S6K的表达与临床病理意义

目的:探讨磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-m TOR)及其下游因子p-p70S6K在结肠癌中的表达情况,分析其与临床病理特征的关系。方法:应用免疫组织化学方法检测结肠癌组织、癌旁组织、正常结肠组织中p-m TOR、p-p70S6K的表达。结果:81例结肠癌组织中p-m TOR表达率为51.85%(42/81),显著高于正常结肠组织的21.74%(5/23)、癌旁组织35.80%(29/81),且p-m TOR的表达与TNM分期、结肠癌解剖位置相关(X^2=7.617、5.358,P<0.05)。p-p70S6K在结肠癌的表达率为72.84%(59/81),且与p-m TOR的表达呈正相关(r=0.356,P=0.001)。结论:p-m TOR、p-p70S6K蛋白在结肠癌组织中高表达,且与结肠癌的发生、解剖部位、TNM分期有关,可作为结肠癌诊断和预后判断的指标。

mTOR和p-p70S6K在食管鳞癌组织中蛋白表达的相关性及其临床意义

目的:探讨哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)及其下游关键因子p-p70S6K的表达与食管鳞癌发生、发展及浸润、转移的关系.方法:35例食管癌手术切除标本取自河南省安阳市肿瘤医院.应用免疫组织化学SP法检测35例食管鳞癌组织,15例癌旁不典型增生组织及15例正常食管黏膜组织中mTOR及p-p70S6K蛋白的表达.结果:食管鳞癌组织中mTOR蛋白表达与肿瘤TNM分期密切相关(χ2=9.121,P<0.05);在食管鳞癌癌变过程中,mTOR蛋白在正常黏膜组织、癌旁不典型增生组织及癌组织中的表达率依次增高,分别为20%(3/15)、46.7%(7/15)、62.9%(22/35),组间比较有明显差异(χ2=7.767,P<0.05).p-p70S6K蛋白表达与肿瘤的淋巴结转移及TNM分期密切相关(χ2=5.846,4.523;均P<0.05),其在正常黏膜组织、癌旁不典型增生组织及癌组织中的表达率依次增高,分别为33.3%(5/15)、73.3%(11/15)、74.3%(26/35),组间比较有明显差异(χ2=8.350,P<0.05),mTOR及p-p70S6K的表达呈正相关关系(γp=0.359,P=0.034).结论:mTOR及p-p70S6K蛋白在食管鳞癌组织中表达显著升高,且二者与食管鳞癌的生物学行为关系密切.提示二者高表达与食管鳞癌的发生、发展有关,可作为食管鳞癌早期诊断和判断预后的辅助指标.

mTOR信号通路中p-p70s6k与结肠癌的研究进展

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mamalian target of rapamycin,mTOR)信号通路在细胞生长、增殖、分化、细胞周期调控等多个方面起到重要作用。核糖体蛋白S6激酶是该通路中的重要成分,磷酸化核糖体蛋白S6激酶是其活化形式。该分子在众多癌组织中异常表达。了解其在结肠癌组织中的表达情况,可能成为治疗结肠癌的潜在靶点,无疑对结肠癌治疗具有重要意义。

乳腺癌组织中p-Tyr、p-Akt和p-p70S6K的表达及其临床意义

目的探讨p-Tyr、p-Akt和p-p70S6K在乳腺癌中的表达以及与临床病理参数的关系。方法用免疫组化SP法检测120例乳腺浸润性导管癌,20例癌旁正常组织,20例导管内癌组织中p-Tyr、p-Akt和p-p70S6K的表达。结果p-Akt表达与p-Tyr和p-p70S6表达呈正相关(r=0.211,P=0.021;r=0.199,P=0.030),在癌旁正常组织中无表达,在癌组织中呈高表达。p-Tyr、p-Akt和p-p70S6K表达与术后无瘤生存有关,差异具有统计学意义(分别P=0.019,P=0.002和P=0.044),与绝经状态、年龄、肿瘤大小和TNM分期无关(P>0.05)。p-Tyr、p-Akt表达与ER表达呈正相关(r=0.252,P=0.006;r=0.229,P=0.012),p-Akt和p-p70S6表达与淋巴结转移有关,差异有统计学意义(分别P=0.004,P=0.022),p-Akt表达还与组织学分级有关,差异有统计学意义(P=0.040),与PR表达呈负相关(r=-0.201,P=0.028)。结论p-Tyr、p-Akt和p-p70S6K在乳腺癌的发生发展中起重要作用。p-Akt可作为判断乳腺癌预后的参考指标。

结肠癌组织中p-p70S6K的表达及临床意义

目的:检测p-p70S6K在结肠癌组织中的表达并探讨其临床意义。方法:选取40例结肠癌组织蜡块以及40例同一患者的正常结肠组织蜡块进行免疫组化实验,其中又随机选取3组新鲜结肠癌组织和正常结肠组织,通过免疫印迹(Western blot)技术检测p-p70S6K在各组织中的表达情况。结果:在免疫组化实验中,癌组织阳性28例,阴性12例,阳性率为70%,正常结肠组织阳性14例,阴性26例,阳性率为35%,采用Pearson卡方检验,得出x2=9.825,P=0.002<0.05,说明癌组织与正常结肠组织中p-p70S6K的表达差异有统计学意义;在免疫印迹实验中,以甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)为内参,重复试验三次,均显示目标蛋白(p-p70S6K)分子量约70 KD,癌组织中p-p70S6K表达较正常结肠组织明显增加,两组表达水平的比较采用t检验,得出P=0.025<0.05,说明差异具有统计学意义。结论:p-p70S6K在结肠癌组织中异常表达,提示该分子在结肠癌的发生、发展过程中具有重要的调控作用,进一步的研究可为结肠癌的靶向治疗提供分子生物学基础。

4E-BP1、p70S6K在RAD001抑制胃癌MKN-28、N-87细胞生长中作用的实验研究

目的:探讨真核起始因子4E(eIF-4E)结合蛋白1(4E-BP1)、核糖体40S小亚基S6K蛋白激酶p70S6K在RAD001抑制胃癌MKN-28、N-87细胞生长中的作用。方法:体外培养人胃癌MKN-28、N-87细胞,给予RAD001干预后通过细胞计数、流式细胞术、Western-blot检测肿瘤细胞生长、细胞周期分布及p70S6k、4E-BP1蛋白表达及磷酸化情况。结果:细胞计数结果显示RAD001作用于胃癌细胞株MKN-28,N-8724h即开始出现对细胞生长的抑制作用,随着作用时间延长至48、72h,抑制作用逐渐增强。流式细胞术结果显示RAD001作用24h后MKN-28、N-87细胞株细胞周期发生改变,停滞在G0～G1期细胞比例增加,在实验中显示细胞系N87对于RAD001作用相对敏感。Western-blot结果显示RAD001作用24h后MKN-28、N-87的4E-BP1和p70S6K表达下降,同时去磷酸化。结论:RAD001是通过抑制mTOR的活性,进而阻断4E-BP1及p70S6K的磷酸化和蛋白质翻译进而调节着细胞周期以发挥抑制胃癌细胞生长的作用。

磷酸化的mTOR、p70S6K及4EBP1在食管鳞状上皮癌变中的表达及其意义

目的分析磷酸化的mTOR、p70S6K及4EBP1在正常组织、高/低级别上皮内瘤变组织及食管鳞癌组织中的表达水平差异及其与患者临床病理特征的相关性,为早期诊断、治疗食管癌提供依据。方法收集食管鳞状细胞癌组织89例,并选取周围高级别上皮内瘤变组织34例,低级别上皮内瘤变组织17例,及远离肿瘤的正常食管组织59例,制作组织芯片,运用免疫组织化学技术检测p-mTOR、p-p70S6K及p-4EBP1在各组中的表达,并与临床病理参数进行相关性分析。结果 p-mTOR、p-p70S6K和p-4EBP1水平在食管鳞癌发生过程中呈递增趋势。p-mTOR水平与肿瘤病理分级呈正相关,在粘膜层及纤维膜层显著高于肌层;p-p70S6K水平与肿瘤临床分期和浸润深度呈负相关。结论 p-mTOR、p-4EBP1与食管癌发生、进展有关,p-p70S6K是食管癌变的早期事件,联合检测可对早期食管癌的发生具有一定预警作用。

p-AKT-mTOR-p70S6K信号通路蛋白与卵巢癌化疗耐药相关性的研究

目的 探讨p-AKT-mTOR-p70S6K信号通路蛋白与卵巢癌化疗耐药相关性。方法 选取2007年2月~2014年5月中南大学湘雅医院收治的卵巢癌患者43例,其中18例患者为耐药组,25例患者为敏感组,对43例患者均实施免疫组化方法检测,对患者p-AKT蛋白、mTOR蛋白、p70S6K蛋白在两组患者中的表达量情况进行观察。结果 p-AKT蛋白、mTOR蛋白、p70S6K蛋白在卵巢癌化疗耐药组织中具有明显较高的阳性表达率,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 p-AKT-mTOR-p70S6K信号通路中p-AKT蛋白、mTOR蛋白、p70S6K蛋白在卵巢癌化疗耐药组织中具有较高的阳性表达率,具有较高的临床推广价值。

PLIN5通过p-AKT/p70S6K信号通路对肺癌细胞增殖的抑制作用

目的检测PLIN5在肺癌中的表达情况及作用,探讨其与p-AKT/p70S6K信号通路的关系。方法通过检索数据库资料结合免疫组化染色,分别在mRNA和蛋白水平分析PLIN5在肺癌及癌旁正常组织中的表达差异。慢病毒感染过表达PLIN5和用siRNA敲低PLIN5在肺癌细胞系A549和NCI-H1299中表达后,CCK-8活力检测细胞增殖能力变化;比色法检测细胞ATP含量变化;流式细胞术检测活性氧含量变化;Western blot检测p-AKT/p70S6K信号通路相关蛋白变化。结果公共数据库资料和免疫组化结果显示,与癌旁组织相比,在肺癌组织中PLIN5表达下调。过表达PLIN5后细胞增殖受到抑制,敲低PLIN5后细胞增殖能力上升。ATP含量检测显示PLIN5降低细胞内ATP含量水平。活性氧含量检测显示PLIN5上调细胞内活性氧含量水平。PLIN5降低p-AKT(Ser473),p-AKT(Thr308),p70S6K蛋白水平表达。结论PLIN5通过p-AKT/p70S6K信号通路在肺癌生长增殖中起抑制作用。

苦参碱通过MAPK/mTOR信号通路诱导IMCD3细胞自噬及机制研究

目的:通过观察苦参碱对小鼠肾脏内髓集合管上皮细胞(IMCD3)自噬的影响,探讨苦参碱诱导细胞自噬可能的分子机制。方法:在小鼠IMCD3中加入不同浓度的苦参碱(0.2、0.4、0.8、1.6 mg/ml),检测苦参碱对细胞活性、细胞的凋亡以及细胞自噬的影响;采用Western blot检测自噬相关的蛋白LC3、ERK、p-ERK、p53、Beclin-1、p70S6K、p-p70S6K、AKT、p-AKT表达水平的变化。结果:当苦参碱浓度为0、0.2、0.4、0.8 mg/ml时,IMCD3活性以及凋亡坏死没有明显变化,当苦参碱浓度为1.6 mg/ml时,细胞凋亡坏死明显增加;苦参碱处理后,细胞中自噬小体的数量明显增加;随着苦参碱处理浓度的增加,细胞中LC3蛋白表达明显升高,p-ERK、p-p70S6K表达明显减弱,ERK、p70S6K、p53、Beclin-1、AKT和p-AKT等蛋白表达无明显变化。结论:苦参碱可通过抑制MAPK/mTOR信号通路的活化促进小鼠IMCD3的自噬。

海马CRHR1调节慢性应激致老年前期小鼠学习记忆损伤的机制

目的探究海马促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)受体1型(CRHR1)在慢性应激致老年前期小鼠学习记忆损伤中的作用机制。方法12~14月龄的C57BL/6J小鼠根据性别、基因型以及是否予以慢性不可预测应激(CUS)进行分组,对应激组施加为期30 d的CUS。使用聚合酶链式反应(PCR)、琼脂糖凝胶电泳和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)对小鼠进行基因型鉴定。新物体识别实验和Morris水迷宫测定学习记忆能力。Golgi-Cox染色观察海马神经元树突受损情况,Western blot测定海马组织雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、p-mTOR(Ser2448)、核糖体蛋白S6激酶(p70S6K)、p-p70S6K(Thr389/Thr412)蛋白表达,ELISA检测血清CRH水平。结果相较于慢性应激前,WT应激各组小鼠慢性应激后的认知系数下降,差异有统计学意义(P<0.05),而KN应激各组小鼠慢性应激前后认知系数差异无统计学意义。与WT应激组相比,WT对照组小鼠逃避潜伏期均缩短(P<0.05)、穿越平台和目标象限次数上升(P<0.01),KN各组小鼠上述差异无统计学意义。相较于WT对照组,WT应激组小鼠海马CA1、CA3、DG区神经元复杂性降低(P<0.05),海马p-mTOR、p-p70S6K表达水平均降低(P<0.05);而KN应激组与KN对照组相比,除雌性组小鼠海马p-mTOR表达水平降低外(P<0.05),其余均无显著性差异。此外,与对照组相比,应激各组小鼠血清CRH水平均上升,差异有统计学意义(P<0.01)。结论海马CRHR1调控慢性应激所致的老年前期小鼠的学习记忆损伤和神经元树突受损,其机制可能是慢性应激引起的高水平CRH无法与受体CRHR1结合,减轻了高水平CRH所抑制的mTOR/p70S6K信号通路表达。

国产雷帕霉素对人淋巴瘤细胞Raji增殖的影响

目的探讨国产雷帕霉素(宜欣可)对人淋巴瘤细胞株Raji细胞体外生长及对mTOR/p 70S6K信号通路的影响。方法 MTT法检测不同浓度(0、1、5、10、20、40、50、100 nmol/L)国产雷帕霉素作用不同时间(24、48、72 h)对Raji细胞增殖的影响。光学显微镜观察Raji细胞形态学变化。流式细胞仪测定国产雷帕霉素对Raji细胞周期分布和凋亡的影响。Western blot方法检测国产雷帕霉素处理前后对Raji细胞mTOR、p70S6K、p-p70S6K蛋白的影响。结果国产雷帕霉素对Raji细胞增殖有明显的抑制作用(不同浓度P<0.01或P<0.05),呈现明显的剂量-效应和时间-效应依赖关系。国产雷帕霉素明显抑制Raji细胞周期发展(P<0.05),但没有发生明显的凋亡(P>0.05)。0、10、50、100 nmol/L国产雷帕霉作用于Raji细胞的mTOR、p-p70S6K,其蛋白量随药物浓度增大而降低(P<0.05),p70S6K随药物浓度增大而升高(P<0.05)。结论人淋巴瘤细胞株Raji中存在mTOR/p70S6K信号通路激活状态,宜欣可可抑制该通路激活并通过阻滞细胞周期发展抑制Raji细胞增殖。

强心饮对心衰病模型大鼠心功能及心肌肥厚影响的实验研究

目的观察强心饮对阿霉素诱导的心肌肥厚大鼠相关调控细胞生长与增殖蛋白表达的变化,以探讨强心饮对心肌肥厚潜在的作用机制。方法 40只SD大鼠随机分为5组:模型组、正常组、雷帕霉素组、强心饮大剂量组、强心饮小剂量组。采取腹腔注射阿霉素复制大鼠心肌肥厚模型,观察大鼠心肌形态学、血流动力学、心衰指标及调控心肌肥厚相关蛋白表达的变化。结果与模型组比较,强心饮治疗组明显改善心肌肥厚大鼠心脏结构及功能,降低心肌组织BNP含量,抑制调控细胞生长蛋白mTOR及p70S6K的磷酸化(P<0.01或P<0.05)。结论强心饮能改善心肌肥厚大鼠心功能及抑制心肌肥厚,其机制可能调控p-mTOR及p-p70S6K的表达有关。

mTOR体内表达水平与妊娠期糖尿病相关性研究

妊娠期糖尿病(GDM)是指妊娠期间发生的轻度的糖代谢异常,但血糖未达到显性糖尿病的水平,占孕期糖尿病的80%~90%,易导致妊娠不良结局[1]。妊娠期糖尿病产后是2型糖尿病发病的高危人群且子代发生肥胖、糖耐量异常和2型糖尿病等代谢相关疾病风险增加,严重影响人类的健康[2]。

mTOR信号通路在Xp11.2易位/TFE3基因融合相关性肾癌中的表达及其意义

目的:探讨mTOR信号通路在Xp11.2易位/TFE3基因融合相关性肾癌(简称TFE3肾细胞癌)中的表达及其意义。方法:选取TFE3肾细胞癌23例、肾透明细胞癌组织60例和乳头状肾细胞癌20例。采用免疫组化方法检测3种肾细胞癌组织中p-mTOR与P70S6K的表达情况,观察二者表达与3种肾细胞癌的关系,进而研究mTOR信号通路与TFE3肾细胞癌发生发展的关系。结果:p-mTOR在TFE3肾细胞癌、肾透明细胞癌和乳头状肾细胞癌中的表达分别为(83.7±3.2)、(49.5±6.7)和(46.8±5.3)(P<0.05)。P70S6K在TFE3肾细胞癌、乳头状肾细胞癌组和肾透明细胞癌中的表达分别为(88.2±9.8)、(42.7±6.7)和(52.4±7.1)(P<0.05)。p-mTOR在年龄<35岁组和年龄≥35岁组的TFE3肾细胞癌表达为(212.0±75.9)和(27.3±47.5),在有淋巴结转移组和无淋巴结转移组表达为(255.0±21.2)和(72.1±93.4),在有脉管瘤栓组和无脉管瘤栓组表达为(225.0±35.5)和(81.6±89.4),两组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。P70S6K在年龄<35岁组和年龄≥35岁组的TFE3肾细胞癌组织中的表达为(220.0±63.2)和(30.3±49.7),在有淋巴结转移组和无淋巴结转移组表达为(187.0±47.5)和(45.1±73.6),在有脉管瘤栓组和无脉管瘤栓组表达为(240.0±42.4)和(73.5±95.9),两组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。TFE3肾细胞癌组织中p-mTOR和P70S6K表达的H-score评分呈正相关(r=0.987,P<0.05)。结论:与肾透明细胞癌和乳头状肾细胞癌组织相比,TFE3肾细胞癌组织中pmTOR与P70S6K表达显著增高,有助于TFE3肾细胞癌的鉴别诊断。TFE3肾细胞癌中P70S6K和p-mTOR表达与患者年龄、脉管瘤栓和淋巴结转移等因素相关,而与肿瘤直径大小和性别无关。TFE3肾细胞癌中mTOR信号通路处于激活状态,为TFE3肾细胞癌的分子治疗提示潜在作用靶点。