MTS_1/p16和MTS_2/p15基因共丢失与原发性非小细胞肺癌预后的研究

目的 探讨p15/p16基因纯合性共丢失与原发性非小细胞癌(NSCLC)患者预后的相关性。方法 采用聚合酶链式反应(PCR)技术,先后检测140例NSCLC手术标本中p15/pl6双基因的共丢失。结果 肺腺癌组织中p15/pl6基因共丢失率明显高于肺鳞癌(P＜0.05),而双丢失组的患者生存率与患者的性别、年龄及TNM分期等因素无关(P＞0.05)。p15/pl6基因共丢失组的患者生存率明显低于未丢失组,两组之间呈著性差异(P＜0.01)。经统计学处理提示TNM分期对患者累计生存率的影响也具有明显差异(P＜0.05)。结论 据于p15/pl6基因共丢失率与肺癌患者生存期密切相关,因此检测pl5/pl6基因共丢失可作为NSCLC患者预后判断的指标。

卵巢上皮性癌血清DNA中p15、p16基因纯合性丢失及其共丢失的研究

背景与目的:p15和/或p16基因高频率的丢失与卵巢癌的发生、发展及预后关系密切,在卵巢癌组织DNA中的研究已有报道,但其在血清DNA中的丢失情况尚不清楚。本研究拟对卵巢上皮性癌、卵巢囊肿及健康对照者血清DNA中的p15、p16基因纯合性丢失及共丢失现象进行研究,探讨其与卵巢癌发生、发展的相关性。方法:采用PCR技术分别对165例卵巢上皮性癌、其相应淋巴细胞、25例卵巢囊肿及15例健康对照者血清DNA中p15/p16基因纯合性丢失及共丢失情况进行检测。结果:165例卵巢上皮性癌血清DNA中,p15、p16基因纯合性丢失率及p15/P16基因共丢失率分别为27.9%(46/165)、27.3%(45/165)及24.2%(40/165),而卵巢癌患者相应的淋巴细胞DNA与卵巢囊肿及健康对照者血清DNA中均未见丢失,差异有极显著性(P值分别为0.000、0.000及0.000)。Ⅰ、Ⅱ期卵巢上皮性癌血清DNA中,p16/p15基因共丢失率为8.6%(3/35),Ⅲ期及Ⅳ期共丢失率分别为29.3%(22/75)及27.3%(15/55),差异有显著性(P=0.049)。而p15、pl6基因丢失率与组织学类型无关。结论:p15、p16基因纯合性丢失及p15/p16基因共丢失现象与卵巢癌发生及发展相关,且可能为卵巢癌发生过程中的关键基因;采用血清DNA作为研究载体,可作为研究卵巢癌相关生物学特性的检测手段。

喉鳞状细胞癌组织中Survivin基因与p15和p16基因表达的关系

目的 探讨抑凋亡基因Survivin(SVV)在喉鳞状细胞癌 (laryngealsquamouscellcarcinomas,LSCC)中的表达意义及与抑癌基因p15、p16表达的关系。 方法 采用免疫组化链酶卵白素 生物素复合体 (strepavidin biotincomplex ,SABC)方法检测了 4 8例LSCC组织及 2 4例癌旁组织、2 4例正常喉黏膜组织SVV、p15、p16蛋白的表达并进行统计分析。 结果 SVV蛋白在正常喉黏膜中不表达 ,4 8例LSCC组织中 2 7例SVV蛋白阳性表达 ,占 5 6 3% ,2 4例癌旁组织中 6例SVV蛋白阳性表达 ,占 2 5 0 % SVV蛋白在LSCC组织与癌旁组织中的表达以及SVV在癌旁组织与正常喉黏膜中的表达差异均有显著性 (P <0 0 5 )。SVV蛋白表达与LSCC的发生部位、TNM分期、病理分级、淋巴结转移及预后有关 (P <0 0 5 )。p16蛋白强阳性组、p16蛋白弱阳性组及 p16蛋白阴性组的SVV蛋白阳性率差异有显著性 (P <0 0 0 1) ,且表达呈正相关 (C =0 5 2 )。p15蛋白阳性组与 p15蛋白阴性组的SVV蛋白阳性表达差异无显著性。结论SVV基因在LSCC的发生发展中起重要作用 ,并对LSCC的早期诊断、预后判断有意义。SVV的过度表达与 p16抑癌作用的失去可能在LSCC的发病机制中有协同作用。

人原发性肝癌中p16,p15基因CpG岛甲基化研究

目的 检测人原发性肝癌中 p16和 p15基因 5’启动子区CpG岛的异常甲基化 ,并分析其与人原发性肝癌发生发展的关系 ,探索其在临床早期基因诊断和治疗中的意义 .方法 用敏感的甲基化特异性PCR检测 2 0例人原发性肝癌患者癌组织、癌旁组织和远癌正常组织中p16 ,p15基因5’CpG岛的甲基化状况 ,统计分析这两个基因 5’CpG岛甲基化与肝癌病理特征的相关性 .结果 2 0例原发性肝癌肝癌组织中 p16和 p15基因 5’CpG岛分别有 6 5 %(13/2 0 )和 5 0 %(10 /2 0 )异常甲基化 ;癌旁组织中 p16和 p15基因 5’CpG岛分别有 6 0 %(12例 )和 4 0 %(8例 )异常甲基化 ;远癌正常组织中p16和 p15基因 5’CpG岛分别有 35 %(7例 )和 2 5 %(5例 )异常甲基化 .p16 ,p15基因 5’CpG岛甲基化在癌组织和癌组织旁、癌组织和远癌组织中均有相关性 .两个基因 5’CpG岛异常甲基化与临床病理特征无显著相关性 .结论 p16和 p15基因 5’CpG岛异常甲基化在人原发性肝癌中频率很高 ,可能在肝癌发生发展中扮演了重要角色 ;而且这可能是一个早期事件 ,其临床早期诊断和基因治疗意义均值得进一步深入研究 .

p16和p15基因在子宫内膜癌中的表达

目的 :探讨抑癌基因 p16及 p15在子宫内膜癌、子宫内膜不典型增生及正常子宫内膜组织中的表达及其与子宫内膜癌的关系。方法 :应用免疫组化技术检测 5 7例子宫内膜癌、 8例子宫内膜不典型增生、 7例子宫内膜增生过长及 7例正常增生期子宫内膜组织中抑癌基因 p16、p15的表达。结果 :p16在子宫内膜癌组织及非癌子宫内膜组织中表达率分别为 4 0 .4 %和 77.3% ,二者表达率差异有显著性 (P<0 .0 5 ) ,在子宫内膜癌中 p16表达与病理类型、病理分级及手术 -病理分期有关 ,与肌层浸润无关 ;p15在子宫内膜癌及非癌子宫内膜组织中表达率分别为 4 7.4 %和 86 .3% ,二者比较差异有显著性 (P<0 .0 5 ) ,在子宫内膜癌组织中 p15的表达与病理分级有关 ,与病理类型、肌层浸润及手术 -病理分期无关 ,子宫内膜癌组织中 p16与 p15表达呈正相关 (r=0 .91,P<0 .0 5 )。结论 :p16和 p15表达缺失在子宫内膜癌的发生发展过程中发挥一定作用 ,其中以 p16更为显著 ;p16和 p15的表达具有一致性 ,功能上有一定的互补作用。

喉癌中p15、p16基因纯合缺失与EGFR基因扩增相关性研究

研究p15、p16基因缺失和EGFR基因扩增的相关性及其与喉癌发生、发展的关系。提取喉癌新鲜组织中基因组DNA ,采用聚合酶链反应技术 ,分别对 3 0例喉癌进行p15基因第 2外显子 (p15E2 )和p16基因第 2外显子(p16E2 )进行纯合缺失研究 ;应用FISH方法进行喉癌实体瘤EGFR基因扩增研究。p15E2纯合缺失率为 13 3 % (4 3 0 ) ,p16E2纯合缺失率为 16 7% (5 3 0 ) ,p15E2、p16E2共同缺失率为 6 7% (2 3 0 )。在 3 0例喉癌实体瘤EGFR基因扩增频率为 3 0 % (9 3 0 ) ,扩增 2～ 8倍。p15E2和p16E2纯合缺失以及二者共同缺失与EGFR基因扩增相关 ,可能引起细胞周期失控而导致细胞增殖紊乱 。

巢式PCR法检测肝母细胞瘤中p15和p16基因启动子异常甲基化

目的DNA甲基化被认为是反映细胞内DNA转录状态的重要遗传学标记。该研究旨在对小儿肝母细胞瘤中p15和p16基因5′启动子区CpG岛异常甲基化的相关性进行评估,并分析其与小儿肝母细胞瘤发生发展的关系。方法采用甲基化特异性PCR法,对30例小儿肝母细胞瘤、癌旁和远癌正常组织进行巢式PCR扩增,经凝胶电泳和测序方法检测目的片段。结果30例小儿肝母细胞瘤组织中p15和p16基因5′CpG岛有30%(9/30)和67%(20/30)、癌旁组织中有20%(6/30)和57%(17/30)、远癌正常组织有13%(4/30)和33%(10/30)异常甲基化。在肝母细胞瘤中发现1例p15E2纯合缺失,缺失率为3%(1/30),E1和部分I1区域未见缺失;p16E2和部分I2区域中3例杂合缺失,缺失率为10%(3/30),E1和部分I1区域未见缺失。结论p15和p16基因5′启动子区CpG岛的异常甲基化可能在肝母细胞瘤发生发展中扮演了重要角色,其主要机制可能是启动子区CpG岛甲基化抑制了基因的转录。

P16、P15基因在胃癌及转移淋巴结中的表达

目的 :观测抑癌基因P16、P15在原发性胃癌及淋巴结中的表达 ,以探讨两者在胃癌的发生转移及预后中的作用。方法 :应用免疫组织化学检测 92例原发性胃癌及 138枚转移淋巴结中P16、P15蛋白的表达。结果 :P16、P15阳性表达率在原发癌中分别为 17 4 %和 2 8 3% ,在转移淋巴结中分别为 15 9%和 2 8 3% ,原发癌伴淋巴结转移组P16、P15阳性表达率较无淋巴结转移组显著低 (P <0 0 5 ) ,P16、P15表达在原发性胃癌中呈正相关性 (P<0 0 5 ,列联系数r=0 2 74 ) ,在淋巴结中呈正相关 (P <0 0 5 ,列联系数r =0 32 4 )。结论 :P16、P15基因蛋白对胃癌的转移可能有抑制作用 ,两者联合检测对胃癌淋巴结转移预测及预后评估具有一定帮助。

多发性骨髓瘤p15、p16基因启动子区甲基化的研究

目的 探讨 ｐ１５、ｐ１６基因启动子区 ＣＰＧ岛甲基化在多发性骨髓瘤发病中的作用。方 法 利用甲基化特异性 ＰＣＲ技术，研究骨髓瘤细胞株（Ｕ２６６、ＬＰ１、ＫＭ３）及多发性骨髓瘤患者 ｐ１５、ｐ１６基因甲基化状态。结果 Ｕ２６６、ＬＰ１细胞 ｐ１５、ｐ１６基因处于完全甲基化状态；ＫＭ３细胞 则为完全未甲基化模式；ＭＭ患者的ｐ１５、ｐ１６基因启动子区甲基化比例分别为 ５２．３８％及 ５７．１４％。 ｐ１５、ｐ１６基因甲基化与 ＭＭ分期无关（Ｐ＞０．０５）。结论 ｐ１５、ｐ１６基因甲基化在多发性骨髓瘤中 较为常见，这可能为多发性骨髓瘤的治疗提供借鉴。

p16和p15基因缺失与白血病

p16和p15基因是近年新发现的抑癌基因,其编码产物为CDK4和CDK6的抑制物,在细胞增殖周期中起负调节作用。p16和p15基因改变可发生于多种瘤细胞。本文仅就p16和p15基因同白血病发生和预后之间的关系,以及p16在该病中发生异常的可能机制等方面的研究进展做了概述,同时提出尚需进一步探讨的一些问题。

河南食管癌高发区居民食管癌组织p15INK4b和p16INK4a基因变化的研究

基因丢失导致ｐ１６ＩＮＫ４ａ和（或）ｐ１５ＩＮＫ４ｂ对ＣＤＫ激酶的抑制作用丧失，从而导致细胞增生调节失控［１－３］，目前在多种肿瘤中已发现存在ｐ１５ＩＮＫ４ｂ和ｐ１６ＩＮＫ４ａ的失活现象［４－６］．作者近年对河南食管癌高发区林州市居民的研究证实，肿瘤...

CCND1基因3'-UTR区miR-15a-5p和miR-16-5p结合位点的荧光素酶报告载体构建及分析

目的:构建miR-15a-5p和miR-16-5p的荧光素酶报告载体,利用此载体分析并验证miR-15a-5p和miR-16-5p与CCND1基因3'-UTR区域的确切结合位点,探讨miR-15a-5p和miR-16-5p与CCND1基因的相互作用关系。方法:通过Pubmed和miRBase数据库分别寻找到CCND1基因3'-UTR区域碱基序列和miR-15a-5p、miR-16-5p的碱基序列。找出理论结合位点后,构建荧光素酶报告载体,并用荧光素酶报告基因方法验证miR-15a-5p和miR-16-5p与CCND1基因之间的作用关系。结果:通过基因测序表明,本实验成功构建了CCND1a/Ma和CCND1b/Mb荧光素酶报告基因表达载体。将上述载体应用于荧光素酶报告基因实验,结果发现CCND1 b组的荧光素酶表达强度显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:miR-15a-5p和miR-16-5p与CCND1基因的3'-UTR区域存在结合位点,其具体结合位置在CCND1b区。这在理论上意味着miR-15a-5p和miR-16-5p可以抑制CCND1基因的表达。

子宫颈癌的p16、p15基因缺失研究

目的 探讨p16、p15基因的纯合性缺失与子宫颈癌发生及发展的相关性。方法 本文采用PCR技术对 5 7例治疗前子宫颈癌组织的 p16、p15基因的纯合性缺失进行检测。结果 p16的纯合性缺失率为 15 7% ( 9 5 7) ,Ⅰ Ⅲ期宫颈癌的不同病理类型均有 p16基因的缺失 ,但没有显著性差异。p15基因未发现缺失。 结论 p16基因的纯合性缺失与子宫颈癌的发生有关 。

胰癌组织p15、p16抑癌基因CpG岛甲基化

目的:检测胰腺癌中p15、p16基因CpG岛的异常甲基化情况,分析其与胰腺癌发生、发展的关系;探索其在临床早期基因诊断和治疗中的意义以及与胰腺癌病理生理特征的相关性.方法:运用甲基化特异性PCR(methylation-specificPCR,MSP),对29例胰腺癌和3例慢性胰腺炎的石蜡组织、2例正常肝组织、以及12例正常成人外周血白细胞DNA的p15、p16抑癌基因启动子区CpG岛甲基化状态进行了检测.结果:对照组p16、p15基因CpG岛甲基化扩增均呈阴性,非甲基化扩增均阳性.胰腺癌中p16、p15基因CpG岛甲基化阳性率分别为37.9%和27.5%,p16、p15基因CpG岛甲基化总检出阳性率为:44.8%.癌组织中同时存在p16、p15基因CpG岛异常甲基化为6例.结论:胰腺癌p15、p16基因CpG岛甲基化是早期事件,可试作为早期基因诊断的分子标志,有可能尝试进行基因治疗.p16、p15基因CpG岛异常甲基化,同患者的病理特征无明显的相关关系.

多发性骨髓瘤中p15^(INK4B)和p16^(INK4A)基因高甲基化的检测

为探索p15 INK4B和p16INK4A基因在多发性骨髓瘤中的甲基化的表达 ,采用敏感的甲基化特异的MSP PCR测定方法 ,检测了 2 4例多发性骨髓瘤 (MM ) p15 INK4B和p16INK4A基因甲基化的情况。结果显示 ,MM中 p15 INK4B和 p16INK4A基因甲基化发生率分别为 70 .8% (17/ 2 4 )和 5 8.3% (14/2 4 ) ,产物分别为 148bp和 15 0bp的片段 ,其中 2例Ⅱ期和 2例Ⅲ期的有浆细胞瘤的MM患者发生 2个基因同时甲基化 ,有 5例 2个基因都没有发生甲基化。这 5例的瘤细胞均为分化较成熟的小浆细胞。结论提示 ,p15 INK4B和 p16INK4A基因甲基化在MM细胞中有一定的发生率 。

痰标本p16基因启动子区甲基化联合血清细胞角蛋白19片段和癌抗原15-3对非小细胞肺癌的诊断价值

目的评价痰液标本中p16基因启动子区甲基化联合血清中细胞角蛋白19片段(cytokeratin 19 fragment,CYFRA 21-1)和癌抗原15-3(CA15-3)的检测对非小细胞肺癌(NSCLC)的诊断价值。方法用巢式甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)检测100例NSCLC患者痰液p16基因启动子区甲基化联合化学发光法检测患者血清中CYFRA21-1和CA15-3的水平,评价3种肿瘤标志物联合检测对NSCLC的诊断价值。结果NSCLC患者痰液中p16基因启动子区甲基化阳性率为61.0%;NSCLC患者血清中CYFRA21-1和CA15-3的实验敏感度分别为58.0%和38.0%;联合检测可明显提高NSCLC的检出率,敏感度79.0%,明显高于各种肿瘤标志物单项检测。结论痰液标本中p16基因启动子区甲基化联合血清中CYFRA21-1和CA15-3的检测可明显提高NSCLC的检出率,为早期诊断NSCLC提供了依据。

环磷酰胺及塞替派诱导的人支气管上皮恶性转化细胞的p16^(INK4a)及p15^(INK4b)基因突变

目的 了解环磷酰胺 (CP)和塞替哌 (TEPA)诱导永生化人支气管上皮细胞 (BEAS 2B)的恶性转化株内BEAS CP和BEAS TE细胞p16和p15基因的突变情况。方法 采用聚合酶链反应 (PCR)、聚合酶链反应 单链构象多态性分析 (PCR SSCP)及DNA序列分析技术。结果 BEAS CP细胞p15基因的外显子 1和外显子 2都出现了异常带型。BEAS TE细胞p16基因的外显子 1及外显子 2a出现了异常带型和迁移率滞后现象 ;p15基因外显子 1的 2条单链带之间出现异常条带。DNA序列分析发现BEAS CP细胞的p15基因外显子 1的 182位有C的插入 ,2 0 6位有G的插入 ;外显子 2的第 30 8位密码子有C→T(TCC→TTC)转换 (Ser→Phe) ,第 32 7位密码子有T→A(AAT→AAA)颠换 (Asn→Lys)。BEAS TE细胞的p16基因外显子 2a的第 12 5位密码子有G→A(CGC→CAC)转换 (Arg→His)。结论 p15基因在CP诱导BEAS 2B发生恶性转化的过程中发挥了重要作用。在TEPA诱导BEAS 2B细胞发生恶性转化的过程中可能涉及了p16基因的失活。

中国人脑瘤中p16、p15基因缺失分析

目的 为了解 p16、p15基因与中国人脑肿瘤遗传易感性的关系。 方法 应用PCR、银染PCR SSCP及免疫组化法对 88例脑肿瘤及相应手术切除正常组织DNA标本 p16、p15基因进行研究。 结果 结果显示在不同病理分级脑胶质瘤中p16、p15基因缺失率分别为Ⅰ -Ⅱ级 4%、0 % ,Ⅲ级 3 2 %、2 8% ,Ⅳ级 3 6 %、2 7% ,p16、p15基因缺失主要见于Ⅲ -Ⅳ级肿瘤中 ;脑转移瘤中也检出缺失该基因 ( 2 /3 ) ,而原发性非胶质细胞瘤 (脑膜瘤、垂体瘤、听神经瘤等 )中未见p16、p15基因缺失 ,各类肿瘤标本PCR SSCP分析均未见 p16、p15基因点突变。 结论 表明国人脑瘤中p16、p15基因异常以缺失为主 ,p16、p15基因缺失在脑胶质瘤中发生频率较高 ,促进肿瘤细胞由良性向恶性演进 ,而对良性非胶质细胞瘤的发病没有作用。

p16及p15基因预测葡萄胎恶变的价值

①目的 探讨p16、p15基因及蛋白缺失与葡萄胎恶变的关系。②方法 应用PCR和免疫组化技术检测40 例葡萄胎和25 例早孕正常绒毛中p16、p15 基因的纯合性缺失及蛋白表达情况。③结果 早孕绒毛中p16、p15基因、蛋白表达均为阳性。葡萄胎中p16、p15基因及蛋白表达缺失率均高于早孕绒毛组织,差异有显著性(χ2=11.152、14.388,P<0.05)。葡萄胎恶变组P16、P15 蛋白表达联合阴性率高于无恶变组(χ2 = 4.675, P<0.05);葡萄胎恶变组中,伴随清宫前子宫大于妊娠月份、同时发生黄素囊肿且大于6 cm、清宫后HCG持续2 个月才消退者,其P16、P15 蛋白表达联合阴性率均高于非恶变组,差异有显著性(χ2 = 4.412, P< 0.05; P= 0. 014、0.038)。④结论 葡萄胎的发生、发展与p16、p15基因、蛋白表达缺失有关。葡萄胎中P16、P15 蛋白表达缺失可望成为预测葡萄胎恶变倾向的指标。

肺癌组织中p53、K-ras、p15、p16基因的改变

目的 探讨p5 3、K ras、p15、p16基因在肺癌组织中改变情况及多基因联合检测在肺癌诊断中的价值。 方法 对 5 9例肺癌组织和 14例肺部良性组织 ,应用PCR SSCP 银染法检测 p5 3基因第 5～ 8外显子突变情况 ;应用PCR RFLP法对K ras基因突变进行检测 ;并应用PCR法检测 p15、p16基因纯合缺失情况。 结果 肺癌组织中 p5 3、p15、p16基因改变频率分别为 3 7.3 %、11.9%、2 3 .8% ,而在肺部良性组织中只有 1例 p16基因阳性。在 2 5例肺腺癌中 ,K ras基因突变率为 48.0 % ,其它类型肺癌中突变率仅为 8.8% ,而 14例良性组织中未检测出K ras基因突变。另外 ,p5 3基因和K ras基因突变与吸烟存在着密切关系 ,即吸烟者出现突变的频率 ( 4 8.7% ,68.5 % )明显高于非吸烟者 ( 15 .0 % ,11.1% ) ,P <0 .0 1。 4种基因联合检测敏感度为 78.0 % ,明显高于单一基因 (以阳性率最高的 p5 3为例 )的敏感度 3 7.3 %。 结论 p5 3基因、K ras基因和 p16基因在肺癌组织中改变率相对较高 ;多基因的联合检测有助于肺癌的早期诊断和筛查。