TCP1表达对HL60和HL60/A 细胞增殖及细胞内药物蓄积的调控作用及其机制

目的:研究TCP1表达对HL60及HL60/A细胞增殖及细胞内药物蓄积的影响及其机制。方法:利用慢病毒转染技术构建敲低、过表达TCP1的HL60/A细胞和HL60细胞及其对照组细胞,Western blot评估敲低、过表达效率。采用CCK-8法检测细胞增殖能力;激光共聚焦显微镜及流式细胞术检测细胞内的药物蓄积;流式细胞术及Western blot检测膜转运蛋白(MRP1、P-gP)及p-AKT的表达水平。结果:在HL60/A细胞中敲低TCP1的表达能够抑制细胞增殖,增加细胞内药物蓄积,降低转运蛋白MRP1及P-gP的表达,在HL60细胞中过表达TCP1能够促进细胞的增殖,减少细胞内药物蓄积,提高转运蛋白MRPI及P-gP的表达。同时利用PI3K抑制剂LY294002抑制PI3K/AKT信号能够拮抗TCP1过表达所致的细胞增殖活性增强、细胞内药物蓄积减少及MRP1、P-gP表达的升高。结论:TCP1能够促进细胞增殖,并通过激活PI3K/AKT信号促进转运蛋白MRP1、P-gP的表达,降低细胞内的药物蓄积。

小分子药物TD-198946促进大鼠骨髓间充质干细胞的成骨分化

背景:小分子药物TD-198946是一种能诱导干细胞形成软骨的高效软骨生成剂,但目前尚不清楚其对成骨分化的作用。目的:探讨小分子药物TD-198946促进大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的效果及其作用机制。方法:提取SD大鼠骨髓间充质干细胞,利用CCK-8法评估不同浓度TD-198946对骨髓间充质干细胞增殖的影响,确定TD-198946的最佳使用浓度;然后加入最适浓度TD-198946和成骨分化培养基对骨髓间充质干细胞进行成骨诱导;成骨诱导第3天用qRT-PCR检测碱性磷酸酶、Runt相关转录因子2、骨桥蛋白、骨钙蛋白、Ⅰ型胶原基因表达;成骨诱导第7天进行碱性磷酸酶染色,Western blot检测Runt相关转录因子2、Ⅰ型胶原、AKT、p-AKT、PI3K、p-PI3K蛋白表达;成骨诱导第21天进行茜素红染色。结果与结论:①CCK-8实验结果显示,100 nmol/L TD-198946能促进骨髓间充质干细胞增殖;②碱性磷酸酶染色及茜素红染色结果显示,TD-198946能促进大鼠骨髓间充质干细胞的成骨分化;③qRT-PCR结果显示,TD-198946可促进成骨相关基因碱性磷酸酶、Runt相关转录因子2、骨桥蛋白、骨钙蛋白、Ⅰ型胶原的表达;④Western blot结果显示,TD-198946可促进Runt相关转录因子2、Ⅰ型胶原以及p-PI3K、p-AKT蛋白表达。结果表明,小分子药物TD-198946可能通过激活PI3K/AKT信号通路,诱导大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化。

偏痛汤1号对痛敏性偏头痛大鼠BDNF/p-Akt信号途径的影响

目的基于BDNF/p-Akt信号途径研究偏痛汤1号对硝酸甘油(NTG)致偏头痛模型大鼠作用机制的影响。方法采用随机数字表法将40只SD雄性大鼠分为空白组、假手术组、模型组、阳性药组、偏痛汤1号组,每组8只。空白组予正常饮食水饲养,假手术组予颈背部皮下注射生理盐水,其余各组大鼠予颈背部皮下注射NTG。成模后给药1周,同时检测行为学及痛阈值变化。采用ELSIA技术检测外周血浆中白细胞介素-6(IL-6)、脑神经营养因子(BDNF)、一氧化氮(NO)水平。RT-qPCR技术检测大鼠三叉神经节中降钙素基因相关肽(CGRP)、BDNF、蛋白激酶B(Akt)、Bcl-2相关死亡启动因子(BAD)及NO mRNA转录水平。Western blotting技术测定大鼠三叉神经节中BDNF、Akt及p-Akt蛋白表达。结果与模型组比较,偏痛汤1号组大鼠眼眶痛阈上调(P<0.05);血浆BDNF、NO蛋白表达水平下调(P<0.05),IL-6无显著下降趋势(P>0.05);三叉神经节中CGRP、Akt、BDNF mRNA转录水平下调(P<0.05),BAD、NO mRNA转录水平有下调趋势,但无显著差异(P>0.05),Akt、p-Akt与BDNF蛋白表达水平显著降低(P<0.05或P<0.001)。结论偏痛汤1号抑制痛敏性偏头痛的机制与调控BDNF/p-Akt信号途径,下调偏头痛相关因子CGRP、NO、IL-6等表达水平,从而减少突触递质引起的通路活化相关。

BMP/Smad信号通路与先天性马蹄内翻足模型大鼠足踝部的软骨发育

背景:先天性马蹄内翻足主要表现为骨本身异常及软骨发育异常,BMP/Smad信号通路可以指导胚胎期骨和软骨的发育,但其在马蹄内翻足病因领域发挥的作用尚无动物实验证实。目的:探讨BMP/Smad信号通路参与调控先天性马蹄内翻足模型大鼠足踝部软骨发育异常的机制。方法:将生长状况相同的孕10 d的SD大鼠随机分为实验组和对照组。实验组采用135 mg/kg维甲酸灌胃制作马蹄内翻足模型,对照组采用等量植物油灌胃;孕21 d后剖腹取出胎鼠,实验组孕鼠产下胎鼠41只中出现马蹄足畸形27只,畸型率65.9%;对照组获得胎鼠36只,均未出现畸形。分离胎鼠足踝部组织进行苏木精-伊红染色,并采用Western blot、RT-qPCR、免疫组化检测BMP/Smad信号通路核心蛋白Smad5、P-Smad5、通路下游蛋白SP7以及Sox9的表达水平。结果与结论:①与对照组相比,苏木精-伊红染色可见实验组大鼠足踝部组织中软骨基质增多,骨间缝隙增大;②免疫组化显示实验组Smad5与SP7表达水平下降,而Sox9基因表达增高;③RT-qPCR结果显示实验组大鼠足踝部组织中Smad5、SP7的mRNA表达水平下降,Sox9 mRNA表达水平升高;④Western blot结果显示实验组大鼠足踝部软骨组织中P-Smad5/Smad5及SP7表达降低,Sox9表达升高;⑤结果说明,先天性马蹄内翻足模型大鼠足踝部软骨异常的发生与BMP/Smad信号通路传导障碍有关。

大黄素抑制背根神经节压迫小鼠模型STAT3、VEGFA、p-ERK蛋白表达及其镇痛作用研究

目的 研究大黄素(Emodin,ED)对背根节压迫小鼠模型的镇痛作用以及对STAT3/VEGFA/p-ERK信号通路的影响。方法 建立背根神经节慢性压迫(chronic compression damage,CCD)小鼠疼痛模型,随机分为空白组、模型组、普瑞巴林组及ED低、中、高剂量组。通过检测动物机械痛敏和热辐射痛敏阈值、醋酸扭体实验评价镇痛效果;ELISA检测小鼠L4-L5节段脊髓组织中白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和CD18等炎症因子含量;Western blot和免疫荧光检测脊髓组织信号转导子和转录激活子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和磷酸化细胞外信号调节激酶(phosphorylated extracellular signal-regulated kinases 1/2,p-ERK1/2)蛋白表达。结果 与空白组比较,模型组的机械痛敏、热辐射痛敏阈值显著降低(P<0.05),脊髓背角炎症因子表达显著增高(P<0.05),脊髓中VEGFA、STAT3、p-ERK的表达显著上调(P<0.05)。与模型组比,ED低、中、高剂量组CCD小鼠模型的机械痛敏、热辐射痛敏阈值升高(P<0.05);脊髓背角炎症因子表达降低(P<0.05);脊髓背角小胶质细胞STAT3、VEGFA、p-ERK的表达降低(P<0.05),醋酸诱导的小鼠急性疼痛中扭体次数减少(P<0.05)。结论 ED对背根节压迫小鼠模型有良好的镇痛作用,其机制可能与抑制脊髓背角炎症因子表达和STAT3/VEGFA/p-ERK介导的脊髓小胶质细胞活化有关。

TCDD通过AHR和Wnt/β-catenin信号通路交互作用导致腭裂的机制研究

目的探究2,3,7,8-四氯二苯并对二噁英(TCDD)在胚胎腭发育过程中对芳香烃受体(AHR)和Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法将36只怀孕的C57BL/6N小鼠随机分为对照组(n=12)、TCDD组(n=12)和TCDD+CH223191组(n=12),并在孕7.5 d(GD7.5)至GD10.5分别对不同组小鼠进行灌胃处理。实验分别在GD13.5、14.5、15.5安乐处死小鼠获取胚胎头部和腭突组织。统计各组腭裂率;HE染色观察胎鼠腭部发育情况;免疫组化染色检测胎鼠腭突组织中蛋白CYP1A1和β-catenin的定位及表达,以及增殖标志物PCNA、Ki67的表达情况;Western blot检测AHR和Wnt/β-catenin信号通路上相关蛋白的表达;TUNEL染色法检测腭突组织中细胞凋亡情况。结果(1)对照组的小鼠胚胎未发生腭裂,而TCDD组的小鼠胚胎腭裂率为96.77%,共同暴露于TCDD和CH223191的小鼠胚胎腭裂率为81.82%。(2)HE染色显示对照组胎鼠腭突在GD13.5未发生接触,GD14.5两侧腭突接触并形成中线上皮缝(MES),GD15.5两侧腭突完全融合;而TCDD组胎鼠腭突在GD13.5~15.5均未发生接触;TCDD可导致胎鼠腭部前、中、后段均发生腭裂。(3)Western blot结果显示TCDD可以激活AHR信号通路;Wnt/β-catenin信号通路受TCDD影响,Wnt 3a和β-catenin蛋白在GD13.5和GD14.5中相对表达水平升高,而在GD15.5中降低(P<0.05);磷酸化GSK-3β/总蛋白的比值在GD13.5,GD14.5中相对升高,而在GD15.5中相对下降(P<0.05);细胞周期蛋白Cyclin D1在GD13.5~15.5中表达水平逐渐降低,并于GD14.4之后低于对照组(P<0.05)。TCDD+CH223191组β-catenin在GD15.5的相对表达高于对照组和TCDD组(P<0.05);CYP1A1在GD15.5的相对表达量低于另外两组(P<0.05)。(4)TUNEL染色结果显示GD15.5的腭间充质区域凋亡细胞比率高于对照组(P<0.05)。结论在胚胎腭发育的关键时期,暴露于TCDD的小鼠胚胎会发生腭裂,这可能与AHR和Wnt/β-catenin信号通路之间存在相互作用有关,这种相互作用会对腭突融合过程细胞的增殖与凋亡产生一定影响,从而导致腭裂的发生。

Erratum to “Plant Defense against Necrotrophic Pathogens” [American Journal of Plant Sciences 11(12) (2020) 2122-2138]

The original online version of this article (Ghozlan, M.H., EL-Argawy, E., Tokgöz, S., Lakshman, D.K. and Mitra, A. (2020) Plant Defense against Necrotrophic Pathogens. American Journal of Plant Sciences, 11, 2122-2138. https://doi.org/10.4236/ajps.2020.1112149) was published mistakenly without another co-author, Nikita Gambhir. In this regard, we revise authors and “how to cite” sections by adding her name.

一种非相干扩频信号跟踪中HPK-P位同步捕获法

星载非相干扩频应答机在接收非相干扩频信号时,特别是在低信噪比条件下,信号跟踪环路中积分结果会因比特翻转而衰减严重,从而影响跟踪环路性能。针对上述问题,提出了一种HPK-P(Half-period Kokkonen-Pietila)位同步捕获法,将位同步时钟捕获精度缩短至半个伪码周期长,降低积分值衰减量,提高了跟踪前期的环路性能。仿真结果表明,与K-P法、半周期直方图法相比,HPK-P法更适合-24 dB低信噪比下的环路跟踪。在现场可编程门阵列(Field Programmable Gate Array,FPGA)上对HPK-P法进行测试,在信噪比为-24 dB,多普勒频偏范围为±1.5 kHz,多普勒加速度为+2.5 kHz/s条件下验证了该设计的可行性。

同步挤压S变换与τ⁃p变换联合的微地震信号消噪方法

微地震监测是指导页岩气开采水力压裂作业和评价压裂效果的常用手段。地面监测所采集的微地震信号能量弱、信噪比低,微地震事件识别困难,严重影响定位的准确性。针对低信噪比地面微地震监测资料,联合使用同步挤压S变换、谱分解和τ⁃p变换,提出一种新的消噪方法。首先对监测资料进行时差校正,将微地震信号的同相轴校平;之后使用同步挤压S变换对校平后的资料进行谱分解获取单频切片;再对每个单频切片进行τ⁃p变换,并根据τ⁃p变换的结果获取微地震信号位置;最后根据信号的位置在时频域完成消噪。实际低信噪比地面微地震监测数据的处理结果表明,新方法可以获得理想的消噪结果。

麦粒灸通过IκBα缓解环磷酰胺小鼠脾脏损伤

目的基于NF-κB信号通路分析麦粒灸对环磷酰胺所致免疫抑制小鼠免疫功能的影响,探讨麦粒灸对免疫功能的调节机制。方法60只SPF级ICR小鼠随机分为空白组、模型组、中药组、麦粒灸组,各15只。空白组腹腔注射生理盐水0.2 ml,其余各组小鼠连续3 d腹腔注射环磷酰胺80 mg/kg造模;麦粒灸组在“大椎”“足三里”“三阴交”进行施灸,中药组给予贞芪扶正颗粒灌胃,每日1次连续7 d。后取材,HE法观察小鼠脾脏形态学变化,ELISA法检测血清中IL-2、IL-4、TNF-α、IFN-γ水平,Western blot检测IκBα、P-IκBα的蛋白表达水平。结果与空白组相比,模型组小鼠一般状况较差;白细胞(WBC)计数降低(P<0.01);脾脏组织出现很大程度损伤;血清中IL-4、IL-2水平降低,TNF-α、IFN-γ水平升高(P<0.01);脾脏组织P-IκBα蛋白的表达显著降低(P<0.01),而IκBα蛋白的表达高于空白组(P<0.01)。与模型组相比,麦粒灸组、中药组一般状况得到改善;WBC计数明显升高(P<0.01);脾脏损害程度有所减轻;血清中IL-4、IL-2水平升高,TNF-α、IFN-γ水平降低(P<0.01);P-IκBα蛋白的表达有不同程度的升高(P<0.01),IκBα蛋白的表达有所降低(P<0.01)。与中药组相比,麦粒灸组小鼠WBC计数略高(P<0.05),脾脏组织状况较好,IFN-γ蛋白水平较低(P<0.01)。结论麦粒灸可通过调节IκBα和P-IκBα的相对表达,影响NF-κB信号通路的活性,进而调节机体免疫应答反应,对环磷酰胺所致的免疫抑制起到缓解作用。

基于P-糖蛋白信号通路研究龙血竭对大鼠失重空肠屏障损伤的保护机制

传统中药龙血竭在航天肠道损伤的防护中发挥重要作用,但其保护失重屏障损伤的作用机制尚不清楚.P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)是肠上皮细胞膜上的外排转运体,能够将毒素、有害菌等外排以维持肠屏障完整性.文中采用大鼠尾吊模型模拟微重力效应,灌胃给药龙血竭(Dragon’s Blood,DB)21d后,观察大鼠空肠组织形态、测定肠屏障通透性标志物质量浓度、检测P-gp与Wnt/β-Catenin信号通路相关蛋白的表达.结果表明,龙血竭可通过激活Wnt/β-Catenin信号通路促进空肠中P-gp基因及蛋白的表达,能够缓解模拟微重力效应下的大鼠空肠屏障损伤.研究结果或可为航天员在轨肠道损伤防护提供基础研究数据.

TGF-β/Smad信号通路在类风湿性关节炎相关的间质性肺纤维化小鼠中的作用

目的研究TGF-β/Smad信号通路在类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)相关的间质性后肺纤维化小鼠中的作用。方法通过小鼠尾根部皮下给药完全弗氏佐剂(complete Freund′s adjuvant,CFA)与鸡Ⅱ型胶原蛋白(chickenⅡcollagen,Col-Ⅱ),构建RA小鼠模型。空白组给等量蒸馏水,对照组给等量冰醋酸(溶媒)。监测小鼠足趾肿胀程度(关节肿胀度与关节炎指数)评价小鼠建模情况;通过HE、Masson染色观察小鼠肺组织病理变化;免疫组化法观察肺间质细胞的胞质中TGF-β表达;采用化学发光法测量肺组织中羟脯氨酸水平;Western blot检测肺组织中Smad2、Smad3及p-Smad2、p-Smad3蛋白表达。结果与空白组、溶媒组相比,模型组小鼠关节肿胀、关节炎指数明显升高;给药21 d后,HE染色显示模型组肺间质有炎性改变,Masson染色显示模型组小鼠肺间质胶原纤维沉积,免疫组化染色显示模型组小鼠肺间质细胞的胞质中TGF-β表达升高,呈棕黄色;同时,与空白组、溶媒组相比,模型组肺组织匀浆显示羟脯氨酸表达明显升高;且进一步Western blot研究发现,与空白组、溶媒组相比,p-Smad2与p-Smad3在模型组中表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论RA可导致肺组织纤维化,p-Smad2与p-Smad3表达上调,在肺纤维化和RA相关的间质性后肺纤维化中起重要作用。

电针对糖尿病神经源性膀胱大鼠肌球蛋白系统的影响

目的观察电针对糖尿病神经源性膀胱(DNB)大鼠肌球蛋白系统的影响,并探讨其效应机制。方法采用高脂高糖饲料喂养结合单次腹腔注射链脲佐菌素制备DNB大鼠模型,将大鼠分为正常组、模型组、电针组和假电针组,每组10只。电针组电针“肾俞”“膀胱俞”“中髎”“三阴交”,连续8周。检测大鼠糖耐量、尿流动力学及膀胱质量,电镜观察膀胱组织线粒体变化,ELISA检测膀胱组织垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP)38、环磷酸腺苷(cAMP)和蛋白激酶A(PKA)含量,Western blot检测膀胱组织磷酸化肌球蛋白轻链激酶(p-MLCK)和磷酸化肌球蛋白轻链(p-MLC)表达。结果与正常组比较,模型组大鼠糖耐量降低,膀胱最大容量、膀胱顺应性明显升高(P<0.05),漏尿点压明显降低(P<0.05),膀胱质量明显增加(P<0.05);逼尿肌细胞线粒体肿胀,线粒体嵴断裂或溶解消失;膀胱组织PACAP38、cAMP和PKA含量明显减少(P<0.01),p-MLCK蛋白表达明显降低(P<0.01),p-MLC蛋白表达明显升高(P<0.01)。与模型组比较,电针组大鼠糖耐量差异无统计学意义(P>0.05),膀胱最大容量、膀胱顺应性明显降低(P<0.05),漏尿点压明显升高(P<0.05),膀胱质量明显降低(P<0.05);逼尿肌细胞部分线粒体轻度肿胀;膀胱组织PACAP38、cAMP和PKA含量明显增加(P<0.01),p-MLCK蛋白表达明显升高(P<0.05),p-MLC蛋白表达明显降低(P<0.05)。结论电针可通过激活DNB模型大鼠膀胱PACAP/cAMP/PKA信号通路,调控其肌球蛋白系统相关收缩元件磷酸化水平,修复逼尿肌细胞受损的线粒体,调节能量代谢,改善膀胱肥大,调控膀胱内压和顺应性,修复DNB模型大鼠受损的膀胱功能。

多指(趾)致病基因研究进展

多指(趾)畸形是最常见肢体畸形之一,具有遗传性,分为综合征型和非综合征型两大类型.非综合征型按照解剖位置可分为轴前、轴后及中央型多指,综合征型多指(趾)是指除多指表型以外,还伴随其他症状.近些年,多用连锁分析、全外显子测序等对相关致病基因的定位及突变进行分析,并通过分析突变的基因所表达的蛋白,了解其对相关信号通路可能产生的影响.通过总结多指(趾)畸形主要致病基因最新研究及影响肢体前后模式主要通路,旨在了解多指(趾)致病基因的研究方向和热点,为今后能在胚胎阶段阻断多指(趾)形成的研究提供依据和思路.

基于稀疏分量分析的生猪音频欠定盲源分离研究

旨在针对生猪养殖过程中,混合生猪音频特征难以提取及识别的问题,提出一种基于稀疏化理论的欠定生猪盲源信号分离方法。本研究选取4个月、150 kg左右,健康状况良好的长白母猪,将其不同状态下的叫声按照不同系数混合得到的音频信号作为观测信号,运用短时傅里叶变换(short-time Fourier transform,STFT)对音频信号做时频域转换,通过分组筛选出信号中的单源点,使用自适应阻尼系数的AP(affinity propagation)算法结合奇异值分解,将单源点聚类以估计混合矩阵,采用优化最小lp范数的方法完成音频信号的重构。设计2组试验,1组阐述试验的一般过程,另1组通过对比分析整个分离算法的性能,使用相似系数(similarity coefficient)、信噪比(signal to noise ratio,SNR)和均方误差(mean square error,MSE)衡量分离音频质量。结果表明:1)3个源信号与2个观测信号的欠定生猪盲源分离中,不同时长下分离出的音频信号与对应源信号的相似系数、信噪比和均方误差分别在0.67~0.92、7.9~9.7 dB和0.005~0.08之间,从波形上看,算法的分离性能与时间长短和试验次数无关,结果具有一定的稳定性。2)在源信号数与观测信号数分别为3和2、4和2、4和3、5和2、5和3、5和4时,重构信号与源信号的平均相似系数、信噪比和均方误差分别在0.785~0.957、7.468~10.347 dB和0.019~0.092之间,经过对比分析,本研究方法具有一定的可靠性。3)在源信号数一定时,观测信号数越多,测得的指标越好,分离出来的音频质量越优。综上所述,该方法能够较为有效地分离出混合猪声信号的各源信号分量,为实际环境中混合生猪音频的特征提取奠定了基础。

补肾温阳化瘀方对子宫内膜异位症大鼠PKC信号通路的影响

目的:研究补肾温阳化瘀方治疗子宫内膜异位症(EMs)的作用,探讨其调控蛋白激酶C(PKC)信号通路的机制。方法:将50只SPF级8~10周龄雌性SD大鼠随机分为5组,分别为假手术组、模型组、中药低剂量组、中药高剂量组和西药组,每组10只。采用自体移植法复制EMs大鼠模型,造模成功后分别给予补肾温阳化瘀方低、高剂量及孕三烯酮灌胃,假手术和模型组灌胃蒸馏水,连续21 d。HE染色观察在位内膜及异位灶的病理形态改变;Western blot测定在位内膜及异位灶磷酸化蛋白激酶C的α亚型(p-PKCα)、蛋白激酶C的α亚型(PKCα)蛋白的表达水平。结果:模型组在位内膜和异位灶p-PKCα蛋白水平升高;给予补肾温阳化瘀方治疗后,p-PKCα的蛋白表达水平降低(P<0.05),PKCα的蛋白表达水平无明显变化。结论:补肾温阳化瘀方通过抑制PKC信号通路来治疗EMs。

基于肺胃同治法探讨肃肺和胃汤对反流性胃肺疾病大鼠肺胃组织PKA、cAMP、SP及TRPV1蛋白表达的影响

目的:观察肃肺和胃汤对反流性胃肺疾病大鼠肺、胃组织蛋白激酶A(PKA)、环腺苷酸(cAMP)、P物质(SP)表达及磷酸化蛋白激酶A(p-PKA)、瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV1)表达的影响,探讨肺胃同治法治疗反流性胃肺疾病的作用机制。方法:30只SD大鼠,按随机数字表法分为正常对照组、模型组、中药组、西药组、中西医结合组,每组6只,除正常对照组外均采用慢性食管内灌注盐酸(含蛋白酶)方法建立反流性胃肺黏膜慢性炎症大鼠模型。中药组和西药组从造模第15天开始分别予肃肺和胃汤流浸膏(6.7 g/kg)和雷尼替丁(27 mg/kg)灌胃,中西医结合组同时给予等剂量肃肺和胃汤流浸膏和雷尼替丁,正常对照组及模型组给予同剂量生理盐水,连续灌胃7 d。取肺、胃组织进行病理形态学观察,免疫组化法测定PKA、cAMP、SP表达,用Western Blot检测p-PKA、TRPV1蛋白的表达水平。结果:各给药组大鼠肺、胃组织炎症病理半定量积分较模型组低。与正常对照组比较,模型组大鼠肺、胃组织PKA、cAMP、SP及TRPV1的蛋白表达量均极显著升高(P<0.01)。与模型组比较,中西医结合组和西药组大鼠肺组织PKA、cAMP、SP蛋白表达量均显著降低(P<0.05或P<0.01),各给药组大鼠胃组织PKA、cAMP和SP蛋白表达量显著降低(P<0.05或P<0.01),各给药组大鼠肺、胃组织p-PKA和TRPV1蛋白表达水平均显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论:肺胃同治法治疗反流性胃肺疾病作用机制可能与通过调控PKA依赖的cAMP信号介导,从而调节TRPV1的激活和SP释放有关。

急性胰腺炎大鼠肠黏膜屏障损伤、MLCK/p-MLC信号通路活性变化及其与抗菌肽的关系

目的观察急性胰腺炎(AP)大鼠肠黏膜屏障损伤情况和MLCK/p-MLC2信号通路活性变化,探讨MLCK/p-MLC2信号通路激活与抗菌肽的关系。方法将24只SD大鼠分为对照组6只和AP组18只,采用胰胆管逆行注射5%牛磺胆酸钠溶液进行AP造模,对照组仅翻动胰腺后复位。AP组于造模后6、12、24 h各取6只大鼠进行解剖和取材,对照组于造模后6 h取材。采用ELISA法检测血清淀粉酶、脂肪酶水平,HE染色法观察回肠组织病理改变,RT-qPCR法检测回肠组织潘氏细胞分泌的抗菌肽REG3γ、α-防御素5、溶菌酶mRNA表达水平,Western blotting法检测回肠组织紧密连接蛋白ZO-1、Claudin-1及MLCK/p-MLC2信号通路相关蛋白MLCK、p-MLC2蛋白表达水平。结果AP组造模后6、12、24 h血清淀粉酶、脂肪酶水平均高于对照组,其中12 h和24 h血清淀粉酶、脂肪酶水平高于6 h,且24 h高于12 h(P均<0.05)。对照组回肠黏膜完整,绒毛结构规整正常;AP组回肠黏膜出现不同程度的断裂缺失、间质水肿、炎性细胞浸润。AP组造模后6、12、24 h回肠组织病理学评分均高于对照组,且24 h高于6 h和12 h,12 h高于6 h(P均<0.05)。AP组造模后6、12、24 h回肠组织REG3γ、α-防御素5、溶菌酶mRNA及ZO-1、Claudin-1蛋白表达水平均低于对照组,且24 h低于6 h和12 h,12 h低于6 h(P均<0.05),造模后6、12、24 h回肠组织MLCK、p-MLC2蛋白表达水平均高于对照组,且12、24 h高于6 h,24 h高于12 h(P均<0.05)。AP组回肠组织MLCK蛋白表达水平与REG3γ、α-防御素5、溶菌酶mRNA水平呈负相关(r分别为-0.96、-0.95、-0.93,P均<0.05),p-MLC2蛋白表达水平与REG3γ、α-防御素5、溶菌酶mRNA水平亦呈负相关(r分别为-0.96、-0.94、-0.96,P均<0.05)。结论AP大鼠存在肠黏膜屏障损伤,MLCK/p-MLC2信号通路激活参与了AP肠黏膜屏障损伤的过程,该作用可能与潘氏细胞分泌抗菌肽减少相关。

BDNF/TrkB/Akt/p-RPS6信号通路在口腔上皮牙源性病变患儿中的作用及免疫反应分析

目的:分析BDNF/TrkB/Akt/p-RPS6信号通路在儿童口腔上皮牙源性病变中的作用及免疫反应。方法:以2018年6月—2020年6月间本院收治的50例口腔上皮牙源性病变患儿的口腔上皮病变组织标本(病例组)和50例健康儿童的口腔上皮组织标本(对照组)为研究对象,均行BDNF/TrkB/Akt/p-RPS6信号通路蛋白检测、免疫功能T细胞亚群(CD3^(+)、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+))检测和免疫球蛋白指标(IgG、IgA、IgM)检测,对比对照组和病例组上述指标的差异,并采用Pearson相关性分析法分析BDNF/TrkB/Akt/p-RPS6信号通路蛋白与免疫功能相关指标的相关性。结果:病例组的脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)、酪氨酸激酶受体B(tyrosine kinase receptor B,TrkB)、蛋白激酶B(protein kinase B,PkB,又称Akt)、磷酸化S6核糖体蛋白抗体(anti-phospho-S6 ribosoma protein,p-RPS6)的平均光密度值均高于对照组(P<0.05)。病例组的免疫功能T亚群细胞(CD3^(+)、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+))、免疫球蛋白指标(IgG、IgA、IgM)数据值均低于对照组(P<0.05)。BDNF、TrkB、Akt、P-RPS6的平均光密度值与免疫功能T细胞亚群(CD3^(+)、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+))数据值、免疫球蛋白指标(IgG、IgA、IgM)数据值呈负相关(均P<0.05)。结论:口腔上皮牙源性病变患儿存在明显的BDNF/TrkB/Akt/p-RPS6信号通路相关蛋白表达异常和免疫功能抑制,且免疫功能抑制与BDNF/TrkB/Akt/p-RPS6信号通路蛋白异常表达相关。

HPV感染与ERK信号通路关键因子在宫颈癌中的交互效应及临床意义

目的:探讨HPV感染与ERK信号通路关键因子在宫颈癌中的交互效应及意义。方法:选取2020年10月至2022年10月我院收治的宫颈癌患者90例,作为研究组,另纳入宫颈上皮内瘤变患者90例,作为对照组。统计两组HPV感染状况、ERK信号通路关键因子[核不均一核糖核蛋白E1(HnRNP E1)、磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)、磷酸化非受体酪氨酸激酶(p-Src)]表达,比较研究组不同临床病理特征患者ERK信号通路关键因子表达,Spearman分析两者间相关性,Logi.0stic回归方程分析HPV感染与ERK信号通路关键因子在宫颈癌中的交互效应。结果:研究组HPV感染率及HnRNP E1、p-ERK1/2、p-Src蛋白阳性率均高于对照组CINⅠ~Ⅱ、Ⅲ级(P<0.05);宫颈癌患者FIGO分期、HPV感染、分化程度与HnRNP E1、p-ERK1/2、p-Src蛋白呈正相关(P<0.05);HnRNP E1、p-ERK1/2、p-Src蛋白及三者交互作用是宫颈癌患者HPV感染高危因素(P<0.05)。结论:HPV感染及ERK信号通路关键因子阳性表达均可增加宫颈癌发病风险,两者存在正向交互作用,可为宫颈癌鉴别诊治提供有利参考信息。