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Changes of the expression of CCNL2 gene during the differentiation of P19 cells to cardiac myocytes
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作者 Zhiwen Jiang Lili Zhuo Jie Gong Rong Yang Yanhui Sheng Xiangqing Kong Kejiang Cao 《Journal of Nanjing Medical University》 2009年第4期275-278,共4页
Objective: To investigate the changes of cyclin L2(CCNL2) gene mRNA and protein during the differentiation of P19 cells to cardiac myocytes, and to explore the relationship between CCNL2 gene and the differentiatio... Objective: To investigate the changes of cyclin L2(CCNL2) gene mRNA and protein during the differentiation of P19 cells to cardiac myocytes, and to explore the relationship between CCNL2 gene and the differentiation of cardiac myocytes. Methods: P19 cells were cultured with 0.9% DMSO for 18 days. Western blots of cardiac troponin I (cTnI) were used to identify cell differentiation. Total RNA was extracted from P19 cells during the process of differentiation at various time points:pre-differentiation(Day 0), and Day 1 to Day 18. The expression levels of CCNL2 gene mRNA and protein were evaluated by RT-PCR and Western blot, respectively. Results: After being induced to differentiate by DMSO for 4 days in suspension, spontaneously and rhythmically beating ceils were seen at 8 day, which were cTnI-positive. In P19 cells, both the expression level of CCNL2 gene mRNA and protein were gradually down-regulated. Conclusion: Both the expression of CCNL2 gene and protein were down-regulated during the process of the differentiation of P19 cells into cardiac myocytes, suggesting a possible role for this cyclin in their differentiation. 展开更多
关键词 cyclin L2 protein gene p19 cells cell differentiation
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外源表达Nkx2-5基因诱导P19细胞向心肌分化 被引量:7
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作者 张金平 张雷 +4 位作者 王惠娟 王多 赵昱 尹青 赵春芳 《解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期725-729,共5页
目的:构建人Nkx2-5基因融合绿色荧光蛋白真核表达质粒pEGFP-N1-Nkx2-5,探讨外源性Nkx2-5基因诱导P19细胞向心肌分化的作用。方法:以真核表达质粒pEFSA-HA-Nkx2-5为模板,PCR扩增得到人Nkx2-5基因,将目的片段亚克隆到pEGFP-N1载体,鉴定正... 目的:构建人Nkx2-5基因融合绿色荧光蛋白真核表达质粒pEGFP-N1-Nkx2-5,探讨外源性Nkx2-5基因诱导P19细胞向心肌分化的作用。方法:以真核表达质粒pEFSA-HA-Nkx2-5为模板,PCR扩增得到人Nkx2-5基因,将目的片段亚克隆到pEGFP-N1载体,鉴定正确。将重组质粒pEGFP-N1-Nkx2-5以脂质体法转染P19细胞,G418筛选2周,聚集4d,贴壁培养16d。以免疫细胞化学检测desmin、α-sarcomeric actin和cardiac Troponin T(cTnT)的表达。结果:将Nkx2-5基因正确插入pEGFP-N1载体,外源表达Nkx2-5基因可使P19细胞在无诱导剂、聚集条件下表达desmin、α-sarcomeric actin和cTnT蛋白。结论:成功构建真核表达质粒pEGFP-N1-Nkx2-5,外源表达Nkx2-5基因诱导P19细胞向心肌分化。 展开更多
关键词 NKX2-5 质粒构建 p19细胞 基因转染 心肌分化
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苏云金芽孢杆菌分子伴侣串联基因p19-p29的克隆和表达载体的构建 被引量:5
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作者 余健秀 曾少灵 +2 位作者 谢瑞瑜 蒙国基 庞义 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期567-572,共6页
根据已知序列设计一对PCR引物 (ORF 5S ,ORF 3N) ,可从cry2Aa或cry2Ac操纵子中扩增出包含串联分子伴侣基因p1 9 p2 9的DNA片段 ,预期大小分别为 1 6kb和 2 0kb。对 1 5 0株苏云金芽孢杆菌菌株进行PCR检测 ,从 2 6株中获得了大小为 1 ... 根据已知序列设计一对PCR引物 (ORF 5S ,ORF 3N) ,可从cry2Aa或cry2Ac操纵子中扩增出包含串联分子伴侣基因p1 9 p2 9的DNA片段 ,预期大小分别为 1 6kb和 2 0kb。对 1 5 0株苏云金芽孢杆菌菌株进行PCR检测 ,从 2 6株中获得了大小为 1 6kb的扩增片段 ,但未获得2 0kb的片段。这表明cry2Aa型操纵子p1 9 p2 9基因存在较广泛 ,而cry2Ac型较罕见。将来自Y2 菌株的 1 6kb片段回收 ,通过一系列亚克隆 ,最终构建成一个含有p1 9 p2 9串联基因的Bt表达载体 ,为进一步研究p1 9 p2 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌 分子伴侣 串联基因 p19-p29 克隆 表达载体
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苏云金芽孢杆菌以色列亚种P19基因的初步研究 被引量:2
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作者 刘子铎 孙明 +3 位作者 喻子牛 ZaritskyA Ben-DovE ManasherobR 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第2期114-119,共6页
以含有P19和cyt1A基因的以色列亚种72MD质粒的97kbHindⅢ片段为模板进行PCR扩增,分别获得P19基因和cyt1A基因片段。与表达载体pUHE24连接转化大肠杆菌XL1,获得3个克隆株。LZ19含有... 以含有P19和cyt1A基因的以色列亚种72MD质粒的97kbHindⅢ片段为模板进行PCR扩增,分别获得P19基因和cyt1A基因片段。与表达载体pUHE24连接转化大肠杆菌XL1,获得3个克隆株。LZ19含有P19基因;pLZcyt1A含有cyt1A基因;LZ19A含有P19和cyt1A两个基因。利用cyt1A蛋白质可使大肠杆菌细胞致死的特性,在IPTG诱导下,测定了各克隆基因表达对大肠杆菌有致死作用;pLZ19A对大肠杆菌的起始致死作用明显快于pLZcyt1A,这种现象可能是P19基因促进cyt1A基因高表达的结果。 展开更多
关键词 苏云金牙孢杆菌以色列亚种 p19基因 cyt1A基因
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Nkx2-5基因诱导P19细胞分化中心肌标志物的表达 被引量:5
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作者 张金平 王慧娟 +5 位作者 史玉兰 王立轩 赵昱 郭艳红 赵春芳 张雷 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期2658-2662,共5页
目的研究同源框基因Nkx2-5在心肌发生中的作用。方法实验分转染组和未转染组,转染组细胞为稳定表达Nkx2-5的P19细胞,未转染组细胞为P19细胞。两组细胞悬浮培养4d,形成聚集体后贴壁培养,于贴壁培养的4、8、12、16d,免疫细胞化学检测α横... 目的研究同源框基因Nkx2-5在心肌发生中的作用。方法实验分转染组和未转染组,转染组细胞为稳定表达Nkx2-5的P19细胞,未转染组细胞为P19细胞。两组细胞悬浮培养4d,形成聚集体后贴壁培养,于贴壁培养的4、8、12、16d,免疫细胞化学检测α横纹肌肌动蛋白(α-sarcomeric actin,α-SA)和心肌肌钙蛋白T(cardiac troponin T,cTnT)的表达;RT-PCR检测GATA-4、α-肌球蛋白重链(α-myosin heavy chain,α-MHC)、心房利钠因子(atrial natriuretic factor,ANF)基因的表达。结果转染组α-SA和cTnT两种蛋白在聚集体贴壁的8、12、16d出现表达,表达量有增高趋势;16d与8d比有显著差异(P<0.01);RT-PCR结果显示:转染组GATA-4在贴壁培养的4d有表达,8、12d表达逐渐增多,16d时表达有所下降。α-MHC和ANF在贴壁培养的8d有表达,12d和16d时表达逐渐增多。统计结果表明GATA-4在8、12、16d的表达量与4d比有显著差异(P<0.05或P<0.01),α-MHC在12、16d的表达量与8d比有显著差异(P<0.05,P<0.01),ANF在16d的表达量与8d比有显著差异(P<0.01),16d表达量与12d比也有显著差异(P<0.01);未转染组结果均为阴性。结论外源表达Nkx2-5基因可诱导P19细胞逐渐表达心肌标志物。 展开更多
关键词 同源框基因 NKX2-5 p19细胞 心肌标志物
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多氯联苯对P19细胞向心肌分化进程的影响 被引量:2
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作者 王瑛 朱春 +5 位作者 余章斌 王薛洁 潘亚 彭宇竹 郭锡熔 韩树萍 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期638-641,共4页
目的探讨多氯联苯对P19细胞向心肌分化进程的影响。方法在P19细胞向心肌细胞分化的培养液中加入多氯联苯(Aroclor 1254)2.5μmol/L,同时设立阴性对照组。显微镜下连续观察P19细胞形态的变化,并采用实时荧光定量RT-PCR技术对分化过程的第... 目的探讨多氯联苯对P19细胞向心肌分化进程的影响。方法在P19细胞向心肌细胞分化的培养液中加入多氯联苯(Aroclor 1254)2.5μmol/L,同时设立阴性对照组。显微镜下连续观察P19细胞形态的变化,并采用实时荧光定量RT-PCR技术对分化过程的第0、4、10天中GATA4及Nkx2.5基因mRNA的表达水平进行检测。结果在分化全程(0~10天),实验组与对照组无细胞形态上的差别;而GATA4、Nkx2.5基因的表达量除在分化开始前(第0天)差异无统计学意义外,在分化中期(第4天)及末期(第10天),实验组中GATA4、Nkx2.5基因的相对表达量均显著低于对照组。结论多氯联苯可通过对早期心脏发育相关重要基因的表达影响心肌分化进程。 展开更多
关键词 多氯联苯 p19细胞 GATA4基因 NKX2.5基因 心肌分化
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P19细胞向心肌细胞分化过程中ZNF207基因的表达变化 被引量:2
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作者 卓莉莉 龚杰 +4 位作者 周蕾 盛燕辉 杨荣 孔祥清 曹克将 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期781-784,F0002,共5页
目的:观察锌指蛋白207基因(ZNF207)在P19细胞向心肌细胞诱导分化过程中表达水平的变化,探讨ZNF207基因与心肌细胞分化之间可能的关系。方法:体外培养P19细胞,应用0.9%二甲基亚砜(DMSO)诱导其向心肌细胞分化,采用RT-PCR技术在细胞分化成... 目的:观察锌指蛋白207基因(ZNF207)在P19细胞向心肌细胞诱导分化过程中表达水平的变化,探讨ZNF207基因与心肌细胞分化之间可能的关系。方法:体外培养P19细胞,应用0.9%二甲基亚砜(DMSO)诱导其向心肌细胞分化,采用RT-PCR技术在细胞分化成熟的不同时段检测P19细胞中ZNF207基因mRNA表达水平。结果:ZNF207基因在P19细胞向心肌细胞分化的过程中均有表达,随细胞分化成熟,该基因表达水平逐渐升高。经统计学分析发现,在分化第0~2天该基因表达无差异;第2~10天表达持续性增高,各时间点之间均有差异,差异均有统计学意义(P<0.05);第10~17天该基因稳定高表达,各时间点之间无差异。结论:ZNF207基因在P19细胞向心肌细胞分化过程中表达逐渐上调,可能有利于心肌细胞的分化和发育。 展开更多
关键词 ZNF207基因 p19细胞 细胞分化
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hhlim促进DMSO诱导的P19细胞向心肌分化 被引量:4
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作者 郑斌 温进坤 +1 位作者 韩梅 周爱儒 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第6期506-511,共6页
为了确定hhlim是否参与胚胎期的心肌分化和发育过程 ,用可表达hhlim蛋白和hhlim反义RNA的真核表达质粒转染P19胚胎干细胞 ,经G4 18筛选得到稳定表达hhlim和hhlim反义RNA的P19细胞克隆后 ,观察hhlim对P19细胞向心肌分化和发育的影响 .结... 为了确定hhlim是否参与胚胎期的心肌分化和发育过程 ,用可表达hhlim蛋白和hhlim反义RNA的真核表达质粒转染P19胚胎干细胞 ,经G4 18筛选得到稳定表达hhlim和hhlim反义RNA的P19细胞克隆后 ,观察hhlim对P19细胞向心肌分化和发育的影响 .结果显示 ,Nkx2 5和GATA 4在未被外源性hhlim基因转染的P19细胞中不表达 .DMSO刺激细胞 2天后 ,GATA 4开始表达 ,3天后Nkx2 5的表达活性显著升高 .hhlim的过表达不但有利于P19细胞的存活和生长 ,而且还可以使Nkx2 5和GATA 4的表达比对照细胞提前 1天 .反义hhlim细胞株被DMSO诱导 5天后 ,细胞仍呈集落化生长 .同时 ,Nkx2 5和GATA 4开始表达的时间明显延滞 .结果表明 ,hhlim能促进P19细胞向心肌细胞分化 ,其作用是通过促进转录因子GATA 4和Nkx2 展开更多
关键词 hhlim基因 心肌细胞 转录因子 p19细胞 分化
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禽白血病病毒p19基因末端片段在大肠杆菌中的表达
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作者 刘公平 赵振芬 刘福安 《中国病毒学》 CAS CSCD 2001年第1期78-80,共3页
根据禽白血病病毒 (ALV) p19基因末端序列合成一条 82bp的双链DNA片段 ,将其克隆到表达质粒pGE MEX 1中 ,序列分析结果与设计的相符。重组表达质粒转化的大肠杆菌BL2 1(DE3)经IPTG诱导后产生 34kD融合表达产物 ,与理论值相符 ;Western
关键词 禽白血病病毒 p19基因 克隆 原核表达
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NKX2-5诱导P19细胞向心肌分化的研究
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作者 张金平 郝军 +5 位作者 王慧娟 邵素霞 王多 郭燕红 赵春芳 张雷 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期197-200,共4页
目的探索NKX2-5在心肌分化中的作用和机制。方法实验分转染组和未转染组,转染组为稳定表达NKX2-5的P19细胞,未转染组为P19细胞。两组细胞悬浮培养4d,形成聚集体后贴壁培养,于贴壁培养的4d、8d、12d、16d,免疫荧光双标和Western blot检... 目的探索NKX2-5在心肌分化中的作用和机制。方法实验分转染组和未转染组,转染组为稳定表达NKX2-5的P19细胞,未转染组为P19细胞。两组细胞悬浮培养4d,形成聚集体后贴壁培养,于贴壁培养的4d、8d、12d、16d,免疫荧光双标和Western blot检测横纹肌α肌动蛋白(α-SA)和心肌肌钙蛋白T(cTnT)的表达;取贴壁培养16d的细胞透射电镜观察细胞超微结构变化。结果转染组α-SA和cTnT两种蛋白在聚集体贴壁4d时没有表达,8d、12d、16d出现表达和共表达。转染组部分细胞出现幼稚的细胞连接和肌丝样结构;未转染组没有发现两种蛋白的表达,电镜观察未发现分化的细胞。结论稳定表达NKX2-5基因的P19细胞可向心肌分化,但不适于作为心脏发育的体外模型。 展开更多
关键词 同源盒基因 NKX2-5基因 p19细胞 心肌分化
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pEGFP-N2-BMP2转染诱导P19细胞分化为心肌样细胞
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作者 王慧娟 张雷 +5 位作者 张金平 李莉 赵静 李航 赵昱 赵春芳 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期367-373,共7页
目的探讨真核表达质粒pEGFP-N2-BMP2转染P19细胞后能否诱导其分化为心肌样细胞。方法实验分转染组和对照组,转染组以真核表达质粒pEGFP-N2-BMP2转染P19细胞并使骨形态发生蛋白2(BMP2)基因稳定表达,然后结合细胞聚集培养,对照组为培养的... 目的探讨真核表达质粒pEGFP-N2-BMP2转染P19细胞后能否诱导其分化为心肌样细胞。方法实验分转染组和对照组,转染组以真核表达质粒pEGFP-N2-BMP2转染P19细胞并使骨形态发生蛋白2(BMP2)基因稳定表达,然后结合细胞聚集培养,对照组为培养的P19细胞。两组细胞聚集培养4d,形成聚集体后贴壁培养,于贴壁培养的4d、8d、12d、16d,免疫细胞化学和Western blotting方法检测心肌标志物心肌肌钙蛋白T(cTnT)和心肌肌动蛋白α;半定量RT-PCR检测心脏早期转录因子GATA-4和NKx2.5基因的表达。结果转染组心肌肌钙蛋白T和心肌肌动蛋白α两种蛋白形成聚集体贴壁4d时无表达,8d、12d、16d出现表达,其表达随时间延长逐渐增强。取材各时间点之间有显著差异(P<0.01)。在转染诱导后4d时GATA-4、NKx2.5两个基因即出现弱的表达,随着时间延长,8d、12d、16d两个基因的表达逐渐增强。取材各时间点之间有显著差异(P<0.01)。对照组未发现心肌肌钙蛋白T和心肌肌动蛋白α两种蛋白的表达,亦未发现GATA-4、NKx2.5两个基因的表达。结论稳定表达BMP2基因的P19细胞可以分化为心肌样细胞,BMP2可能通过调控转录因子GATA-4、NKx2.5进而影响心肌肌钙蛋白T和心肌肌动蛋白α的表达。 展开更多
关键词 pEGFP-N2-BMP2 基因转染 p19细胞 心肌细胞 免疫组织化学
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Relation of cytochrome P450 2C19 gene 681G>A single nucleotide polynmrphism to clopidogrel resistance after PCI in Chinese
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作者 LIANG Zhen-yang,HAN Ya-ling,ZHANG Xiao-lin,YAN Cheng-hui (Department of Cardiology,Cardiovascular Institute of PLA, Shenyang Northern Hospital.Shenyang 110031,China) 《岭南心血管病杂志》 2011年第S1期155-155,共1页
Objectives Clopidogrel is a prodrug that has to be converted to an active metabolite by hepatic cytochrome P450(CYP) isoenzymes to inhibit platelet aggregation.Individualvariability of platelet inhibition by clopidogr... Objectives Clopidogrel is a prodrug that has to be converted to an active metabolite by hepatic cytochrome P450(CYP) isoenzymes to inhibit platelet aggregation.Individualvariability of platelet inhibition by clopidogrel suggests a possibility for genetic factors having a significant influence on clopidogrel responsiveness.In this study,we sought to determine the association between the single nucleotide polymorphism of CYP 2C19 681G】A and the occurrence of clopidogrel resistance(CR) in Chinese.Methods The study enrolled 614 hospitalized patients who underwentsuccessful percutaneouscoronary intervention with drug-eluting stents were received the treatmentwith dual antiplatelet regimen(aspirin plus clopidogrel).All patients received loading doses of 600 mg clopidogrel and 300 mg aspirin.20μmol/L ADP-induced platelet aggregation ratio(PAR ) was assessed 24 h after clopi- dogrel administration.The maximum residual PAR≥70%was defined as CR.Genomic DNA was extracted from whole blood samples according to standard protocols,the single nucleotide polymorphism of the CYP2C19 681G】A was genotyped by polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) in all the patients.Results CR was found in 126 patients(20.5%).There was CYP2C19 681G】A polymorphism in the study population.The frequencies of the three kinds of genotypes(GG,GA,A A) in CR group and non-CR (NCR)group were 32.5%,47.6%,19.8%and 48.0%, 45.0%,7.0%,respectively.The frequency of AA genotype was significantly higher in NCR group than that in CR group (OR =3.03,95%CI:1.889~5.784,P=0.003).The A allele carriers were more likely to develop clopidogrel resistance compared with that of G allele carriers(OR=1.85,95%CI: 1.392~2.459,P=0.002).Conclusions CYP2C19 681G/A polymorphism is associated with the risk of CR,and the A allele carriers may be a possible genetic susceptibility factor for patients with CR. 展开更多
关键词 PCI Relation of cytochrome P450 2C19 gene 681G>A single nucleotide polynmrphism to clopidogrel resistance after PCI in Chinese gene
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苏云金芽孢杆菌的cry2A芽孢期启动子和分子伴侣ORF1-ORF2对Cry11Aa蛋白表达的影响 被引量:1
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作者 师永霞 曾少灵 +2 位作者 袁美妗 孙钒 庞义 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期672-676,共5页
【目的】分析苏云金芽孢杆菌的cry2A型芽孢期启动子对晶体蛋白Cry11Aa的协调作用和分子伴侣ORF1-ORF2对Cry11Aa表达的促进功能。【方法】3个包括cry11Aa编码区的重组质粒pHcy1、pHcy2和pHcy4被构建并电激转化到苏云金芽孢杆菌晶体缺陷株... 【目的】分析苏云金芽孢杆菌的cry2A型芽孢期启动子对晶体蛋白Cry11Aa的协调作用和分子伴侣ORF1-ORF2对Cry11Aa表达的促进功能。【方法】3个包括cry11Aa编码区的重组质粒pHcy1、pHcy2和pHcy4被构建并电激转化到苏云金芽孢杆菌晶体缺陷株4Q7中,其中pHcy1质粒携带cry11Aa基因自身启动子和分子伴侣p19基因,pHcy2携带cry2A型芽孢期启动子和分子伴侣orf1-orf2基因,pHcy4质粒在pHcy1的上游插入了cry2A型芽孢期启动子和分子伴侣orf1-orf2基因。SDS-PAGE分析了Cry11Aa蛋白在各重组苏云金菌株中的表达情况,并通过生物测定确定了其对蚊虫的生物活性。【结果】SDS-PAGE结果表明,Cry11Aa蛋白在4Q7(pHcy1)和4Q7(pHcy4)均获得了表达,在4Q7(pHcy2)中未检测到Cry11Aa蛋白,推测晶体蛋白Cry11A不能利用cry2A型启动子进行表达调控;Cry11Aa蛋白在等体积4Q7(pHcy4)培养液中的表达量是4Q7(pHcy1)菌株的1.25倍,暗示着分子伴侣ORF1-ORF2在某种程度上能提高Cry11Aa的蛋白表达量。4Q7(pHcy1)和4Q7(pHcy4)形成的Cry11Aa蛋白晶体的形状和大小相似,两者对致倦库蚊的生物活性没有明显差异,LC50s分别为59.33ng/mL和66.21ng/mL。【结论】推测晶体蛋白Cry11A能否成功表达与其使用启动子的类型和两者的协调配合有关。分子伴侣ORF1-ORF2虽然在某种程度上能提高Cry11Aa的蛋白表达量,但对提高Cry11Aa蛋白的杀蚊毒力没有显著性帮助。 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌 分子伴侣 p19基因 orf1-off2基因 晶体蛋白Cry11Aa
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表没食子儿茶素没食子酸酯促进急性髓系白血病细胞凋亡的机制 被引量:2
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作者 吴明彩 蒋明 +5 位作者 薛梦雅 李青 程彬 黄梦珠 徐蕾 章尧 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期1230-1238,共9页
目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)诱导CHD5基因去甲基化促进KG-1、THP-1细胞凋亡的相关机制。方法设实验组及正常对照组,实验组:不同浓度(25、50、75、100、150μg/mL)EGCG处理作用于KG-1、THP-1细胞,正常对照组:不加EGCG处理。... 目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)诱导CHD5基因去甲基化促进KG-1、THP-1细胞凋亡的相关机制。方法设实验组及正常对照组,实验组:不同浓度(25、50、75、100、150μg/mL)EGCG处理作用于KG-1、THP-1细胞,正常对照组:不加EGCG处理。MSP法检测KG-1、THP-1细胞CHD5基因甲基化;MTT法检测作用48 h后细胞增殖;流式细胞术检测作用48 h后细胞周期和细胞凋亡状况;RT-qPCR、Western blot检测DNMT1、CHD5、p19^Arf、p53、p21^Cip1基因和蛋白表达。结果EGCG呈现剂量依赖性逆转了KG-1、THP-1细胞CHD5基因高甲基化;EGCG以剂量依赖性的方式抑制KG-1、THP-1细胞增殖(P<0.05);EGCG诱导细胞周期停滞于G1期,促进细胞凋亡;EGCG以剂量依赖性的方式下调DNMT1的mRNA和蛋白表达,上调CHD5、p19^Arf、p53、p21^Cip1的mRNA和蛋白表达(P<0.05)。结论EGCG可通过下调DNMT1降低KG-1、THP-1细胞CHD5基因高甲基化,恢复CHD5基因表达,从而上调p19^Arf、p53、p21^Cip1表达诱发细胞凋亡。 展开更多
关键词 表没食子儿茶素没食子酸 CHD5基因 甲基化 p19^Arf-p53-p21^Cip1信号通路 急性髓系白血病
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Lrrc10在体外心肌发生过程中的表达研究
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作者 李晓霞 陈祥贵 +2 位作者 戴清源 杨潇 王布强 《四川动物》 CSCD 北大核心 2009年第2期175-177,共3页
Lrrc10是一心脏特异新基因。为探讨Lrrc10在心肌细胞分化过程中的表达,采用DMSO诱导P19细胞分化,建立体外心肌发生模型,显微镜观察细胞形态变化,以心α-MHC和β-MHC作为心肌分化的标志,RT-PCR检测分化过程中各基因的表达。结果表明,P19... Lrrc10是一心脏特异新基因。为探讨Lrrc10在心肌细胞分化过程中的表达,采用DMSO诱导P19细胞分化,建立体外心肌发生模型,显微镜观察细胞形态变化,以心α-MHC和β-MHC作为心肌分化的标志,RT-PCR检测分化过程中各基因的表达。结果表明,P19细胞经诱导后形态发生明显变化;α-MHC在诱导分化6d时开始表达,β-MHC在诱导分化8d时开始表达,表明心肌分化成功。而Lrrc10在诱导分化2d时就开始表达,提示其功能可能与心肌分化有关。 展开更多
关键词 Lrrc10 基因表达 p19细胞 体外心肌分化
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五味子乙素对D-半乳糖致衰老小鼠学习记忆能力的改善作用 被引量:5
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作者 刘聪 孙伟静 +7 位作者 李宁 高佳琪 于泽鹏 敬舒 王春梅 孙靖辉 陈建光 李贺 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2018年第19期201-206,共6页
目的:观察五味子乙素(schisandrin B,SCB)对D-半乳糖致衰老小鼠学习记忆能力的改善作用。方法:ICR小鼠随机分为4组,即正常对照组(灌胃蒸馏水,皮下注射生理盐水)、衰老模型组(灌胃蒸馏水,皮下注射220mg/kg D-半乳糖)、SCB(M)组(灌胃20mg/... 目的:观察五味子乙素(schisandrin B,SCB)对D-半乳糖致衰老小鼠学习记忆能力的改善作用。方法:ICR小鼠随机分为4组,即正常对照组(灌胃蒸馏水,皮下注射生理盐水)、衰老模型组(灌胃蒸馏水,皮下注射220mg/kg D-半乳糖)、SCB(M)组(灌胃20mg/kg?SCB,皮下注射D-半乳糖220mg/kg)、SCB(C)组(灌胃20mg/kg?SCB,皮下注射生理盐水),连续给药7周。通过避暗实验及Morris水迷宫实验观察SCB对小鼠学习记忆能力的影响;通过WST-1法检测小鼠脑组织中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力;通过硫代巴比妥酸法检测小鼠脑组织中丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量;通过实时定量聚合酶链式反应及Western?blot法,检测小鼠脑组织中p19、p53、p21基因表达情况。结果:SCB能够明显改善D-半乳糖诱导的脑衰老小鼠的学习记忆能力,提高脑衰老小鼠脑组织中SOD活力,降低MDA水平,明显降低脑组织中的p19、p53、p21基因的表达水平。结论:SCB能够改善D-半乳糖诱导的小鼠脑衰老,该作用可能与其提高小鼠抗氧化能力及下调小鼠脑组织中p19、p53、p21基因表达水平有关。 展开更多
关键词 五味子乙素 改善老年记忆障碍 p19基因 p53基因 P21基因
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小鼠NOMO1基因RNA干扰载体的构建及其功能的初步研究 被引量:2
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作者 沈震 陈欢欢 +3 位作者 张浩 盛燕辉 杨荣 孔祥清 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期1661-1665,共5页
目的:构建小鼠NOMO1基因RNA干扰载体,比较其对P19细胞NOMO1基因的抑制效率,以研究NOMO1基因与P19细胞向心肌细胞方向分化的关系。方法:利用Designer3.0软件设计小鼠NOMO1基因干扰片段,合成shRNA序列,再行寡核苷酸双链的合成,退火后形成... 目的:构建小鼠NOMO1基因RNA干扰载体,比较其对P19细胞NOMO1基因的抑制效率,以研究NOMO1基因与P19细胞向心肌细胞方向分化的关系。方法:利用Designer3.0软件设计小鼠NOMO1基因干扰片段,合成shRNA序列,再行寡核苷酸双链的合成,退火后形成的寡核苷酸双链克隆到pGPU6/Hygro载体的黏性末端,连接产物转化到感受态细胞,增菌,质粒扩增,质粒DNA抽提,使用PstⅠ、BamHⅠ进行双酶切和DNA测序鉴定重组克隆。将小鼠NOMO1基因RNA干扰载体转染P19细胞,以RT-PCR技术验证NOMO1基因在P19细胞中的mRNA表达。以DMSO诱导分化方案诱导P19细胞向心肌细胞分化,采用定量RT-PCR技术检测P19细胞中α-MHC等基因mRNA的表达,评估NOMO1与P19干细胞向心肌细胞方向分化的关系。结果:双酶切证实shRNA正确插入质粒,测序结果表明插入的序列正确。载体转染的P19细胞筛选稳定表达株,经RT-PCR和Western blot验证4个位点设计的干扰质粒对NOMO1在P19细胞中的mRNA表达均具有较高的抑制效率。转染后P19细胞的α-MHC基因mRNA表达则显著下调(P<0.05)。结论:成功构建小鼠NOMO1基因RNA干扰载体,为研究NOMO1基因与P19细胞向心肌细胞方向分化的关系提供了稳定的转染细胞工具,NOMO1可能通过诱导α-MHC等基因表达,促进P19干细胞向中胚层的分化。 展开更多
关键词 先天性心脏病 NOMO1基因 RNA干扰 RNA干扰载体 p19细胞
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农杆菌介导的pCB302-3载体在本氏烟中瞬时表达条件优化 被引量:11
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作者 孙春莲 王洪洋 田振东 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期8-12,共5页
以GFP为报告基因构建植物表达载体pCB302-3-GFP,采用农杆菌叶片注射法对其在本氏烟叶片中瞬时表达条件进行优化。分析基因沉默抑制子p19、菌液不同浓度以及侵染时间对GFP荧光强度的影响,结果显示,当农杆菌菌液D600为0.8-1.0并与含有p19... 以GFP为报告基因构建植物表达载体pCB302-3-GFP,采用农杆菌叶片注射法对其在本氏烟叶片中瞬时表达条件进行优化。分析基因沉默抑制子p19、菌液不同浓度以及侵染时间对GFP荧光强度的影响,结果显示,当农杆菌菌液D600为0.8-1.0并与含有p19基因的载体共注射条件下,农杆菌注射3-5d后本氏烟草叶片表现出很强的绿色荧光,实现了GFP在本氏烟草中的高效瞬时表达。 展开更多
关键词 pCB302-3载体 瞬时表达优化 农杆菌叶片注射 本氏烟 基因沉默抑制子p19 GFP
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P19细胞分化过程中激活型bHLH基因的表达
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作者 王冲 安丽莎 马旭 《山东大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2009年第10期19-22,共4页
目的检测P19细胞分化过程中激活型碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)转录调控因子mRNA的表达,探讨其神经分化机制。方法用维甲酸(RA)诱导P19细胞分化,通过反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测P19分化前以及分化后2、4d时果蝇As-c的哺乳动物类似物(Mash... 目的检测P19细胞分化过程中激活型碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)转录调控因子mRNA的表达,探讨其神经分化机制。方法用维甲酸(RA)诱导P19细胞分化,通过反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测P19分化前以及分化后2、4d时果蝇As-c的哺乳动物类似物(Mash-1)、果蝇atonal的哺乳动物类似物(Math-1)、Neurological stem celll eukemia-2(Nscl-2)mRNA的表达。采用免疫印迹方法(Western blot)检测Mash-1蛋白的表达。结果Mash-1mRNA和Nscl-2mRNA随分化表达升高,在分化后2d到达顶峰后下降,Math-1mRNA在分化后期表达明显。Mash-1蛋白的表达与mRNA的表达一致。结论P19细胞分化过程中bHLH转录因子mRNA的表达具有明显的时相性,为解释神经细胞分化调控机制提供实验基础。 展开更多
关键词 p19细胞 维甲酸 分化 bHLH转录因子
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INK4系列抑癌基因在白血病中纯合子缺失的实验研究
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作者 郑瑞玑 沈松菲 +1 位作者 沈建箴 马旭东 《白血病.淋巴瘤》 CAS 2004年第5期280-282,共3页
目的:探讨p16基因家族失活与白血病发生、发展及预后的关系。方法:PCR检测p16、p15、p18、p19 基因在白血病中纯合子缺失。结果:p16、p15 基因外显子1在AL组纯合子缺失率分别为22.37 %、17.05 %,在ALL组为45.95 %、32.43 %,在ANLL组均为... 目的:探讨p16基因家族失活与白血病发生、发展及预后的关系。方法:PCR检测p16、p15、p18、p19 基因在白血病中纯合子缺失。结果:p16、p15 基因外显子1在AL组纯合子缺失率分别为22.37 %、17.05 %,在ALL组为45.95 %、32.43 %,在ANLL组均为5.88 %;在CML的慢性期均为0。p16、p15基因外显子2在AL组纯合子缺失率分别为12.5 %、5.68 %;在ALL组为24.32 % 、10.81 %;在ANLL组为3.92 %、1.96 %;在CML和对照组二者均无缺失。p18、p19 基因外显子1在AL组纯合子缺失率分别为1.14 %、0;在ALL组分别为2.70 %、0;在ANLL和对照组均无缺失。结论:p16、p15基因纯合子缺失在AL的发生频率较高,ALL缺失率明显高于ANLL,复发ALL组基因失活率最高。p16、p15基因纯合子缺失是AL,尤其是ALL的发病重要因素之一。p18、p19基因在AL组中几乎未见纯合子缺失。在ALL中,p16纯合子缺失率高于p15纯合子缺失率。两个基因的纯合子缺失常伴随存在。在ANLL中,p16、p15基因的纯合子缺失均少见。 展开更多
关键词 白血病 基因 p16 P15 P18 p19 纯合子缺失
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