CYP27A1对肝细胞癌预后的影响及生物学作用

目的分析细胞色素P450家族27亚家族A成员1(CYP27A1)对肝细胞癌(HCC)预后的影响及生物学作用,并初步探讨其影响HCC生长的分子机制。方法基于癌症基因数据库(TCGA)分析CYP27A1在HCC中的表达情况及其与HCC患者预后的关系;基于CYP27A1表达量中位值,将样本分为CYP27A1高表达组(n=170)与CYP27A1低表达组(n=170),利用基因集富集分析(GSEA)分别对两组进行基因集富集分析;免疫荧光染色检测及数据库查找CYP27A1蛋白亚细胞定位;构建过表达CYP27A1质粒,转染HCC细胞MHCC-97H和HCCLM3,设置阴性对照组(转染空载质粒)与CYP27A1过表达组(转染过表达CYP27A1重组质粒)。采用CCK-8法、流式细胞仪、活性氧(ROS)荧光探针等检测过表达CYP27A1对HCC细胞活力、凋亡及ROS生成的影响;结合生物信息学分析CYP27A1与ROS生成相关基因及HCC增殖相关基因表达的相关性。结果与正常肝组织比较,HCC组织中CYP27A1 mRNA表达量明显降低(P<0.01)。CYP27A1表达与HCC患者性别、T分期、肿瘤分级和肿瘤分期有关(P<0.05)。CYP27A1低表达组总生存率明显低于高表达组(P<0.01)。GSEA富集分析结果显示,CYP27A1低表达组HCC“干性”亚类和“增殖”亚类基因集水平升高。在MHCC-97H和HCCLM3细胞中,CYP27A1主要定位于细胞核;在HepG2细胞中,CYP27A1主要定位于线粒体。与阴性对照组比较,过表达CYP27A1后,HCC细胞活力下降(P<0.01)、ROS水平降低(P<0.05),而细胞凋亡水平无明显改变(P>0.05)。CYP27A1与抑制ROS生成相关基因表达呈正相关(P<0.05),抑制ROS生成相关基因与HCC增殖相关基因表达呈负相关(P<0.05)。结论CYP27A1在HCC中呈低表达,下调CYP27A1可能通过促进ROS生成促进HCC恶性生长。

肝细胞癌患者癌组织TTF-1、p53、p63表达变化及其对术后生存的影响

目的探讨肝细胞癌(HCC)患者癌组织甲状腺转录因子(TTF)-1、p53和p63表达变化及其对术后生存的影响。方法2019年1月~2021年12月我院收治的HCC患者56例,均行肝内肿瘤切除术治疗,术后随访2年。采用免疫组化法检测癌组织和癌旁组织TTF-1、p53和p63表达。结果HCC患者癌组织TTF-1表达阳性率为33.9%,显著低于癌旁组织的73.2%(P<0.05),而p53和p63表达阳性率分别为76.8%和64.3%,显著高于癌旁组织的7.1%和32.1%(P<0.05);34例Ⅰ~Ⅱ期和19例高分化肿瘤患者癌组织TTF-1阳性率分别为47.1%和63.1%,显著高于22例Ⅲ~Ⅳ期和37例中/低分化者的13.6%和18.9%(P<0.05);Ⅲ~Ⅳ期肿瘤、38例有淋巴结转移、21例低分化肿瘤和22例有门静脉癌栓的HCC患者癌组织p53阳性率分别为95.4%、89.5%、100.0%和95.4%,显著高于Ⅰ~Ⅱ期肿瘤、无淋巴结转移、中/高分化和无门静脉癌栓者(分别为64.7%、50.0%、59.5%和64.7%,P<0.05);Ⅲ~Ⅳ期肿瘤、有淋巴结转移和低分化肿瘤组织p63阳性率分别为86.4%、73.7%和85.7%,显著高于Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移和中/高分化者的50.0%、44.4%和48.7%(P<0.05);19例TTF-1阳性者1 a和2 a生存率分别为84.2%和73.3%,显著高于37例阴性者的51.4%和35.1%(P<0.05);43例p53阳性者1 a和2 a生存率分别为53.5%和39.3%,显著低于13例阴性者的92.3%和76.9%(P<0.05);36例p63阳性者1 a和2 a生存率分别为47.2%和33.3%,显著低于20例阴性者的90.0%和75.0%(P<0.05)。结论HCC患者癌组织TTF-1阳性表达率较低,而p53和p63阳性表达率较高,而它们都可能在HCC发病过程中起作用,并影响患者生存率,值得进一步研究。

肝细胞肝癌中LncRNA OSER1-AS1靶向调控miR-433-3p的作用

目的研究肝细胞肝癌(HCC)中长链非编码RNA(LncRNA)氧化应激反应丝氨酸丰富1反义RNA1(OSER1-AS1)靶向调控微小RNA(miR)-433-3p的作用及生物学意义。方法选择唐山市第九医院手术切除的HCC组织和癌旁组织,培养HCC细胞株SMMC-7721、HepG2、MHCC97H及正常肝细胞株HL-7702。检测LncRNA OSER1-AS1、miR-433-3p的表达水平,比较HCC组织与癌旁组织、HCC细胞株与正常肝细胞株中LncRNA OSER1-AS1、miR-433-3p表达水平的差异。对转染MHCC97H细胞进行分组,转染阴性对照(NC)-siRNA为si-NC组,转染LncRNA OSER1-AS1-siRNA为si-OSER1-AS1组,转染LncRNA OSER1-AS1-siRNA及NC miR为si-OSER1-AS1+miR-NC组,转染LncRNA OSER1-AS1-siRNA及miR-433-3p抑制物为si-OSER1-AS1+miR-433-3p抑制物组。检测细胞增殖活力、凋亡率、增殖细胞核抗原(PCNA)及裂解型caspase-3(cleaved caspase-3)的表达水平,采用双荧光素酶报告基因实验验证LncRNA OSER1-AS1靶向miR-433-3p。结果HCC组织中LncRNA OSER1-AS1的表达水平高于癌旁组织(1.77±0.34 vs1.00±0.21)、miR-433-3p的表达水平低于癌旁组织(0.65±0.09 vs 1.00±0.28)(P<0.05)且LncRNA OSER1-AS1与miR-433-3p呈负相关(r=-0.351,P<0.05);HCC细胞株中LncRNA OSER1-AS1的表达水平高于HL-7702细胞、miR-433-3p的表达水平低于HL-7702细胞(P<0.05)且MHCC97H细胞中上述变化最显著。si-OSER1-AS1组MHCC97H细胞中LncRNA OSER1-AS1、PCNA的表达水平及增殖活力低于si-NC组(0.37±0.05 vs 1.00±0.11,0.33±0.05 vs 0.92±0.12,0.51±0.09 vs 1.03±0.12),miR-433-3p、cleaved caspase-3的表达水平及凋亡率高于si-NC组(1.88±0.25 vs 1.00±0.09,0.96±0.11 vs 0.44±0.06,9.39%±1.15%vs 3.82%±0.55%)(P<0.05);si-OSER1-AS1+miR-433-3p抑制物组MHCC97H细胞中cleaved caspase-3表达水平及凋亡率低于si-OSER1-AS1+miR-NC组(0.27±0.05 vs 0.91±0.10,6.04%±0.77%vs 11.32%±1.32%),PCNA的表达水平及增殖活力高于si-OSER1-AS1+miR-NC组(0.94±0.12 vs 0.48±0.06,0.95±0.11 vs 0.34±0.05)(P<0.05)。结论LncRNA OSER1-AS1靶向miR-433-3p调控HCC细胞的增殖和凋亡。

长链非编码RNA PVT1异常表达对肝癌细胞增殖和迁移侵袭的影响

目的探讨长链非编码RNA浆细胞瘤变异易位基因1(PVT1)对肝细胞癌(HCC)细胞增殖和迁移侵袭过程的影响及潜在调控机制。方法检测HCC肿瘤组织和细胞中PVT1和微小RNA-488-3p(miR-488-3p)的表达水平。将MHCC97-H细胞分为Control组(空白未处理)、siRNA组(转染阴性对照siRNA-NC)、siRNA-PVT1组(干扰PVT1表达)和siRNA-PVT1+miR-488-3p inhibitor组(干扰PVT1表达同时抑制miR-488-3p表达)。MTT、划痕愈合实验和Transwell小室实验分别检测MHCC97-H细胞的增殖、迁移和侵袭能力。双荧光素酶报告基因实验验证PVT1与miR-488-3p之间的靶向关系。结果PVT1在HCC组织和细胞中表达水平增高(P<0.05),miR-488-3p在HCC组织和细胞中表达水平降低(P<0.05)。与siRNA组相比,siRNA-PVT1组MHCC97-H细胞增殖活力、划痕愈合率和穿膜细胞数量均降低(P<0.05);与siRNA-PVT1组相比,siRNA-PVT1+miR-488-3p inhibitor组MHCC97-H细胞增殖活力、划痕愈合率和穿膜细胞数量均增加(P<0.05)。PVT1能够靶向负调控miR-488-3p。结论PVT1在HCC组织和细胞系中异常高表达,干扰PVT1表达可能通过上调miR-488-3p表达抑制HCC的增殖、迁移和侵袭。

长链非编码RNA FER1L4在肝细胞癌中调节miR-106a-5p发挥抑癌因子作用的研究

目的:探讨长链非编码RNA FER1L4(lncRNA FER1L4)调节miR-106a-5p的表达影响肝癌细胞增殖、迁移、侵袭能力的可能机制及其临床意义。方法:收集2017~2019年阜阳市第五人民医院及大连大学附属中山医院36例肝细胞癌患者手术标本,采用荧光定量PCR技术(RT-qPCR)分析肝癌细胞和癌旁正常肝细胞中lncRNA FER1L4和miR-106a-5p的表达情况。同时采用RT-qPCR分析肝癌细胞系Huh-7、HepG2和正常肝细胞系L-02中lncRNA FER1L4和miR-106a-5p的表达情况。采用CCK-8法、细胞划痕及集落形成实验等方法测定细胞的增殖、转移和成瘤能力。结果:与正常组织相比,lncRNA FER1L4在肝癌组织中表达较低(P<0.05),而miR-106a-5p表达较高(P<0.05),且两者呈负相关(P<0.0001,R2=0.376);与对照组相比,下调FER1L4肝癌细胞的增殖能力增加(P<0.05),敲除FER1L4肝癌细胞的迁移和侵袭能力增加(P<0.05);与对照组相比,转染FER1L4 siRNA的肿瘤细胞中miR-106a-5p的表达增高(P<0.05),敲除miR-106a-5p的肿瘤细胞中FER1L4的表达增高(P<0.05),两者之间存在相互抑制的关系。结论:lncRNA FER1L4通过抑制miR-106a-5p的表达对肝细胞癌产生抑制作用,单独或联合检测lncRNA FER1L4和miR-106a-5p可能预测肝癌的临床预后。

利用组织芯片研究p21^(WAF1/CIP1)和Rb基因在肝细胞肝癌中的表达

目的:利用组织芯片研究肝细胞肝癌(hepatocelluarcarcinoma,HCC)中p21WAF1/CIP1简称p21、Rb蛋白的表达及两者的关系。方法:建立含40例HCC肿瘤组织及其相应癌旁、远癌正常组织共120个微组织的组织芯片,应用免疫组织化学技术(SP法)检测HCC肿瘤、癌旁、远癌正常组织中p21、Rb蛋白的表达情况。结果:p21蛋白缺失率在HCC肿瘤组织中为27.5%,显著高于癌旁及远癌正常肝组织(P<0.05),并与HCC的组织学分级相关(P<0.05);Rb蛋白缺失率在HCC肿瘤组织中为42.5%,显著高于癌旁和远癌正常肝组织P<0.05,但与HCC肿瘤的大小和组织学分级均无统计学相关性(P>0.05)。HCC肿瘤组织中p21与Rb的表达呈负相关P<0.05。结论:p21、Rb蛋白表达缺失可能与HCC的发生有密切联系,p21与Rb基因在HCC中可能通过负反馈机制相互调节。组织芯片是可高效进行肿瘤分子病理研究的技术平台。

CyclinD1、p21^(WAF1)、p53及Ki-67在肝细胞癌中的表达及与预后的关系

目的探讨肝细胞癌(HCC)中cyclin D1、p21、p53及Ki-67蛋白的表达及其与HCC预后的关系。方法选择2000年1月-2005年1月在解放军总医院行手术切除的80例HCC患者的肝组织标本,采用EliVision法进行cyclin D1、p21WAF1、p53及Ki-67免疫组化染色,分析其表达水平与HCC病理特征的关系,并进行生存分析。结果 Cyclin D1、p21WAF1、p53及Ki-67在HCC中的阳性表达率分别为38.8%、40.5%、65.4%及80.0%,均明显高于癌旁肝组织(分别为19.0%、11.5%、0.0%、6.3%,P<0.005)。相关分析显示,cyclin D1阳性表达与核分级呈正相关(P=0.041),p21WAF1及p53阳性表达与肿瘤分化程度(P=0.032、P=0.031)和血管浸润(P=0.036、P=0.011)呈正相关,Ki-67阳性表达与肿瘤分化程度(P=0.004)、核分级(P=0.045)和血管浸润(P=0.001)呈正相关。生存分析显示,cyclin D1及Ki-67高表达者预后较差。Ki-67阳性表达与p53(P=0.000)及p21WAF1(P=0.047)阳性表达有明显相关性,其他各蛋白之间表达无明显相关。Cox回归模型分析显示,肿瘤大小(P=0.042)、肿瘤数目(P=0.004)及血管浸润(P=0.000)为HCC的独立预后因素。结论 Cyclin D1、p21WAF1、p53及Ki-67可能参与了HCC的生物学进程;cyclin D1及Ki-67阳性表达对HCC预后的判断有一定价值。

口腔鳞状细胞癌cyclin E及p21^waf1蛋白定量检测及意义

目的:探讨口腔鳞状细胞癌(oralsquamous cell cancer,OSCC)cyclin E、p21waf1蛋白表达与抑癌基因p53突变的关系及其临床病理学意义。方法:采用流式细胞术(FCM)对8例正常口腔粘膜及30例OSCC石蜡包埋组织中cyclin E和p21waf1蛋白表达进行定量检测,分析其与突变型p53蛋白表达及临床病理学参数间的关系。结果:OSCC组织cyclinE蛋白平均表达量高于正常口腔粘膜(t=-6.582,P<0.01),过表达率为63.33%(19/30);而p21waf1蛋白平均表达量低于正常口腔粘膜(t=8.126,P<0.01),低表达率为53.33%(16/30);OSCC组织cyclinE/p21waf1比值高于正常口腔粘膜(t=-9.434,P<0.01),异常率为100%(30/30);p53阳性组p21waf1表达量低于p53阴性组(t=3.905,P<0.01),两者间呈负相关(r=-0.491,P<0.05)。p21waf1表达量在OSCC有淋巴结转移组低于无淋巴结转移组(t=3.391,P<0.01),但与OSCC分化无关(P>0.05);而cyclinE表达量与OSCC肿瘤分化及淋巴结转移均无关(P>0.05)。结论:cyclinE蛋白表达上调及p21waf1蛋白表达下调是OSCC常见异常现象,p21waf1蛋白表达下调可能与p53突变有关,并与OSCC淋巴结转移密切相关,G1/S期正负调控因子cyclinE/p21waf1比例失衡在OSCC发生中可能起着重要作用。

肝细胞肝癌组织中P21^(WAF1/CIP1)与PCNA的表达及意义

目的:检测p21WAF1/CIP1与PCNA在肝脏各种病变组织中的表达与分布情况,探讨P21WAF1/CIP1与PCNA在肝细胞癌发病机制中的作用,以及在肝良性与恶性病变鉴别诊断中的价值.方法:采用免疫组织化学方法(DakoEnVisionTMSystems)结合组织病理学观察,检测了36例慢性肝炎?28例不典型增生?52例肝细胞癌组织中的P21WAF1/CIP1与PCNA的表达与分布情况.结果:在慢性肝炎?不典型增生和肝细胞癌组织中,P21WAF1/CIP1阳性检出率明显下降,阳性检出率分别为72.2%(26/36),53.6%(15/28)和26.9%(14/52);三种病变组织中PCNA标记指数明显增加,分别为24.2±6.5%,55.6±7.2%和76.9±10.4%.P21WAF1/CIP1与PCNA的表达在三者之间均存在着显著的差别(P<0.05),明P21WAF1/CIP1与PCNA的表达均与组织分化程度相关,即组织分化程度高,P21WAF1/CIP1表达多;组织分化程度低,P21WAF1/CIP1表达少或不表达;PCNA的表达则相反.结论:在肝细胞癌发病过程中,P21WAF1/CIP1与PCNA的表达均有可能起着重要的作用;同时检测P21WAF1/CIP1与PCNA的表达?分布情况,在肝癌患者预后判断中具有辅助诊断价值.

鲨鱼软骨制剂诱导人肝癌细胞凋亡及p21^(WAF1)和PCNA表达调控的研究

目的 :探讨鲨鱼软骨制剂 (SCP)能否诱导 SMMC772 1细胞凋亡及其机制。方法 :以不同浓度 SCP加入体外培养的 SMMC772 1细胞中 ,用 MTT 比色法 ,荧光显微镜 ,琼脂糖凝胶电泳和免疫细胞化学方法 ,观察SMMC772 1细胞形态学 ,生化和基因表达的变化。结果 :SCP明显抑制 SMMC772 1细胞生长 ,IC5 0 值为 1mg/ m L,荧光显微镜下可见典型的凋亡细胞的形态学改变 ;琼脂糖凝胶电泳呈现梯状条带 (DNA ladder) ;免疫细胞化学检测显示 p2 1WAF 1表达增强 ,PCNA表达减弱。结论 :SCP诱导 SMMC772 1细胞凋亡 ,使 p2 1WAF 1表达上调 ,PCNA表达下降 ,提示

p21^(WAF1)基因介导诱发的人肝癌细胞系的细胞凋亡研究

目的研究外源性ｐ２１ＷＡＦ１基因超表达对ＨＣＣ－９２０４肝癌细胞系的作用和意义。方法通过脂质体介导方式将带有人全长ｐ２１ＷＡＦ１ｃＤＮＡ和潮霉素抗性基因的真核表达载体ＰＣＥＰ转入肝癌细胞中，用潮霉素筛选后，酶联免疫吸附测定（ＥＬＩＳＡ）法检测ｐ２１蛋白的表达情况，使用流式细胞仪检测细胞周期并判定有无细胞凋亡及程度。通过透射电镜进一步观察细胞的超微结构。结果ＥＬＩＳＡ法测定ｐ２１蛋白表达结果，对照组、空载体组和ＷＡＦ１组的吸光度（Ａ）值分别为０．１７５±０．０２、０．１８３±０．０３和０．３３±０．０４，提示转基因后ｐ２１蛋白量却明显增加（Ｐ＜０．０５）。流式细胞仪检测细胞周期表明Ｇ１期细胞显著增加，并在Ｇ１期前出现一凋亡峰，凋亡细胞占细胞总数的２２．５％。透射电镜可见ＷＡＦ１组部分细胞体积缩小，细胞完整，有出芽现象，细胞器结构完整，致密的染色体边集于核膜内侧，呈明显的凋亡细胞的形态。结论本实验成功地将ｐ２１ＷＡＦ１基因转入到培养的肝细胞中，获得了稳定表达ｐ２１蛋白的细胞株；外源性ｐ２１ＷＡＦ１基因的超表达可引起肝癌细胞自发凋亡。通过对该基因的进一步研究可为肝癌防治提供理论依据。

微囊藻毒素促肝癌过程中肝细胞PCNA、p21^(waf1)基因表达研究

目的 探讨微囊藻毒素 (MC)促肝癌的分子机制。方法 采用二阶段致癌理论建立中期试验动物模型 ,γ -GT染色检验MC的促癌作用 ,并以免疫组化法结合图像分析技术精确测定大鼠肝脏PCNA和p2 1waf1基因的表达情况。结果 (1)MC在促大鼠肝癌过程中能显著增加γ -GT阳性率。 (2 )MC在促大鼠肝癌过程中能显著增加大鼠肝脏PCNA基因表达强度和面积。 (3)MC在促大鼠肝癌过程中能显著降低大鼠肝脏 p2 1waf1基因的表达强度和面积。结论 (1)进一步证明MC促癌剂的作用。 (2 )初步明确 ,调节与细胞增殖相关的癌基因和抑癌基因表达是MC促癌过程的重要机制。

罗格列酮激活p38MAPK通路调控p53及p21影响人肝癌HepG2细胞周期

目的研究p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)通路及相关蛋白在罗格列酮引发的人肝癌HepG2细胞周期阻滞过程中的作用。方法 MTT法检测罗格列酮对人肝癌HepG2细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞周期分布,Western blot检测p38MAPK通路相关蛋白的表达变化。结果罗格列酮可抑制HepG2细胞的增殖,并引发G0/G1期阻滞(P<0.05)。Western blot检测结果显示罗格列酮可激活p38MAPK通路,上调HepG2细胞中磷酸化p53蛋白及p21蛋白的表达水平(P<0.05);而ERK1/2及JNK的磷酸化程度没有明显变化。p38MAPK通路抑制剂SB203580可明显减弱罗格列酮对HepG2细胞的增殖抑制及周期阻滞作用;并且SB203580可部分逆转由罗格列酮引发的磷酸化p53及p21蛋白的表达变化。结论罗格列酮可通过激活p38MAPK通路引发人肝癌HepG2细胞周期阻滞,其机制可能与p38MAPK通路激活后参与对磷酸化p53蛋白及p21蛋白的调控有关。

肝细胞癌SCT表现特征与p21^(WAF1)、p16^(INK4)、PCNA关系的研究

目的 探讨肝细胞癌 (HCC)螺旋CT(SCT)表现特征与癌细胞中p2 1WAF1、p16 INK4 及PCNA表达的关系。资料与方法 对 39例 (共 41个病灶 )经手术病理证实且行SCT动、静脉双期增强扫描的HCC患者 ,观察每个病灶SCT表现特征 ,包括肿瘤大小、包膜的形成、侵袭危险性及强化类型。用免疫组织化学方法检测癌组织中p2 1WAF1、p16 INK4 、PCNA的表达情况。分析评价SCT表现特征与这 3种蛋白之间的关系。结果 SCT图像上HCC肿瘤大小、侵袭危险性、强化类型分别与p2 1蛋白、p16蛋白及PCNA有相关性 (P <0 .0 5 ) ,HCC包膜形成与p2 1蛋白、p16蛋白及PCNA无相关性 (P >0 .0 5 )。结论 根据HCC的SCT表现特征 (肿瘤大小、侵袭危险性、强化类型 ) ,可在一定程度上推测p2 1WAF1、p16 INK4 及PCNA表达情况 ,有助于HCC的早期诊断及治疗方案的选择。

肝细胞癌凋亡、p21和PCNA表达与临床预后关系的研究

目的：研究 Ｈ Ｃ Ｃ 细胞凋亡、ｐ２１ 和 Ｐ Ｃ Ｎ Ａ 表达与临床预后的关系。方法：５５ 例 Ｈ Ｃ Ｃ 标本采用 Ｄ Ｎ Ａ末端标记（ Ｔｕｎｅｌ） 和免疫组化检测并结合计算机图像技术定量分析。结果： 小肝癌（ ＜ ５ ｃｍ） Ａ Ｉ高于大肝癌（ Ｐ＜００１） ，肝内转移、浸润性及低分化 Ｈ Ｃ Ｃ 的 Ａ Ｉ分别低于无转移（ Ｐ＜ ００１） 、非浸润性及高分化 Ｈ Ｃ Ｃ（ Ｐ＜ ００５） 。而 Ｐ Ｃ Ｎ Ａ Ｌ Ｉ恰好相反。癌旁组织ｐ２１ 阳性率及ｐ２１ 表达值（ Ｐ Ｕ） 均高于癌组织（ Ｐ＜ ００１） 。并且癌及癌旁组织ｐ２１ 表达值在浸润性及肝内转移 Ｈ Ｃ Ｃ 分别高于非浸润性及无转移 Ｈ Ｃ Ｃ（ Ｐ＜ ００１） 。 Ａ Ｉ 与 Ｐ Ｃ Ｎ Ａ Ｌ Ｉ 呈高度负相关（ｒ＝ ０７２８ ９ ， Ｐ＜ ００１） 。术后生存１ 年以上者其 Ａ Ｉ大于生存１ 年以内者（ Ｐ＜ ００１） ，而 Ｐ Ｃ Ｎ Ａ Ｌ Ｉ和ｐ２１ 表达值却小于生存１ 年以内者（ Ｐ＜ ００５） 。结论： Ａ Ｉ、 Ｐ Ｃ Ｎ Ａ Ｌ Ｉ和ｐ２１ 表达水平与 Ｈ Ｃ Ｃ 的分化、浸润、转移和预后密切相关，可能成为 Ｈ Ｃ Ｃ 预后判断的潜在指标。

肝细胞肝癌p21^(WAF1)与p53的表达及其意义

目的 探讨HCC中p2 1WAF1与p5 3的表达及其意义。方法 应用免疫组化法检测 38例手术切取的HCC及其配对癌旁肝组织、5例正常肝组织中p2 1WAF1和p5 3的表达 ,并分析它们与病理形态的关系。结果 p2 1WAF1、p5 3在HCC中的表达明显高于癌旁肝组织 ,p2 1WAF1阳性 14例 (36 8% ) ,p5 3阳性 2 8例 (73 7% ) ,其中两者表达一致 (均阳或均阴 )的 18例 ,表达不一致的 2 0例。癌旁肝组织 1例 (2 6% )、正常肝组织 2例p2 1WAF1呈阳性表达 ,所有癌旁及正常肝组织中均未见p5 3表达。HCC中p2 1WAF1表达与p5 3表达无明显关系 (P >0 0 5 )。在不同组织学分级、有无肝内转移或门脉癌栓之间p2 1WAF1、p5 3表达差异均无显著性 (P >0 0 5 )。结论 p2 1WAF1与p5 3在癌内表达均高于癌旁 ,但两者间并无相关性 ,提示p2 1WAF1表达可能受p5 3依赖和p5

原发性肝细胞癌组织中p53和p21^(WAF/CIP1)及MDM2蛋白的表达及其临床意义

目的:探讨p53、p21WAF/CIP1及MDM2蛋白在原发性肝细胞癌(hepatocel-lularcarcinoma,HCC)组织中的表达及其临床病理意义。方法:选取115例HCC及其相应的癌旁肝组织构建组织芯片,应用免疫组织化学方法检测p53、p21WAF/CIP1及MDM2蛋白的表达,采用统计学分析它们的表达及其与临床病理参数之间的关系。结果:p53、p21WAF/CIP1及MDM2在HCC组织中的阳性表达率分别为83.5%(96/115)、36.5%(42/115)和48.7%(56/115),同癌旁组织相比,p53、p21WAF/CIP1及MDM2的表达均明显增高,P<0.05。两两相关分析比较,p53表达分别与p21WAF/CIP1和MDM2表达有关;p53、p21WAF/CIP1及MDM2的阳性表达率与患者性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤数量、HB-sAg、病理分级、血清AFP浓度和患者生存时间均无关,P均>0.05。结论:p53、p21WAF/CIP1及MDM2在HCC组织中呈增高表达并具有一定的相关性,提示它们可能在HCC的发生发展中发挥重要的作用。

Gli2在原发性肝细胞癌中的表达及与Cyclin D1、p21的关系

目的探讨原发性肝细胞癌(HCC)中Gli2、Cyclin D1和p21的表达及其意义。方法采用组织芯片和免疫组织化学方法以及RT-PCR检测了44对HCC和相应癌旁肝组织中Gli2蛋白和mRNA的表达情况,应用Western blot检测了Cyclin D1、p21蛋白在两种组织中的表达差异。结果免疫组化染色与RT-PCR示Gli2在HCC组织中的阳性表达率为68.2%,而癌旁肝组织为38.6%,两者差异具有极显著性意义(P<0.01),且Gli2与HCC的组织分化和门静脉转移相关。Cyclin D1蛋白在HCC中的表达显著高于癌旁肝组织(P<0.05),且与Gli2的表达呈正相关;而p21蛋白在癌旁肝组织中的表达显著高于HCC,但与Gli2无明显相关性。结论Gli2过度激活可能通过上调Cyclin D1的表达而使肝癌细胞异常增殖,参与HCC的发生和发展。

肉桂醛对肝癌HepG2细胞p21和CDK4蛋白的影响

目的检测肉桂醛对肝癌HepG2细胞p21和细胞周期依赖性蛋白激酶4(cyclin-dependent kinase 4,CDK4)蛋白表达的影响。方法肉桂醛(3.13、1.56、0.78、0.39、0.20、0.10 g/L)作用肝癌HepG2细胞后,MTT比色法检测HepG2细胞增殖活性和半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC_(50))。流式细胞术检测肉桂醛对HepG2细胞凋亡影响。免疫荧光法检测HepG2细胞p21和CDK4蛋白的表达。结果肉桂醛能抑制HepG2细胞增殖,且呈剂量和时间依赖性,24小时、48小时和72小时IC_(50)值分别为0.68、0.45、0.35 g/L(P<0.01)。肉桂醛组(0.900、0.450、0.225 g/L)肝癌HepG2细胞凋亡率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。肉桂醛能增加p21蛋白和降低CDK4蛋白在HepG2细胞中的表达,各浓度肉桂醛组的p21、CDK4蛋白表达与对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论肉桂醛可抑制人肝癌细胞HepG2的增殖,可能与调节p21和CDK4的蛋白表达有关。

RNA干扰p21对肝癌细胞SMMC-7721增殖的影响

目的:探讨RNA干扰技术沉默p21基因对肝癌细胞SMMC-7721增殖及恶性表型变化的影响.方法:通过慢病毒载体将p21小干扰RNA片段稳定转染入SMMC-7721细胞,通过RT-PCR、Westernblot分别检测p21mRNA和蛋白表达变化,流式细胞仪检测7721-p21RNAi组(感染p21siRNA慢病毒载体组)、7721-NC组(感染阴性对照慢病毒载体组)、7721组(未转染组)细胞生长周期,MTT法检测转染后SMMC-7721细胞生长情况,细胞克隆形成实验检测单细胞锚定依赖性成克隆能力.结果:慢病毒载体可有效介导p21小干扰RNA片段进入SMMC-7721细胞,经RT-PCR及West-ernblot检测,p21小干扰RNA可以明显降低SMMC-7721细胞p21mRNA和蛋白的表达.流式细胞仪检测细胞周期发现,各组G0/G1期比例分别为32.82%±3.27%、61.25%±0.76%、57.77%±4.08%,S期比例分别为42.56%±5.62%,22.91%±1.53%,25.13%±5.11%.经统计学分析,7721-p21RNAi组G0/G1期比例较其余两组下降(P<0.05),S期比例较其余两组升高(P<0.05),而7721-NC组与7721组相比差异无显著性.MTT法检测细胞生长速度发现,与7721-NC和7721组细胞相比,7721-p21RNAi组细胞的生长速度较快,每天的活细胞数目均多于另外两种细胞系(P<0.05).细胞克隆形成实验发现7721-p21RNAi组、7721-NC组及7721组克隆形成数分别为81.24±1.5、51.67±2.08、52.73±1.53个.7721-p21RNAi组克隆形成数明显多于7721-NC组、7721组(P<0.05),7721-NC组克隆形成数与7721组无明显差异.表明p21表达下降可加速SMMC-7721细胞从G1期进入S期,细胞生长速度加快,单细胞锚定依赖性成克隆能力增强.结论:本研究通过RNA干扰技术反向验证了p21具有抑制肝癌细胞生长及细胞周期进程的作用,为下一步深入研究p21抑制细胞增殖的机制及在肝癌发生发展中所起的作用打下了基础.