重组屋尘螨变应原突变体的免疫原性与过敏原性研究

目的 构建屋尘螨Der p2变应原突变体的原核表达质粒,并在大肠杆菌中表达、纯化,以观察屋尘螨Der p2变应原突变体的免疫原性以及抗原性.方法 基因敲除屋尘螨Der p2变应原的部分氨基酸残基序列,将编码基因定向克隆到pET32a原核表达质粒中,转入BL21表达菌中并提纯;将18只Balb/c小鼠随机分为Der p2变应原突变体组、重组Der p2组和对照组.采用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定各组小鼠血清中IgE、IgG1与IgG2a抗体变化,用免疫斑点试验测定Der p2突变体的IgE结合能力.结果 成功构建了Der p2变应原突变体的原核表达质粒,表达并纯化了Der p2变应原突变体.腹腔免疫后0d,各组IgE、IgG1与IgG2a抗体表达无明显变化（P=0.067、P=0.052、P=0.078）;免疫后第7d,重组Der p2变应原组诱导IgE抗体的产生量高于Der p2变应原突变体组（P =0.002）,重组Der p2变应原组诱导的IgG2a抗体高于Der p2变应原突变体组（P=0.0056）;腹腔免疫后第14 d,重组Der p2变应原组IgE抗体的产生量高于Der p2变应原突变体组（P=0.001）,Der p2变应原突变体组IgG2a低于重组Der p2变应原组（P=0.0034）.Der p2变应原突变体与屋尘螨过敏患者的阳性血清结合明显较低.结论 Der p2变应原突变体能诱导小鼠产生IgG1抗体和IgG2a抗体,同时能明显减少IgE抗体的产生,并且Der p2变应原突变体具有较低的IgE结合能力.