屋尘螨抗原Derp2基因的克隆和表达

目的 构建并克隆屋尘螨抗原 Der p2基因 ,在大肠杆菌中初步表达 .方法 根据已发表的 Der p2基因 ,人工设计合成一系列基因片段 ,经单链扩增后连接成完整的 Der p2基因 ;将该基因克隆入表达载体 p Pro EX HTb中 ,测序并进行初步表达 .结果 利用所设计的结构制备了完整的 Der p2基因 ,以大肠杆菌为宿主在 IPTG的诱导下获得初步表达 ,该外源蛋白 Mr约为 17× 10 3,占总蛋白量的 2 0 % .结论 所构建的 Der

水稻草状矮缩病毒P2基因多克隆抗体的制备及应用

为了进行水稻草状矮缩病毒(Rice grassy stunt virus,RGSV)诊断方法和蛋白功能研究。通过RT-PCR方法从感染RGSV的水稻中克隆该病毒的P2基因,并将此基因片段重组到原核表达载体pDEST17上。将重组载体转化E.coli Rosetta,经IPTG诱导后获得分子量约为29kDa含HIS标签的融合蛋白。以诱导的融合蛋白为抗原,免疫新西兰大耳白兔获得多克隆抗体,经酶联免疫检测发现其效价达到l:8192。并用制备的抗体建立了特异、灵敏的检测RGSV的IC-RT-PCR和Dot-blot ELISA方法,为该病毒的检测、诊断提供了保障,同时也为P2蛋白的结构和功能研究奠定了基础。

地方土猪源副猪嗜血杆菌Omp P2基因的分子鉴定及遗传演化分析

为研究地方土猪源副猪嗜血杆菌（Hps）的分子遗传演化特性,应用PCR方法扩增淮南猪源河南分离株XY0501的Omp P2基因,并进行序列比较和遗传演化分析。结果显示,XY0501的Omp P2基因序列全长为1080bp,编码359 aa;与参考菌株的核苷酸序列同源性为96.7%~99.4%,与4型、5型和12型参考菌株的核苷酸序列同源性分别为96.9%~97.4%、96.7%~99.4%和97.1%~99.1%;基因进化树显示与血清5型参考菌株FJ685760亲缘关系最近,同源性高达99.4%。研究结果证明,该分离菌株属于血清5型;Hps可感染地方猪种并导致发病,但其来源则有待进一步研究;Omp P2基因在Hps国内优势流行血清型中高度保守,而且这种高保守性并无明显品种差异;不同地域的Hps分离菌株存在一定的遗传差异。

抗原肽运载体TAP2基因与乙型肝炎病毒感染预后的相关性研究（摘要）

目的研究上海地区中国人群抗原肽运载体（transporter associated with antigen processing，TAP）基因与HBV感染以及慢性HBV感染和慢性肝炎并发肝硬化之间的相关性。方法收集临床病例，检测乙型肝炎病毒标志，参照“病毒性肝炎防治方案-2000”，选取101例乙型肝炎病毒感染者，21例HBV感染康复者及113例正常对照，进行TAP2等位基因分型。对数据分组进行统计分析。结果慢性乙型肝炎组的TAP2＊0201基因频率显著低于感染恢复组（X^2=4．95，P〈0．03）；肝硬化组的TAP2＊0101基因频率显著高于正常对照组（X^2=5．72，P〈0．02）；在慢性乙型肝炎并发肝硬化组中DR4与TAP2＊0101等位基因间存在显著的连锁不平衡（△=0．026，P〈0．05）。结论TAP2＊0101等位基因型携带者易感慢性乙型肝炎和乙型肝炎并发肝硬化，而丁AP2＊0201则表现出对慢性乙型肝炎的抗性。两者均与HBV感染的预后似有一定相关。

过表达P57KIP2基因对滋养层细胞生物学行为的影响

目的:探究P57KIP2基因过表达之后对滋养层细胞生物学行为的影响。方法:采用实时荧光定量(q PCR)及Western Blot方法检测人绒毛膜滋养层细胞(HTR8-/SVneo)过表达P57KIP2基因后mRNA和蛋白水平的表达变化;用Transwell方法检测HTR8-/SVneo细胞过表达P57KIP2基因后迁移、侵袭能力生物学行为的变化;CCK8检测HTR8-/SVneo细胞过表达该基因后增殖能力的变化。采用免疫荧光检测HTR8-/SVneo细胞过表达该基因后,抗凋亡蛋白Bcl2的表达变化。结果:滋养层细胞过表达P57KIP2基因后,其mRNA及蛋白水平均明显增高(P<0.05);P57KIP2基因过表达后滋养层细胞的迁移、侵袭数量均明显增高,差异有统计学意义(P<0.05);滋养层细胞的细胞相对吸光值48小时后明显增高(P<0.001);过表达P57KIP2基因后滋养层细胞中抗凋亡蛋白Bcl2表达增高(P<0.05)。结论:P57KIP2基因可能会增加滋养层细胞迁移、侵袭以及增殖能力,P57KIP2基因可能参与调控滋养细胞的凋亡过程。

抑制wwp2基因可控制癌细胞转移

英国一项最新研究发现,一个促使癌细胞扩散的＂帮凶＂基因,如果用药物抑制这个基因的作用,癌细胞将不易扩散。研究人员称,这一发现将有助于提高癌症治疗水平。

芍药苷调节丝氨酸/苏氨酸激酶/鼠双微基因2/p53信号通路对弥漫大B细胞淋巴瘤细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响实验研究

目的:探讨芍药苷(PAE)调节丝氨酸/苏氨酸激酶(AKT)/鼠双微基因2(MDM2)/p53信号通路对弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法:以OCI-LY3细胞为研究对象,分别设置PAE低浓度组(15μmol/L PAE)、PAE中浓度组(30μmol/L PAE)、PAE高浓度组(60μmol/L PAE)、PAE高浓度+SC79(AKT激活剂)组(60μmol/L PAE+8μg/ml SC79),同时以未经处理的细胞为对照组。48 h后,分析细胞增殖、克隆形成能力及细胞周期和凋亡变化,检测AKT/MDM2/p53信号通路相关蛋白的表达水平。结果:与对照组比较,PAE低浓度组、PAE中浓度组、PAE高浓度组细胞凋亡率、p53表达、G_(0)/G_(1)期增加,细胞克隆形成数和细胞增殖率,p-AKT/AKT和p-MDM2/MDM2表达水平,以及G_(2)/M、S期降低(均P<0.05)。与PAE高浓度组比较,PAE高浓度+SC79组细胞凋亡率、p53表达、G_(0)/G_(1)期降低,细胞克隆形成数和细胞增殖率,p-AKT/AKT和p-MDM2/MDM2表达水平,以及G_(2)/M、S期增加(均P<0.05)。结论:PAE通过抑制AKT/MDM2上调p53表达,抑制DLBCL细胞增殖、细胞周期进展,诱导其凋亡。

副猪嗜血杆菌OMP P2基因的克隆与表达

利用已分离的菌株HB070412,根据NCBI上GenBank中的HPS序列(ZP_02477753)设计了1对引物,用PCR方法扩增了副猪嗜血杆菌外膜蛋白中的穿孔素前体蛋白P2基因(OMP P2),并克隆到载体pMD18-T(T-Vec-tor),序列测定结果表明OMP P2基因全长1 077bp,序列同源性分析表明该基因相当保守,与所报道的HPS OMPP2基因之间的核苷酸序列同源性为98.1%,氨基酸序列同源性为95.5%。用pGEX-6p-1构建了原核表达载体pGEX-P2,在大肠杆菌中进行了高效表达,表达蛋白约占菌体总蛋白的50%,主要为包涵体形式。SDS-PAGE电泳结果显示表达的融合蛋白约为65 000,Western blot结果表明该表达蛋白具有抗原性。

刚地弓形虫ROP2-P30复合基因在E.coliBL21中的表达和鉴定(英文)

目的获得编码弓形虫RH株棒状体蛋白2和主要表面抗原1重组复合蛋白为弓形虫病快速诊断试剂盒及蛋白质疫苗的研制作准备。方法用PCR技术从弓形虫基因组DNA中扩增出ROP2和P30基因片段,分别克隆入pMD18T载体,并对重组入外源基因的质粒通过PCR.,双酶切和测序鉴定,将pMD ROP2中的ROP2基因片段经EcoRⅠ和HindⅢ酶切,连接等反应,亚克隆入pET30a(+)原核表达载体构建pET ROP2载体,然后再将pMD P30中的P30基因片段与经BglⅡandEcoRⅠ酶切的pET ROP2载体连接,构建pET ROP2P30载体,经含卡那霉素的LB平板筛选,酶切和PCR鉴定。阳性重组质粒转化到大肠埃氏菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导,表达产物用SDS PAGE进行鉴定。大量的表达融合蛋白经纯化和复性后,用Westernblot分析。结果从弓形虫RH株基因组DNA中扩增出特异的ROP2和P30基因片段,成功构建成pET ROP2和pET ROP2P30载体,成功表达了弓形虫棒状体蛋白2和弓形虫棒状体蛋白与主要表面抗原1的融合复合蛋白,表达出的蛋白经纯化复性后具有免疫反应性。结论ROP2和P30基因重组后,在原核表达载体中表达出的蛋白经纯化复性后具有活性,获得纯化和复性的弓形虫ROP2和ROP2P30的高效表达产物,为弓形虫病的诊断和疫苗研究奠定了基础。

抗原肽运载体TAP2基因与乙型肝炎病毒感染预后的相关性研究

目的 研究上海地区中国人群抗原肽运载体(transporter associated with antigen processing, TAP)基因与HBV感染以及慢性HBV感染和慢性肝炎并发肝硬化之间的相关性。方法 收集临床病例,检测乙型肝炎病毒标志,参照“病毒性肝炎防治方案2000”,选取101例乙型肝炎病毒感染者,21例HBV感染康复者及113例正常对照,进行TAP2 等位基因分型。对数据分组进行统计分析。结果 慢性乙型肝炎组的TAP2 *0201基因频率显著低于感染恢复组(χ2 =4.95, P<0.03);肝硬化组的TAP2 *0101基因频率显著高于正常对照组(χ2 =5.72, P<0.02);在慢性乙型肝炎并发肝硬化组中DR4与TAP2 *0101等位基因间存在显著的连锁不平衡(△=0.026,P<0.05)。结论 TAP2 *0101等位基因型携带者易感慢性乙型肝炎和乙型肝炎并发肝硬化,而TAP2 *0201则表现出对慢性乙型肝炎的抗性。两者均与HBV感染的预后似有一定相关。

p57^(Kip2)和p27^(Kip1)基因mRNA在胃癌组织中的表达及意义

目的研究细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子p57Kip2和p27Kip1基因mRNA在胃癌组织中的表达及意义。方法采用RTPCR技术,分别检测p57Kip2和p27Kip1基因mRNA在108例胃癌组织及60例癌旁组织中的表达。结果p57Kip2基因mRNA在胃癌组织中阳性表达率为28.70%,显著低于癌旁组织中的阳性表达率56.67%(P<0.05),p57Kip2基因mRNA相对含量检测胃癌组织为0.59±0.17,显著低于癌旁组织1.63±0.21(P<0.05);p27Kip1基因mRNA在胃癌组织中阳性表达率为23.15%,低于癌旁组织中的阳性表达率31.67%(P>0.05),p27Kip1基因mRNA相对含量检测胃癌组织为1.53±0.23,稍高于癌旁组织1.46±0.35(P>0.05)。结论胃癌组织中p57Kip2和p27Kip1基因蛋白表达的降低与转录机制有关,并在胃癌的发生中存在不同的抑癌途径或不同的调控机制。

p53、p21和p16基因蛋白在膀胱癌中表达意义

１材料和方法１．１材料收集牡丹江市第一人民医院有完整随访记录的膀胱癌患者５０例，年龄３５～７６岁，其中男性４３例，女性７例。所有标本均经１０％福尔马林固定，常规石蜡包埋，４μｍ厚连续切片，另取６例正常膀胱标本作对照。全部病例术前均未作化疗，病理分级按...

大肠腺癌组织中p57^(kip2)蛋白和基因的表达及其与临床病理的关系

目的探讨细胞周期调控抑制因子p57kip2蛋白和基因在大肠腺癌发生发展中的作用。方法采用免疫组化技术SP法,检测p57kip2蛋白在37例大肠腺癌和26例正常大肠黏膜组织中的表达;采用RT-PCR技术,检测p57kip2基因mRNA在32例大肠腺癌和癌旁组织中的表达。结果p57kip2蛋白阳性表达率在大肠腺癌组织中为40.5%,显著低于正常大肠黏膜组织(χ2=5.039,P<0.05),并与大肠腺癌组织分化程度和淋巴结转移均有关(χ2=8.914,χ2=4.416,P<0.05);p57kip2基因mRNA阳性表达率在大肠腺癌组织中为34.4%,显著低于癌旁大肠黏膜组织(χ2=4.016,P<0.05),并与大肠腺癌组织分化程度、淋巴结转移无关;大肠腺癌组织p57kip2基因mRNA表达水平显著低于癌旁组织(P<0.05)。结论p57kip2蛋白的低表达与大肠腺癌的发生发展有关,p57kip2基因mRNA的低表达与大肠腺癌的发生有关,且p57kip2基因mRNA的低表达可能是p57kip2蛋白低表达的原因之一。

基于快速CYP2C19基因检测的颈内动脉重度狭窄患者双联抗血小板治疗1例报道

本文报道了一例老年女性院内卒中患者的临床诊疗过程。该患者于肛肠外科手术后2 d突发急性缺血性卒中,经影像学检查确诊为右侧颈内动脉起始部重度狭窄。在接受了1个月的卒中二级预防药物治疗后,择期行血管内治疗。术前该患者进行了快速细胞色素P450酶家族2亚家族C成员19(cytochrome P450 family 2 subfamily C member 19,CYP2C19)基因检测,结果为中间代谢型,提示应用氯吡格雷的效果可能不佳。基于这一检测结果调整抗血小板治疗方案,选择替格瑞洛联合阿司匹林作为替代治疗。治疗后,患者病情稳定,预后较好。本病例报道提示,在非轻型卒中患者中,快速CYP2C19基因检测可帮助选择抗血小板治疗策略,改善患者预后。

SREBP-2基因多态与胆固醇水平的关联研究

目的探讨SREBP2基因的常见多态rs4822063与胆固醇水平的关系。方法在948个研究对象中采用PCR-限制性片段长度多态方法进行基因分型,分析rs4822063不同基因型间胆固醇水平的相关关系。结果与常见G等位基因的携带者(GG+GC基因型)相比,少见等位基因纯合子CC携带者的高总胆固醇(Total cholesterol,TC)及高低密度脂蛋白胆固醇(Low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)的危险增加;CC基因型携带者TC和LDL-C的水平高于常见G等位基因的携带者(GG+GC)。结论SREBP2基因的常见多态rs4822063与胆固醇水平相关。

叉头框P2(FoxP2)基因与鸟鸣

叉头框P2(FoxP2)基因是与人类语言相关的基因,在鸣禽脑中也存在,不仅参与胚胎时期的关键性发育,对鸣禽鸣曲学习也有影响。实验表明,FoxP2基因对神经回路发育和出生后的鸣唱学习,以及成鸟的鸣曲稳定都有重要作用。FoxP2基因主要在与人类同源的基底神经节——X区表达。本文介绍了FoxP2基因与鸟鸣的新近研究进展。

非小细胞肺癌pl6/CDKN2基因失活的研究

目的：分析中国人非小细胞肺癌中ｐ１６／ＣＤＫＮ２基因失活的情况，探讨该基因在肺癌发生中的作用。方法：选取与ｐ１６基因紧密连锁的Ｄ９Ｓ１７４８位点，对１７例临床切除的原发性肺癌标本进行微卫星不稳定性分析，用甲基化特异性ＰＣＲ（ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ＰＣＲ， ＭＳＰ）检测 ｐｌ６基因启动子区 ＣｐＧ岛甲基化状况，用免疫组织化学法检测Ｐ１６蛋白表达情况。结果：微卫星不稳定性分析结果表明，在１３例Ｄ９Ｓ１７４８位点存在多态性的肿瘤ＤＮＡ中有 ９例（６９ ．２％）发生了杂合性缺失（ｌｏｓｓ ｏｆ ｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｓｉｔｙ， ＬＯＨ）。 ＭＳＰ的结果显示，有 ７０． ６％（１２／１７）的肿瘤组织存在ｐ１６启动子区的异常高甲基化。在本研究中，８２．４％（１４／１７）的肿瘤组织可以检测出一种或两种ｐ１６基因的异常改变。对此１７例肿瘤标本进行的免疫组织化学分析显示，有 １３例 Ｐ１６蛋白表达阴性，其中 ９２ ３％（１２／１３）存在一种或两种ｐ１６基因的异常改变。免疫组化结果与ｐ１６基因分子遗传学改变情况基本吻合。结论：作为一种抑癌基因，ｐ１６在多种肿瘤组织中都有异常改变。我们的研究表明，ｐ１６基因失表达是非小细胞肺癌?

口蹄疫病毒P1+2A基因真核表达载体的构建

通过RT-PCR方法获得了口蹄疫病毒O型,编号为OF3毒的P1+2A区的目的基因,并将其克隆到克隆载体pMD18-T上,再根据表达载体pQE-Trisystem的特性及酶切位点设计合适的表达引物.由表达引物通过PCR技术从克隆载体上扩增出带有特定酶切位点的目的片段,再对载体和目的片段进行酶切处理,处理后由T4 DNA连接酶将二者连接.通过PCR及酶切鉴定,结果证明口蹄疫病毒目的基因片段已被正确克隆到表达载体pQE-Trisystem上.

血小板膜受体P2Y12基因多态性与原发性高血压血瘀证的相关性研究

目的探讨血小板膜受体P2Y12基因G52T、-T744C多态性与原发性高血压（EH）血瘀证易感性的关系。方法选择福建省汉族人群EH血瘀证患者216例，EH非血瘀证患者220例，血压正常对照者193例。抽取受试者外周静脉血，提取DNA，采用聚合酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性（PCR—RFLP）检测P2Y12基因G52T、-T744C多态性类型。结果3组间G52T的GG、GT和TT基因型分布频率差异无统计学意义（x2=2．041，P=0．728），-T744C的TT、TC和CC基因型分布频率差异有统计学意义（x2=10．500，P=0．033）；经进一步誓分割检验显示，EH血瘀证组TC／CC基因型分布频率（43．1％）高于EH非血瘀证组（30．9％）和健康对照组（33．2％），差异有统计学意义（X2=7．598，P=0．006）。多因素Logistic回归分析显示，以健康对照组为参照系，TC／CC基因型人群是患EH血瘀证的独立危险因素；调整相关混杂因素后，TC／CC基因型人群患EH血瘀证的相对危险度是1．518，95％可信区间（95％CI）为1．011～3．025，P=0．042。结论P2Y12基因TC／CC型可能是汉族人群EH血瘀证发病的易感危险因素之一。

水稻P450基因Oscyp71Z2增强稻瘟病抗性的机制

【目的】分析水稻细胞色素P450基因Oscyp71Z2在稻瘟病抗性中的作用,并解析其介导的水稻抗稻瘟病机制。【方法】根据高抗稻瘟病转hrf1水稻NJH12表达谱结果,筛选到一个表达量高达114.6倍的细胞色素P450基因Oscyp71Z2(NCBI登录号:Os07g0217600)。根据Oscyp71Z2全长编码区序列设计引物,以水稻模式粳稻品种日本晴的cDNA为模板,通过PCR扩增Oscyp71Z2全长编码区序列。将所得的cDNA序列经测序后,与双元表达载体pVec8连接,构建超量表达载体pVec8::Oscyp71Z2。采用冻融法将构建的超量表达载体pVec8::Oscyp71Z2质粒转入农杆菌菌株EHA105,并利用农杆菌转化法获得Oscyp71Z2超表达水稻。常规PCR技术检测T4代Oscyp71Z2超量表达水稻中选择标记基因潮霉素磷酸转移酶编码基因(hygromycin phosphotransferase gene,hph),并通过qRT-PCR检测超量表达水稻中目的基因Oscyp71Z2的表达量。进一步对阳性超量表达水稻(T4、T5和T6)进行稻瘟病表型鉴定,并检测植保素含量变化(T4)。【结果】RT-PCR和qRT-PCR结果显示,水稻细胞色素P450基因Oscyp71Z2在高抗稻瘟病的转hrf1水稻中有较高的表达,与表达谱数据一致。通过生物信息学分析Oscyp71Z2全长1 554 bp,含有2个细胞色素P450保守结构域,是CYP71Z2亚家族成员。将Oscyp71Z2成功连接到双元载体pVec8,利用农杆菌介导法获得Oscyp71Z2超量表达水稻。超量表达水稻株系在各生育期、株高等性状,与非转基因水稻日本晴基本一致。超量表达株系中Oscyp71Z2的表达量较野生型有显著升高。超量表达水稻的穗颈瘟抗性等级维持在1—2级,表现为抗病或者中抗,而野生型水稻的穗颈瘟等级为3—4级,表现为感病,Oscyp71Z2在水稻中超量表达显著增强了对穗颈瘟的抗性。Oscyp71Z2超量表达株系每克新鲜叶片中植保素MA和PB含量平均是328和124 ng,相对于野生型的85和42 ng·g-1新鲜叶片有显著升高。Oscyp71Z2超量表达株系中涉及到植保素MA和PB合成通路的4个关键基因的表达量较野生型有显著地升高。【结论】水稻细胞色素P450基因Oscyp71Z2通过调控植保素生物合成通路,赋予水稻稻瘟病抗性。