人原发性肝癌中p16,p15基因CpG岛甲基化研究

目的 检测人原发性肝癌中 p16和 p15基因 5’启动子区CpG岛的异常甲基化 ,并分析其与人原发性肝癌发生发展的关系 ,探索其在临床早期基因诊断和治疗中的意义 .方法 用敏感的甲基化特异性PCR检测 2 0例人原发性肝癌患者癌组织、癌旁组织和远癌正常组织中p16 ,p15基因5’CpG岛的甲基化状况 ,统计分析这两个基因 5’CpG岛甲基化与肝癌病理特征的相关性 .结果 2 0例原发性肝癌肝癌组织中 p16和 p15基因 5’CpG岛分别有 6 5 %(13/2 0 )和 5 0 %(10 /2 0 )异常甲基化 ;癌旁组织中 p16和 p15基因 5’CpG岛分别有 6 0 %(12例 )和 4 0 %(8例 )异常甲基化 ;远癌正常组织中p16和 p15基因 5’CpG岛分别有 35 %(7例 )和 2 5 %(5例 )异常甲基化 .p16 ,p15基因 5’CpG岛甲基化在癌组织和癌组织旁、癌组织和远癌组织中均有相关性 .两个基因 5’CpG岛异常甲基化与临床病理特征无显著相关性 .结论 p16和 p15基因 5’CpG岛异常甲基化在人原发性肝癌中频率很高 ,可能在肝癌发生发展中扮演了重要角色 ;而且这可能是一个早期事件 ,其临床早期诊断和基因治疗意义均值得进一步深入研究 .

PHI调控Molt-4细胞组蛋白甲基化诱导p15基因去甲基化后再表达

本研究探讨异硫氰酸苯己酯(PHI)对急性T淋巴细胞性白血病Molt-4细胞组蛋白H3K4、H3K9甲基化,及p15基因的去甲基化的调控作用及诱导沉默基因重新表达的机制。用Western blot方法检测PHI作用后Molt-4细胞的组蛋白H3K4、H3K9甲基化状态及P15蛋白的表达的变化;应用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)检测PHI作用前后Molt-4细胞株p15基因甲基化状态的变化;半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测Molt-4细胞经过PHI处理后p15基因的mRNA的表达变化。结果表明,PHI作用于Molt-4细胞可增强组蛋白H3K4甲基化表达,抑制组蛋白H3K9甲基化表达,并呈浓度及时间依赖性;PHI作用于Molt-4细胞5天后,p15基因的甲基化程度减弱,p15基因的异常高甲基化现象被逆转,沉默的p15基因重新表达;p15 mRNA、P15蛋白表达增加,并呈浓度依赖性。结论:PHI可能通过特异性调节组蛋白H3K4、H3K9甲基化水平,引起染色体空间结构发生变化,使p15基因的CPG岛去甲基化,从而诱导p15基因重新表达。

P16、P15基因在胃癌及转移淋巴结中的表达

目的 :观测抑癌基因P16、P15在原发性胃癌及淋巴结中的表达 ,以探讨两者在胃癌的发生转移及预后中的作用。方法 :应用免疫组织化学检测 92例原发性胃癌及 138枚转移淋巴结中P16、P15蛋白的表达。结果 :P16、P15阳性表达率在原发癌中分别为 17 4 %和 2 8 3% ,在转移淋巴结中分别为 15 9%和 2 8 3% ,原发癌伴淋巴结转移组P16、P15阳性表达率较无淋巴结转移组显著低 (P <0 0 5 ) ,P16、P15表达在原发性胃癌中呈正相关性 (P<0 0 5 ,列联系数r=0 2 74 ) ,在淋巴结中呈正相关 (P <0 0 5 ,列联系数r =0 32 4 )。结论 :P16、P15基因蛋白对胃癌的转移可能有抑制作用 ,两者联合检测对胃癌淋巴结转移预测及预后评估具有一定帮助。

p16和p15基因缺失与白血病

p16和p15基因是近年新发现的抑癌基因,其编码产物为CDK4和CDK6的抑制物,在细胞增殖周期中起负调节作用。p16和p15基因改变可发生于多种瘤细胞。本文仅就p16和p15基因同白血病发生和预后之间的关系,以及p16在该病中发生异常的可能机制等方面的研究进展做了概述,同时提出尚需进一步探讨的一些问题。

p15基因启动子区甲基化与新疆维吾尔族寻常性银屑病的相关性研究

银屑病（psoriasis，PS）是一种常见并易复发的慢性炎症性皮肤病。根据PS临床特征．一般可分为4种类型：寻常性、脓疱性、关节病性及红皮病性银屑病。国内外研究表明，PS是多基因疾病，遗传和环境因素对其发病有至关重要的影响，但发病机制目前仍然不清楚。

多发性骨髓瘤中p15基因高甲基化的研究

目的 :探索p15 (MSTINK4b)基因在多发性骨髓瘤中的作用特点和甲基化发生的规律。方法 :用甲基化特异的PCR的方法 -MSP(methylation -specific -PCR) ,检测 2 3例多发性骨髓瘤 (multiplemyeloma ,MM)p15基因甲基化的发生率。结果 :MM中甲基化的发生率为 73 5 % (17/ 2 3) ,扩增产物为 148bp片段。其中 4例Ⅰ期 ,骨髓象为浆细胞型的MMp15基因未发生甲基化 ;1例Ⅱ期和 1例Ⅲ期 ,骨髓象为分化成熟的浆细胞的MM中p15基因未发生甲基化 ;在Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ期中多数为浆细胞型或混合型中的幼稚浆细胞的病例易发生甲基化。Ⅰ、Ⅱ期和Ⅲ期中甲基化的发生率分别为 5 5 % (5 / 9)、10 0 % (7/ 7)和 71 4% (5 / 7)。结论 :p15基因甲基化可能是MM发病原因之一 ,与病程的进展和预后有一定的关系。

子宫颈癌的p16、p15基因缺失研究

目的 探讨p16、p15基因的纯合性缺失与子宫颈癌发生及发展的相关性。方法 本文采用PCR技术对 5 7例治疗前子宫颈癌组织的 p16、p15基因的纯合性缺失进行检测。结果 p16的纯合性缺失率为 15 7% ( 9 5 7) ,Ⅰ Ⅲ期宫颈癌的不同病理类型均有 p16基因的缺失 ,但没有显著性差异。p15基因未发现缺失。 结论 p16基因的纯合性缺失与子宫颈癌的发生有关 。

p15基因甲基化在骨髓增生异常综合征中的变化

目的 :探索p15基因异常甲基化在骨髓增生异常综合征中的变化及其在各亚型中的表达。方法 :采用MSP(Methylation -specific-PCR)的方法 ,研究p15基因异常甲基化在 32例骨髓增生异常综合征 (MDS)及其各亚型中的发生率。结果 :在MDS中p15基因异常甲基化占 5 0 % (16 32 ) ;在各亚型中的比例为 :难治性贫血 (RA)为 0 % ,难治性贫血伴环状铁粒幼细胞 (RA -S)为 2 0 % (1 5 ) ,难治性贫血伴原始细胞增多 (RAEB)为 5 7 1% (4 7) ,慢性粒单核细胞白血病 (CMML)为 71 4% (5 7) ,难治性贫血伴原始细胞转化型 (RAEB -T)为 85 7% (6 7)。其中 4例是在亚型间转型或进展为急性髓性白血病 (AML)时发生p15基因异常甲基化。结论 :p15基因甲基化可能是MDS发病的原因之一 ,并与MDS病程进展有关 ;其各亚型并非独立的分型 ,亚型间因病情的进展而转型时易有p15基因异常甲基化的发生。

中国人脑瘤中p16、p15基因缺失分析

目的 为了解 p16、p15基因与中国人脑肿瘤遗传易感性的关系。 方法 应用PCR、银染PCR SSCP及免疫组化法对 88例脑肿瘤及相应手术切除正常组织DNA标本 p16、p15基因进行研究。 结果 结果显示在不同病理分级脑胶质瘤中p16、p15基因缺失率分别为Ⅰ -Ⅱ级 4%、0 % ,Ⅲ级 3 2 %、2 8% ,Ⅳ级 3 6 %、2 7% ,p16、p15基因缺失主要见于Ⅲ -Ⅳ级肿瘤中 ;脑转移瘤中也检出缺失该基因 ( 2 /3 ) ,而原发性非胶质细胞瘤 (脑膜瘤、垂体瘤、听神经瘤等 )中未见p16、p15基因缺失 ,各类肿瘤标本PCR SSCP分析均未见 p16、p15基因点突变。 结论 表明国人脑瘤中p16、p15基因异常以缺失为主 ,p16、p15基因缺失在脑胶质瘤中发生频率较高 ,促进肿瘤细胞由良性向恶性演进 ,而对良性非胶质细胞瘤的发病没有作用。

小球隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)P15基因的克隆和表达

通过 PCR扩增出小球隐孢子虫 (Cryptosporidium parvum) P1 5基因片段。将该片段连接到克隆质粒载体 p U C1 9的 Bam H 酶切位点上 ,并对其序列进行了测定。结果表明 ,该基因长度为 4 79bp,编码的表面蛋白由 1 4 8个氨基酸残基组成。再将 P1 5蛋白基因片段分别在大肠杆菌和哺乳动物细胞中表达 ,经 SDS- PAGE分析和 Western blot检测 ,结果表明 ,小球隐孢子虫 P1 5蛋白基因在大肠杆菌内获得表达的融合蛋白相对分子质量为 5 0 0 0 0 ;在哺乳动物细胞中 ,重组痘病毒表达的蛋白相对分子质量为 1 80 0 0～ 2 2 0 0 0 ,与直接从自然感染牛小球隐孢子虫分离的 P1

乙酸镍诱导16HBE细胞恶变过程中的K-ras和P15基因的改变及基因组不稳定性分析

目的 :检测乙酸镍对 K- ras基因和 P15基因的改变及基因组不稳定性的影响 ,从而进一步探讨镍化合物致癌的分子机制。方法 :采用聚合酶链反应 -单链构象多态性分析方法探查乙酸镍在诱导 16 HBE细胞恶变过程中的 K- ras基因Exon1和 P15基因 Exon2存在状况。采用随机扩增多态性技术对乙酸镍在诱导 16 HBE细胞恶变过程中的基因组不稳定性进行分析。结果 :K- ras基因 Exon1和 P15基因 Exon2未发生改变。本实验所选用的 7条随机引物均能扩增出清晰、明显的条带 ,条带数在 1- 6条之间。 7条引物中 P4、P7二条引物扩增的片段在实验组和对照组之间无差异。其余 5条引物均有差异 ,对于同一随机引物他们都具有特异的带型。结论 :P15基因第 2外显子和 K- ras基因第 1外显子 (包括第 12、 13密码子 )可能不是乙酸镍作用的靶部位。在乙酸镍诱发细胞恶性转化过程中 ,基因组变得逐渐不稳定。

脑胶质瘤p15基因缺失及5′CPG岛甲基化研究

目的 探讨 p1 5基因变异及其与脑胶质瘤的发生、恶性进展的关系。方法 利用 PCR和 PCR- based甲基化检测技术检测了 56例脑胶质瘤中 p1 5基因外显子 1缺失及 5′CPG岛甲基化情况。结果 43例高级别的脑胶质瘤中 ,1 4例发生了 p1 5基因缺失 ( 32 .6% ) ,而 1 3例低级别的脑胶质瘤中无一例发生 p1 5基因缺失 ,差异具有显著性 ( P<0 .0 5)。 1例低级别的脑胶质瘤、3例高级别的脑胶质瘤发生了 p1 5基因 5′CPG岛甲基化。结论 p1 5基因异常可能参与脑胶质瘤的发生、恶性进展。基因纯合缺失是脑胶质瘤中 p1

肝细胞癌P16P15基因纯合性缺失

目的研究 p16,p15基因缺失状态与原发性肝细胞癌(HCC)发生、发展的关系.方法提取 HCC 新鲜组织中基因组 DNA,采用聚合酶链反应(PCR)技术,分别对30例 HCC 进行 p16基因第二外显子(p16E2)和 p15基因第二外显子(p15E2)纯合缺失研究.并与其癌旁组织进行对照.结果检测 p16E2纯合缺失率为16.7%(5/30),p15E2纯合缺失率为13.3%(4/30),p16E2、p15E2共同缺失率为6.7%(2/30).而癌旁组织 p16E2,p15E2均无缺失.结论 p16E2纯合缺失与 p15E2纯合缺失以及二者共同缺失是 HCC 的遗传易感因素,可能在 HCC 的发生、发展中起一定作用.

膀胱移行上皮细胞癌p15基因启动子区甲基化检测及其临床意义

目的探讨膀胱移行细胞癌p15基因5’CpG岛甲基化状态及其临床意义。方法应用甲基化特异性PCR方法检测45例膀胱移行细胞癌和10例正常膀胱组织中p15基因5’CpG岛甲基化程度,分析其甲基化程度与膀胱癌病理分级、分期间关系。结果膀胱移行细胞癌p15基因5’CpG岛甲基化阳性率为37.8%,而正常膀胱组织中未检测到p15基因5’CpG岛甲基化;p15基因甲基化与膀胱癌病理分级、分期差异有统计学意义(P<0.05)。结论p15基因在膀胱移行细胞癌组织中的甲基化率较高,其异常高甲基化在膀胱癌的发生、发展中具有重要作用。

原发性子宫内膜癌组织p15基因及其蛋白的表达

①目的 检测原发性子宫内膜癌组织中 p1 5基因以及相应蛋白的表达 ,以探讨该基因在原发性子宫内膜癌发生发展中的作用。②方法 应用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)及免疫组化方法 ,对 62例原发性子宫内膜癌及 1 5例正常子宫内膜组织的 p1 5基因和相应蛋白的表达进行检测。 ③结果 62例子宫内膜癌组织中有 2 4例 p1 5基因表达缺失 (38.71 % ) ,蛋白表达缺失者 2 7例 (43 .55 % ) ;1 5例正常子宫内膜组织p1 5基因及其蛋白均表达 ;p1 5基因和相应蛋白表达缺失率与原发性子宫内膜癌的FIGO分期以及组织学分级有关 (χ2 =1 1 .57～ 1 5 .52 ,P均 <0 .0 5) ,且有随临床期别及组织学分级的增高其表达缺失率呈增加趋势 (χ2 =1 1 .0 4～ 1 1 .98,P均 <0 .0 5)。④结论 p1

皮肤血管瘤组织中p15基因产物表达及意义

为探讨 p15基因在皮肤血管瘤组织中的表达情况及其临床病理学意义 ,采用免疫组织化学方法检测了 p15基因在 46例皮肤血管瘤组织 (其中增生期 2 0例 ,退化期 2 6例 )和 5例正常皮肤组织标本中的表达。结果显示 ,p15基因在退化期血管瘤内皮细胞表达水平高于增生期 ,差异有显著性 (P<0 .0 1)。

酪氨酸激酶抑制剂对转染p15基因的K562细胞的作用

本研究探讨酪氨酸激酶抑制剂伊马替尼(imatinib)和p15基因克隆联合作用对K562细胞的增殖、细胞周期及凋亡等的调控作用。用RT-PCR扩增p15基因,胶纯化回收后连接到T载体测序,确认序列正确后构建p15-pcDNA3.1载体,将p15-pcDNA3.1与空载体分别以脂质体转染入p15基因突变的K562细胞,经筛选得到G418抗性的K562细胞株;用Westernblot检测转染后P15蛋白的表达;用MTT法测定细胞存活率;流式细胞术检测细胞周期和凋亡。结果表明:从对照K562细胞中扩增的DNA片段,在第174-180位点有7个碱基缺失,这证实对照K562细胞中p15基因部位基因缺失。表达外源性P15蛋白的p15-pcDNA3.1-K562细胞株生长速度明显慢于对照K562细胞株;流式细胞术显示G0/G1期细胞增多,S期细胞明显减少;p15-pcDNA3.1-K562细胞与伊马替尼联合应用后凋亡细胞比例明显上升,MTT法显示细胞存活率较对照细胞明显下降。结论:表达外源P15蛋白联合应用伊马替尼对抑制K562细胞增殖及促凋亡方面具有协同作用。

硫酸镍诱导16HBE细胞恶变过程中的K-ras、P15基因的改变及基因组不稳定性分析

目的 检测硫酸镍对K—ras基因和P15基因的改变及基因组不稳定性的影响，从而进一步探讨镍化合物致癌的分子机制。方法 采用聚合酶链反应-单链构象多态性分析方法探查硫酸镍在诱导16HBE细胞恶变过程中的K—ras基因Exon1和P15基因Exon2存在状况。采用随机扩增多态性技术对硫酸镍在诱导16HBE细胞恶变过程中的基因组不稳定性进行分析。结果 K—ras基因Exon1和P15基因Exon2未发生改变。本实验所选用的7条随机引物均能扩增出清晰、明显的条带，条带数在1～6条之间。7条引物中P1、P4、P7三条引物扩增的片段在实验组和对照组之间无差异。其余四条引物均有差异，对于同一随机引物他们都具有特异的带型。结论 P15基因第2外显子和K—ras琏因第一外显子可能不足硫酸镍作用的靶部位。在硫酸镍诱发细胞恶变转化过程中，基因组变得逐渐不稳定。