模拟长期微重力对大鼠耳蜗基底膜p120-catenin表达的影响

目的观察模拟长期微重力对大鼠听功能的影响,探讨耳蜗黏附连接蛋白p120-catenin(p120ctn)在耳蜗基底膜表达情况及模拟微重力对其产生的影响。方法选取健康雄性SD大鼠48只,随机分为模拟微重力组和对照组,每组24只;模拟微重力组和对照组又根据暴露时间分别随机分为1 d、1周、8周、12周组,每组6只12耳。在暴露前(B0)、暴露结束后即刻(P0)进行双耳畸变产物耳声发射(distortion product otoacoustic emission,DPOAE)和听性脑干反应(auditory brainstem response,ABR)阈值检测,并于P0测听结束后处死每组大鼠并分离双侧耳蜗,进行免疫组化染色。结果各组DPOAE引出率比较,差异无统计学意义(P>0.05),ABR阈值随暴露时间的增加而升高,模拟微重力1周组、模拟微重力8周组、模拟微重力12周组P0时ABR阈值较B0时升高,差异有统计学意义(P<0.05)。模拟微重力8周组、模拟微重力12周组基底膜上p120ctn阳性表达较对照组显著增高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论模拟微重力会导致大鼠听功能损伤,耳蜗基底膜上p120ctn表达随暴露时间的延长而增加,中长期微重力导致听功能下降可能与基底膜p120ctn的表达增加有关。

K-ras基因突变通过调节E-cadherin/β-catenin/p120蛋白复合体形成和RhoA蛋白活性对结肠癌细胞株Caco-2转移的影响

目的观察K-ras基因突变通过调节E-cadherin/β-catenin/p120蛋白复合体形成和RhoA蛋白活性对结肠癌细胞株Caco-2转移的影响,探讨其促进结肠癌转移的相关机制。方法将培养的结肠癌细胞株Caco-2分别给予空白质粒phr-GFP转染(对照组)、K-ras基因突变型质粒phr-K-ras(Val12)转染(转染组)、phr-K-ras(Val12)质粒转染+丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)途径特异性抑制剂PD98059处理(MAPK抑制组)和phr-K-ras(Val12)质粒转染+磷脂酰肌醇3激酶(PI-3K)途径特异性抑制剂LY294002处理(PI-3K抑制组),Transwell细胞迁移实验检测细胞迁移率,细胞免疫荧光检测E-cadherin、β-catenin蛋白表达及其在细胞内定位,Western blot检测细胞内p120蛋白的表达,免疫沉淀检测与E-cadherin结合的β-catenin蛋白水平,Pull-down实验检测RhoA蛋白活性。结果转染组Caco-2细胞的迁移率为(19.8±5.6)%,明显高于对照组的(14.0±4.2)%(P=0.001)和MAPK抑制组的(15.8±1.2)%(P=0.044),但与PI-3K抑制组的(17.5±2.8)%差异无统计学意义(P=0.095)。细胞免疫荧光检测结果显示,转染组细胞膜上的E-cadherin和β-catenin蛋白表达减少。Western blot检测结果显示,转染组和PI-3K抑制组细胞内p120总蛋白表达减少。免疫沉淀检测结果显示,转染组和PI-3K抑制组细胞内与E-cadhenn结合的β-catenin蛋白水平下降。Pulldown实验检测结果显示,转染组细胞内的RhoA蛋白活性增加。结论K-ras基因突变可以促进结肠癌细胞株Caco-2的转移,其可能是通过MAPK途径减少E-cadherin/β-catenin/p120蛋白复合体形成,增强RhoA蛋白活性来实现的。

p120-catenin通过Kaiso在转录水平上调控肺癌细胞系LTEP-a-2中β-catenin的表达

目的:探讨肺癌细胞系中p120-catenin(p120ctn)调节β-catenin转录的分子机制。推测p120ctn可能通过其分子伴侣Kaiso进而发挥调节β-catenin转录的重要功能。方法:转染、Real-Time PCR、BSP测序、染色质免疫共沉淀及蛋白质免疫共沉淀等多种研究方法验证我们的推测。结果:对肺癌细胞系中β-catenin启动子区域的测序结果发现,LTEP-a-2中存在着可能与Kaiso结合的甲基化的Cp G双核苷酸序列和KBS序列。去甲基化试剂5-Aza-CdR能使肺癌细胞系中β-catenin的mRNA表达明显上调。转染Kaiso后,肺癌细胞系中Kaiso的高表达可明显下调β-catenin的mRNA表达。用5-Aza-CdR处理肺癌细胞系后再转染Kaiso,细胞系中β-catenin的mRNA表达上调。染色质免疫共沉淀结果显示LTEP-a-2中Kaiso只能够与甲基化的Cp G双核苷酸序列结合而不与KBS序列结合;蛋白质免疫共沉淀显示Kaiso能够与p120ctn结合。结论:肺癌细胞系LTEP-a-2中p120ctn调节β-catenin的转录是通过转录抑制因子Kaiso与β-catenin启动子区域甲基化的Cp G双核苷酸序列而实现的。

E-cadherin、β-catenin和p120^(ctn)在所谓肺硬化性血管瘤中的表达

背景与目的所谓肺硬化性血管瘤(so-called pul monary sclerosing hemangioma,PSH)是一种迄今未能确定其组织来源及性质的少见肺部肿瘤,多年来一直是人们研究的热点。本研究通过检测E-cad-herin、β-catenin和p120ctn在PSH表面立方细胞和间质多角形细胞的免疫表型以探讨其组织来源。方法采用S-P免疫组化法检测25例手术切除PSH标本及8例肺炎性假瘤标本的E-cadherin、β-catenin和p120ctn表达情况。结果25例PSH的立方细胞中,三种上皮粘附分子E-cadherin、β-catenin和p120ctn均呈胞膜强阳性表达,β-catenin在胞膜强阳性表达的同时有胞质表达。而在多角形细胞中,E-cadherin表达缺失,β-catenin胞膜表达缺失伴部分胞质表达,p120ctn胞质表达为主伴少量胞膜表达;三种粘附分子在多角形细胞中的表达存在异质性。血管瘤样区的腔内衬细胞E-cadherin、β-catenin和p120ctn均呈胞质胞膜阳性表达。8例肺炎性假瘤中增生的Ⅱ型肺泡细胞E-cadherin、β-catenin和p120ctn表达与PSH中立方细胞的表达情况相同。结论PSH中的立方细胞可能是增生的Ⅱ型肺泡细胞,而多角形细胞为肿瘤的实质细胞且缺乏分化成熟的上皮细胞所具有的E-cadherin/catenin复合体。血管瘤样区的腔内衬细胞是与立方细胞相同的上皮细胞而非血管内皮细胞。

Neutrase和N120P蛋白酶同步水解杏仁蛋白制备杏仁短肽工艺研究

采用Neutrase和N120P蛋白酶同步水解杏仁蛋白制备杏仁短肽,以短肽得率(TCA-NSI)及水解度(DH)为指标对制备工艺进行优化,并建立了回归模型。结合实际生产确定出了Neutrase和N120P蛋白酶水解杏仁蛋白的最适条件为:底物质量浓度0.04 g/mL,pH6.0,水解温度52.5℃,Neutrase与N120P复合酶比例2∶1,复合酶用量7 200 U/g,水解时间173.5 min。在此条件下,短肽得率为71.49%,水解度为26.20%。

p120连环蛋白表达变化对NF-κB信号通路的影响及有关机制

目的通过甲醛(FA)刺激建立体外气道炎症反应模型,探讨甲醛刺激后人气道上皮细胞株(16HBE)中p120连环蛋白(p120ctn)的表达变化及其对核转录因子-κB(NF-κB)信号通路的影响,从而进一步分析气道炎症发生发展的有关机制。方法培养的16HBE细胞分为对照组和实验组,实验组用100μmol/L的甲醛处理。采用Western blot技术检测甲醛处理不同时间后16HBE细胞p120ctn、NF-κB p65、NF-κB抑制蛋白(IκBα)等蛋白的表达;定量酶联免疫吸附试验(ELISA)检测甲醛处理不同时间后16HBE细胞中白细胞介素8(IL-8)的表达,并与对照组进行比较。结果①p120ctn在正常16HBE细胞中含量丰富,甲醛刺激后,p120ctn表达下调,并呈时间依赖性。②甲醛刺激后引起16HBE细胞中NF-κB p65总蛋白表达量呈时间依赖性增加。③ELISA检测显示甲醛刺激后NF-κB靶基因IL-8表达明显增强。④甲醛刺激后NF-κB抑制蛋白IκBα表达减少;核内NF-κB p65表达增多。⑤甲醛刺激后p120ctn的表达与NF-κB的表达呈负相关。结论在甲醛引起的气道炎症反应中,p120ctn可能通过IκBα降解、释放NF-κB p65入核及促进IL-8表达而负性调节NF-κB信号途径的活化,从而抑制气道炎症反应。

p120-catenin缺失下调E-cadherin/β-catenin复合体在肺癌细胞系的表达

目的探讨catenin家族的重要成员p120-catenin(p120ctn)对E-cadherin介导的细胞粘附作用的调节及机制,检测在活体内外肺癌细胞系中p120ctn对E-cadherin/β-catenin复合体的调节作用。及其对肺癌细胞侵袭和转移能力的影响。方法应用siRNA技术建立p120ctn基因沉默的多种癌细胞系后,采用Western Blot,Transwell分析,裸鼠移植实验等方法进行检测。结果在成功干扰p120ctn表达的肺癌细胞系中,应用Western Blot和RT-PCR方法,我们观察到E-cadherin的蛋白表达出现不同程度的减弱,但mRNA的表达几乎没有变化;而β-catenin在蛋白和mRNA水平上都出现了明显的表达减弱。同时应用Transwell和裸鼠移植实验,我们在活体内外还观察到p120ctn缺失的肺癌细胞系具有较强的侵袭转移能力。结论肺癌细胞系中p120ctn的表达缺失可能通过下调E-cadherin和β-catenin的表达,参与肺癌细胞的侵袭和转移。

β-连环蛋白在转染p120ctn同工蛋白3A的肝癌细胞中的表达变化

目的观察β-连环蛋白在转染p120ctn同工蛋白3A的肝癌细胞中的表达变化;为通过这一途径实施肿瘤的基因治疗提供实验依据。方法对BEL-7404人肝癌细胞进行稳定转染p120ctn同工蛋白3A,然后用激光共聚焦显微镜和免疫印迹技术,检测β-连环蛋白在细胞中的表达情况,同时检测细胞黏附、细胞迁移以及增殖能力的改变。结果肝癌细胞转染p120ctn同工蛋白3A后,促进了β-连环蛋白与上皮钙黏蛋白的结合,表现为其与上皮钙黏蛋白的沉淀量增加,在细胞膜上的表达增强,在细胞核中的表达趋向减弱;细胞黏附能力增强,迁移及增殖能力下降。结论转染p120ctn同工蛋白3A,能弱化β-连环蛋白在细胞核中的表达量,削弱了BEL-7404人肝癌细胞的恶性行为,是调控β-连环蛋白癌基因表达的有效途径之一。

正常肝组织和肝细胞系、肝癌组织及细胞系中连环蛋白P120的表达

目的 探讨正常肝细胞、肝癌细胞、正常肝组织和肝癌组织中连环蛋白 P12 0 (P12 0 ctn)的表达及其在细胞内的分布 ,揭示连环蛋白与肝癌间的关系。方法 采用 RT- PCR、免疫荧光标记 (激光共聚焦显微镜 )和免疫组织化学分析 ,分别对正常肝细胞、肝癌细胞、正常肝组织和肝癌组织中 P12 0 ctn进行检测。结果 RT- PCR检测结果显示 ,上述细胞和组织中均可检测到 P12 0 ctn同工蛋白 1A和 3A m RNA表达 ;免疫荧光标记和免疫组化检测结果显示 ,在正常肝细胞和正常肝组织中 ,P12 0 ctn分布在细胞与细胞连接处和细胞膜上 ,而肝癌细胞和肝癌组织中P12 0 ctn的分布发生了转位 ,胞膜表达减弱或消失 ,胞浆表达增强 ,出现核内转位。结论 P12 0 ctn表达异常与肝癌的发生有一定关系 。

柚皮苷改善侧脑室灌注HIV-1糖蛋白120(gp120)所致的大鼠学习和记忆障碍

目的研究柚皮苷对配体门控离子通道7嘌呤能P2X受体(P2X7)介导的1型人类免疫缺陷病毒(HIV-1)包膜糖蛋白120(gp120)所致大鼠认知障碍的保护作用。方法水迷宫实验观察柚皮苷对侧脑室灌注gp120拟痴呆大鼠认知功能障碍的影响,反转录PCR检测海马组织P2X7受体mRNA的水平,Western blot法检测海马组织P2X7受体蛋白的水平。结果 Morris水迷宫可见柚皮苷治疗组大鼠的逃避潜伏期和寻找目标错误次数与gp120模型组相比缩短。Western blot法和PCR检测结果显示,柚皮苷治疗组P2X7受体蛋白和mRNA的表达与模型组相比有所下降。结论柚皮苷具有改善侧脑室灌注gp120所致大鼠学习记忆障碍的作用,其机制可能与对抗P2X7受体表达上调有关。

肺癌细胞系中p120-catenin的基因缺失调控small GTP酶活性

背景与目的作为catenin蛋白家族的重要成员之一,p120-catenin(p120ctn)是small GTPase酶的重要调节因子,影响细胞的运动能力,但其中具体的调节机制尚不清楚。本研究旨在探讨p120ctn在肺癌细胞系中对small GTP酶家族核心成员的调节作用,及其对肺癌细胞侵袭、转移的影响。方法应用siRNA方法成功地建立了p120ctn基因沉默的多种癌细胞系BE1、SPC、LTE的细胞克隆,采用Western Blot,pull-down蛋白活性分析,裸鼠移植等体内外实验探讨其可能的调节机制。结果p120ctn的基因沉默能激活Cdc42和Rac1,失活RhoA,并且在活体内外促进肺癌细胞的侵袭和转移。结论p120ctn的缺失可激活Cdc42/Rac1、失活RhoA,促进肺癌细胞的侵袭和转移能力。

连环蛋白P120在肝细胞癌中的表达及其意义

目的检测肝细胞性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中连环蛋白P120(P120catenin,P120ctn)的表达,分析其与临床病理特点之间的关系。方法用免疫组化技术检测58例HCC、17例癌旁肝硬化及8例正常肝组织中P120ctn的表达。结果58例HCC组织中有34例P120ctn(58.6%)膜表达弱阳性或缺失,30例(51.7%)胞质表达,异常表达总比例为65.5%(38/58);17例癌旁肝硬化组织中有6例(35.3%)膜表达弱阳性,8例(47.1%)胞质表达,异常表达总比例为47.1%(8/17);8例正常肝组织全部表现为胞膜正常表达,无胞质表达。P120ctn的异常表达与HCC的包膜形成、淋巴浸润、有无卫星灶、肿瘤分化等相关(P<0.05),而与性别、年龄、瘤体积大小、分期等无关(P>0.05)。结论HCC中存在较高比例的P120ctn异常表达,主要表现为胞膜表达缺失伴胞质异常染色,P120ctn可以作为预测HCC转移潜能和预后状况的有价值的指标。

P120-catenin和E-cadherin的协同表达与肺癌的恶性程度相关

目的方法结果结论探讨p120-catenin(p120ctn)和E-cadherin(E-cad)在非小细胞肺癌中的表达是否具有相关性。方法免疫组织化学S-P法、RT-PCR及WesternBlot等检测肺癌组织中p120ctn和E-cad的表达情况。结果p120ctn和E-cad在肺癌组织中的表达明显低于正常肺组织,并且p120ctn的异常表达与E-cad的异常表达呈正相关。肺癌组织中p120ctn和E-cad的异常表达与肺癌的高分期,低分化和淋巴结转移明显相关。与正常支气管上皮细胞HBE相比,同源的BE1和LH7细胞中都显示出p120ctn、E-cad的表达下降。但在转移能力较高的BE1细胞系中这种异常表达的现象尤为明显。结论肺癌中p120ctn和E-cad的低表达可能与肺癌的恶性度有关。

SOX2 OCT4 β-连环蛋白p120ctn在甲状腺癌中的表达及临床意义

目的通过观察SOX2、OCT4、β-连环蛋白和p120ctn蛋白在甲状腺滤泡型腺瘤和甲状腺腺癌组织中的表达、分布,分析4种蛋白与甲状腺癌的临床病理特征之间的关系,探讨其在甲状腺癌发生、发展和预后中的价值。方法收集10例正常甲状腺组织,20例甲状腺滤泡型腺瘤和78例甲状腺腺癌蜡块,应用免疫组织化学二步法,对其组织中的SOX2、OCT4、β-连环蛋白及p120ctn的表达情况进行检测,采用SPSS14.0软件进行统计学分析,分析4种蛋白的表达与患者的肿物大小、年龄、临床分期和淋巴结转移的关系。并分析SOX2、OCT4、β-连环蛋白和p120ctn的表达相关性。结果①20例甲状腺滤泡型腺瘤组织中,有3例SOX2表达阳性,有2例OCT4表达阳性,β-连环蛋白和p120ctn有2例和1例异常表达。②78例甲状腺癌组织中,SOX2和OCT4的阳性表达率是64%和87%,SOX2表达与淋巴结转移有明显相关关系(P<0.05),OCT4的表达和淋巴结转移及肿瘤大小明显相关(P<0.05)。β-连环蛋白和p120ctn的异常表达率分别为79%和72%,二者的异常表达都和淋巴结转移相关(P<0.05)。③SOX2、OCT4、β-连环蛋白和p120ctn在甲状腺癌中的表达明显高于甲状腺滤泡腺瘤组织,其差异有统计学意义。(P<0.05)。④甲状腺癌的SOX2的异常表达强度随着OCT4表达强度的增强而升高,呈正相关(r=0.543)。β-连环蛋白异常表达与p120ctn异常表达呈正相关(r=0.319)。结论①SOX2和OCT4蛋白在甲状腺癌中阳性表达率升高,β-连环蛋白和p120ctn在甲状腺癌中出现明显的表达异常,反映出其表达情况在甲状腺癌发生发展中起重要作用。②SOX2、OCT4、β-连环蛋白和p120ctn的表达和甲状腺癌病理特征关系紧密,这4种蛋白的表达情况可以用来监测甲状腺癌恶性程度。③SOX2与OCT4阳性表达,β-连环蛋白异常表达与p120ctn异常表达可能在甲状腺癌的发生发展中起协同作用,这4种蛋白可以对甲状腺癌的生物学行为进行准确预测,在制定个体化治疗方案中,也具有一定的临床价值。

P120ctn及相关蛋白在宫颈鳞癌中的表达及生物学意义

目的探讨宫颈鳞癌患者P120连环蛋白(P120ctn)、β连环蛋白(β-cat)与E钙黏蛋白(E-cad)的表达及生物学意义。方法应用免疫组化SP法检测P120ctn、β-cat及E-cad在正常宫颈组织和宫颈鳞癌组织中的表达。结果1正常宫颈组织中P120ctn、β-cat及E-cad表达在胞膜,胞浆少见;宫颈鳞癌中P120ctn、β-cat及E-cad胞膜表达降低,出现胞浆表达;β-cat还有胞核表达;三者异常表达与癌细胞分化程度、淋巴结转移相关。2P120ctn异常表达与β-cat及E-cad异常表达明显正相关。结论P120ctn及相关蛋白异常表达可作为宫颈鳞癌诊断的辅助指标,并为判断疾病发展转移提供客观依据。

p53凋亡刺激蛋白2通过稳定β-catenin-E-cadherin复合体抑制骨肉细胞转移

目的探讨p53凋亡刺激蛋白2(ASPP2)对骨肉瘤细胞转移的影响及其机制。方法 Q-PCR检测骨肉瘤组织和细胞中ASPP2 mRNA的表达;western blot检测骨肉瘤细胞中ASPP2蛋白表达;transwell检测细胞转移能力;co-IP实验检测β-catenin和E-cadherin相互作用水平;免疫荧光检测β-catenin在细胞核中表达水平。结果 8例手术标本Q-PCR检测发现,骨肉瘤组织中ASPP2 mRNA的表达较癌旁组织明显降低;4株骨肉瘤细胞系中(OS187、SAOS2、HOS和MG63)ASPP2 mRNA和蛋白的表达较正常成骨细胞明显减少。过表达ASPP2蛋白的SAOS2其转移能力明显减弱,同时β-catenin和E-cadherin相互作用水平增加,而β-catenin核转位减少。结论 ASPP2可以减少骨肉瘤细胞SAOS2的转移,其机制可能的通过稳定β-catenin-E-cadherin复合体,抑制β-catenin核转位。

P120链蛋白与肿瘤

研究参与肿瘤发生的重要信号分子,对揭示肿瘤发生发展有重要意义。链蛋白(catenin)家族成员与肿瘤的发生密切相关,在保持细胞黏附中起着重要作用,其表达缺失或下降将导致细胞分化丧失和具有侵袭性,容易发生浸润和转移。链蛋白家族最早被分为α、β、γ三类,它们都能与E-钙黏着蛋白(E-cadherin)形成复合体。P120cat作为新发现的链蛋白家族成员之一,位于细胞连接处和细胞核内,与肿瘤的发生有着更密切和特殊的关系,在不同的条件下,它既可以作为肿瘤的促进物,又可成为肿瘤的抑制物。

连环蛋白p120在胰腺癌细胞株中的表达及其意义

目的:了解连环蛋白p120(p120ctn)及VEGF在胰腺癌细胞株中的表达情况,探讨p120ctn对胰腺癌细胞生物学行为的影响。方法:采用RT-PCR、Western blotting方法检测5株胰腺癌细胞及胰腺星状细胞中p120ctn及VEGF的表达情况;选取表达差异明显的panc-1及Patu8988细胞株,利用细胞侵袭迁移试验观察其生物学行为。结果:与胰腺星状细胞相比,胰腺癌细胞株中p120ctn的表达均上调,但在不同胰腺癌细胞株中表达存在差异;在同一细胞株中,p120ctn与VEGF的表达量呈正相关;高表达p120ctn的胰腺癌细胞,其侵袭迁移能力要明显低于低表达的细胞。结论:胰腺癌细胞株中p120ctn的表达明显上调,并与VEGF的表达存在相关性,胰腺癌细胞p120ctn高表达其侵袭转移能力可能下降。

CDX2和p120-catenin在胃癌组织中的临床意义

目的探讨胃癌组织中CDX2和P120-catenin表达与其浸润、转移及预后的关系。方法采用Maxvision“”免疫组化方法，检测88例胃癌组织中CDX2和P120-catenin表达情况。结果88例胃癌患者中肿瘤直径〈2cm者、肠型胃癌者、无淋巴结转移者、I期及无浆膜层受侵者CDX2阳性表达率分别为51．4％、45．8％、70．0％、71．4％、66．6％，均相应高于肿瘤直径〉2cm者、弥漫浸润型胃癌者、有淋巴结转移者、Ⅱ～Ⅳ期及浆膜层受侵者，对应各组阳性表达率比较具有显著性差异（P〈0．05）。88例胃癌患者中肠型胃癌者、无淋巴结转移者、I期及无浆膜层受侵者p120-catenin阳性表达率分别为40．6％、50．0％、53．5％、58．3％，均相应高于弥漫浸润型胃癌者、有淋巴结转移者、Ⅱ～Ⅳ期及浆膜层受侵者，对应各组阳性表达率比较具有显著性差异（P〈0．05）。结论CDX2和p120-catenin表达与胃癌的Lauren分型、有无淋巴结转移、TNM分期及肿瘤浸润深度相关，联合检测胃癌患者的CDX2和p120-catenin，可判断胃癌患者预后。

SOX2 OCT4 β-连环蛋白p120-连环蛋白在乳腺癌中的表达及临床意义

乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤之一．近年来其发病率呈上升和发病年轻化的趋势。侵袭和转移是最重要的生物学特征，乳腺癌患者转移是死亡的主要原因。随着分子生物学研究领域的发展，人们对乳腺癌发生及演进机制的了解不断深入，乳腺癌的分子生物学发病机制和预后因素的探讨已成为目前研究的热点。