p15^(INK4B)和p21^(WAF1)基因联合转染对人食管鳞癌细胞系EC109的协同抑制作用

目的:探讨p15INK4B(p15)和p21WAF1(p21)基因联合转染对人食管鳞癌细胞系EC109细胞增殖和凋亡的影响.方法:脂质体介导pcDNA3.1(+)-p15和pcDNA3.1(+)-p21转染EC109细胞,稳定筛选后用RT-PCR检测转染细胞p15与p21基因mRNA表达,Western blot检测转染细胞P15和P21蛋白的表达.用MTT法和透射电镜检测p15和p21基因分别及联合转染对EC109细胞增殖与凋亡的影响,流式细胞仪检测EC109细胞周期分布与凋亡率.结果:p15和p21转染组EC109细胞生长速度低于空载体组与未转染组,联合转染组与二者单独转染组相比,亦明显抑制EC109细胞体外生长速度.p15和p21转染组EC109细胞发生G1/S阻滞,G1期细胞比例显著高于空载体组和未转染组,S期则显著降低(G1期:60.52%±3.75%,63.12%±2.89%vs42.17%±5.30%,41.38%±6.54%;S期:22.67%±1.25%,17.96%±2.03%vs30.96%±3.33%,36.05%±1.78%,均P<0.01),并出现凋亡峰,透射电镜亦发现p15和p21转染组发生细胞凋亡,联合转染组发生更为明显的G1/S阻滞,G1期比例显著升高、S期比例明显降低(G1期:72.83%±2.31%vs60.52%±3.75%,63.12%±2.89%;S期:13.59%±2.59%vs22.67%±1.25%,17.96%±2.03%,均P<0.05),凋亡率明显升高(21.21%±1.78%vs4.32±1.74%,10.83%±2.40%,均P<0.01).结论:p15和p21基因联合转染在体外可以进一步增强对人食管鳞癌EC109细胞的抑制与诱导凋亡作用.