芒果甙对连环蛋白P120磷酸化及肝癌细胞生物学行为的影响

目的:探讨P120ctn磷酸化与肝癌细胞恶性行为的关系,以及黄酮类化合物芒果甙对P120ctn磷酸化和肝癌细胞生物学行为的影响。方法:用EGF刺激法使人肝癌细胞P120ctn发生酪氨酸磷酸化并以免疫沉淀和免疫印迹法进行鉴定分析,同时观察芒果甙对细胞的干预作用。结果:肝癌细胞经EGF刺激后,P120ctn发生酪氨酸磷酸化,细胞黏附能力降低而迁移能力增强。而经芒果甙处理后,在一定程度上能使这些恶性表现得到逆转,表现为P120ctn酪氨酸磷酸化程度较轻;细胞恶性形态有所改善,伪足减少。结论:P120ctn在肝癌细胞黏附和恶性行为中起重要作用,酪氨酸磷酸化后的P120ctn与细胞恶性行为的增强有关;结果进一步提示芒果甙对P120ctn酪氨酸磷酸化有抑制作用。

非小细胞肺癌组织中p120^(ctn)与RhoA和Cdc42表达的相关性及意义

背景与目的p120ctn可以通过改变RhoGTP酶的状态进而调节细胞的黏附和肿瘤的转移。本研究通过观察p120ctn与RhoGTP酶中RhoA、Cdc42在非小细胞肺癌中的表达及其对临床病理特征的影响,为探索p120ctn在肿瘤中的生物学功能提供依据。方法采用S-P免疫组化法检测124例非小细胞肺癌标本中p120ctn、RhoA和Cdc42的表达。结果正常支气管粘膜细胞p120ctn为细胞膜强阳性表达,在非小细胞肺癌出现胞膜表达减弱和胞浆表达等异常表达,其异常表达率为79.8%(99/124),异常表达与组织类型无明显关系,与肿瘤细胞的分化、TNM分期和淋巴结转移有明显关系(P<0.05)。RhoA和Cdc42在正常支气管粘膜中均正常表达,在癌组织中表达明显增强(62.9%,78/124;56.5%,70/124)。RhoA、Cdc42在非小细胞肺癌中的表达增强与临床病理特征无明显关系。非小细胞肺癌中p120ctn的异常表达与RhoA和Cdc42的表达增强有较好的一致性和相关性(Kappa=0.523,P<0.001;Kappa=0.493,P<0.001)。结论p120ctn的异常表达可能是导致RhoA和Cdc42表达增强的重要因素。

E-cadherin、β-catenin和p120^(ctn)在所谓肺硬化性血管瘤中的表达

背景与目的所谓肺硬化性血管瘤(so-called pul monary sclerosing hemangioma,PSH)是一种迄今未能确定其组织来源及性质的少见肺部肿瘤,多年来一直是人们研究的热点。本研究通过检测E-cad-herin、β-catenin和p120ctn在PSH表面立方细胞和间质多角形细胞的免疫表型以探讨其组织来源。方法采用S-P免疫组化法检测25例手术切除PSH标本及8例肺炎性假瘤标本的E-cadherin、β-catenin和p120ctn表达情况。结果25例PSH的立方细胞中,三种上皮粘附分子E-cadherin、β-catenin和p120ctn均呈胞膜强阳性表达,β-catenin在胞膜强阳性表达的同时有胞质表达。而在多角形细胞中,E-cadherin表达缺失,β-catenin胞膜表达缺失伴部分胞质表达,p120ctn胞质表达为主伴少量胞膜表达;三种粘附分子在多角形细胞中的表达存在异质性。血管瘤样区的腔内衬细胞E-cadherin、β-catenin和p120ctn均呈胞质胞膜阳性表达。8例肺炎性假瘤中增生的Ⅱ型肺泡细胞E-cadherin、β-catenin和p120ctn表达与PSH中立方细胞的表达情况相同。结论PSH中的立方细胞可能是增生的Ⅱ型肺泡细胞,而多角形细胞为肿瘤的实质细胞且缺乏分化成熟的上皮细胞所具有的E-cadherin/catenin复合体。血管瘤样区的腔内衬细胞是与立方细胞相同的上皮细胞而非血管内皮细胞。

P120连环蛋白及其相关转录因子kaiso与肿瘤的关系

转录因子kaiso是新近发现的BTB—POZ蛋白家族的重要成员，是Armadillo连环蛋白及细胞辅助黏附因子P120连环蛋白（P120-cateninjP120^ctn）的特异性绑定伙伴，已经被证实具有转录抑制功能。P120^ctn可解除kaiso介导的转录抑制作用，并且P120^ctn在肿瘤中的亚细胞定位影响着kaiso蛋白的活性。Kaiso不像其他典型的POZ蛋白，其拥有双重的DNA序列识别，并且kaiso的细胞质和细胞核定位依赖于肿瘤组织的微环境。对于P120^ctn来说，基于它在细胞内的定位不同，它发挥了不同的作用，比如钙粘蛋白依赖性的细胞间的粘附，肌动蛋白细胞骨架的再塑造和位于细胞核内时对kaiso活性的影响。本文就核内P120^ctn和其伙伴转录因子kaiso以及他们在肿瘤基因表达调控中的角色予以综述。

β-连环蛋白P120^(ctn) survivin及雌激素受体β在乳腺癌中的表达及临床意义

本实验采用免疫组织化学方法对50例乳腺癌标本和15例癌旁正常乳腺组织的β-连环蛋白、P120^ctn、survivin和雌激素受体（ER）B基因进行检测，以揭示其在乳腺癌组织中的表达情况．并探讨其在乳腺癌发生、发展中的作用及其与临床预后之间的关系。

P120^(ctn)在口腔鳞癌中的表达及其与细胞黏附的关系

目的:对比口腔鳞癌(oral squamous-cell carcinoma,OSCC)与口腔正常黏膜中P120-连环蛋白(P120-catenin,P120ctn)和E-钙粘蛋白(E-cadherin,E-cad)的表达,观察P120ctn和E-cad的表达与口腔鳞癌临床病理参数之间的关系以及它们之间的相互关系。方法:选用人正常口腔黏膜组织26例OSCC标本49例,采用免疫组化方法检测P120ctn和E-cad的表达。结果:在口腔鳞癌中P120ctn和E-cad的正常表达率显著低于它们在正常口腔黏膜组织中的正常表达(P<0.05)。有淋巴结转移组和肌层浸润组的OSCC组织P120ctn及E-cad的正常表达显著低于无淋巴结转移组和黏膜及黏膜下层浸润组(P<0.05)。OSCC组织中Pl20ctn异常表达组的E-cad正常表达率显著低于P120ctn正常表达组(P<0.05),P120ctn与E-cad高度相关(P<0.01)。结论:P120ctn和E-cad在OSCC中的表达具有相关性,且随组织病理改变而改变。

腺病毒介导的P120ctn基因对SMMC-7721细胞侵袭能力的影响

目的以腺病毒介导连环蛋白P120(P120ctn)基因,转染人肝癌SMMC-7721细胞,观察其对SMMC-7721细胞侵袭能力的影响。方法用腺病毒介导的P120ctn基因转染SMMC-7721细胞,用逆转录-PCR(RT-PCR)和Western Blot检测细胞中P120ctn表达水平,并测定转染后细胞侵袭能力的变化。结果腺病毒介导的P120ctn转染SMMC-7721后,P120ctn的表达水平显著上升;体外侵袭实验显示转染后SMMC-7721的侵袭能力明显下降。结论腺病毒介导的P120ctn基因能够在SMMC-7721细胞中有效表达,并显著抑制肝癌细胞的侵袭能力。

β-catenin、p120 ctn在尖锐湿疣及宫颈鳞癌中的表达和意义

目的探讨β-连环蛋白及p120-连环蛋白(p120 ctn)在尖锐湿疣及宫颈鳞癌组织中的表达及生物学意义。方法采用免疫组化SP法分别检测β-catenin、p120 ctn在尖锐湿疣和宫颈鳞癌中的表达。结果β-catenin、p120 ctn在尖锐湿疣和宫颈鳞癌组织中的表达程度和阳性表达率均显著低于正常对照组,有显著性差异(P<0.01);尖锐湿疣组和宫颈鳞癌组β-catenin和p120 ctn的表达程度比较有显著性差异(P<0.01)。结论β-cate-nin、p120 ctn在尖锐湿疣和宫颈鳞癌的发病机制中起一定的作用,可作为宫颈癌前病变的参考指标。

p120^(ctn)在非小细胞肺癌组织中的表达及其临床意义

目的 探讨p120ctn在非小细胞肺癌组织中的表达及与各临床病理因素和预后的关系。方法 应用p120ctn单克隆抗体,采用免疫组织化学SP法检测143例非小细胞肺癌p120ctn表达情况,其中36例同时应用Westernblot方法对其蛋白表达和亚型情况进行了观察。结果 免疫组织化学:正常支气管黏膜细胞p120ctn表达为细胞膜强阳性,而在非小细胞肺癌中绝大多数表现为膜表达减弱或出现胞质内异位表达,其异常表达率为79 .7% ( 114 /143 )。异常表达与组织学类型无关(P>0 .05),但与肿瘤分化程度、TNM分期和淋巴结转移相关(P<0 .05),与非小细胞肺癌患者不良预后正相关。胞质的异位表达更容易出现在胞膜表达减弱的病例中,鳞癌中胞质异位表达高于腺癌。Westernblot:正常组织中p120ctn总蛋白量明显高于非小细胞肺癌,二者差异有统计学意义(P=0 .003)。正常肺组织p120ctn以亚型1(相对分子质量120 000)和亚型3(相对分子质量100 000)表达为主,而肿瘤组织中则以亚型1表达缺失或减弱为主。结论 p120ctn在非小细胞肺癌组织有异常表达,可作为评估预后的辅助指标。

肝癌细胞生物学行为改变涉及p120^(ctn)酪氨酸磷酸化的研究

目的 以表皮生长因子刺激肝癌细胞内 p12 0 ctn酪氨酸磷酸化 ,观察 p12 0 ctn酪氨酸磷酸化与p12 0 ctn在细胞内转位及肝癌细胞生物学行为的关系 ,探讨p12 0 ctn在肝癌细胞粘附和信号转导中的作用。方法 使用免疫沉淀和免疫印迹法检测表皮生长因子引起的 p12 0 ctn酪氨酸磷酸化改变情况 ,用间接免疫荧光法观察了表皮生长因子引起的 p12 0 ctn在BEL 74 0 4人肝癌细胞内的分布、转位。用相应的方法检测表皮生长因子促使BEL 74 0 4人肝癌细胞的细胞形态和细胞粘附能力的改变情况。人全长 p12 0 ctn反义核苷酸转染细胞 ,观察表皮生长因子促使的 p12 0 ctn磷酸化改变情况是否受到明显抑制。结果 表皮生长因子可使BEL 74 0 4人肝癌细胞内的 p12 0 ctn酪氨酸发生磷酸化 ,以表皮生长因子作用 2 0min时最明显 ;在细胞内转染人全长p12 0 ctn反义核苷酸后 ,表皮生长因子对p12 0 ctn酪氨酸磷酸化的上调作用明显减弱。表皮生长因子刺激下 ,磷酸化的p12 0 ctn发生了细胞内转位 ,表现为 p12 0 ctn细胞膜的表达明显减少 ,核表达增加 ;同时 β 连环蛋白也发生相似的改变 ;表皮生长因子刺激下 ,BEL 74 0 4人肝癌细胞的粘附能力明显下降 ;细胞形态变为细长和不规则 ,伪足增多。结论 在表皮生长因子刺激下BEL 74 0 4中

蛋白激酶C激活对口腔鳞癌细胞上皮-间质转化的影响

目的:利用舌癌细胞系HN12探索激活蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)对口腔鳞癌细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响。方法:采用质粒pCMV6-AC-GFP-P120^(ctn)转染HN12细胞,使HN12过表达P120-连环蛋白(P120-catenin,P120^(ctn)),再加入蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)激活剂佛波酯(phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA),采用实时荧光定量PCR、Western blot检测PMA处理前后PKC、P120^(ctn)、E-cad的mRNA和蛋白表达,通过Transwell细胞侵袭及细胞迁移试验等方法检测细胞的迁移和侵袭能力。结果:当PKC被PMA活化时,细胞形态发生改变,细胞中P120ctn的表达显著降低,E-钙黏蛋白(E-cadherin,E-cad)也随之降低,间质标记蛋白N-钙黏蛋白(N-cadherin,N-cad)和波形蛋白(Vimentin,Vim)的mRNA和蛋白表达水平显著升高,肿瘤细胞的迁移和侵袭能力显著提高(P<0.05)。结论:PKC可能通过磷酸化调节P120^(ctn)的表达,参与细胞黏附的调控,促进EMT,在口腔鳞癌细胞的迁移和侵袭过程中发挥作用。

病理学

0502056 颗粒酶B和穿孔紊免疫组织化学检测诊断肝移植急性排斥反应的敏感性与特异性；0502057 NY-ESO-1和LAGE-1癌症-睾丸抗原在肝细胞癌的表达；0502058 p120^ctn在非小细胞肺癌组织中的表达及其临床意义；0502059 涎腺恶性肌上皮瘤临床病理分析；0502060 Wortmannin对高糖视网膜Müller细胞条件培养基诱导的内皮纽胞增殖和迁移的影响。