骨髓增生异常综合征的免疫表型和SURVIVIN、P15INK4B、TRF1基因表达

目的探讨骨髓增生异常综合征(MDS)特征性免疫表型,SURVIVIN、P15INK4B、TRF1基因表达程度,及其与临床病情进展的关系。方法抽取50例MDS患者骨髓细胞,用流式细胞学技术检测免疫表型;抽取单个核细胞,用RT-PCR方法检测SURVIVIN、P15INK4B、TRF1基因mRNA表达程度。结果与对照组相比,MDS患者骨髓细胞原始群CD7和CD34表达增多;粒细胞群CD34表达增多,CD13、CD33、CD11b表达下降;单核细胞表达CD117和CD34。与对照组相比,MDS患者骨髓单个核细胞SURVIVIN和TRF1基因mRNA表达增加,P15INK4B基因mR-NA表达下降(P均<0.05)。从低危组到高危组,SURVIVIN和TRF1基因mRNA表达增加,P15INK4B基因mRNA表达下降(P均<0.05)。结论 MDS免疫表型有其特征性,SURVIVIN、P15INK4B和TRF1基因表达可能与其发病进展有关。

河南食管癌高发区居民食管癌组织p15INK4b和p16INK4a基因变化的研究

基因丢失导致ｐ１６ＩＮＫ４ａ和（或）ｐ１５ＩＮＫ４ｂ对ＣＤＫ激酶的抑制作用丧失，从而导致细胞增生调节失控［１－３］，目前在多种肿瘤中已发现存在ｐ１５ＩＮＫ４ｂ和ｐ１６ＩＮＫ４ａ的失活现象［４－６］．作者近年对河南食管癌高发区林州市居民的研究证实，肿瘤...

骨髓增生异常综合征与白血病细胞p15INK4B基因甲基化及机制研究

目的探讨p15INK4B基因甲基化异常和血液系统肿瘤发病的关系及甲基化异常的机制。方法采用RT-PCR、甲基化特异PCR、Westernblot法检测20例骨髓增生异常综合征(MDS)、20例急性白血病患者(AL)、14例慢性粒细胞性白血病(CML)患者骨髓单个核细胞p15INK4B基因mRNA和p15INK4B蛋白的表达、p15INK4B基因甲基化及甲基转移酶(DNMTs)的表达。结果高危组MDS患者p15INK4B蛋白表达阳性率低于低危组MDS患者(10%vs80%,P<001),p15INK4B基因甲基化阳性率较高(60%vs10%,P<001)。20例AL有9例(45%)存在p15INK4B基因甲基化。10例CML慢性期(CML-CP)患者仅1例存在p15INK4B基因甲基化。4例CML急变期(CML-BP)患者均检测到p15INK4B基因部分甲基化。DNMT3A、DNMT3B表达在AL、高危组MDS和CML-BP患者均明显高于低危组MDS(P<005)。结论p15INK4B基因甲基化在AL、高危组MDS和CML-BP患者发生率高于低危组MDS,伴有甲基转移酶DNMT3A、DNMT3B表达较高。p15INK4B基因甲基化可能参与MDS和AL的发病机制并与MDS及CML的预后有关。

鼻咽癌组织中P14ARF和P15INK4B基因异常甲基化的研究

目的 通过检测P14肝和P15INK4B基因启动子区甲基化情况,分析其与鼻咽癌发生、发展及临床病理特征的关系,探讨其可能在鼻咽癌临床早期分子生物学诊断和治疗中的作用.方法 运用甲基化特异性聚合酶链式扩增对54例鼻咽癌组织和20例正常鼻咽上皮组织的P14ARF和P15INK4B基因启动子区甲基化状态进行检测,比较两者的差异,并分析鼻咽癌组织中两种基因甲基化与患者临床病理特征的关系,以及两种基因甲基化的相关性.结果 鼻咽癌组织中P14ARF和P15INK4B基因启动子区甲基化阳性率分别为20.4%(11/54)和22.2%(12/54),两者总检出率为27.8%(15/54);而正常鼻咽上皮组织中未检测到P14ARF和P15INK4B基因启动子区甲基化;两组间P14ARF和P15INK4B基因启动子区甲基化阳性率差异有统计学意义(P<0.01).15例甲基化的癌组织同时两种基因同时甲基化为8例,非甲基化39例.P14ARF和P15INK4B基因甲基化与鼻咽癌的临床病理特征均无明显相关性(均P>0.05).结论 P14ARF和P15INK4B基因启动子区甲基化在鼻咽癌的发生、发展中可能存在协同作用,作为鼻咽癌发生的早期事件,有望成为分子生物学早期诊断的标志物,将来还可能作为去甲基化基因治疗的靶点.

Polymorphism of p16INK4a gene and rare mutation of p15INK4b gene exon2 in primary hepatocarcinoma

INTRODUCTION Hepatocellular carcinoma(HCC)is the mostcommon cause of death from cancer in China.Themechanisms of hepatocarcinogenesis are not yetknown clearly,p16INK4a gene,the multiple tumorsuppressor gene 1(MTS1),encodes P16 protein,which acts as an inhibitor by binding directly toCDK4 and CDK6 and preventing its association

p16INK4A和p15INK4B对人肝癌细胞增殖和凋亡影响的研究

目的 为探讨抑癌基因 p16 INK4 A和 p15 INK4 B对 Rb基因状态不同的人肝癌细胞系增殖和凋亡的影响。方法 在分析细胞系遗传背景鉴定基础上采用脂质体将构建的 p XJ- p16、p XJ- p15重组质粒转染人肝癌细胞系 BEL74 0 2 (p16 +/ p15 +Rb+)和 SMMC772 1(p16 +/ p15 +/ Rb- )。应用 PCR、RNA斑点印迹、MTT、集落形成、流式细胞仪等技术检测外源性 p16和 p15基因、m RNA表达及其对肝癌细胞增殖、凋亡的影响。结果 经转染的 BEL74 0 2 - p16 ,BEL74 0 2 - p15细胞 ,分别存在外源性 p16、p15基因 ,在含外源基因细胞中相应的 m RNA表达增强 ;BEL74 0 2 - p15细胞生长速度、集落形成率显著低于对照细胞 BEL 74 0 2 (P<0 .0 1) ;细胞周期分析观察到与亲本细胞比较 ,BEL 74 0 2 - p15的 G1期细胞由 37.7%增高到 4 3.6 % ,S期细胞由 2 2 %下降到 13% (P<0 .0 5 ) ,并出现 G1亚峰 (凋亡峰 )。与此相反 ,BEL74 0 2 - p16细胞增殖未见抑制 ,细胞周期分布无明显差异 ,集落形成率也未见减少。此外 ,SMMC772 1- p16细胞增殖也无抑制。结论 外源性 p15 INK4 B具有抑制人肝癌细胞生长 ,诱导细胞凋亡的作用 ,其作用不受内源性p15影响。而 p16 INK4 A对肝癌细胞生长抑制的作用可能依赖于 RB途径的完整性。

地西他滨对淋巴瘤细胞株Raji中P15INK4B基因的去甲基化作用

目的探讨Burkitt淋巴瘤细胞系Raji中P15INK4B基因甲基化状态,地西他滨对Raji细胞P15INK4B基因去甲基化作用及生长增殖的生物学影响。方法用不同浓度地西他滨作用淋巴瘤细胞株Raji,用台酚蓝拒染法研究药物对Raji细胞生长曲线的影响,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,采用聚合酶链反应(RT-PCR)检测P15INK4B表达,用甲基化特异PCR(MSP)方法检测P15INK4B基因的甲基化程度。结果地西他滨对Raji细胞有生长抑制作用,作用后细胞凋亡增加,P15INK4B基因表达增加,地西他滨使其甲基化程度下降。结论在Raji细胞中P15INK4B高度基因甲基化,并且表达下降,地西他滨通过去甲基化抑制淋巴瘤增殖。

低剂量亚砷酸及维甲酸方案对儿童骨髓增生异常综合征p15INK4B基因的影响

目的 探讨低剂量亚砷酸及维甲酸双诱导方案对骨髓增生异常综合征（MDS）患儿p15INK44B基因表达的影响及患儿p15INK4B基因甲基化水平的变化.方法 11例MDS患儿接受低剂量亚砷酸及维甲酸双诱导方案治疗,应用实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）方法检测治疗前后p15INK4B基因的表达,应用亚硫酸氢钠修饰及实时荧光定量PCR方法检测p15INK4B基因的甲基化水平.结果 11例MDS患儿经过双诱导方案治疗后,9例获益.治疗后10例患儿p15INK4B基因表达水平显著升高,治疗前后p15INK4B基因甲基化水平分别为（1.68±0.58）％、（1.44±0.65）％,二者差异无统计学意义（t=-0.885,P＞0.05）.结论 低剂量亚砷酸及维甲酸双诱导方案治疗儿童MDS疗效较好,该方案的作用机制可能与p15INK4B基因表达升高有关,但p15INK4B基因表达升高与去甲基化无相关性.

存活素和细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制因子2B在骨髓增生异常综合征诊断及患者预后评估中的临床价值研究

目的:探讨存活素(Survivin)和细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制因子2B(P15INK4B)在骨髓增生异常综合征(MDS)诊断及患者预后评估中的临床价值。方法:选取MDS患者150例为观察组,另选取同期体检健康者150例为对照组,比较Survivin、P15INK4B阳性表达及mRNA相对表达水平。对观察组患者进行为期1年的预后随访,比较不同预后患者Survivin、P15INK4B mRNA相对表达水平。绘制受试者工作特征曲线(ROC)曲线分析Survivin、P15INK4B对MDS的诊断价值,以及对MDS患者不良预后的评估价值。结果:观察组Survivin阳性表达率及mRNA表达水平高于对照组,P15INK4B阳性表达率及mRNA表达水平低于对照组(均P<0.05)。150例MDS患者中50例病死,1年生存率为66.67%(100/150),病死组Survivin mRNA表达水平高于存活组,P15INK4B mRNA表达水平低于存活组(均P<0.05)。Survivin、P15INK4B对MDS均有较高诊断价值,两者联合检测的诊断价值更高(均P<0.05)。Survivin、P15INK4B对MDS患者不良预后均有较高评估价值,两者联合检测的评估价值更高(均P<0.05)。结论:MDS患者Survivin高表达,且与患者预后呈正相关;P15INK4B低表达,且与患者预后呈负相关;两者均可用于MDS的诊断及不良预后的评估,联合检测有更高的价值。

半巢式甲基化特异性聚合酶链反应对肿瘤细胞株p15基因甲基化或缺失状态的检测

本研究分析多种恶性肿瘤细胞株的p15基因甲基化或缺失状态,阐明p15基因甲基化或缺失在肿瘤发生发展中的作用。运用半巢式甲基化特异性聚合酶链反应(hemi-nested methylation specific polymerase chain reaction,hn-MSP)分析20种恶性肿瘤细胞株和正常人单个核细胞或细胞株的p15基因甲基化及缺失状态,并评价该方法的敏感性和特异性。结果表明:在所有的细胞中,Molt-4、Raji、KG1、CA46、SW480、NCE、SMMC-7221、NCI-H446细胞为部分甲基化,hn-MSP检测p15基因甲基化敏感性可达到1×10-5。正常人单个核细胞、HL-60、HeLa、HepG2、293、SGC7901、U266、CEM细胞则为p15非甲基化,而K562、NB4、GMC、Jurkat似乎显现p15基因缺失或突变。结论:p15基因甲基化或缺失在多种肿瘤,特别在恶性血液病中有较高的发生率,且对疾病的进展及预后有密切的关系,hn-MSP具有较高的敏感性和特异性,值得在临床推广应用。

地西他滨对MDS-L细胞增殖的抑制作用及其相关作用机制研究

目的:探讨去甲基化药物地西他滨(Decitabine,DAC)的不同剂量对MDS-RAEB(骨髓增生异常综合征-原始细胞增多型)细胞株MDS-L细胞增殖的抑制作用及其相关作用机制。方法:采用LC-MS/MS生物分析法检测应用DAC 20和15 mg/m^2×5 d的两组MDS患者血药浓度水平;模拟患者的血药浓度,设计不同剂量的DAC(0.5、0.3、0.2、0.1、0.05、0.025和0.01μg/ml)作用于MDS-L细胞24、48、72和96 h,用CCK-8法检测细胞的增殖抑制效应;光学显微镜下观察细胞形态学变化;流式细胞术检测细胞周期变化及凋亡情况;PCR检测DAC作用后MDS-L细胞P15的甲基化水平的变化。结果:注射结束即刻,DAC 20 mg/m^2×5 d组患者血药浓度为174.08±80.15(84.7-311)ng/ml,明显高于15 mg/m^2×5 d组的89.87±32.94(43.2-165)ng/ml(P=0.014)。DAC对MDS-L细胞有明显增殖抑制作用,且呈时间浓度依赖关系(r=0.786),但DAC≥0.1μg/ml浓度时,各浓度对细胞的抑制作用无明显差异。DAC处理后G_1期细胞明显增多,而S期细胞明显减少。与对照组相比,MDS-L细胞经DAC 0.01、0.025、0.05、0.1、0.2μg/ml作用96 h后,P15INK4B表达均下降,但各浓度之间无显著差异(P>0.05)。结论:低浓度DAC对MDS-L细胞有明显增殖抑制作用,在0.1和0.2μg/ml浓度时,对MDS-L细胞的抑制作用达理想范围。DAC可以将MDS-L细胞阻滞在G_1期,阻止G_1期细胞向S期细胞转化。

骨髓增生异常综合征患者p15^(INK4B)基因甲基化与疾病进展的Meta分析

目的分析骨髓增生异常综合征(MDS)患者p15INK4B基因甲基化与疾病进展的关系。方法搜索Cochrane Library、Medline、PubMed、Embase、OVID、Springlink、CBMdisc、VIP、万方和CNKI数据库(1979 to 2012),查找报道MDS患者及sAML(MDS转化的白血病)患者p15INK4B基因甲基化发生率的文献,使用RevMan 5.0对数据进行统计分析。结果共有20篇文献检测了MDS患者p15INK4B基因甲基化状态,并报道了患者骨髓原始细胞数;其中9篇文献包括sAML患者(共690名患者)。p15INK4B基因甲基化状态在骨髓原始细胞5%～19%组中高于原始细胞<5%组(RR=0.41,95%CI:0.33～0.50),sAML组高于MDS原始细胞5%～19%组(RR=0.51,95%CI:0.41～0.64)。4篇文献报道了MDS患者疾病的进展(包括179名患者)。p15INK4B基因甲基化阳性组疾病进展率高于甲基化阴性组(RR=3.09,95%CI:2.04～4.68)。结论 p15INK4B基因甲基化与MDS患者疾病进展及白血病转化密切相关。

5′-杂氮-2′-脱氧胞苷对高危组骨髓增生异常综合征细胞作用的体外研究

本研究探讨 5′ 杂氮 2′ 脱氧胞苷 (5 aza 2′ deoxycytidine ,5 Aza CdR ,Decitabine)对高危组骨髓增生异常综合征 (MDS)细胞体外作用的机制。以人MDS RAEB细胞株MUTZ 1细胞为研究对象 ,采用细胞培养技术、MTT增殖抑制实验测定细胞存活率及抑制率 ;用细胞形态学、流式细胞术检测磷脂酰丝氨酸 (PS)转位及细胞凋亡 ;用RT PCR检测 p15INK4B基因、甲基转移酶 (DNMT1、DNMT3A、DNMT3B)基因mRNA表达 ;用甲基化特异PCR(MSP)方法检测 p15INK4B基因甲基化程度。结果表明 :5 Aza CdR对MUTZ 1细胞有生长抑制作用 ;作用后的细胞显示凋亡细胞的特征性改变。p15INK4B基因甲基化程度随 5 Aza CdR剂量增加而减弱 ,伴随 p15INK4B基因mRNA表达增加。经 3.2mmol/L 5 Aza CdR作用 4 8小时后 ,MUTZ 1细胞DNMT3A mRNA表达水平较未加药组明显下降 (灰度比为 0 .385∶0 .6 5 4 ,P <0 .0 5 ) ,DNMT1、DNMT3B mRNA表达水平与未加药组相比无明显改变。结论 :在 0 .4 - 6 .4mmol/L浓度范围 5 Aza CdR通过诱导MUTZ 1细胞凋亡而抑制该细胞生长 ,这可能是其抗肿瘤的主要机制之一。 5 Aza CdR可能通过下调DNMT3A mRNA表达使p15INK4B基因甲基化程度下降 ,从而恢复其表达。

骨髓增生异常综合征患者P15^(INK4B) FHIT基因甲基化的研究

目的探讨P15^(INK4B)基因和FHIT基因甲基化异常与骨髓增生异常综合征(MDS)发病机制的关系。方法采用甲基化特异聚合酶链反应(MSP)技术和变性高效液相色谱(DHPLC)检测分析50例MDS患者,其中包括低危组3例、中危-1组10例、中危-2组27例和高危组10例骨髓细胞P15^(INK4B)基因与FHIT基因的甲基化情况。结果随着疾病的进展,即由低危组MDS向高危组MDS进展,P15^(INK4B)基因和FHIT基因甲基化阳性率逐渐增高,且P15^(INK4B)基因和FHIT基因甲基化在3组间的差异有统计学意义(P=0.022,P=0.026),其中低危组/中危-1组P15^(INK4B)基因和FHIT基因甲基化阳性率低于高危组,且2组间的差异有统计学意义(P<0.05),而低危组/中危-1组与中危-2组、中危-2组与高危组间差异无统计学意义;2个基因的甲基化没有关联性。结论 P15^(INK4B)基因和FHIT基因甲基化可能参与MDS的发病机制,并与疾病的恶化程度有关。

去铁胺(DFO)诱导骨髓增生异常综合征(MDS)细胞株SKM-1的P15^(INK4B)基因去甲基化

目的探讨铁螯合剂去铁胺(deferoxamine,DFO)诱导骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)细胞株SKM-1的P15INK4B基因去甲基化作用。方法以枸橼酸铁铵(ferric ammonium citrate,FAC)和DFO处理SKM-1细胞,按不同铁负荷分成3组:对照组、FAC组和FAC+DFO组,分别检测不同铁负荷组细胞内可变铁池(labile ironpool,LIP)、细胞内活性氧类(reactive oxygen species,ROS)、P15INK4B基因甲基化状态、P15INK4B基因mRNA表达情况、细胞增殖(CFSE的平均荧光强度MFI)、细胞早期凋亡率以及细胞周期。结果与对照组相比,FAC组的LIP(64.04%±2.12%vs.1.45%±0.65%)、ROS(45.57%±1.18%vs.33.38%±12.96%)、细胞增殖MFI(23.01%±5.20%vs.51.67%±1.61%)明显升高,P15INK4B基因mRNA表达水平(0.72±0.08 vs.1)和细胞早期凋亡率(13.97%±2.25%vs.22.53%±1.76%)明显减少,差异均有统计学意义(P<0.05);与FAC组相比,FAC+DFO组的LIP(8.34%±4.21%vs.64.04%±2.12%)、ROS(34.39%±2.12%vs.45.57%±1.18%)、细胞增殖MFI(37.34%±6.61%vs.23.01%±5.20%)明显减少,P15INK4B基因mRNA表达水平(1.50±0.15 vs.0.72±0.08)和细胞早期凋亡率(55.07%±1.30%vs.13.97%±2.25%)明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05);3组细胞周期的差异无统计学意义。结论 DFO可使LIP和ROS降低,诱导铁过载的SKM-1细胞P15INK4B基因去甲基化,使其mRNA重新表达,并可抑制铁过载的SKM-1细胞增殖,促进其凋亡。

地西他滨对MDS细胞株SKM-1的作用研究

目的:探讨去甲基化制剂地西他滨(5-aza-2’-deoxycytidine,Decitabine)对MDS-RAEB(骨髓增生异常综合征-原始细胞增多型)细胞株SKM-1株的影响以及机制。方法:用台酚蓝拒染法研究药物对SKM-1细胞生长曲线的影响,用NBT(硝基四氮唑蓝)还原试验和流式细胞技术研究药物对细胞的分化作用,用AnnexinⅤ-FITC标记了解药物对细胞的早期凋亡作用,用RT-PCR研究药物作用后P15INK4BmRNA表达的变化。结果:地西他滨对SKM-1细胞有生长抑制作用,能促进SKM-1细胞分化和诱导早期凋亡,上调细胞P15INK4BmRNA表达。结论:地西他滨可能通过上调P15INK4BmRNA表达而促进SKM-1株的分化和诱导细胞早期凋亡。

p15^(INK4B)和p21^(WAF1)基因对人胰腺癌细胞系BxPC3的协同抑制作用

目的探讨p15INK4B(p15)和p21WAF1(p21)基因联合转染对人胰腺癌细胞系BxPC3细胞增殖和凋亡的影响。方法脂质体介导将pcDNA3.1(+)-p15和pcDNA3.1(+)-p21转染BxPC3细胞,稳定筛选后用RT-PCR检测转染细胞p15和p21基因mRNA表达,Western blot检测转染细胞p15和p21蛋白的表达。用MTT法和透射电镜检测p15和p21基因分别及联合转染对BxPC3细胞增殖和凋亡的影响,流式细胞仪检测BxPC3细胞周期分布和凋亡率。结果 p15和p21转染组BxPC3细胞生长速度低于空载体组和未转染组,联合转染与二者单独转染相比,细胞体外生长速度受抑制更明显。p15和p21转染组BxPC3细胞发生G1/S阻滞,G1期细胞比例显著高于空载体组和未转染组,S期比例显著低于空载体组和未转染组,并出现凋亡峰,透射电镜亦发现p15和p21转染组发生细胞凋亡。p15和p21联合转染组与二者单独转染相比,发生更为明显G1/S阻滞,G1期比例升高,有统计学意义,S期比例降低,但无统计学意义,凋亡率升高,有统计学意义。透射电镜发现联合转染组诱导BxPC3发生更明显的细胞凋亡。结论 p15和p21基因联合转染可以进一步增强对人胰腺癌BxPC3细胞的抑制作用和诱导凋亡作用。

神经胶质瘤中IDH2 R172G突变对基因表观修饰的研究

目的分析在神经胶质瘤细胞中异柠檬酸脱氢酶2(IDH2)突变后P15ink4b转录水平的变化,寻找和基因表观遗传修饰相关的异常表达的蛋白。重点关注P15ink4b启动子区甲基化水平变化,进而分析IDH2突变、肿瘤抑制基因P15ink4b、2-HG和甲基胞嘧啶羟化酶(TET)之间的关系。方法 p EGFP-N1、p EGFP-N1-IDH2M、p EGFP-N1-IDH2WT3个质粒转染C6细胞48h后,收获细胞Western Blot检测抑癌蛋白P15ink4b水平,q PCR检测P15ink4bmRNA变化,5-hm C检测试剂盒检测P15ink4b启动子区Cp G岛,CCGG位点5-hm C概率。结果 IDH2突变组抑癌蛋白P15ink4b表达明显低于对照组。IDH2突变组P15ink4bmRNA水平低于对照组,差异有统计学意义(P=0.043)。随着2-羟基戊二酸浓度加大,细胞活性明显增强,差异有统计学意义(P<0.05)。p EGFP-N1-IDH2WT组8个CCGG位点第二个C的5-hm C的概率都大于80%,而p EGFP-N1-IDH2M组都小于1%。结论 IDH2突变后产生的2-羟基戊二酸可以抑制TET酶活,从而去甲基化程度降低,使得抑癌基因P15ink4b启动子区甲基化程度增强,抑制P15ink4b基因表达,促进细胞增殖迁移。

肝硬化和肝癌患者外周血淋巴细胞中INK4位点反义非编码RNA和肿瘤抑制因子的表达

目的：探讨肝硬化、肝癌患者外周血淋巴细胞中INK4位点反义非编码RNA（ANRIL）和肿瘤抑制因子（p14ARF、p15INK4b和p16INK4a）的mRNA表达水平对肝硬化、肝癌诊断和鉴别诊断的价值。方法选择汕头市中心医院2013年10月至2014年4月收治的诊断为肝癌和肝硬化的住院患者，采用实时定量反转录-聚合酶链反应（RT-qPCR）检测患者外周血淋巴细胞中ANRIL、p14ARF、p15INK4b和p16INK4a的mRNA表达水平；以本院门诊的健康体检者作为健康对照组。结果最终纳入患者肝癌组19例，肝硬化组24例，健康对照组31例。肝癌组ANRIL mRNA表达明显高于健康对照组（？Ct：13.07±0.62比12.45±0.84，P＜0.01），p15INK4b mRNA表达明显低于健康对照组（13.24±0.98比13.99±0.99，P＜0.05），而肝癌和肝硬化组ANRIL（13.07±0.65比12.71±0.76）和p15INK4b（13.24±0.98比13.55±1.08）的mRNA表达水平无统计学差异（均P＞0.05）；3组p14ARF、p16INK4a的mRNA表达水平比较差异亦均无统计学意义（均P＞0.05）。结论肝癌患者外周血淋巴细胞中ANRIL mRNA表达水平升高，p15INK4b mRNA表达水平降低，可能成为肝癌早期诊断、预测其预后的参考指标。

P15^(INK4B)高表达对人黑色素瘤细胞G1/S进程的阻滞及与MAPK信号相关性之初探

利用TdR-N_2O同步法分别获得P15高表达的MLIK6和表达空载体的MLC2的M期细胞和G_1期细胞,~3H-TdR掺入结果显示,与对照组细胞MLC2相比,实验组细胞MLIK6从G_1期进入S期时间延长2h,并且掺入强度明显减弱,DNA合成被抑制。进一步观察了P15^(INK4B)对G_1/S相关调控蛋白的影响,在M期细胞释放8h(晚G_1期细胞)后,与对照组MLC2细胞相比,实验组MLIK6细胞中CyclinD1,CyclinE,Cdk4,C-Myc蛋白水平均降低。相反,P27^(KIP1)的表达却上升。同时探讨了MAPK信号在P15^(INK4B)阻抑A375细胞G_1/S转换中的作用与相关性,结果显示晚G_1期的MLIK6细胞中ERK1,ERK2水平变化不大,而具有活性的P-ERK1和P-ERK2均表现出下降。上述实验表明,P15^(INK4B)可能通过作用于G_1期相关的周期调节蛋白和抑制ERK1和ERK2活性,阻滞G_1/S转换与抑制DNA合成。