矮小症患儿的临床特征及重组人生长激素联合来曲唑对p21waf/cip1、25-OH-D水平的影响

目的探讨重组人生长激素(rh-GH)联合来曲唑治疗特发性矮小症(ISS)的临床价值及对患儿p21waf/cip1、25羟基维生素D(25-OH-D)水平的影响。方法选取86例ISS患儿,随机分为对照组与研究组,各43例;对照组给予rh-GH,研究组联合来曲唑治疗,疗程均为12个月。比较两组的骨龄、Ⅰ型胶原氨基酸延长肽(PINP)、预测终身高、p21waf/cip1、骨碱性磷酸酶(BALP)、25-OH-D、骨钙素(OC)、临床疗效及不良反应。结果研究组的疗效优良率(95.35%Vs 76.74%)高于对照组(P<0.05)。治疗前,两组的骨龄、PINP、预测终身高、BALP、OC、p21waf/cip1蛋白、25-OH-D差异无统计学意义(P>0.05);治疗12个月后,研究组的PINP、骨龄、25-OH-D、OC、预测终身高大于对照组,研究组的p21waf/cip1蛋白、BALP小于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。两组的总不良反应率(11.63%VS 6.98%)差异无统计学意义(P>0.05)。结论在rh-GH基础上联合来曲唑治疗ISS的疗效良好,能够有效改善患儿骨代谢指标与25-OH-D、p21waf/cip1水平,促进患儿身高增长与骨骼发育,提高患者终身高值。

紫薯花青素通过调节p53-p21^(Waf1/Cip1)信号通路对辐射致造血干/祖细胞衰老的保护作用

目的:探讨紫薯花青素(Solanum tuberosum anthocyanin,STA)对辐射致造血干细胞(hematopoietic stem cell,HSC)/造血祖细胞(hematopoietic progenitor cell,HPC)衰老起保护作用的分子机制。方法:将C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组、STA治疗组和STA预防组,利用X射线照射构建衰老细胞模型。给药后用血细胞分析仪检测各组小鼠血液指标;免疫磁性分选法分离纯化各组小鼠Sca-1^(+)HSC/HPC,并用衰老相关β-半乳糖苷酶(senescence-associated β-galactosidase,SA-β-Gal)染色试剂盒对其进行染色实验并计算各组阳性率;利用HSC/HPC混合集落(colony forming unit-mixture,CFU-Mix)数评价各组细胞形成HSC/HPC集落能力与分化潜能;流式细胞术分析细胞周期;实时定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,q PCR)检测p53和p21^(Waf1/Cip1)mRNA的表达;Western blot检测p53和p21^(Waf1/Cip1)蛋白的表达。结果:与对照组相比,模型组小鼠外周血指标红细胞、白细胞、血小板数均极显著降低(P<0.01),衰老细胞阳性率极显著增加(P<0.01),Sca-1^(+)HSC/HPC形成CFU-Mix的数量极显著减少(P<0.01),G0/G1期比例极显著升高(P<0.01),G2/M和S期比例极显著降低(P<0.01),p53和p21^(Waf1/Cip1)mRNA和蛋白的相对表达量极显著增加(P<0.01),STA治疗和STA预防均可分别显著和极显著恢复模型组小鼠以上指标,其中STA预防效果更好。结论:STA可以通过调节p53-p21^(Waf1/Cip1)信号通路保护受到辐射的HSC/HPC。

p21^(WAF1/CIP1) Gene DNA Sequence Change and Their Relationship with the Phenotype of Human Osteosarcoma

Objective: To investigate the p21WAF1 /CIP1gene DNA sequence change and their relationship with the phenotype of human osteosarcoma. Methods: p21WAF1 /CIP1gene DNA of 36 osteosarcoma spec- imens was examined by using polymerase chain reaction-single strand conformation polymorphism (PCR- SSCP) method. The PCR products were sequenced directly. Results: In p21WAF1 /CIP1 gene exon3 of 36 cases of human osteosarcoma, the change of C→T in the p21WAF1 /CIP1gene CDNA sequence of position 609th occurred in 17 cases with the incidence being 44.4%. In 10 normal blood samples, DNA sequence analysis showed the change of C→T in the p21WAF1 /CIP1gene CDNA sequence of position 609th occurred in 8 cases with the incidence being 80%. Conclusion: The novel location of p21WAF1 /CIP1gene polymorphism of osteosarcoma, but not mutation was de?ned, and this location might provide the meaningful reference for the further research of p21WAF1/CIP1 gene.p2lWAF1/CIP1基因DNA序列分析及其与骨肉瘤表型的关系

外源性p21^(WAF1/CIP1)基因转染对人胶质瘤细胞生长和细胞周期的影响

目的 :探讨外源性 p2 1 WAF1 /CIP1 基因对胶质瘤细胞生长和细胞周期的影响 .方法 :采用脂质体介导法将p2 1 WAF1 /CIP1 基因质粒转导入人胶质瘤细胞系SHG44细胞 ,然后用电镜、流式细胞仪等技术对细胞形态、生长及细胞周期进行观察 .结果 :酶切电泳和斑点杂交显示p2 1 WAF1 /CIP1 基因成功的转染至SHG44细胞 .转染p2 1 WAF1 /CIP1 基因的细胞光镜及电镜下可见凋亡产生 ;生长速度明显慢于亲代细胞 ,其倍增时间约是对照细胞的二倍 ;细胞周期发生明显改变 ,G1 期明显增多 ,S期明显减少 .结论 :外源性 p2 1 WAF1 /CIP1 基因对SHG44细胞的生长和细胞周期有明显的抑制作用 。

脑胶质瘤组织p21^(WAF1/CIP1)基因表达与p53基因的关系

目的 探讨抑癌基因、细胞周期调控与胶质瘤发生、发展的关系 .方法 采用免疫组织化学技术对 6 3例脑胶质瘤组织及 10例正常脑组织标本中 p2 1WAF1 /CIP1与 p5 3基因的表达状况进行检测 ,并进行相关性分析 .结果 110例正常脑组织均为 p2 1WAF 1 /CIP1阳性表达 ,6 3例脑胶质瘤组织中p2 1WAF1 /CIP1的表达阳性率与肿瘤分化程度呈正相关 ;2 10例正常脑组织中仅 1例为突变型 p5 3弱阳性表达 .脑胶质瘤组织中突变型 p5 3的阳性率与分化程度呈负相关 ;3大部分突变型 p5 3表达阳性标本中 p2 1WAF 1 /CIP1为阴性表达 ,而大部分突变型 p5 3表达阴性的标本中 p2 1WAF 1 /CIP1 为阳性表达 .结论 p2 1WAF1 /CIP1的突变或缺失可能与胶质瘤的发生、发展有关 ,p2 1WAF1 /CIP1表达的减弱或消失可能是由 p5 3突变引起 ,野生型p5 3基因的肿瘤抑制作用可能是通过 p2 1WAF 1 /CIP1

白藜芦醇体外对肝癌HepG2细胞分化及P21^(WAF1/CIP1)表达的影响

目的探讨白藜芦醇在体外对肝癌细胞分化及相关周期蛋白依赖激酶抑制因子P21WAF1/CIP1的影响。方法体外培养肝癌HepG2细胞,用MTT法检测白藜芦醇对HepG2细胞的生长抑制作用,用倒置显微镜观察肝癌细胞的形态改变,用放射免疫法检测其AFP分泌,以RT-PCR方法检测HepG2细胞中P21WAF1/CIP1mRNA的表达,用免疫细胞化学检测其P21WAF1/CIP1蛋白的表达。结果白藜芦醇呈时间剂量性抑制HepG2细胞株的增殖,使其亚细胞结构趋于正常,AFP分泌量下降,并显著上调HepG2细胞中P21WAF1/CIP1 mRNA和蛋白的表达。结论白藜芦醇能诱导HepG2细胞在体外向正常肝细胞分化,并上调其P21WAF1/CIP1的表达。

人前列腺癌中P21^(CIP1/WAF1),Rb的表达意义

目的 研究 P2 1CIP1 /WAF 1 及 Rb在人前列腺癌标本中的表达以及两者的相关性 ,以阐述它们与前列腺癌的病理分级及临床分期的关系 .方法 应用免疫组化 SABC法染色技术对 36例前列腺癌标本进行检测 ,观察 P2 1CIP1 /WAF 1 及 Rb在前列腺癌各病理分级 ,临床分期中的表达及相关性 .结果 在 36例人前列腺癌标本中 ,P2 1CIP1 /WAF 1和 Rb免疫组化阳性染色为棕黄色或棕褐色 ,分别定位于细胞质和细胞核 ,其中P2 1CIP1 /WAF 1阳性 19例 ,阳性率 5 2 .8% .Rb阳性 17例 ,阳性率47.2 % .在不同病理分级、临床分期之间差异均有显著性 ,但实验结果未发现 P2 1CIP1 /WAF 1 与 Rb有显著相关性 .结论 P2 1CIP1 /WAF 1 ,Rb的表达与前列腺癌组织的病理学分级、临床分期呈负相关性 ,在前列腺癌分子发病机制中可能涉及到P2 1CIP1 /WAF 1 。

子宫内膜样腺癌中Id-1、Smad4和p21^(WAF1/CIP1)蛋白及mRNA的表达

目的探讨分化抑制因子-1(Id-1)、DPC4/Smad4和p21WAF1/CIP1蛋白及其mRNA在正常子宫内膜、子宫内膜增殖症和子宫内膜样腺癌(EA)组织中的表达及其临床病理学意义。方法采用免疫组织化学和原位分子杂交方法,检测30例正常子宫内膜组织、30例单纯性增生过长、30例复杂性增生伴不典型增生、72例EA组织中Id-1、Smad4和p21WAF1/CIP1蛋白及其mRNA的表达。结果Id-1、Smad4和p21WAF1/CIP1蛋白及三者mRNA在EA中的表达率分别为86.1%(62/72)、44.4%(32/72)、63.9%(46/72)、73.6%(53/72)、41.7%(30/72)和61.1%(44/72),Id-1和p21WAF1/CIP1阳性率明显高于正常和各型增生内膜;而Smad4则相反;Id-1蛋白及mRNA过表达与组织学分级、临床分期、浸润程度和淋巴结转移有关(P值均<0.05);Smad4和p21WAF1/CIP1蛋白及mRNA阳性表达与组织学分级、临床分期和浸润程度有关(P值均<0.05);Id-1、Smad4和p21WAF1/CIP1蛋白与相对应的mRNA呈正相关;Id-1与Smad4表达呈负相关。结论Id-1、Smad4和p21WAF1/CIP1蛋白及mRNA表达异常与EA的发生发展有关,有可能成为判断子宫内膜组织癌变和转移的重要指标。

组蛋白去乙酰化酶抑制剂调控p21^(WAF1/CIP1)启动子乙酰化水平影响乳腺癌MCF-7细胞周期

目的研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylase inhibitor,HDACI)调控p21^(WAF1/CIP1)启动子乙酰化水平,调节乳腺癌MCF-7细胞周期的分子机制。方法采用实时定量PCR、Western blot和DNA-Ch IP方法测定SAHA对乳腺癌MCF-7细胞周期调控系统的影响;应用染色质免疫沉淀(chromatin immunoprecipitation,Ch IP)技术探究SAHA调控p21^(WAF1/CIP1)启动子乙酰化水平的情况。结果 SAHA明显影响乳腺癌细胞周期相关调控因子的表达;在针对p21^(WAF1/CIP1)基因功能的筛查中发现,SAHA可明显诱导p21^(WAF1/CIP1)mRNA和蛋白的表达,并且可调节p21^(WAF1/CIP1)启动子乙酰化水平。结论 SAHA通过影响p21^(WAF1/CIP1)启动子乙酰化程度调节乳腺癌MCF-7细胞周期的进程。

P21^(Cip/WAF1)及P27^(Kip1)与增殖细胞核抗原在人骨髓间充质干细胞向肝细胞分化过程中的表达

背景:P21Cip/WAF1、P27Kip1是两种重要的细胞周期的负调控因子,增殖细胞核抗原是反映干细胞增殖的指标。目的:观察体外诱导人骨髓间充质干细胞向肝细胞分化过程中P21Cip/WAF1,P27Kip1及增殖细胞核抗原的表达变化。设计、时间及地点:细胞学基因水平观察,于2006-12/2007-06在中山大学附属第二医院林百欣医学研究中心实验室完成。材料:骨髓来源于中山大学附属第二医院行骨髓穿刺的健康供者。方法:全骨髓贴壁筛选法体外分离培养人骨髓间充质干细胞,传至第5代后,加入含20μg/L肝细胞生长因子、10μg/L成纤维细胞生长因子4的opti-MEMI低血清培养基向肝细胞诱导分化。主要观察指标:诱导后RT-PCR检测细胞内P21Cip/WAF1,P27Kip1及增殖细胞核抗原基因mRNA的表达。结果:骨髓间充质干细胞向肝细胞定向诱导后0,1,3,5,7d,细胞内P21Cip/WAF1mRNA表达的相对量逐渐升高(P<0.01),P27Kip1mRNA表达的相对量无明显差异(P>0.05),增殖细胞核抗原mRNA表达的相对量除诱导后0,1d无明显差异(P>0.05)外,其余各时间点均逐渐降低(P<0.01)。结论:P21Cip/WAF1高表达抑制了骨髓间充质干细胞增殖,同时在其向肝细胞分化过程中起一定调控作用,P27Kip1可能并不起作用,增殖细胞核抗原的表达则与P21Cip/WAF1相反,呈逐步减少趋势。

KLF6、p21^(WAF1/CIP1)、CyclinD1在结直肠癌中的表达及意义

目的研究转录因子KLF6、p21WAF1/C IP1及Cyc linD1在结直肠癌中的表达及意义。方法应用免疫组化Envision法对58例结直肠癌组织、20例结直肠黏膜慢性炎症组织中的KLF6、p21WAF1/C IP1及Cyc linD1蛋白表达进行检测。结果结直肠癌组织KLF6、p21WAF1/C IP1及Cyc linD1蛋白表达率均与结直肠黏膜慢性炎症组织比较有统计学差异(P<0.05);KLF6、p21WAF1/C IP1及Cyc linD1蛋白在结直肠癌组织中的表达与其浸润深度及预后有关(P<0.05)。结论 KLF6、p21WAF1/C IP1及Cyc linD1在结直肠癌的发生发展中可能起重要作用。

前列腺癌p21^(CIP1/WAF1)和PCNA的表达及相关性研究

目的 研究 p2 1CIP1 /WAF1 及 PCNA在人前列腺癌标本中的表达及相关性 ,阐述它们与前列腺癌病理分级及临床分期的关系 .方法 以 36例确诊前列腺癌石蜡包埋存档标本作为研究对象 ,采用免疫组化 SABC法对其 p2 1CIP1 /WAF 1及PCNA进行检测 ,并应用图像分析仪判定 ,统计学处理 ,对前列腺癌的病理分级及临床分期进行了对比分析及相关性研究 .结果 p2 1CIP1 /WAF 1 及 PCNA的免疫组化阳性染色为棕黄色和 /或棕褐色 ,定位于细胞质或细胞核 .所得数据均经统计学处理 .在不同病理分级及临床分期之间差异均有显著性 ,同时还发现 PCNA与 p2 1CIP1 /WAF 1存在显著负相关性 .结论 p2 1CIP1 /WAF1表达与前列腺癌组织的病理分级及临床分期呈负相关性 ,在发病机制中可能涉及到 p2 1CIP1 /WAF1 和 PCNA调节通路的异常 .同时 ,作为一种检测方法 。

p21^(WAF1/CIP1)基因与肿瘤

肿瘤的发生发展是多基因参与的复杂而多步骤的过程。p2 1WAF1/CIP1基因作为一种重要的细胞周期抑制基因与肿瘤的发生发展密切相关 ,近年来的研究表明它在不同肿瘤发生发展中有着不同的作用。

腺病毒介导的P21^(WAF1/CIP1)基因诱导血管平滑肌细胞凋亡

目的 应用重组腺病毒载体介导的P2 1WAF1/CIP1基因转染血管平滑肌细胞 (VSMC) ,探讨P2 1WAF1/CIP1基因对平滑肌细胞凋亡的诱导作用。材料与方法 P2 1WAF1/CIP1的重组腺病毒载体转染体外培养的猪主动脉平滑肌细胞 ,应用RT PCR检测外源性P2 1WAF1/CIP1基因的表达 ,并通过细胞形态、原位细胞凋亡分析、流式细胞仪和细胞生长曲线等方法观察P2 1诱导VSMC凋亡 ,抑制VSMC增殖的情况。结果 P2 1WAF1/CIP1基因的重组腺病毒载体可以有效地转入平滑肌细胞中 ,诱导平滑肌细胞凋亡 ,并能显著地抑制平滑肌细胞增殖。结论 外源性P2 1WAF1/CIP1基因转移可以诱导平滑肌细胞凋亡 ,显著地抑制平滑肌细胞增殖。

乳腺癌MCF-7细胞p21^(WAF1/CIP1)启动子区HDAC1高功能结合位点的研究

目的研究乳腺癌MCF-7细胞中组蛋白去乙酰化酶1(histone deacetylases 1,HDAC1)募集于p21^(WAF1/CIP1)启动子区调控其转录活性的特异性结合位点。方法将处于对数生长期的乳腺癌MCF-7细胞在无血清培养基中饥饿24 h后,分别用20μmol·L^(-1)0.88μL SAHA(S组)、0.625 nmol·L^(-1)10μL Leptin(L组)处理24 h,对照组(B组)细胞培养在完全型RPMI 1640培养基中。各组细胞裂解液与HDAC1抗体孵育,收集纯化结合HDAC1抗体的DNA片段,应用Realtime PCR法检测p21^(WAF1/CIP1)启动子区从TSS到其上游(+2^-4 000 bp)f1~f10片段的DNA相对表达量并用2-ΔΔCT法分析。结果 B组中,HDAC1抗体在p21^(WAF1/CIP1)启动子区f1、f8片段有高亲和力,f8片段达最高。S组中,HDAC1抗体与p21^(WAF1/CIP1)启动子区f1~f10片段结合量明显低于对照组,f8片段达最低,而在L组此片段与HDAC1抗体结合量达最大值。结论乳腺癌MCF-7细胞增殖过程中,HDAC1可被招募至p21^(WAF1/CIP1)启动子区,该启动子区上游-2 800 bp至-3 200 bp DNA片段是与HDAC1高度结合的靶功能区。

细胞周期蛋白D1和p21^(WAF1/CIP1)在喉癌癌变过程中表达及其意义

目的 :研究喉癌变过程中细胞周期蛋白 (cyclin)D1和p2 1WAF1/CIP1表达及其临床病理学意义。方法 :用免疫组化检测 2 0例正常黏膜、 40例不典型增生病变和 6 0例喉癌组织中cyclinD1和p2 1WAF1/CIP1的表达。结果 :①cyclinD1和p2 1WAF1/CIP1阳性表达定位于细胞核。②在喉癌癌变过程中 ,喉正常黏膜、不典型增生病变和喉癌中cyclinD1阳性表达率分别为 :5 0 % (1/ 2 0 ) ,30 ,0 % (12 / 40 ) ,5 3 3% (32 / 6 0 ) (P <0 0 0 1) ;p2 1WAF1/CIP1阳性表达率分别为 :95 0 % (19/ 2 0 ) ,75 0 % (30 / 40 )和 6 3 3% (38/ 6 0 ) (P <0 0 5 )。③p2 1WAF1/CIP1在高、中和低分化的喉癌中阳性表达率分别为 :76 2 % (16 / 2 1) ,6 5 5 % (19/ 2 9)和 30 0 % (3/ 10 ) (P <0 0 5 ) ;p2 1WAF1/CIP1阳性表达与肿瘤细胞的分化有关。④cyclinD1和p2 1WAF1/CIP1阳性表达显著相关。结论 :①喉癌癌变过程中cyclinD1阳性表达率呈逐渐升高的趋势 ,而p2 1WAF1/CIP1阳性表达率呈呈逐渐降低的趋势。②cyclinD1异常表达是喉癌发生中早期分子事件。③p2 1WAF1/CIP1表达与喉癌细胞分化程度有关。④cyclinD1和p2

P53和P21^(WAF1/CIP1)蛋白在新疆维吾尔族妇女宫颈癌中的表达及意义

采用免疫组化方法检测80例维族宫颈癌组织和34例维族正常宫颈组织中P53和P21WAF1/CIP1蛋白表达情况,探讨P53和P21WAF1/CIP1蛋白在新疆维吾尔族妇女宫颈癌中发生、发展中的作用以及相互关系。结果显示:宫颈癌组织中P53蛋白的阳性表达率为62.5%,明显高于正常对照组8.8%(P<0.05);P21WAF1/CIP1蛋白阳性表达率96.25%,明显高于正常对照组38.23%(P=0.000)。说明P53和P21WAF1/CIP1蛋白的高表达与宫颈癌的发生、发展有关。

甲基莲心碱对人脐静脉血管平滑肌细胞增殖及Cyclin D1,P^(21Waf1/Cip1)表达的影响

目的:观察甲基莲心碱对人脐静脉平滑肌细胞(HUVSMCs)增殖,Cyclin D1及P21Waf1/Cip1表达的影响,旨在探讨甲基莲心碱作用的分子机制。方法:采用MTT法和流式细胞仪观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)及甲基莲心碱对HUVSMCs增殖的影响。用免疫印迹法检测Cyclin D1及P21Waf1/Cip1蛋白表达,以半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Cyclin D1及P21Waf1/Cip1rnRNA的表达。结果:AngⅡ对HUVSMCs有明显促增殖作用,其促增殖效应在24 h达到峰值,且在0.001-0.1μmol/L浓度范围内有剂量依赖关系。甲基莲心碱呈剂量依赖性地抑制AngⅡ诱导的HUVSMCs增殖,同时可抑制AngⅡ诱导的Cyclin D1蛋白及mRNA的表达,促进P21Waf1/Cip1蛋白及mRNA表达。结论:甲基莲心碱可通过下调Cyclin D1及上调P21Waf1/Cip1的表达阻滞细胞周期的进程,从而抑制血管平滑肌细胞的增殖,是一种有效的抑制血管平滑肌细胞增殖的药物。

p21^(WAF1/CIP1)在视网膜母细胞瘤中的表达及意义

目的探讨p21WAF1/CIP1在视网膜母细胞瘤(RB)中的表达及其与肿瘤的病理分期、组织分型、浸润深度的关系。方法利用免疫组织化学法检测p21WAF1/CIP1在46例RB组织和15例正常视网膜组织中的表达。结果p21WAF1/CIP1主要表达于细胞核及细胞浆内,在RB中的阳性表达率为47.83%,与正常视网膜组织相比差异有统计学意义(P=0.007),并随肿瘤病理分期的进展而下降,与组织分型和浸润深度有关(P<0.05)。结论p21WAF1/CIP1在RB的发生发展过程中起重要作用,表达的下降与肿瘤恶化及预后不良相关。