基质金属蛋白酶-2和p185^(HER-2/neu)蛋白在卵巢癌中的研究进展

基质金属蛋白酶-2(Matrix Metalloproteinase-2,MMP-2)是基质金属蛋白酶家族的重要成员,能降解明胶蛋白和Ⅳ型、V型胶原,在细胞外基质的降解过程中起着关键作用,能够促进肿瘤细胞发生侵袭和转移。p185HER-2/neu蛋白是一种相对分子质量185×103的跨膜糖蛋白,由HER-2/neu基因编码,属于酪氨酸激酶受体家族,p185HER-2/neu蛋白在人类多种癌症中存在扩增及过量表达,并与肿瘤的侵袭性表型及生存期短密切相关。就基质金属蛋白酶-2和p185HER-2/neu蛋白的生物学特性,与卵巢癌侵袭转移和预后的关系及MMP-2和p185HER-2/neu蛋白的研究情况等予以综述。

p16^(INK4)、p21^(ras)及p185^(C-erbB-2)蛋白在子宫内膜癌的表达及临床病理意义

目的:研究p16 INK4 蛋白在子宫内膜增殖症和子宫内膜癌的表达特征,以探讨其与p2 1ras、p185 C erbB 2 蛋白的相互关系及在子宫内膜癌发生发展中的作用。方法:应用免疫组化SP法检测6 5例子宫内膜癌及2 0例子宫内膜增殖症组织中p16 INK4 、p2 1ras及p185 C erbB 2 蛋白的表达。结果:子宫内膜增殖症组织p16 INK4 蛋白表达率为85 .0 0 % (17/ 2 0 ) ,子宫内膜癌组织p16 INK4 蛋白表达率为6 0 .0 0 % (39/ 6 5 ) ,其表达与组织分级及p185 C erbB 2 蛋白表达呈负相关。结论:p16 INK4 蛋白失表达与子宫内膜癌分化差有一定关系,与p2 1ras、p185 C erbB 2 蛋白的联合检测可反映肿瘤的分化。

原癌基因HER2/neu表达产物p185蛋白免疫原性研究

用表达ｐ１８５蛋白ＨＥＲ２／ｎｅｕ转基因３Ｔ３－ＨＥＲ２／ｎｅｕ细胞裂解物免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，经３次免疫后，免疫小鼠脾细胞对表达ｐ１８５蛋白的３Ｔ３－ＨＥＲ２／ｎｅｕ细胞呈现较强的增殖反应（平均刺激指数分别为ＳＩ＝３．１５±１．８８），而对未转染ＨＥＲ２／ｎｅｕ基因的３Ｔ３细胞的应答较弱（ＳＩ＝１．１４±０．９７）。并检测到１号免疫鼠脾细胞对３Ｔ３－ＨＥＲ２／ｎｅｕ细胞有特异杀伤作用。免疫鼠血清中出现高水平的抗ｐ１８５抗体（ＯＤ均值＝１．０２±０．１６），较正常对照组（ＯＤ均值＝０．３６±０．１０）有显著差异（Ｐ＜０．００１），表明ＨＥＲ２／ｎｅｕ表达产物ｐ１８５蛋白具有免疫原性，用于免疫小鼠可诱导出对ｐ１８５蛋白的特异免疫应答反应。

EGF受体介导c-erbB2癌基因反义寡核苷酸对p185蛋白表达的影响

目的 研究c-erbB2癌基因反义寡核苷酸探针99mTc-ASODN-EGF对SK-Br-3乳腺癌细胞c-erbB2蛋白表达的影响。方法 将反义寡脱氧核苷酸与次乙酰双半胱氨酸偶联,用锝(99mTc)标记,再与表皮生长因子联合,形成分子复合物99mTc-ASODN-EGF。将该复合物给予SK-Br-3乳腺癌细胞,用免疫组化方法测定细胞膜c-erbB2蛋白的表达。结果99mTc-ASODN-EGF明显抑制c-erbB2蛋白表达,免疫组化的平均光密度值最低,对照正义和无义组对蛋白表达的影响较小。结论c-erbB2反义寡脱氧核苷酸明显抑制目的基因表达,使p185蛋白减少,细胞活力减弱。

应用组织芯片技术检测卵巢癌组织中基质金属蛋白酶-2和p185^(HER-2/neu)的表达及其临床意义

目的:研究基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和p185HER-2/neu在卵巢癌组织中的表达及临床意义,探讨MMP-2和p185HER-2/neu联合和单一检测对卵巢癌诊断的价值。方法:利用组织芯片技术结合免疫组织化学SP法检测80例卵巢癌组织及30例正常卵巢组织MMP-2和p185HER-2/neu的表达。结果:MMP-2和p185HER-2/neu在卵巢癌中的阳性率均明显高于正常卵巢组织(P<0.01),MMP-2和p185HER-2/neu的阳性率与分化程度、临床分期及淋巴结转移的差异均有统计学意义(P<0.05~P<0.01),而与组织学类型无明显关系。联合MMP-2和p185HER-2/neu诊断卵巢癌的灵敏度、准确性有所上升,阴性似然比下降。结论:MMP-2和p185HER-2/neu在卵巢癌组织中的表达对卵巢癌的生长、浸润及转移起重要作用,与卵巢癌的分化、临床分期及淋巴结转移相关。

抗乳腺癌导向药物-人源化抗p185单链抗体/hIL-2双功能融合蛋白的制备

肿瘤特异性载体结合细胞毒物质构成的导向制剂曾被称为生物"魔弹".抗体作为载体的主体一直是人们研究的重点,虽然仍面临诸多困难,如抗抗体反应及抗体大分子难以穿越微血管壁等,但随着技术进步正逐步得到解决.近年来,用于乳腺癌治疗的Herceptin及用于白血病及胃肠道肿瘤的Gleevec等导向制剂,相继获得FDA批准,已在国内外上市,它们的临床疗效获得了人们的极大重视,显示了良好的应用前景.本文报道一新抗乳腺癌导向药物,即人源化抗原癌基因HER-2/neu(c-erbB2)产物p185单链抗体/人白细胞介素2(hIL-2)双功能融合蛋白的研究工作.

ICAM-1、C-erbB-2蛋白表达产物p185和喉癌相关性研究

目的研究喉癌组织中细胞间粘附因子-1(ICAM-1)、C-erbB-2基因的蛋白产物p185的表达情况及其在肿瘤发展过程中的作用。方法采用免疫组化方法检测ICAM-1、p185在喉癌(52例),喉息肉(10例)及正常人喉粘膜组织(10例)中的表达。结果ICAM-1、p185在喉癌中阳性表达率为69.2%,51.9%,其阳性表达率在有无淋巴结转移、复发、临床分期、5年生存率等方面差异有显著性(P<0.05)。结论ICAM-1、p185在喉癌中的表达与肿瘤的自然发展过程有关,同时可作为判断肿瘤恶性程度及预后的有效指标。

抗人P185^(erbB2) scFv-Fc-IL-2调变肿瘤细胞表面分子和激活免疫效应细胞

目的将抗人P185erbB2scFv-Fc-IL-2融合蛋白(HFI)作用于人卵巢癌细胞株SKOV3细胞和人外周血单个核细胞(PBMC),通过体外实验阐明HFI调变肿瘤细胞表面分子和激活免疫效应细胞的抗肿瘤机制,为HFI临床应用提供实验依据。方法MTT法检测细胞增殖、杀伤活性;流式细胞术观察细胞表面分子的表达水平;生物活性法检测细胞膜相关TNF杀伤活性;RT-PCR检测细胞穿孔素表达水平。结果HFI处理后,未观察到对SKOV3细胞增殖活性的直接抑制作用;SKOV3细胞表面杀伤相关分子ICAM-1、Fas表达率分别由24.85%、0.53%增高到85.36%、59.19%(P<0.01);人PBMC的增殖活性增强,CD3+CD8+T细胞和CD3-CD16+CD56+NK细胞分别由24.37%、6.90%提高到38.80%、13.45%(P<0.01);CD25、LFA-1、FasL表达水平分别由3·99%、86.52%、5.02%提高到12.96%、99.06%16.19%(P<0.01);穿孔素基因、膜相关TNF均表达增强,LAK样、NK样杀伤活性在各效靶比时均明显增高(P<0.01)。结论HFI提高SKOV3细胞杀伤相关分子ICAM-1、Fas表达水平,并且对人PBMC有明显的增殖活化作用,通过激活LFA-1/ICAM-1、Fas/FasL途径提高杀伤介质穿孔素和膜相关TNF的释放,增强LAK样、NK样杀伤活性。

p185蛋白在乳腺癌中的研究进展

p185蛋白是癌基因C-erbB-2编码的跨膜糖蛋白受体,p185蛋白的高表达在乳腺癌的发生、发展及治疗方面起着非常重要的作用.本文对p185蛋白的过度表达及对乳腺癌的发生、发展、诊断、治疗及预后意叉进行了综述.

P185^(c-erBb-2)胞外区结构域在大肠杆菌BL21中的表达分析

以 PET-HT为表达载体 ,探讨在大肠杆菌 BL2 1中高效表达 P1 85c- er Bb- 2胞外区结构域蛋白的最佳条件 .经 SDS-PAGE与软件分析 ,确定其最佳表达时间为 3 h,当菌液密度为 0 .7时 ,所表达的蛋白含量最高 ,而 IPTG在一定浓度范围内对表达含量不产生影响 .

阿那曲唑联合依维莫司治疗乳腺癌的效果及对血清HER-2/neu、p185水平的影响

目的探究阿那曲唑联合依维莫司用于治疗乳腺癌的临床疗效及其对患者血清中人类表皮生长因子受体2蛋白(HER-2/neu)、p185水平的影响。方法选取2013年1月至2018年12月广元市第一人民医院治疗的符合纳入标准的患者1000例,按照随机数字表法分为对照组(n=500)和观察组(n=500)。对照组给予口服阿那曲唑片,观察组在对照组的基础上给予口服依维莫司片。治疗3个月后,观察比较2组患者的临床疗效及不良反应发生率,比较2组患者雌激素、HER-2/neu、p185水平。结果观察组的临床缓解率为60.60%,要明显高于对照组(54.20%),差异有统计学意义(χ^2=4.190,P=0.041)。治疗前,2组患者的雌二醇(E2)、黄体生成素(LH)、HER-2/neu、p185水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。经过3个月的治疗,观察组的E2、LH、HER-2/neu、p185水平均明显低于对照组(t=8.148,P=0.000;t=85.170,P=0.000;t=20.209,P=0.000;t=16.109,P=0.000)。治疗过程中,对照组和观察组患者不良反应发生率分别为8.60%和7.60%,差异无统计学意义(χ^2=0.340,P=0.562)。结论阿那曲唑联合依维莫司治疗乳腺癌具有良好的临床疗效,可抑制肿瘤细胞的生长发育,降低患者体内雌激素水平,且安全性高。

抗P185单克隆抗体结合活性的研究

目的 :研究所制备的单克隆抗体的结合活性。方法 :用所获得的七株单克隆抗体进行ELISA、WesternBlot、免疫沉淀分析。结果 :单克隆抗体 1H3、5A12、7E5、7F9可与NIH3T3-erbB2细胞、SKBR3细胞特异性结合 ,与NIH3T3细胞无反应 ;1H3与原核表达的c -erbB2胞外区蛋白有特异性反应 ,而与无关蛋白KDR无反应。WesternBlot分析中 ,1H3可与NIH3T3-erbB2细胞、SKBR3细胞裂解液在约 185KD处染出一条特异性条带。 1H3、5A12、7E5、7F9均可与NIH3T3-erbB2细胞的膜提取物沉淀出一条分子量与P185相似的蛋白条带。结论 :七株单克隆抗体中有四株可与P185特异反应 。

LncRNA ASB16-AS1调节miR-185-5p/TRAM2轴对口腔鳞癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

该文旨在探讨长链非编码RNA ASB16-AS1(LncRNA ASB16-AS1)靶向微小RNA-185-5p(miR-185-5p)/易位相关膜蛋白2(TRAM2)轴对口腔鳞状细胞癌(又称口腔鳞癌)细胞增殖、迁移和侵袭的影响。体外培养人口腔鳞癌细胞SCC-9,将其分为对照组、sh-NC组、sh-ASB16-AS1组、sh-ASB16-AS1+inhibitor NC组、sh-ASB16-AS1+miR-185-5p inhibitor组。用qRT-PCR法检测各组细胞LncRNA ASB16-AS1、miR-185-5p、TRAM2 mRNA表达水平;用CCK-8试剂盒检测SCC-9细胞增殖情况;用流式细胞术检测SCC-9细胞凋亡情况;用划痕实验检测SCC-9细胞迁移情况;用Transwell法检测SCC-9细胞侵袭情况;Western blot检测TRAM2蛋白表达水平。双荧光素酶报告实验验证LncRNA ASB16-AS1与miR-185-5p及miR-185-5p与TRAM2之间的靶向关系。与对照组和sh-NC组相比,sh-ASB16-AS1组中Lnc RNA ASB16-AS1、TRAM2 mRNA、TRAM2蛋白表达水平以及D值、划痕愈合率、细胞侵袭数降低,mi R-185-5p水平、细胞凋亡率升高(P<0.05);与sh-ASB16-AS1+inhibitor NC组相比,sh-ASB16-AS1+miR-185-5p inhibitor组中mi R-185-5p水平、细胞凋亡率降低,TRAM2 m RNA表达水平、TRAM2蛋白表达水平、D值、划痕愈合率、细胞侵袭数升高(P<0.05),而Lnc RNA ASB16-AS1水平无显著变化(P>0.05);生物学信息网站预测显示mi R-185-5p与Lnc RNA ASB16-AS1和TRAM2均存在靶向结合位点,且双荧光素酶报告基因实验证实LncRNA ASB16-AS1与miR-185-5p,以及miR-185-5p与TRAM2之间均存在靶向关系(P<0.05)。在口腔鳞癌细胞中Lnc RNA ASB16-AS1表达上调,抑制Lnc RNA ASB16-AS1的表达可靶向上调mi R-185-5p的表达,抑制TRAM2的表达,进而促进口腔鳞癌细胞凋亡,抑制口腔鳞癌细胞增殖、迁移和侵袭。

p185^(HER-2)蛋白胞外区的表达及其结合肽的筛选

目的 :构建p185 HER -2 蛋白胞外区的原核表达载体 ,实现p185 HER -2 蛋白胞外区的表达。以纯化p185 HER -2 蛋白胞外区为靶 ,从噬菌体肽库中筛选其结合肽 ,用于肿瘤导向治疗。方法 :从含有HER 2全长cDNA的质粒psv2 -cerbB -2 中克隆了人p185 HER -2 蛋白胞外区cDNA ,将此cDNA克隆到pET 30a +表达载体中 ,构建p185蛋白胞外区的表达载体。表达的p185 HER -2 蛋白胞外区通过Zn2 + 螯合层析柱进行纯化。以纯化的p185 HER -2 蛋白胞外区为靶 ,通过淘洗方法进行噬菌体肽库筛选。结果与结论 :构建了p185 HER -2 蛋白胞外区的原核表达载体 ,实现了p185 HER -2蛋白胞外区的高表达。通过Zn2 + 螯合层析柱实现一步纯化 ,p185 HER -2 蛋白胞外区的纯度达到 95 %。从噬菌体随机环七肽库中找到了一组具有核心序列p185 HER -2 蛋白胞外区结合肽。这些p185 HER -2 蛋白胞外区结合肽有可能成为肿瘤治疗的新的候选分子。

c—erbB—2基因在人卵巢肿瘤中的表达及其与临床预后关系的研究

目的 研究C—erbB—2基因在人卵巢肿瘤中的表达及意义 方法 用LSAB免疫组化方法共检测101例石腊包埋卵巢良恶性肿瘤及卵巢正常组织P185蛋白表达情况,并对其与卵巢上皮癌、交界瘤临床预后因素之间的关系进行统计学分析。结果 (1)P185蛋白在卵巢上皮癌、和良性肿瘤的阳性表达率分别为49％、10％,二者之间存在统计学差异(P<0.05)。(2)P185蛋白在卵巢上皮癌中的阳性表达与各临床预后因素如分期、分化、组织学类型及术后残存肿瘤大小无任何相关性,对生存率亦无影响(P>0.05)。(3)P185蛋白阳性表达与早期卵巢癌(Ⅰ—Ⅲ期)、交界瘤的病情进展与否无关。结论 P185蛋白表达可能与卵巢恶性肿瘤发生相关,但无明显临床预后意义。

胃癌、胃黏膜不典型增生和胃炎组织中p185和p21蛋白的表达及其临床意义

目的研究胃癌、胃黏膜不典型增生和胃炎组织中c-erbB-2和ras癌基因产物p185和p21蛋白的表达,以探讨p185和p21蛋白在胃癌发生、发展过程中的作用。方法采用免疫组化S-P法检测39例胃癌组织、24例胃黏膜不典型增生组织和33例胃炎组织p185和p21蛋白的表达。结果p185蛋白在慢性胃炎、轻度胃黏膜不典型增生组织中不表达;在中、重度胃黏膜不典型增生组织中的表达率分别为11.8%和66.7%,差异有显著性(P<0.05),表达程度明显增强(P<0.05);在高、中、低分化胃癌组织中的表达率分别为77.8%、50.0%和29.2%,差异有显著性(P<0.05),高分化胃癌组织中p185蛋白的表达程度明显高于中、低分化胃癌组(P<0.05)。p21蛋白在胃黏膜不典型增生及胃癌组织中的表达率和表达程度较慢性胃炎组明显增高,差异有显著性(P<0.01);在轻、中、重度胃黏膜不典型增生组织中的表达率分别为25.0%、82.4%和100.0%,差异有显著性(P<0.05),表达程度明显增强(P<0.05);在高、中、低分化胃癌组织中的表达率分别为44.4%、66.7%和95.8%,差异有显著性(P<0.01),表达程度明显增强(P<0.05)。p185和p21蛋白在胃癌组织中的表达呈负相关(r=-0.450,P<0.01)。结论c-erbB-2和ras癌基因产物p185和p21蛋白在胃癌致病机制中起重要作用,p21蛋白作用于胃癌发生的早期阶段,p185蛋白可能作用于胃癌发生的较晚期。

肾癌组织中C－erbB－2基因的扩增和P185蛋白的表达分析

肾癌组织中Ｃ－ｅｒｂＢ－２基因的扩增和Ｐ１８５蛋白的表达分析丁强张炯孙逊潘文生作者单位：２０００４０上海医科大学泌尿外科研究所，华山医院泌尿外科（丁强）；上海市第六人民医院泌尿外科（张炯）；药学院有机室（孙逊）；中山医院病理科（潘文生）应用核酸分子杂...

c-erbB2 ASODN-Folato(FA)诱导乳腺癌细胞凋亡的体外研究

目的本研究通过癌基因反义寡脱氧核苷酸抑制癌基因表达的原理,研究c-erbB2癌基因反义寡脱氧核苷酸对乳腺癌细胞SK-Br-3凋亡和蛋白表达的影响。方法采用DNA末端原位标记染色和Annexin-V荧光标记法检测ASODN-FA对乳腺癌细胞凋亡的作用,用免疫组化法检测对p185蛋白表达的影响。结果DNA末端原位标记染色实验表明,c-erbB2 ASODN-FA能诱导SK-Br-3细胞晚期凋亡,其凋亡指数AI为(17.37±2.78)%,与对照组[(4.60±1.76)%]比较有显著差异(P=0.000)。Annexin-V检测发现,c-erbB2 ASODN-FA能诱导SK-Br-3细胞早期凋亡,早期凋亡细胞阳性率为(18.62±1.80)%,与对照组[(2.75±1.09)%]比较有显著差异(P=0.000)。免疫组化测定细胞p185表达情况,ASODN-FA组的平均光密度为0.11±0.02,与对照组(0.31±0.06)比较明显降低(P=0.000)。结论c-erbB2反义寡脱氧核苷酸能诱导乳腺癌细胞SK-Br-3的早期和晚期凋亡,使p185蛋白表达降低。

乳腺癌C-erbB-2表达与预后意义的深入探讨

C-erbB-2亦称neu或p185,其结构类似EGFR,主要用于乳癌、卵巢癌、肠、胃、食道癌等,以往的研究中,有的学者认为,C-erbB-2过度表达与乳腺癌预后有关,即阳性者复发率高而生存期短.为了进一步明确C-erbB-2与乳腺癌预后的关系,我们应用免疫组化方法检测乳腺癌C-erbB-2蛋白、雌激素受体（ER）和孕激素受体（PR）表达情况,得出了不同结论.