新生大鼠在高氧环境下肺成纤维细胞P16-RB-E_2F_1通路的改变

目的探讨新生大鼠在高氧环境下肺成纤维细胞(lungfibroblasts,LF)P16-RB-E2F1蛋白信号传导通路的改变。方法足月新生SD大鼠于生后12h内分别持续吸入85%高氧和空气,于3、7、14和21d随机处死动物,无菌条件下采集肺组织,进行LF细胞的原代培养,应用免疫组织化学、Westernblotting法检测P16、RB、E2F1蛋白表达;Real-timePCR法检测其mRNA含量。免疫组织化学法检测磷酸化RB蛋白(p-RBser-795)表达。结果高氧组与空气组相比,生后7d时高氧组P16蛋白及mRNA表达开始减少,E2F1表达增加(P<0.05),14d和21d时P16蛋白及mRNA表达明显减少,E2F1表达则明显增加(P<0.01);各实验组LF的总RB蛋白表达无明显差异(P>0.05),生后7d时高氧组p-RB蛋白表达增加(P<0.05),14d和21d时明显增加(P<0.01)。结论高氧可能通过肺成纤维细胞P16基因表达失活,导致RB蛋白磷酸化(Rb灭活),E2F1基因表达水平增加,LF过度增殖最终导致肺间质纤维化。

人参皂苷Rg1诱导人红白血病K562细胞株衰老与p16-Rb信号通路的相关性

目的探讨人参皂苷Rg1(以下简称Rg1)诱导人红白血病K562细胞株衰老与p16-Rb信号通路的相关性。方法以不同浓度的Rg1(0、5、10、20、40和80μmol/L)作用于K562细胞不同时间(24、48、72 h),MTT法筛选Rg1抑制K562细胞增殖的最佳作用浓度及作用时间,以该浓度干预K562细胞不同时间,流式细胞术检测细胞的细胞周期;以最佳浓度Rg1干预K562细胞最佳时间,集落培养法检测细胞集落形成能力;衰老相关-β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测阳性细胞百分率;透射电镜观察细胞的超微结构;Southern blot检测细胞的端粒长度;Western blot检测细胞中P16和RB蛋白的表达。结果 Rg1在体外可明显抑制K562细胞增殖,其最佳作用浓度及作用时间分别为20μmol/L和48 h;经20μmol/L Rg1诱导48 h的K562细胞与常规培养对照组相比,细胞出现G2/M期阻滞(P<0.05),集落形成能力明显减弱(P<0.05),SA-β-Gal染色阳性率增加(P<0.01),细胞体积增大,且溶酶体,线粒体体积增大,数目增多,端粒缩短加速(P<0.05),P16和RB蛋白表达上调(P<0.05)。结论 Rg1能诱导人红白血病K562细胞株衰老,可能与Rg1激活了p16-Rb信号通路有关。

p16和Rb基因产物在非小细胞肺癌的表达

目的 研究非小细胞肺癌 (NSCLC)中p16、Rb蛋白表达及二者的关系。方法 应用免疫组织化学技术 (SP法 )检测 74例NSCLC和 10例正常肺组织中p16、Rb蛋白的表达情况。结果 p16蛋白在NSCLC的缺失率为 45 .95 % ,显著高于正常肺组织 (P <0 .0 1) ,并与淋巴结转移有密切关系 (P <0 .0 1)。Rb蛋白在NSCLC的缺失率为 2 8.3 8% ,与正常肺组织差异无显著性 (P >0 .0 5 )。p16蛋白与Rb蛋白表达呈负相关 (P <0 .0 5 )。结论 p16缺失与可能NSCLC的发生、转移有密切关系。p16与Rb可能通过负反馈机制相互调节。

胃癌组织中p16、p53、Rb和增殖细胞核抗原的表达与临床病理特征的关系

目的：研究胃癌中 p16、 p53、 Rb蛋白及 PCNA表达与临床病理的关系。方法：应用免疫组化 SP法对 63例胃癌组织中 p16、 p53、 Rb和 PCNA进行检测。结果： 63例胃癌组织中 p16、 p53、 Rb蛋白和 PCNA表达阳性率分别为 63.5％、 60.3％、 65.6％和 71.4％。 p16蛋白阳性表达随着肿瘤分化程度降低、恶性程度增加和浸润深度的加深， 其表达的阳性率逐渐降低，而 p53、 Rb蛋白及 PCNA的表达则相反。 p16与 p53、 Rb蛋白表达有明显负相关。结论： p16和 p53、 Rb基因蛋白和 PCNA的检测可作为判断胃癌恶性程度、预测肿瘤转移和预后的参考指标。

p16和Rb基因蛋白在肺癌中的表达

目的：研究ｐ１６和Ｒｂ基因蛋白的表达与肺癌临床病理学特征的关系。方法：采用免疫组织化学方法对８９例肺癌进行了ｐ１６和Ｒｂ蛋白的定位观察。结果：肺癌ｐ１６基因蛋白的总丢失率为４７２％（４２／８９），且与肺癌的组织学类型、淋巴结转移、临床病理分期有关。Ｒｂ基因蛋白的总丢失率为３１５％（２８／８９），与组织学类型有关。ｐ１６和Ｒｂ基因蛋白的表达存在着明显的互补性。结论：ｐ１６和Ｒｂ基因蛋白的丢失是肺癌发生发展中重要的分子事件，与细胞周期Ｇ１→Ｓ期的负反馈调节环路中断关系密切。

胃癌组织中P16和Rb蛋白的表达

目的 :探讨P1 6和Rb蛋白在胃癌发生发展中的作用。方法 :采用免疫组化方法检测 4 0例胃癌标本和1 8例癌旁正常胃黏膜中的P1 6和Rb蛋白的表达。结果 :P1 6和Rb蛋白在胃癌组织中的表达阳性率 (35 .5 % ,4 0 % )明显低于癌旁正常胃黏膜组织 (88.6 % ,85 .7% ) (P <0 .0 5 ) ;P1 6和Rb蛋白在胃癌中的表达阳性率呈明显负相关(P <0 .0 5 ,rs=- 0 .5 1 2 ) ;P1 6表达与胃癌的淋巴结转移 ,浸润深度 ,TNM分期有关 (P <0 .0 5 ) ;Rb表达与胃癌的淋巴结转移有关 (P <0 .0 5 ) ,与浸润深度 ,TNM分期无关 (P >0 .0 5 )。结论 :P1 6和Rb蛋白在胃癌中相互抑制表达 ,在胃癌发生发展过程中起一定的作用 。

新疆不同民族食管癌中p53、p16、Rb蛋白的表达及其意义

目的 探讨 p5 3、p16、Rb蛋白在新疆不同民族食管癌中的表达及意义。 方法 应用免疫组化技术检测 119例不同民族食管癌组织中 p5 3、p16、Rb蛋白的表达。 结果 新疆食管癌 p5 3、p16、Rb蛋白检出率在不同民族间的阳性表达率均无显著性差异 (P >0 .0 5 )。三者阳性表达率与组织学分级无关 (P >0 .0 5 ) ;p5 3、p16阳性均与肿瘤浸润深度以及淋巴结转移有关 (P <0 .0 5 ) ,而Rb阳性仅与淋巴结转移有关 (P <0 .0 5 )。Rb与p16的表达密切相关 (P <0 .0 1)。结论 1.食管癌组织内三者蛋白表达在新疆不同民族之间无显著性差异。 2 .检测三者蛋白的表达有助于判断食管癌的恶性程度以及推断临床预后。

子宫颈腺癌中HPV16/18感染对p16^(Ink4a)、Rb蛋白表达的影响

目的研究16、18型人乳头瘤病毒(HPV16/18)DNA与细胞周期相关蛋白p16Ink4a、Rb在子宫颈腺癌中的表达情况及HPV16/18感染对p16Ink4a、Rb蛋白表达的影响。方法采用组织微阵列技术结合原位杂交和免疫组化EliVision二步法标记检测HPV16/18DNA和p16Ink4a、Rb蛋白在86例子宫颈腺癌、15例子宫颈腺上皮异型增生及24例慢性子宫颈炎组织中的表达。结果子宫颈腺癌组和子宫颈腺上皮异型增生组HPV16/18DNA阳性表达率分别为65·1%和46·7%,均明显高于慢性子宫颈炎组8·3%(P<0·01);p16Ink4a蛋白在子宫颈腺癌组的阳性表达率为74·4%,显著高于慢性子宫颈炎组33·4%(P<0·01)。Rb蛋白在子宫颈腺癌组的阳性表达率为33·7%,低于慢性子宫颈炎组45·8%,但差异无显著性(P>0·05)。HPV16/18感染与子宫颈腺癌的病理分级和组织学类型无关,但与p16Ink4a蛋白表达呈正相关(P<0·05)。p16Ink4a与Rb蛋白表达与子宫颈腺癌的病理分级有关,G2、G3组p16Ink4a阳性表达率明显高于G1组(P<0·05),G3组Rb阳性表达率明显低于G1组(P<0·05)。p16Ink4a表达与子宫颈腺癌组织学类型有明显相关性,子宫内膜样腺癌p16Ink4a阳性表达率明显高于透明细胞腺癌(P<0·05)。结论子宫颈腺癌的发生与HPV16/18感染有关,HPV16/18感染可能影响p16Ink4a、Rb蛋白表达,使子宫颈腺上皮发生癌变并促进恶性发展。

肺癌组织p16和Rb基因mRNA表达的双重原位杂交观察

目的 :研究 p16和Rb基因在mRNA水平的表达及其与肺癌的关系。方法 :制备 p16和Rb基因cDNA探针 ,采用双重原位杂交的方法 ,对 89例肺癌和正常肺组织进行了 p16和Rb基因mRNA表达的定位研究。 结果 :小细胞肺癌 p16mRNA阳性表达率高达 82 4% (14/ 17) ,而非小细胞肺癌阳性率为 45 8% (33/ 72 ) ,两者差异有显著性 (P <0 0 5 )。非小细胞肺癌RbmRNA阳性表达率为 81 9% (5 9/ 72 ) ,而小细胞肺癌阳性率仅 5 9% (1/ 17) ,两者差异有高度显著性 (P <0 0 1)。两种基因在蛋白水平和mRNA水平的表达基本相符。结论 :p16基因mRNA表达的丢失主要发生于非小细胞肺癌 ,Rb基因表达的丢失主要发生于小细胞肺癌。在翻译水平上也存在着引起 p16和Rb基因蛋白失活的可能机制。

肺癌p16、Rb基因mRNA和蛋白水平表达的定位观察

为研究 p16和Rb基因在蛋白水平和mRNA水平的表达及其与肺癌发生发展的关系 ,采用免疫组化和原位杂交的方法 ,对 89例肺癌手术标本进行了p16和Rb基因表达的定位观察。发现 p16基因蛋白的丢失主要发生于非小细胞肺癌 ,Rb基因蛋白的丢失主要发生于小细胞肺癌。两种基因各自在蛋白水平和mRNA水平的表达基本相符。提示p16和Rb基因的表达与肺癌的组织学类型密切相关 ,有可能作为非小细胞肺癌与小细胞肺癌基因分型诊断的分子生物学指标之一 ;在翻译水平上也存在着引起基因失活的可能机制。

HPV-16E7、Rb、p16蛋白在宫颈鳞状细胞癌中的表达及其意义

目的：探讨HPV-16E7、Rb、p16蛋白在宫颈鳞状细胞癌中的表达及其相互关系。方法：利用过氧化酶标记的链霉卵白素（SP）染色法，检测58例宫颈鳞状细胞癌中的HPV-16E7、Rb、p16蛋白表达。结果：在58例宫颈鳞状细胞癌中，HPV－16E7、Rb和p16阳性表达率分别为879％（51／58）、34．5％（20／58）和81．0％（47／58）。在50例Rb蛋白阴性和弱阳性表达的宫颈鳞状细胞癌组织中，HPV－16E7和p16为过度表达，Rb与HPV－16E7、p16呈相关关系（P＜0.01）；HPV－16E7与p16呈正相关关系（P＜0，05）。Rb、p16表达与临床分期有关，Rb阳性表达随着临的升高而减弱，p16阳性表达随临床分期升高而增强。结论：宫颈鳞状细胞癌的发生与Rb阴性和弱表达，p16、HPV－16E7过度表达有关；检测Rb、p16、HPV-16E7表达水平，对于宫颈鳞状细胞癌的临床早期诊断具有一定的参考价值。

大肠癌组织中p16、Rb及p27基因启动子区甲基化状态检测

目的:探讨大肠癌组织中p16、Rb和p27基因启动子区甲基化状态的改变及意义。方法:应用甲基化特异性聚合酶链反应方法检测56例大肠癌及其相应癌旁正常上皮、42例腺瘤组织中p16、Rb和p27基因启动子区甲基化状态。结果:腺瘤、癌组织中p16和p27基因启动子区甲基化率均较正常组织增加(χ2=4.680、9.091和4.008、10.618,P<0.05);Rb基因启动子区甲基化率无明显变化(χ2=2.513和3.125,P>0.05),而且甲基化水平低。癌组织中p16和p27基因启动子区甲基化状态与其蛋白表达负关联(rP分别为0.894和0.920,P<0.001),而Rb基因启动子区甲基化状态与蛋白表达无关联(rP=0.026,P=0.661)。p16基因启动子区高甲基化状态与大肠癌的分化程度、浸润深度及淋巴结转移有关(χ2=10.757,6.229和5.707,P<0.05),而p27高甲基化状态仅与淋巴结转移有关(χ2=10.475,P<0.001)。结论:p16和p27基因启动子区高甲基化在大肠癌的发生、演进和转移中可能起重要作用。

瘢痕疙瘩成纤维细胞p16、cyclinD1、CDK4、Rb的表达差异及其意义探讨

目的探讨瘢痕疙瘩成纤维细胞中p16、cyclinD1、CDK4、Rb等细胞周期调控元件的表达及其与瘢痕发生、发展的关系。方法分别以正常皮肤和浅表性瘢痕为对照,采用RT-PCR和免疫组化方法,检测培养的成纤维细胞中p16、cyclinD1、CDK4、Rb的mRNA和蛋白表达情况及其之间的相互关系。结果瘢痕疙瘩成纤维细胞中p16、cyclinD1、CDK4、Rb的mRNA存在过表达,与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);在蛋白表达水平上,p16、cyclinD1、CDK4、Rb阳性表达率分别为15.23%、82.43%、76.34%、45.74%,与其在对照组中的表达差异均有统计学意义(P<0.05)。结论瘢痕疙瘩中p16、cyclinD1、CDK4、Rb存在异常表达,p16与cyclinD1处于失衡状态,导致细胞的持续高增殖,在瘢痕疙瘩的发生、发展中起重要的作用。

卵巢癌和乳腺癌P53、P21、P16和Rb基因表达水平的研究

目的 :研究肿瘤组织癌相关基因P53、Rb、P16、和P21表达水平的临床意义。 方法:用流式细胞仪(FCM)检测30例卵巢癌和乳腺癌瘤体中心灶P53、Rb、P16、和P21异常表达的阳性细胞百分率。 结果: 卵巢癌和乳腺癌的P53、Rb、P16、和P21基因蛋白表达水平及异常表达率均无明显差异(P>0.05)。30例肿瘤的4种基因异常表达率分别为 :P5340 % ;Rb53.3 % ;P2166.7 %和P1653.3 %。96.7 %(29/30)的肿瘤存在至少一种以上癌相关基因的异常表达。异常表达两个以上癌相关基因的患者较易出现临床转移。 结论:联合检测实体肿瘤P53、Rb、P16、和P21基因蛋白表达水平并综合分析这些指标 。

疏肝养胃通脉冲剂治疗慢性萎缩性胃炎后胃黏膜P16 P53和Rb蛋白表达的观察

目的观察疏肝养胃通脉冲剂治疗慢性萎缩性胃炎(chronic atrophic gastritis,CAG)后P16、P53和Rb蛋白的变化。方法应用免疫组织化学S-P方法,对106例不同病理亚型CAG患者进行P16、P53和Rb蛋白检测。结果P16蛋白随胃癌前病变的萎缩、化生、异型增生及幽门螺杆菌(Hp)感染严重程度增加而减弱,而P53和Rb蛋白相反;治疗后,上调P16蛋白,下调P53和Rb蛋白且治疗前后比较除非Hp感染组的Rb蛋白外差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论疏肝养胃通脉冲剂能抑杀Hp,修复损伤的P16、P53、Rb蛋白和胃黏膜上皮,改善患者临床症状,对CAG的治疗和预防癌变有较好的作用。

抑癌基因p16、Rb在甲状腺癌组织中的表达

目的 探讨 p1 6、Rb蛋白在甲状腺癌发生、发展中的作用及其相互关系。 方法 采用免疫组织化学SP法对 46例甲状腺癌中 p1 6、Rb蛋白表达情况进行检测。 结果 在甲状腺癌中 ,p1 6蛋白的表达随肿瘤的恶性程度增高而降低 ,与淋巴结转移、临床分期及预后指数呈负相关。Rb蛋白在各型甲状腺癌中均呈阳性表达 ,p1 6、Rb表达无相关性。结论 p1 6基因的异常表达在甲状腺癌的发生、发展中有一定作用 ,而Rb基因可能无作用。

冬凌草甲素对胰腺癌BxPC-3细胞Cyclin D/Rb/p16信号蛋白的影响研究

[目的]通过观察冬凌草甲素对胰腺癌BxPC-3细胞形态和DNA变化的影响,研究其对Cyclin D/Rb/p16信号通路中基因表达的调节作用,分析冬凌草甲素对胰腺癌BxPC-3细胞的诱导与Cyclin D/Rb/p16信号通路之间的内在联系,为冬凌草甲素抗肿瘤提供可能的途径,为临床使用提供有利数据。[方法]冬凌草甲素作用BxPC-3细胞后,经瑞氏染色和Hoechst 33258荧光染色观察细胞形态,RT-PCR和实时荧光定量法(realtime PCR)检测Cyclin D/Rb/p16信号通路基因的表达变化;甲基化专一性PCR试剂盒检测p16基因的甲基化。[结果]冬凌草甲素(32μg·mL-1)作用于BxPC-3细胞后,瑞氏染色可见细胞出现典型的凋亡小体,Hoechst33258荧光染色可见BxPC-3细胞出现特征性凋亡变化,冬凌草甲素(32μg·mL-1)作用BxPC-3细胞36 h时,CDK4的表达量达到最低,但p16的表达量达到最高;p16基因有甲基化。[结论]1、冬凌草甲素能诱导BxPC-3细胞形态改变。2、冬凌草甲素在一定程度下调了CDK4基因的表达,上调了p16基因的表达,不能改变p16基因的甲基化,可能通过影响Cyclin D/Rb/p16信号通路而抑制胰腺癌的生长周期。

Cyclin D1、p16及Rb在视网膜母细胞瘤中的表达及其相关性

目的探讨Cyclin D1、p16、Rb在视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,RB)中的表达及其生物学意义。方法采用免疫组织化学方法(SP法)检测Cyclin D1、p16及Rb在46例常规石蜡包埋的视网膜母细胞瘤标本中的表达,并在生物学行为及分化程度不同的视网膜母细胞瘤之间进行比较。结果正常视网膜组织与视网膜母细胞瘤组织中CyclinD1、p16及Rb蛋白表达差异有极显著性意义(P<0.01);视网膜母细胞瘤中,Rb与p16、Cyclin D1表达之间无明显相关性(P>0.05);p16表达率在生物学行为不同的视网膜母细胞瘤之间差异显著,30例视神经未浸润组视网膜母细胞瘤的p16阳性表达率明显高于16例视神经浸润组(P<0.05);Rb及p16蛋白表达阳性率随组织学分级降低而下降,分化组与未分化组视网膜母细胞瘤中Rb及p16蛋白表达率差异有极显著性意义(P<0.01)。结论p16、Rb、Cyclin D1在视网膜母细胞瘤发生发展中起着重要作用。Cyclin D1的过表达与p16和Rb的表达缺失或失活是视网膜母细胞瘤发生的重要分子事件,p16蛋白失表达可能与其视神经浸润能力有关,Rb及p16蛋白失表达则与其分化程度相关。

Rb,p53与p16基因表达的相关性研究

为了检测 Rb,p53,p16基因产物在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达特征,采用免疫组化和图像定量相关分析技术比较了 Rb,p53与 p16的表达情况及相互关系。结果11例 Rb 表达阴性的肿瘤,p16蛋白表达皆为强阳性,而30例 Rb 表达阳性程度较高(++～+++)的标本中,23例显示 p16表达阴性或低水平表达,图像定量相关分析显示 Rb 失活与 p16表达之间存在负相关关系。提示 NSCLC 发生发展的分子遗传机制可能涉及 p16及 Rb 基因在内的细胞周期 G_1期负反馈调节通路异常。

HPV16 E7蛋白阳性和阴性乳癌组织中Rb和P16蛋白的表达

目的:研究人乳头瘤病毒16型(HPV16)E7蛋白阳性(E7+)和阴性(E7-)乳癌组织中Rb和P16蛋白的表达及意义。方法:以经PCR筛选证实的HPV16 DNA阳性的56例乳癌组织(经Western blotting证实42例HPV16E7+,14例E7-)为研究对象,采用Western blotting方法检测癌组织中Rb和P16蛋白的表达。结果:HPV16E7+、HPV16E7-乳癌组织中,Rb蛋白阳性率分别为9.5%(4/42)、50.0%(7/14),P16蛋白阳性率分别为85.7%(36/42)、21.4%(3/14),HPV16E+和E7-乳癌组织中P16和Rb蛋白阳性率差异均有统计学意义(χ2=20.525,10.898,P均<0.001)。HPV16E7+乳癌组织中,Rb和P16蛋白表达有关(rp=0.792,P=0.003);HPV16E7-乳癌组织中,Rb和P16蛋白表达无关(P=0.182)。结论:HPV16E7可通过降解Rb,促进P16蛋白表达,从而在乳癌发生发展中发挥作用。