模拟长期微重力对大鼠耳蜗基底膜p120-catenin表达的影响

目的观察模拟长期微重力对大鼠听功能的影响,探讨耳蜗黏附连接蛋白p120-catenin(p120ctn)在耳蜗基底膜表达情况及模拟微重力对其产生的影响。方法选取健康雄性SD大鼠48只,随机分为模拟微重力组和对照组,每组24只;模拟微重力组和对照组又根据暴露时间分别随机分为1 d、1周、8周、12周组,每组6只12耳。在暴露前(B0)、暴露结束后即刻(P0)进行双耳畸变产物耳声发射(distortion product otoacoustic emission,DPOAE)和听性脑干反应(auditory brainstem response,ABR)阈值检测,并于P0测听结束后处死每组大鼠并分离双侧耳蜗,进行免疫组化染色。结果各组DPOAE引出率比较,差异无统计学意义(P>0.05),ABR阈值随暴露时间的增加而升高,模拟微重力1周组、模拟微重力8周组、模拟微重力12周组P0时ABR阈值较B0时升高,差异有统计学意义(P<0.05)。模拟微重力8周组、模拟微重力12周组基底膜上p120ctn阳性表达较对照组显著增高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论模拟微重力会导致大鼠听功能损伤,耳蜗基底膜上p120ctn表达随暴露时间的延长而增加,中长期微重力导致听功能下降可能与基底膜p120ctn的表达增加有关。

乳腺浸润性导管癌MMP2和p120ctn表达的临床病理研究

目的 探讨乳腺浸润性导管癌(breast invasive ductal carcinoma, BIDC)患者MMP2和p120ctn表达与临床病理指标及预后的关系。方法 应用免疫组织化学EliVision^(TM) plus两步法检测80例BIDC患者手术标本及30例癌旁乳腺组织MMP2和p120ctn的表达,分析MMP2和p120ctn表达与患者年龄、TNM分期、分化等级、淋巴结宏转移、术后5年内复发转移5项指标的关系。结果 BIDC及癌旁乳腺组织MMP2阳性率分别为78.8%(63/80)和16.7%(5/30),p120ctn阳性率分别为45.0%(36/80)和86.7%(26/30),差异均有统计学意义(P<0.05)。MMP2和p120ctn表达均与年龄无关(P>0.05)。在TNM(T_(3)+T_(4))期、低分化、有淋巴结宏转移和5年内复发转移患者中MMP2高表达,p120ctn低表达,两者呈负相关(r=-0.46)。结论 BIDC发生发展与MMP2和p120ctn显著相关,MMP2高表达或(和)p120ctn低表达均预示BIDC发展快、分化低、转移早、预后差。

芒果甙对连环蛋白P120磷酸化及肝癌细胞生物学行为的影响

目的:探讨P120ctn磷酸化与肝癌细胞恶性行为的关系,以及黄酮类化合物芒果甙对P120ctn磷酸化和肝癌细胞生物学行为的影响。方法:用EGF刺激法使人肝癌细胞P120ctn发生酪氨酸磷酸化并以免疫沉淀和免疫印迹法进行鉴定分析,同时观察芒果甙对细胞的干预作用。结果:肝癌细胞经EGF刺激后,P120ctn发生酪氨酸磷酸化,细胞黏附能力降低而迁移能力增强。而经芒果甙处理后,在一定程度上能使这些恶性表现得到逆转,表现为P120ctn酪氨酸磷酸化程度较轻;细胞恶性形态有所改善,伪足减少。结论:P120ctn在肝癌细胞黏附和恶性行为中起重要作用,酪氨酸磷酸化后的P120ctn与细胞恶性行为的增强有关;结果进一步提示芒果甙对P120ctn酪氨酸磷酸化有抑制作用。

K-ras基因突变通过调节E-cadherin/β-catenin/p120蛋白复合体形成和RhoA蛋白活性对结肠癌细胞株Caco-2转移的影响

目的观察K-ras基因突变通过调节E-cadherin/β-catenin/p120蛋白复合体形成和RhoA蛋白活性对结肠癌细胞株Caco-2转移的影响,探讨其促进结肠癌转移的相关机制。方法将培养的结肠癌细胞株Caco-2分别给予空白质粒phr-GFP转染(对照组)、K-ras基因突变型质粒phr-K-ras(Val12)转染(转染组)、phr-K-ras(Val12)质粒转染+丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)途径特异性抑制剂PD98059处理(MAPK抑制组)和phr-K-ras(Val12)质粒转染+磷脂酰肌醇3激酶(PI-3K)途径特异性抑制剂LY294002处理(PI-3K抑制组),Transwell细胞迁移实验检测细胞迁移率,细胞免疫荧光检测E-cadherin、β-catenin蛋白表达及其在细胞内定位,Western blot检测细胞内p120蛋白的表达,免疫沉淀检测与E-cadherin结合的β-catenin蛋白水平,Pull-down实验检测RhoA蛋白活性。结果转染组Caco-2细胞的迁移率为(19.8±5.6)%,明显高于对照组的(14.0±4.2)%(P=0.001)和MAPK抑制组的(15.8±1.2)%(P=0.044),但与PI-3K抑制组的(17.5±2.8)%差异无统计学意义(P=0.095)。细胞免疫荧光检测结果显示,转染组细胞膜上的E-cadherin和β-catenin蛋白表达减少。Western blot检测结果显示,转染组和PI-3K抑制组细胞内p120总蛋白表达减少。免疫沉淀检测结果显示,转染组和PI-3K抑制组细胞内与E-cadhenn结合的β-catenin蛋白水平下降。Pulldown实验检测结果显示,转染组细胞内的RhoA蛋白活性增加。结论K-ras基因突变可以促进结肠癌细胞株Caco-2的转移,其可能是通过MAPK途径减少E-cadherin/β-catenin/p120蛋白复合体形成,增强RhoA蛋白活性来实现的。

p120ctn亚型在肺鳞癌、腺癌中表达及意义

背景与目的已有的研究显示:p120ctn(p120 catenin)与肿瘤的发生密切相关,在保持细胞黏附中起着重要作用,本研究通过观察p120ctn各亚型在肺鳞癌、腺癌和相应的癌旁肺组织中蛋白表达量的变化,探讨p120ctn亚型与各临床病理因素的关系。方法应用免疫荧光和Western Blot方法检测肺鳞癌、腺癌及对应癌旁正常肺组织中p120ctn各亚型的表达情况。结果与正常肺组织相比,p120ctn在肺癌细胞膜表达减弱,呈现胞膜荧光不连续或缺失,胞浆内存在p120ctn的蓄积。正常肺组织中p120ctn总蛋白量明显高于肺癌组织(P<0.001)。p120ctn蛋白以亚型1(120KD)和亚型3(100KD)表达为主,而在肺癌组织则出现1、3亚型表达缺失或减弱(P=0.001,P<0.001)。并且亚型3的这种缺失或减弱的现象与肺癌的淋巴结转移负相关(P=0.005)。结论p120ctn亚型1和3的蛋白表达的减弱或缺失是肺癌的普遍现象,且这种现象与淋巴结的转移相关。

肺癌细胞系中p120-catenin的基因缺失调控small GTP酶活性

背景与目的作为catenin蛋白家族的重要成员之一,p120-catenin(p120ctn)是small GTPase酶的重要调节因子,影响细胞的运动能力,但其中具体的调节机制尚不清楚。本研究旨在探讨p120ctn在肺癌细胞系中对small GTP酶家族核心成员的调节作用,及其对肺癌细胞侵袭、转移的影响。方法应用siRNA方法成功地建立了p120ctn基因沉默的多种癌细胞系BE1、SPC、LTE的细胞克隆,采用Western Blot,pull-down蛋白活性分析,裸鼠移植等体内外实验探讨其可能的调节机制。结果p120ctn的基因沉默能激活Cdc42和Rac1,失活RhoA,并且在活体内外促进肺癌细胞的侵袭和转移。结论p120ctn的缺失可激活Cdc42/Rac1、失活RhoA,促进肺癌细胞的侵袭和转移能力。

非小细胞肺癌组织中p120^(ctn)与RhoA和Cdc42表达的相关性及意义

背景与目的p120ctn可以通过改变RhoGTP酶的状态进而调节细胞的黏附和肿瘤的转移。本研究通过观察p120ctn与RhoGTP酶中RhoA、Cdc42在非小细胞肺癌中的表达及其对临床病理特征的影响,为探索p120ctn在肿瘤中的生物学功能提供依据。方法采用S-P免疫组化法检测124例非小细胞肺癌标本中p120ctn、RhoA和Cdc42的表达。结果正常支气管粘膜细胞p120ctn为细胞膜强阳性表达,在非小细胞肺癌出现胞膜表达减弱和胞浆表达等异常表达,其异常表达率为79.8%(99/124),异常表达与组织类型无明显关系,与肿瘤细胞的分化、TNM分期和淋巴结转移有明显关系(P<0.05)。RhoA和Cdc42在正常支气管粘膜中均正常表达,在癌组织中表达明显增强(62.9%,78/124;56.5%,70/124)。RhoA、Cdc42在非小细胞肺癌中的表达增强与临床病理特征无明显关系。非小细胞肺癌中p120ctn的异常表达与RhoA和Cdc42的表达增强有较好的一致性和相关性(Kappa=0.523,P<0.001;Kappa=0.493,P<0.001)。结论p120ctn的异常表达可能是导致RhoA和Cdc42表达增强的重要因素。

p120-catenin通过Kaiso在转录水平上调控肺癌细胞系LTEP-a-2中β-catenin的表达

目的:探讨肺癌细胞系中p120-catenin(p120ctn)调节β-catenin转录的分子机制。推测p120ctn可能通过其分子伴侣Kaiso进而发挥调节β-catenin转录的重要功能。方法:转染、Real-Time PCR、BSP测序、染色质免疫共沉淀及蛋白质免疫共沉淀等多种研究方法验证我们的推测。结果:对肺癌细胞系中β-catenin启动子区域的测序结果发现,LTEP-a-2中存在着可能与Kaiso结合的甲基化的Cp G双核苷酸序列和KBS序列。去甲基化试剂5-Aza-CdR能使肺癌细胞系中β-catenin的mRNA表达明显上调。转染Kaiso后,肺癌细胞系中Kaiso的高表达可明显下调β-catenin的mRNA表达。用5-Aza-CdR处理肺癌细胞系后再转染Kaiso,细胞系中β-catenin的mRNA表达上调。染色质免疫共沉淀结果显示LTEP-a-2中Kaiso只能够与甲基化的Cp G双核苷酸序列结合而不与KBS序列结合;蛋白质免疫共沉淀显示Kaiso能够与p120ctn结合。结论:肺癌细胞系LTEP-a-2中p120ctn调节β-catenin的转录是通过转录抑制因子Kaiso与β-catenin启动子区域甲基化的Cp G双核苷酸序列而实现的。

E-cadherin、β-catenin和p120^(ctn)在所谓肺硬化性血管瘤中的表达

背景与目的所谓肺硬化性血管瘤(so-called pul monary sclerosing hemangioma,PSH)是一种迄今未能确定其组织来源及性质的少见肺部肿瘤,多年来一直是人们研究的热点。本研究通过检测E-cad-herin、β-catenin和p120ctn在PSH表面立方细胞和间质多角形细胞的免疫表型以探讨其组织来源。方法采用S-P免疫组化法检测25例手术切除PSH标本及8例肺炎性假瘤标本的E-cadherin、β-catenin和p120ctn表达情况。结果25例PSH的立方细胞中,三种上皮粘附分子E-cadherin、β-catenin和p120ctn均呈胞膜强阳性表达,β-catenin在胞膜强阳性表达的同时有胞质表达。而在多角形细胞中,E-cadherin表达缺失,β-catenin胞膜表达缺失伴部分胞质表达,p120ctn胞质表达为主伴少量胞膜表达;三种粘附分子在多角形细胞中的表达存在异质性。血管瘤样区的腔内衬细胞E-cadherin、β-catenin和p120ctn均呈胞质胞膜阳性表达。8例肺炎性假瘤中增生的Ⅱ型肺泡细胞E-cadherin、β-catenin和p120ctn表达与PSH中立方细胞的表达情况相同。结论PSH中的立方细胞可能是增生的Ⅱ型肺泡细胞,而多角形细胞为肿瘤的实质细胞且缺乏分化成熟的上皮细胞所具有的E-cadherin/catenin复合体。血管瘤样区的腔内衬细胞是与立方细胞相同的上皮细胞而非血管内皮细胞。

Neutrase和N120P蛋白酶同步水解杏仁蛋白制备杏仁短肽工艺研究

采用Neutrase和N120P蛋白酶同步水解杏仁蛋白制备杏仁短肽,以短肽得率(TCA-NSI)及水解度(DH)为指标对制备工艺进行优化,并建立了回归模型。结合实际生产确定出了Neutrase和N120P蛋白酶水解杏仁蛋白的最适条件为:底物质量浓度0.04 g/mL,pH6.0,水解温度52.5℃,Neutrase与N120P复合酶比例2∶1,复合酶用量7 200 U/g,水解时间173.5 min。在此条件下,短肽得率为71.49%,水解度为26.20%。

p120连环蛋白表达变化对NF-κB信号通路的影响及有关机制

目的通过甲醛(FA)刺激建立体外气道炎症反应模型,探讨甲醛刺激后人气道上皮细胞株(16HBE)中p120连环蛋白(p120ctn)的表达变化及其对核转录因子-κB(NF-κB)信号通路的影响,从而进一步分析气道炎症发生发展的有关机制。方法培养的16HBE细胞分为对照组和实验组,实验组用100μmol/L的甲醛处理。采用Western blot技术检测甲醛处理不同时间后16HBE细胞p120ctn、NF-κB p65、NF-κB抑制蛋白(IκBα)等蛋白的表达;定量酶联免疫吸附试验(ELISA)检测甲醛处理不同时间后16HBE细胞中白细胞介素8(IL-8)的表达,并与对照组进行比较。结果①p120ctn在正常16HBE细胞中含量丰富,甲醛刺激后,p120ctn表达下调,并呈时间依赖性。②甲醛刺激后引起16HBE细胞中NF-κB p65总蛋白表达量呈时间依赖性增加。③ELISA检测显示甲醛刺激后NF-κB靶基因IL-8表达明显增强。④甲醛刺激后NF-κB抑制蛋白IκBα表达减少;核内NF-κB p65表达增多。⑤甲醛刺激后p120ctn的表达与NF-κB的表达呈负相关。结论在甲醛引起的气道炎症反应中,p120ctn可能通过IκBα降解、释放NF-κB p65入核及促进IL-8表达而负性调节NF-κB信号途径的活化,从而抑制气道炎症反应。

P120连环蛋白在鼻咽癌中的表达及其与细胞凋亡的关系

目的:研究鼻咽癌组织中上皮钙黏蛋白(E-cadherin)/P120连环蛋白(P120ctn)的表达情况,探讨它们与临床病理特征、细胞凋亡之间的关系。方法:应用免疫组化二步法、TUNEL技术检测56例鼻咽癌标本和15例正常鼻咽黏膜上皮标本中E-cadherin、P120ctn的表达情况以及鼻咽癌细胞凋亡情况。结果:鼻咽癌组织中E-cadherin和P120ctn的异常表达率分别为64.29%(36/56)和67.86%(38/56)。E-cadherin和P120ctn的异常表达均与鼻咽癌的病理分型(分别为P=0.0118和P=0.0010)、TNM分期(分别为P=0.0208和P=0.0124)、颈部淋巴结转移(分别为P=0.0438和P=0.0406)之间存在显著相关。P120ctn与E-cadherin在鼻咽癌组织中的表达呈正相关(r=0.5217,P=0.0000)。12例E-cadherin与P120ctn共同正常表达组癌细胞凋亡指数(AI)为0.3%～2.0%(均数为0.83%),28例E-cadherin与P120ctn共同异常表达组癌细胞AI为0.1%～1.3%(均数为0.56%),无统计学差异(P=0.3271)。结论:鼻咽癌的发生发展过程中常发生E-cadherin与P120ctn的表达异常,与肿瘤的浸润、转移有关,可作为判断鼻咽癌生物学特征和预后的重要指标。鼻咽癌组织中E-cadherin与P120ctn的表达与癌细胞凋亡无直接相关关系。

乳腺癌中p120连环素和Bmi-1的表达及临床意义

目的探讨p120及Bmi-1在乳腺浸润性导管癌中的表达及其与临床病理特征的关系。方法采用免疫组化检测135例乳腺浸润性导管癌组织中p120、Bmi-1及ER、PR、c-erbB-2表达情况,并检测了20例乳腺增生症中p120、Bmi-1表达情况。结果 p120异常表达率及Bmi-1高表达率在135例乳腺浸润性导管癌中分别为67.4%和48.1%,在20例乳腺增生症中分别为5%和10%,以上两组之间差异有显著性(P<0.01)。p120异常表达与高组织学分级、淋巴结转移和临床较晚分期均有明显相关性(P<0.05)。Bmi-1高表达与淋巴结转移、临床较晚分期均有明显相关性(P<0.05)。并且,p120异常表达与Bmi-1高表达呈明显正相关(r=0.259,P<0.01)。结论 p120异常表达与Bmi-1高表达在乳腺癌的发生及发展过程中可能发挥了协同或相关的作用。p120与Bmi-1可能成为预测乳腺浸润性导管癌生物学行为及指导靶向治疗的新的分子标记物。

E-cadherin和P120ctn在食管鳞癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨食管鳞癌组织中上皮钙黏附素(E-cadherin)和P120ctn的表达特征及其与肿瘤侵袭转移的关系。方法采用免疫组化SP法检测72例食管鳞癌组织和癌旁正常食管组织中E-cadherin及P120ctn的表达情况,分析两者与分化程度以及临床病理因素之间的关系。结果免疫组化结果显示,P120ctn和E-cadherin在食管鳞癌组织中表达降低,其异常表达与肿瘤分化程度、临床分期、浸润深度和淋巴结转移密切相关(P<0.05),食管鳞癌组织中两者表达呈正相关(P<0.05)。结论食管鳞癌病情进展过程中常发生E-cadherin和P120ctn表达下调,且与食管鳞癌的发生发展有关。二者均是肿瘤侵袭和评估预后的有价值指标。

P2X_7受体在gp120所致大鼠学习记忆障碍中的作用

目的:探讨P2X7受体在HIV-1包膜糖蛋白gp120所致大鼠学习记忆障碍的作用。方法:用gp120侧脑室灌注制备拟艾滋痴呆症动物模型,并用水迷宫实验观察侧脑室灌注gp120造成的大鼠认知功能的障碍及蛋白印迹和PCR方法探究P2X7受体的作用。结果:gp120侧脑室灌注3 d,可制备拟艾滋痴呆症动物模型;Morris水迷宫可见gp120模型组大鼠逃避潜伏期和寻找目标错误次数与对照组相比明显延长(P<0.01);蛋白印迹和PCR结果显示,gp120模型组大鼠海马P2X7受体蛋白和m RNA的表达与对照组相比均有所升高(P<0.01)。结论:gp120侧脑室灌注可制备拟艾滋痴呆症动物模型,P2X7受体可能参与gp120所致大鼠学习记忆障碍的病理生理过程。

蛇床子素减轻HIV gp120诱发的周围神经病理痛

目的探讨蛇床子素(osthole,Ost)对背根神经节(dorsal root ganglia, DRG)P2X_3受体(P2X_3R)介导人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)包膜糖蛋白gp120诱发周围神经病理痛的作用及机制。方法建立HIV gp120诱发周围神经病理痛大鼠模型,其中Ost给药组大鼠于建模术前7 d至术后14 d灌胃给药(40 mg·kg^(-1)·d^(-1))。检测各组大鼠机械痛缩足反射阈值(PWT)与热痛缩足反射潜伏期(PWL);实时定量PCR、蛋白印迹、免疫组化等方法检测DRG中神经元P2X_3R、炎性因子及ERK、p-ERK等的表达;全细胞膜片钳检测HEK293细胞三磷酸腺苷(ATP)激活电流及Ost对电流的影响。结果 gp120组大鼠PWT、PWL较假手术组(sham)减小,大鼠DRG中P2X_3R、TNF-αR及p-ERK表达均较sham组明显升高;gp120+Ost组大鼠PWT、PWL较gp120组增大,大鼠DRG中P2X_3R、TNF-αR及p-ERK表达均较gp120组降低;Ost抑制了转染人P2X_3R的HEK293细胞ATP激动电流。结论 Ost下调DRG神经元中P2X_3R,抑制相关信号通路与炎性反应,减轻gp120诱发的周围神经病理痛。

β-连环蛋白在转染p120ctn同工蛋白3A的肝癌细胞中的表达变化

目的观察β-连环蛋白在转染p120ctn同工蛋白3A的肝癌细胞中的表达变化;为通过这一途径实施肿瘤的基因治疗提供实验依据。方法对BEL-7404人肝癌细胞进行稳定转染p120ctn同工蛋白3A,然后用激光共聚焦显微镜和免疫印迹技术,检测β-连环蛋白在细胞中的表达情况,同时检测细胞黏附、细胞迁移以及增殖能力的改变。结果肝癌细胞转染p120ctn同工蛋白3A后,促进了β-连环蛋白与上皮钙黏蛋白的结合,表现为其与上皮钙黏蛋白的沉淀量增加,在细胞膜上的表达增强,在细胞核中的表达趋向减弱;细胞黏附能力增强,迁移及增殖能力下降。结论转染p120ctn同工蛋白3A,能弱化β-连环蛋白在细胞核中的表达量,削弱了BEL-7404人肝癌细胞的恶性行为,是调控β-连环蛋白癌基因表达的有效途径之一。

柚皮苷改善侧脑室灌注HIV-1糖蛋白120(gp120)所致的大鼠学习和记忆障碍

目的研究柚皮苷对配体门控离子通道7嘌呤能P2X受体(P2X7)介导的1型人类免疫缺陷病毒(HIV-1)包膜糖蛋白120(gp120)所致大鼠认知障碍的保护作用。方法水迷宫实验观察柚皮苷对侧脑室灌注gp120拟痴呆大鼠认知功能障碍的影响,反转录PCR检测海马组织P2X7受体mRNA的水平,Western blot法检测海马组织P2X7受体蛋白的水平。结果 Morris水迷宫可见柚皮苷治疗组大鼠的逃避潜伏期和寻找目标错误次数与gp120模型组相比缩短。Western blot法和PCR检测结果显示,柚皮苷治疗组P2X7受体蛋白和mRNA的表达与模型组相比有所下降。结论柚皮苷具有改善侧脑室灌注gp120所致大鼠学习记忆障碍的作用,其机制可能与对抗P2X7受体表达上调有关。

正常肝组织和肝细胞系、肝癌组织及细胞系中连环蛋白P120的表达

目的 探讨正常肝细胞、肝癌细胞、正常肝组织和肝癌组织中连环蛋白 P12 0 (P12 0 ctn)的表达及其在细胞内的分布 ,揭示连环蛋白与肝癌间的关系。方法 采用 RT- PCR、免疫荧光标记 (激光共聚焦显微镜 )和免疫组织化学分析 ,分别对正常肝细胞、肝癌细胞、正常肝组织和肝癌组织中 P12 0 ctn进行检测。结果 RT- PCR检测结果显示 ,上述细胞和组织中均可检测到 P12 0 ctn同工蛋白 1A和 3A m RNA表达 ;免疫荧光标记和免疫组化检测结果显示 ,在正常肝细胞和正常肝组织中 ,P12 0 ctn分布在细胞与细胞连接处和细胞膜上 ,而肝癌细胞和肝癌组织中P12 0 ctn的分布发生了转位 ,胞膜表达减弱或消失 ,胞浆表达增强 ,出现核内转位。结论 P12 0 ctn表达异常与肝癌的发生有一定关系 。