HeLa细胞中Skp2的表达调控p21WAFCIP1稳定性

泛素 蛋白酶体抑制剂MG 132处理的HeLa和SaoS 2细胞中 ,低表达的p2 1WAF CIP1受泛素 蛋白酶体通路调控 .为探讨肿瘤细胞中高表达的E3连接酶底物结合亚基 Skp2和低表达的p2 1WAF CIP1之间的关系 ,在HeLa细胞中转染Skp2的反义寡核苷酸后 ,p2 1表达水平明显升高 .同时 ,相对于转染空载体和Skp2ΔF(Skp2的F box缺失突变体 )的真核表达载体 ,转染全长Skp2的HeLa细胞中 ,p2 1表达水平显著下降 ,说明肿瘤细胞中Skp2调节p2 1的稳定性 ,并且这种调控作用依赖于Skp2蛋白中的F box结构 .免疫荧光结果表明 ,Skp2和p2 1共定位于细胞核 ,这为两者间的相互作用提供了前提 ;体内相互免疫共沉淀结果表明 ,p2 1和其它SCFSkp2 的底物一样与Skp2直接结合 ,并且它们之间的结合区不在F box结构域 ,这一结果在体外的GST

p53蛋白三维空间结构改变与甲状腺乳头状瘤p21^WAF1/CIP1蛋白定量表达关系的研究

目的:从结构分子生物学深度探讨p53蛋白三维空间结构改变与甲状腺乳头状癌(PTC)及甲状腺滤泡性腺瘤(TFA)中p21WAF1/CIP1蛋白定量表达的关系。方法:采用PCR-SSCP、DNA序列分析、计算机重构p53蛋白三维空间结构和有关分析软件、免疫组织化学和图像分析等技术进行研究。根据p53基因Exon5-8突变与否把PTC划分为Ⅰ组(p53基因突变组)和Ⅱ组(无p53基因突变组),再根据突变型p53蛋白三维构象改变的空间位点不同,把Ⅰ组分为ⅠA和ⅠB组。结果:Ⅱ组和ⅠA组的阳性细胞的平均积分光密度值(MOD)差异无统计学意义,两者均数差1.26,P>0.05。Ⅲ组(TFA组)和Ⅱ组、Ⅲ组和ⅠB组、Ⅲ组和ⅠA组之间,尤其是ⅠB组和ⅠA组之间的MOD的差异有统计学意义,均数差分别为12.57、25.80、13.84和-1.96,P<0.01。结论:p53蛋白空间构象的改变与p21WAF1/CIP1蛋白定量表达的变化之间存在着质变与量变的关系。

P21^WAF1/CIP1、BaX蛋白在维吾尔族宫颈癌p53Arg72Pro不同基因型中的表达研究

目的初步探讨p53Arg72Pro不同基因型的生物学功能以及在新疆维吾尔族宫颈癌发生机制中的相关作用。方法采用免疫组化的方法检测110例维吾尔族宫颈癌和45例维吾尔族正常宫颈组织中p53基因第四外显子第72位密码子Arg／Pro（p53Arg72Pro）三种基因型Arg／Arg、Pro／Arg、Pro／Pro型中P21^WAF1/CIP1、Bax蛋白的表达。结果在维吾尔族宫颈癌组织中P21^WAF1/CIP1、Bax蛋白的阳性表达率均高于正常宫颈组织，其表达差异有统计学意义（P〈0．05），同时在p53Arg72Pro三种基因型中Pro／Pro型的Bax蛋白阳性高表达率最高66．67％（10／15），其表达差异有统计学意义（P〈0．05）。而P21^WAF1/CIP1蛋白阳性表达率在Arg／Arg型中最高58．5％（24／41），但其差异并无统计学意义（P〉0．05）。结论p53Arg72Pro三种基因型在诱导细胞凋亡、转录激活以及调节细胞周期方面可能存在差异，p53Arg72Pro多态性可能通过不同的机制引起宫颈癌的发生。

P53和P21^WAF1/CIP1蛋白与上皮性卵巢癌预后关系的探讨

目的探讨P53和P21蛋白表达与上皮性卵巢癌预后的关系。方法108例上皮性卵巢癌标本用于研究，用免疫组化的方法检测P53和P21蛋白表达。结果P53（10w）和P53（high）病人的5a生存率分别为60．47％和29．43％，差异有显著性（P=0．0228）。P21（10w）和P21（high）病人的5a生存率分别为31．58％和47．14％，差异有显著性（P=0．0246）。P53（10w）并且P21（high）病人的预后明显优于其他病人（P=0．0013）。P53蛋白表达与P21蛋白表达呈负相关（P=0．0003）。多因素分析显示P53、P21蛋白联合分析是判断上皮性卵巢癌预后的独立因子。结论联合分析P53、P21蛋白表达在判断上皮性卵巢癌预后上的意义优于单纯检测P53或P21蛋白表达，对临床有指导意义。

DNA损伤生物学反应中ATM对p21^(WAF1/CIP1)蛋白的直接磷酸化

毛细血管扩张性共济失调症突变蛋白 (mutatedinataxiatelangiectasia ,ATM)是直接感受DNA双链断裂损伤并起始诸多DNA损伤信号反应通路的主开关分子 .已有研究发现 ,DNA损伤生物学反应中 ,ATM可通过磷酸化活化p5 3,继而转录活化细胞周期检查点蛋白p2 1WAF1 CIP1的表达 ,而对于ATM是否直接参与p2 1WAF1 CIP1的早期活化迄今尚无实验证明 .通过免疫共沉淀反应 ,检测到细胞电离辐射 (ionizingradiation ,IR)反应早期ATM与p2 1WAF1 CIP1蛋白存在相互作用 .将p2 1WAF1 CIP1蛋白编码基因全长克隆入原核表达载体pGEX4T 2 ,经诱导表达及亲和层析纯化获取GST p2 1融合蛋白作为磷酸化底物 .体外磷酸化实验检测证明 ,IR活化的ATM具磷酸化p2 1WAF1 CIP1蛋白的功能 ,并且此磷酸化功能可被PI3K家族特异性抑制剂Wortmannin所抑制 .结果揭示了IR后ATM可通过直接磷酸化p2 1WAF1 CIP1蛋白 ,在IR致DNA损伤生物学反应早期调控p2 1WAF1

MDM2、p53和p21^(WAF1/CIP1)蛋白在胃癌中的表达及意义

目的 :探讨 MDM2在胃癌中的表达情况以及 MDM2、p5 3和 p2 1W AF 1 /CIP1 在胃癌发生发展中的作用。方法 :应用免疫组化 SABC法检测 94例胃癌 MDM2、 p5 3和 p2 1WAF 1 /CIP1 蛋白的表达情况 ,并对三者之间的关系及其与胃癌临床病理特征的关系进行统计分析。结果 :94例胃癌中未发现有 MDM2的表达。 p5 3及 p2 1WAF1 /CIP1 的阳性表达率分别为 5 6 .38% (5 3/ 94 )和4 1.4 9% (39/ 94 ) ,阳性表达位于癌细胞核。在癌旁不典型增生灶中 ,p5 3有 3例 ,p2 1W AF 1 /CIP1 有 5例阳性 ,癌旁正常黏膜均为阴性。 p5 3和 p2 1WAF1 /CIP1 两者的阳性表达率之间无显著相关性。在性别、年龄、部位、浸润深度、局部淋巴结转移及组织学类型等临床病理指标中 ,p5 3或 p2 1WAF 1 /CIP1 的阳性表达率的差异均无统计学意义。结论 :MDM2在胃癌的发展中不起重要作用 ,而在胃癌发展中起主要作用的是抑癌基因 p5 3的突变。p2 1WAF1 /CIP1 在胃癌中可能是以不依赖 p5 3的途径增高 ,说明癌细胞增生已不受

Survivin、P21^(WAF1/CIP1)及Cyclin D1蛋白表达及与早期宫颈癌复发的关系

目的 :探讨凋亡抑制蛋白Survivin、细胞周期蛋白CyclinD1及细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白P2 1WAF1/CIP1在宫颈癌中的表达及与早期宫颈癌复发的关系。方法 :应用免疫组化S P法 ,检测Survivin、CyclinD1及P2 1WAF1/CIP1蛋白在 5 5例宫颈癌 (鳞癌 4 5例 ,腺癌 10例 )及 10例正常宫颈组织中的表达。结果 :①Survivin、CyclinD1及P2 1WAF1/CIP1蛋白在正常宫颈组织的阳性表达率分别为 0、10 0 %、2 0 0 % ;在宫颈鳞癌中阳性表达率分别为 6 8 9%、5 1 1%、5 7 8% ;在宫颈腺癌中阳性表达率分别为 6 0 0 %、90 0 %、80 0 % ;与正常宫颈组织比较 ,三者在宫颈癌中的阳性表达率明显增高 (P <0 0 5 )。②Survivin或CyclinD1蛋白的表达与鳞癌临床分期及病理分级成正相关 (P <0 0 5 ) ,而P2 1WAF1/CIP1蛋白的表达与其无关 (P >0 0 5 )。③P2 1WAF1/CIP1与Survivin或CyclinD1的共表达仅与病理分级有关 (P <0 0 5 )。而三种蛋白的共表达时与临床分期及病理分级均有关 (P <0 0 5 )。④Survivin、cyclinD1蛋白单独表达与早期宫颈癌的复发有关 (P <0 0 5 ) ,二者的共表达与早期宫颈癌的盆腔淋巴结转移有关(P <0 0 5 )。结论 :Survivin及cyclinD1蛋白在宫颈癌中的表达与临床晚期、分化不良及复?

曲古菌素A调节NB4细胞组蛋白乙酰化和p21^(WAF1/CIP1)表达

目的 研究去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A (trichostatin A, TSA) 对人急性早幼粒细胞白血病细胞NB4组蛋白H3乙酰化水平的调节作用及对细胞周期素依赖性激酶抑制剂 p21WAF1/CIP1 表达的影响。方法 应用 300、150、75、37 5、18 75 nmol/L浓度的TSA分别作用NB4细胞 4、8、12、24、48 h, 提取细胞的总 mRNA和总蛋白, 采用RT PCR技术检测 p21WAF1/CIP1mRNA表达情况, 并用免疫印迹技术 (Western blot) 观察组蛋白 H3 的乙酰化水平变化及 p21WAF1/CIP1蛋白的表达水平。结果 TSA对组蛋白H3乙酰化作用随时间改变而变化; 在低浓度时就可引起组蛋白H3的乙酰化。TSA对 p21WAF1/CIP1 mRNA和 p21WAF1/CIP1 蛋白表达的影响呈时间和剂量依赖性。结论 TSA能够明显上调NB4细胞组蛋白H3的乙酰化水平, 促进细胞周期依赖性激酶抑制剂 p21WAF1/CIP1的表达。

细胞周期素D1和P21^(WAF1/CIP1)蛋白在肺癌组织中的表达

目的 研究细胞周期素 (Cyclin)D1和P2 1 WAF1/CIP1在肺癌组织中的表达及其与肺癌临床分期、组织类型、分化程度及转移和预后的关系。方法 用免疫组化法检测癌旁肺组织及肺癌组织中CyclinD1和P2 1 WAF1/CIP1蛋白的表达。结果 ①CyclinD1和P2 1 WAF1/CIP1在癌旁肺组织中不表达或很少表达 ,而在癌组织中有较高的表达率 ,其阳性表达率分别为 60 .4% (2 9/ 4 8)和 2 7.0 8% (1 3 / 4 8)。②CyclinD1和P2 1 WAF1/CIP1蛋白表达与肿瘤的病理类型和临床TNM分期无关 ;与肺癌组织分化程度有关 ,其中CyclinD1阳性率越高 ,肺癌的分化程度越低 (P <0 .0 5 ) ,P2 1 WAF1/CIP1蛋白阳性率越高 ,肺癌的分化程度越高 (P <0 .0 5 )。③P2 1蛋白阳性表达者转移率低于阴性表达者 (P <0 .0 5 ) ,并且其存活期长 (P <0 .0 5 )。④CyclinD1和P2 1 WAF1/CIP1蛋白的表达呈显著负相关 (P <0 .0 5 )。结论 ①CyclinD1和P2 1 WAF1/CIP1蛋白的表达与肿瘤的组织分化有关 ;②P2

胃癌组织cyclinE和p21^(WAF1/CIP1)蛋白表达的意义

目的 :探讨cyclinE和p2 1WAF1/CIP1蛋白在胃癌发生发展中的作用及其表达的意义。方法 :采用免疫组化S P法检测正常胃黏膜、萎缩性胃炎伴肠上皮化生、萎缩性胃炎伴不典型增生各 2 0例和 78例胃腺癌组织中cyclinE和 p2 1WAF1/CIP1蛋白表达。结果 :cyclinE蛋白阳性表达在胃癌组高于正常胃黏膜、萎缩性胃炎伴肠上皮化生组 ,而 p2 1WAF1/CIP1蛋白表达则相反 ,差异均有显著性 (P <0 0 5 ) ;cyclinE、p2 1WAF1/CIP1蛋白表达与胃癌细胞分化程度相关 (P <0 0 5 ) ;有肝转移的胃癌组cyclinE阳性表达率高于无肝转移组 (P <0 0 5 ) ;有淋巴结转移组 p2 1WAF1/CIP1蛋白表达率低于无淋巴结转移组 (P <0 0 5 )。结论 :cyclinE蛋白高表达与 p2 1WAF1/CIP1蛋白失表达可能参与胃癌的发生发展过程 ,检测cyclinE和p2

重组核心蛋白聚糖转染对HepG2细胞p21^(WAF1/CIP1)表达的影响

目的:将已构建完成的分泌型核心蛋白聚糖真核表达载体转染到HepG2细胞中并检测核心蛋白聚糖及p21WAF1/CIP1的表达,探讨核心蛋白聚糖抗肿瘤作用的机制。方法:HepG2细胞分为转染pcDNA3.1-DCN载体的转染组和转染pcDNA3.1空载体的对照组,脂质体介导核心蛋白聚糖真核表达载体及质粒pcDNA3.1载体分别转染到HepG2细胞中,经G418筛选建立稳定转染的细胞株,采用RT-PCR法检测核心蛋白聚糖和p21WAF1/CIP1mRNA表达;Western blotting法检测核心蛋白聚糖和p21WAF1/CIP1蛋白质的表达;免疫组化法检测核心蛋白聚糖蛋白质的表达。结果:RT-PCR检测转染组细胞核心蛋白聚糖及p21WAF1/CIP1mRNA表达的灰度比值均高于对照组(P<0.05),Western blotting检测核心蛋白聚糖及p21WAF1/CIP1蛋白质表达的灰度比值也高于对照组(P<0.05),免疫组化检测转染组细胞核心蛋白聚糖蛋白质表达的阳性细胞计数高于对照组(P<0.05)。结论:成功建立了稳定转染核心蛋白聚糖的HepG2细胞株,并证实核心蛋白聚糖能够提高p21WAF1/CIP1mRNA和蛋白质的表达。

P21^(WAF1/CIP1)、P16蛋白表达与人脑神经胶质瘤的相关分析

背景与目的:探讨P21WAF1/CIP1、P16两种抑癌基因与人脑神经胶质瘤恶性程度的关系。材料与方法:采用SABC免疫组织化学方法对98例人脑胶质瘤组织及12例正常脑组织标本中P21WAF1/CIP1和P16的表达进行检测,并进行相关分析。结果:P21WAF1/CIP1和P16阳性表达率在人脑胶质瘤中分别为58.16%和42.86%,与正常脑组织中的表达情况差异有统计学意义;P21WAF1/CIP1蛋白和P16蛋白阳性表达率均随着胶质瘤的恶性程度的增高而降低;P21WAF1/CIP1蛋白和P16蛋白可协同表达。结论:P21WAF1/CIP1与P16蛋白的阳性表达率及协同表达率可在一定程度上反映胶质瘤细胞的恶性生物学行为,可以作为一项判断其恶性程度的有效指标。

P53、P21^(WAF/CIP1)和Cyclin D1基因蛋白在沥青烟暴露小鼠肺组织中的表达

[目的]探讨沥青烟对小鼠肺组织形态及基因蛋白P53、P21^(WAF/CIP1)和Cyclin D1表达的影响。[方法]建立沥青烟亚急性染毒小鼠模型,将120只昆明种健康小鼠随机分为3组,即1个对照组和2个染毒组,染毒组进行不同浓度(55、165mg/m^3)和不同时间(30、60d)染毒,光镜下观察肺组织形态改变,采用免疫组化S-P法,对P53、P21、Cyclin D1染色,观察P53、P21和Cyclin D1基因蛋白表达。[结果]不同浓度、不同时间染毒小鼠肺组织形态有不同程度改变,高浓度染毒组出现不典型增生。小鼠肺组织P53基因蛋白表现为低浓度染毒30d组,未见阳性表达;高浓度染毒60d组呈强阳性表达(P<0.01)。P21^(WAF/CIP1)基因蛋白表达低浓度染毒30d呈阳性表达;高浓度染毒60d组表达明显下调(P<0.01)。Cyclin D1基因蛋白表达同P53基因蛋白表达。[结论]随着染毒浓度和染毒时间的增加,肺组织增生逐渐明显,P53和Cyclin D1基因蛋白的表达呈上升趋势,P21^(WAF/CIP1)呈下降趋势。

PSA启动子介导的TAT-p21^(WAF1/CIP1)融合蛋白在前列腺癌细胞中的特异表达及活性初探

目的:设计并构建含有前列腺组织特异性抗原(PSA)启动子的TAT-p21WAF1/CIP1融合蛋白真核表达载体(pPSA-TAT-p21),使由TAT蛋白转导结构域(TAT)介导的抑癌基因蛋白p21WAF1/CIP1(p21)能够在前列腺癌细胞中实现特异性的跨膜转运,增强p21对前列腺癌的抑制作用。方法:利用PCR技术构建含有PSA启动子、TAT蛋白转导序列和p21读码框架的真核表达载体pPSA-TAT-p21,并进行酶切、测序鉴定。脂质体法在前列腺癌LNCaP细胞和大肠癌HT-29细胞中转染上述表达载体及对照质粒后进行反转录PCR(RT-PCR),检测p21的mRNA以及蛋白在不同细胞中的表达情况。MTT法检测转染pPSA-TAT-p21后LNCaP细胞的增殖情况。结果:成功构建pPSA-TAT-p21真核表达载体。RT-PCR和Western blotting结果显示PSA-TAT-p21在前列腺癌细胞中有明显表达,在大肠癌细胞中基本不表达,呈现特异性的表达,而由CMV启动子介导的p21(pCMV-21)对照组在两个细胞株中均有表达。细胞增殖实验结果显示,含有TAT蛋白转导结构域的PSA-TAT-p21的融合蛋白对前列腺癌细胞增殖的抑制作用明显高于不含TAT的PSA-p21蛋白。结论:pPSA-TAT-p21能够在前列腺癌细胞中特异性地高效表达,为前列腺癌基因的靶向治疗提供了实验依据。

细胞周期蛋白D1和p21^(WAF1/CIP1)在喉癌癌变过程中表达及其意义

目的 :研究喉癌变过程中细胞周期蛋白 (cyclin)D1和p2 1WAF1/CIP1表达及其临床病理学意义。方法 :用免疫组化检测 2 0例正常黏膜、 40例不典型增生病变和 6 0例喉癌组织中cyclinD1和p2 1WAF1/CIP1的表达。结果 :①cyclinD1和p2 1WAF1/CIP1阳性表达定位于细胞核。②在喉癌癌变过程中 ,喉正常黏膜、不典型增生病变和喉癌中cyclinD1阳性表达率分别为 :5 0 % (1/ 2 0 ) ,30 ,0 % (12 / 40 ) ,5 3 3% (32 / 6 0 ) (P <0 0 0 1) ;p2 1WAF1/CIP1阳性表达率分别为 :95 0 % (19/ 2 0 ) ,75 0 % (30 / 40 )和 6 3 3% (38/ 6 0 ) (P <0 0 5 )。③p2 1WAF1/CIP1在高、中和低分化的喉癌中阳性表达率分别为 :76 2 % (16 / 2 1) ,6 5 5 % (19/ 2 9)和 30 0 % (3/ 10 ) (P <0 0 5 ) ;p2 1WAF1/CIP1阳性表达与肿瘤细胞的分化有关。④cyclinD1和p2 1WAF1/CIP1阳性表达显著相关。结论 :①喉癌癌变过程中cyclinD1阳性表达率呈逐渐升高的趋势 ,而p2 1WAF1/CIP1阳性表达率呈呈逐渐降低的趋势。②cyclinD1异常表达是喉癌发生中早期分子事件。③p2 1WAF1/CIP1表达与喉癌细胞分化程度有关。④cyclinD1和p2

干扰素诱导蛋白16在结直肠癌中的表达及与p53、p21^(waf1/cip)表达的相关性

目的探讨结直肠癌组织中干扰素诱导蛋白16(IFI16)表达与p53及p21waf1/cip表达间的相关性。方法免疫组化SP法检测56例不同病理组织分化结直肠癌标本IFI16、p53、p21waf1/cip的蛋白表达,Pearson等级相关分析法分析及其表达间的相关性。结果在结直肠癌细胞中IFI16除呈现胞核表达外,尚存在胞质的异位表达。IFI16的表达与p21waf1/cip表达呈正相关(r=0.365,P<0.01),而异位的IFI16与p21waf1/cip表达呈负相关(r=-0.298,P<0.05);IFI16的表达与p53表达无显著相关性(r=0.056,P>0.05)。结论 IFI16可能通过细胞表达及定位调控p21waf1/cip及其下游路径激活参与结直肠癌的发生、发展。

锰对HUVEC-304细胞生长及p53、p21^(WAF1/CIP1)蛋白表达的影响

目的探讨锰对人脐静脉内皮细胞系HUVEC-304细胞生长及p53、p21WAF1/CIP1蛋白表达的影响。方法取指数生长期HUVEC-304细胞,以100、200、400、800μmol/L MnCl2,分别作用24、48、72 h后,以四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色实验检测细胞的存活力,筛选锰对细胞的毒性剂量。流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡,Western blot方法检测p53、p21WAF1/CIP1蛋白的表达。结果100、200、400、800μmol/L MnCl2作用24、48、72 h均对HUVEC-304细胞有显著的抑制作用(P<0.05),且呈剂量-时间效应关系。流式细胞仪检测结果表明锰能诱导HUVEC-304细胞凋亡(P<0.01),Western blot结果显示,随锰浓度的增高,p53蛋白的表达下降(P<0.05);而p21WAF1/CIP1蛋白表达上升,差异有统计学意义(P<0.05),且呈剂量依赖性。结论锰可抑制HUVEC-304细胞的增殖,诱导其发生凋亡,p53蛋白的表达减少及p21WAF1/CIP1蛋白的表达增加是其发生凋亡的机制之一。

胎盘部位滋养细胞肿瘤增殖状况与p21^(WAF1/CIP1)蛋白表达

目的：通过观察胎盘部位滋养细胞肿瘤(PSTT）细胞增殖及p21^(WAF1／CIP1)(p21）蛋白表达状态，了解PSTT生物学行为。方法：应用免疫组织化学方法对8例PSTT增殖细胞核抗原(PCNA）及p21蛋白表达状况进行观察，并与正常胎盘组织、胎盘部位过度反应、绒毛膜癌比较。结果：PSTT的肿瘤细胞阳性细胞指数为(31．25±8．86）％，高于正常胎盘组织及胎盘过度反应(P＜0．01），低于绒癌(P＜0．01）； PSTT肿瘤细胞p21蛋白阳性细胞指数为(9．30±6．69）％，高于胎盘过度反应(P＜0．01），低于绒癌(P＜0．05），与正常胎盘比较无显著差异。结论：从细胞增殖角度观察PSTT为潜在恶性肿瘤，PCNA可做为评估PSTT恶性潜能的重要指标之一。p21蛋白表达可能与滋养层细胞终末分化有关。