p21活化激酶在APP/PS1转基因AD小鼠模型海马内表达的年龄变化(英文)

阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)与突触障碍密切相关,p21活化激酶(p21-activated kinase,PAK)在突触功能调节中起重要作用。然而,PAK与AD病理学变化之间的关系,尚不清楚。本实验用分子生物学及组织化学等方法检测了不同周龄APP/PS1转基因AD小鼠模型海马中PAK3(PAK的代表性亚型)、pPAK(磷酸化的PAK)和Aβ42(含42个氨基酸片断的Aβ多肽)的表达水平以及神经元的形态学变化。Western Blot结果显示,海马中PAK3的表达,在不同年龄的APP/PS1转基因AD模型小鼠和非转基因小鼠中,均没有显著性差别;而pPAK表达则出现显著性降低(32周),并且随年龄增长进一步下降。Aβ42的水平在转基因AD小鼠模型海马中增加较早(22周),并随年龄的增长而显著增加。Nissl染色显示,转基因AD小鼠模型海马神经元无明显数量变化;而Golgi银染法显示,转基因AD小鼠模型海马神经元的树突显著变形、紊乱。这些结果说明,在APP/PS1转基因AD小鼠模型PAK表达正常,但PAK的磷酸化过程出现了异常,导致其活性不足。Aβ42的毒性作用可能是导致pPAK活性下降的原因,而pPAK的下降又可能是影响海马神经元树突发育、造成其变形、紊乱的直接原因。

神经细胞粘附分子通过P21活化激酶1促进神经突生长

目的探索神经细胞粘附分子(NCAM)促进神经突生长的分子机制。方法对新生小鼠脑组织行免疫共沉淀以筛选NCAM的结合伴侣。向体外培养的海马神经元中加入免疫共沉淀的阳性筛选分子的抑制剂,观察其对NCAM促进神经突生长作用的影响。提取新生小鼠脑内生长锥以及脂筏,检测NCAM、NCAM的结合伴侣及其上、下游分子在小鼠脑内的空间分布。结果免疫共沉淀发现P21活化激酶1(Pak1)为NCAM的结合伴侣,Pak1抑制剂可以阻断NCAM促进神经突生长的作用。对小鼠脑内脂筏的研究发现NCAM和Pak1上游激活物Pak相互作用交换因子(PIX)、细胞分裂周期蛋白42(Cdc42)在生长锥脂筏上富集,提示NCAM与Pak1的结合以及Pak1的活化可能在脂筏上完成。结论 NCAM通过Pak1途径促进神经突生长,且这一作用的实现可能依赖于脂筏。

宫颈鳞癌组织中P21活化的激酶1和Sprouty相关EVH1域蛋白1表达观察

目的观察宫颈鳞癌组织中P21活化的激酶1(PAK1)、Sprouty相关EVH1域蛋白1(Spred1)的表达变化,并探讨其临床意义。方法采用免疫组化法检测40例健康者、24例宫颈上皮内瘤变Ⅰ级(CINⅠ)患者、31例宫颈上皮内瘤变Ⅱ～Ⅲ级(CINⅡ～Ⅲ)患者、59例宫鳞癌患者的宫颈组织PAK1、Spred1,分析PAK1、Spred1表达与宫颈鳞癌患者临床病理参数的关系。结果 CINⅠ、CINⅡ～Ⅲ、宫颈鳞癌、正常宫颈组织PAK1的阳性表达率分别为29. 17%(7/24)、58. 06%(18/31)、81. 36%(48/59)、17. 50%(7/40),与正常宫颈、CINⅠ组织比较,CINⅡ～Ⅲ、宫颈鳞癌组织PAK1的阳性表达率升高(P均<0. 05),与CINⅡ～Ⅲ组织比较,宫颈鳞癌组织PAK1的阳性表达率升高(P <0. 05)。CINⅠ、CINⅡ～Ⅲ、宫颈鳞癌、正常宫颈组织Spred1的阳性表达率分别为70. 08%(17/24)、32. 26%(10/31)、13. 55%(8/59)、90. 00%(36/40),随宫颈病变程度加重,宫颈组织Spred1的阳性表达率降低(P均<0. 05)。PAK1蛋白表达与宫颈鳞癌患者病理分级、有无淋巴转移有关(P均<0. 05)。Spred1蛋白表达与宫颈鳞癌患者病理分级有关(P <0. 05)。不同病变程度宫颈组织PAK1与Spred1表达呈负相关(r=-0. 440,P=0. 000)。结论与正常宫颈组织相比,宫颈上皮内瘤变宫、颈鳞癌组织中PAK1表达升高、Spred1表达降低;随宫颈病变程度加重,宫颈组织PAK1表达升高、Spred1表达降低。PAK1与Spred1呈负调控作用,在宫颈鳞癌的发生、发展中发挥重要作用。

p21活化蛋白激酶与心血管疾病:从病理生理学到药物发现(英文)

在全世界范围内,心血管疾病的发病率和死亡率一直都是排在首位的。从心脏信号转导这一新兴领域寻找新疗法的可能性促使人们在过去几十年中对心肌重塑开展了广泛深入研究。本综述将对一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶——p21活化激酶1(Pak1)——在心脏方面,特别是其心脏保护作用的研究进展作一回顾。我们提出一种Pak1信号转导模型,揭示其特异性影响心脏细胞进程的机制;进而从抗心肌肥厚,抗缺血性损伤以及在生理条件、β-肾上腺素能和肥厚性应激条件下维持心室钙稳态和电生理稳定性的角度探讨它的心脏保护作用。此外,还将通过天然存在的鞘氨醇及其类似物FTY720,以及旨在减少Pak1自抑制而设计的生物活性肽的研究实例来讨论Pak1激活作为心血管疾病新型疗法以及开展药物研发的可能性。

血红素氧合酶-1及p38丝裂原活化蛋白激酶在脓毒症患者血清中的表达及意义

目的:观察脓毒症患者血清中血红素氧合酶(HO)-1及p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)表达的变化,探讨其在病程进展及预后中的意义。方法:选取脓毒症患者45例,根据预后将其分为存活组(31例)及死亡组(14例),另选取同期健康体检者50例作为对照组。通过逆转录聚合酶链反应和Western Blot技术分别检测3组血清HO-1及p38 MAPK的表达水平。结果:与对照组比较,死亡组与存活组患者的血清HO-1 mRNA及蛋白表达均明显上升(P <0. 01),且死亡组高于存活组(P <0. 05)。死亡组与存活组患者的p38 MAPK蛋白表达均明显高于对照组(P <0. 01),且死亡组明显高于存活组(P <0. 05)。结论:脓毒症患者血清HO-1和p38 MAPK的mRNA及蛋白表达明显高于对照组,HO-1和p38 MAPK表达水平可提示病情严重程度及预后。

P21活化激酶1的分子结构与功能的生物信息学分析

目的:探讨P21活化激酶1(PAK1)作为多种恶性肿瘤潜在的预后标志物和治疗靶点的潜在功能机制及其参与的信号通路。方法:从NCBI数据库获取PAK1基因序列及编码蛋白序列,通过生物信息学方法研究PAK1基因的DNA序列、RNA结构及该蛋白的理化性质、亚细胞定位、信号肽与跨膜区域、互作蛋白、系统发育等。结果:人的PAK1蛋白是酸性疏水蛋白,无信号肽和跨膜区域,定位于细胞核的可能性较大,主要的二级结构为α-螺旋结构和无规卷曲体,属于α-淀粉酶催化结构域超家族和碳水化合物结合模块20超家族。与PAK1相互作用的蛋白主要有RAC1、RAC3、Cdc42、FLNA和ARHGEF7。结论:本研究对PAK1基因结构及其蛋白质的亚细胞定位、三级结构和潜在的分子功能等进行了预测分析,为以后开展实验研究PAK1的功能奠定基础。

P21活化激酶1在肾癌组织中的表达及其临床意义分析

目的分析P21活化激酶1(PAK1)在肾癌组织中的表达及其临床意义。方法选取75例肾癌患者的芯片(HKidE150CS03),采用免疫组织化学染色方法进行PAK1检测。比较肾癌不同组织(癌旁组织和癌组织)中PAK1阳性检出率及不同分期、不同病理分化程度PAK1阳性检出率。结果癌组织中PAK1阳性检出率为84%,高于癌旁组织中的12%,差异有统计学意义(P<0.05)。Ⅰ~Ⅱ期患者PAK1阳性检出率为77.36%,Ⅲ~Ⅳ期患者PAK1阳性检出率为100.00%;Ⅲ~Ⅳ期患者PAK1阳性检出率高于Ⅰ~Ⅱ期患者,差异有统计学意义(χ^2=5.930, P<0.05)。病理高分化患者PAK1阳性检出率为92.59%,中低分化患者PAK1阳性检出率为89.58%,比较差异无统计学意义(χ^2=0.185, P>0.05)。结论 PAK1蛋白在肾癌的发生发展和浸润转移中有促进作用, PAK1高表达可能成为肾癌诊断、侵袭性和预后判断的重要生物学参考指标,因此临床检测中,可将PAK1蛋白表达水平作为肾癌发展程度的预测因子。

PAK1基因3′-UTR区荧光素酶报告基因载体的构建及鉴定

目的针对人p21小GTP酶活化激酶1(p21-activated kinase-1,PAK1)基因的3′端非翻译区(3′-untranslated region,3′-UTR)构建PAK1的荧光素酶报告基因载体,并对其进行鉴定和筛选,为后续PAK1与microRNA-145(miR-145)的功能和机制研究提供实验基础。方法用PCR法扩增出PAK1基因3′-UTR片段,经连接、酶切插入到pGL3载体上,构建了PAK1 3′-UTR荧光素酶报告基因载体。通过生物信息学方法预测miR-145可能靶向作用于PAK1基因的3′-UTR,后将上述重组质粒以及miRNA mimics(miRNA模拟物)、miRNA-Con(miRNA control,miRNA阴性对照)瞬转到膀胱癌T24和J82细胞系中,并检测其相对荧光素酶活性。另外,利用实时定量PCR法检测不同实验组中PAK1的表达情况。结果成功构建了重组pGL3-PAK1 3′-UTR WT质粒,并通过双酶切以及测序的方法验证所得结果的正确性。且转染pGL3-PAK1 3′-UTR WT质粒后,T24/miR-145组和J82/miR-145的相对荧光素酶活性显著低于T24/miR-con和J82/miR-con组,差异有统计学意义(P<0.05)。另外,通过实时定量PCR法发现,miR-145mimics组的PAK1表达水平显著低于miR-145con组。结论成功构建了PAK1基因3-UTR区荧光素酶报告载体,且miR-145能够显著降低其荧光素酶活性,提示miR-145能靶向负调控PAK1的表达。

计算机辅助复方苦参注射液中抑制p21活化激酶1的活性成分预测及分子机制研究

靶向p21活化激酶1(PAK1)是胰腺癌治疗的新策略。复方苦参注射液中含有多种抗胰腺癌成分,但具体作用靶点未知。本研究基于分子对接的虚拟筛选发现,复方苦参注射液中的14α-羟基苦参碱与PAK1的别构调节位点具有较高的结合自由能。分子动力学模拟发现,14α-羟基苦参碱使PAK1的α1和α2螺旋向外延伸形成一个较深的别构调节口袋,同时诱导三磷酸腺苷(ATP)结合口袋处的β-折叠向内关闭,导致ATP结合口袋处于“半闭合”状态而失活。当去除14α-羟基苦参碱后,PAK1从失活构象向活性构象转变,因此推测,14α-羟基苦参碱可能是PAK1的可逆别构调节抑制剂。本研究采用现代技术方法对中药活性成分进行研究,为天然产物的开发利用及寻找新的胰腺癌治疗方案奠定基础。

曲古菌素A调节NB4细胞组蛋白乙酰化和p21^(WAF1/CIP1)表达

目的 研究去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A (trichostatin A, TSA) 对人急性早幼粒细胞白血病细胞NB4组蛋白H3乙酰化水平的调节作用及对细胞周期素依赖性激酶抑制剂 p21WAF1/CIP1 表达的影响。方法 应用 300、150、75、37 5、18 75 nmol/L浓度的TSA分别作用NB4细胞 4、8、12、24、48 h, 提取细胞的总 mRNA和总蛋白, 采用RT PCR技术检测 p21WAF1/CIP1mRNA表达情况, 并用免疫印迹技术 (Western blot) 观察组蛋白 H3 的乙酰化水平变化及 p21WAF1/CIP1蛋白的表达水平。结果 TSA对组蛋白H3乙酰化作用随时间改变而变化; 在低浓度时就可引起组蛋白H3的乙酰化。TSA对 p21WAF1/CIP1 mRNA和 p21WAF1/CIP1 蛋白表达的影响呈时间和剂量依赖性。结论 TSA能够明显上调NB4细胞组蛋白H3的乙酰化水平, 促进细胞周期依赖性激酶抑制剂 p21WAF1/CIP1的表达。

LncRNA SNHG3通过miR-330-5p/PAK1信号轴调节前列腺癌细胞的增殖、凋亡和上皮间质转化

目的 探讨长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因(LncRNA SNHG)3通过miR-330-5p/P21活化激酶(PAK)1信号轴调节前列腺癌细胞的增殖、凋亡和上皮间质转化。方法 体外培养人前列腺上皮细胞和人前列腺癌细胞株PC-3、DU 145、VCaP,通过实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测各细胞中LncRNA SNHG3、miR-330-5p与PAK1 mRNA表达。体外培养人前列腺癌细胞PC-3,随机分为对照组、LncRNA SNHG3 siRNA组、miR-330-5p inhibitor组、共转染阴性对照(LncRNA SNHG3 siRNA阴性对照+miR-330-5p inhibitor阴性对照)组、共转染(LncRNA SNHG3 siRNA+miR-330-5p inhibitor)组,分组转染LncRNA SNHG3 siRNA及其阴性对照、miR-330-5p inhibitor及其阴性对照后,以噻唑蓝(MTT)和5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(EdU)染色法检测PC-3细胞增殖情况;以流式细胞术检测PC-3细胞凋亡情况;以Transwell实验检测PC-3细胞侵袭情况;以qRT-PCR检测PC-3细胞miR-330-5p、PAK1与上皮间质转化因子E-钙黏附蛋白(cadherin)、波形蛋白(Vimentin)表达;以双荧光素酶报告基因实验检测PC-3细胞中LncRNA SNHG3对miR-330-5p的靶向调控作用。结果 与人前列腺上皮细胞比较,PC-3、DU 145、VCaP细胞中LncRNA SNHG3、PAK1 mRNA表达明显升高,miR-330-5p表达明显降低(P<0.05)。与对照组、共转染组分别相比,LncRNA SNHG3siRNA组细胞活力与相对增殖率、细胞Vimentin与PAK1 mRNA表达、侵袭细胞数均明显降低,细胞凋亡率、细胞miR-330-5p、E-cadherin mRNA表达均明显升高(均P<0.05);miR-330-5p inhibitor组细胞活力与相对增殖率、细胞Vimentin与PAK1 mRNA表达、侵袭细胞数均明显升高,细胞凋亡率、细胞miR-330-5p、E-cadherin mRNA表达均降低(P<0.05);共转染阴性对照组细胞各指标均无显著差异(P>0.05)。在PC-3细胞中,LncRNA SNHG3可靶向下调miR-330-5p表达。结论 下调LncRNA SNHG3可通过上调miR-330-5p表达而降低PAK1表达,进而抑制前列腺癌细胞增殖、迁移和上皮间质转化,诱导其凋亡。

息肉样脉络膜视网膜病变患者泪液p38 MAPK mRNA、 Sirt1 mRNA水平与康柏西普治疗效果的关系

目的探讨息肉样脉络膜视网膜病变(PCV)患者泪液p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)mRNA、沉默信息调节因子2相关酶1(Sirt1)mRNA水平与康柏西普治疗效果的关系。方法选取2020年8月至2022年4月该院94例PCV患者作为观察组,根据康柏西普治疗效果分为效果良好亚组、效果较差亚组,选取同期年龄、性别匹配的健康体检者94例作为对照组。2组均检测泪液p38 MAPK mRNA、Sirt1 mRNA及血管内皮生长因子(VEGF)水平。分析泪液p38 MAPK mRNA、Sirt1 mRNA水平与VEGF的相关性。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析泪液p38 MAPK mRNA、Sirt1 mRNA及VEGF对康柏西普治疗效果的预测价值。采用多因素Logistic回归分析康柏西普治疗效果的影响因素。结果观察组治疗前、治疗12周泪液p38 MAPK mRNA及VEGF水平高于对照组,Sirt1 mRNA水平低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);观察组治疗12周泪液p38 MAPK mRNA及VEGF水平低于治疗前,Sirt1 mRNA水平高于治疗前,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗前、治疗12周泪液p38 MAPK mRNA水平与VEGF水平呈正相关(r=0.717、0.338,P<0.001),治疗前、治疗12周泪液Sirt1 mRNA水平与VEGF水平呈负相关(r=-0.766、-0.396,P<0.001)。94例PCV患者随访1年,息肉完全消退率为40.66%。效果较差亚组治疗前、治疗12周p38 MAPK mRNA及VEGF水平高于效果良好亚组,Sirt1 mRNA水平低于效果良好亚组,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗12周泪液p38 MAPK mRNA、Sirt1 mRNA及VEGF联合预测PCV患者康柏西普治疗效果的曲线下面积(AUC)大于单项指标预测的AUC(P<0.05)。p38 MAPK mRNA、Sirt1 mRNA均是PCV患者康柏西普治疗效果的影响因素(P<0.05)。结论PCV患者p38 MAPK mRNA、Sirt1 mRNA表达异常,二者均与康柏西普治疗效果有关。

PAK1和NF2/Merlin的拮抗作用驱动少突胶质细胞髓鞘膜扩张

在中枢神经系统中,少突胶质细胞(OL)髓鞘的形成依赖于肌动蛋白细胞骨架从聚合到解聚的转变。触发这种转变的分子机制尚未阐明。本研究确定P21活化激酶1(PAK1)是OL中肌动蛋白解聚的主要调节因子。我们的结果表明,PAK1以激酶抑制形式在OL中积累,从而触发肌动蛋白分解,进而导致髓鞘膜扩张。值得注意的是,PAK1结合伙伴的蛋白质组学分析使我们能够确定NF2/Merlin是其内源性抑制剂。本研究表明,OL中的Nf2敲低会导致PAK1活化、肌动蛋白聚合和OL髓鞘膜扩张减少。通过使用PAK1抑制剂治疗可以挽救这种影响。本研究还提供了证据表明,少突胶质细胞中特定的Pak1功能丧失会刺激体内髓鞘增厚。总体而言,我们的数据表明PAK1和NF2/Merlin对OL肌动蛋白细胞骨架的拮抗作用对于髓鞘的正常形成至关重要。这些发现对研究脱髓鞘疾病和神经发育障碍的机制和治疗有着重要意义。

迁移侵袭抑制蛋白和p21活化激酶1在子宫内膜癌中的表达及其临床意义

目的探讨迁移侵袭抑制蛋白（MIIP）和p21活化激酶1（PAK1）在子宫内膜癌组织中的表达，分析其与子宫内膜癌患者临床病理特征及预后的关系。方法采用免疫组化SP法检测135例子宫内膜癌、55例不典型增生和88例正常子宫内膜组织中MIIP和PAK1蛋白的表达，分析子宫内膜癌组织中MIIP和PAK1蛋白表达的临床意义及二者的相关性。 结果正常子宫内膜组、不典型增生组和子宫内膜癌组MIIP的阳性表达率分别为52.3%（46/88）、41.8%（23/55）和34.8%（47/135），子宫内膜癌组明显低于正常子宫内膜组（P〈0.05）。MIIP蛋白的表达与肌层浸润、国际妇产科联盟（FIGO）分期和淋巴结转移情况有关（均P〈0.05）。正常子宫内膜组、不典型增生组和子宫内膜癌组的PAK1阳性表达率分别为45.5%（40/88）、50.9%（28/55）和62.2%（84/135），子宫内膜癌组显著高于正常子宫内膜组（P〈0.05）。PAK1蛋白的表达与组织学分级、肌层浸润、FIGO分期和淋巴结转移情况有关（均P〈0.05）。MIIP和PAK1蛋白的表达与患者的累积生存率无关（P值分别为0.092和0.052）。子宫内膜癌组织中MIIP与PAK1蛋白的表达呈负相关（r=-0.329，P〈0.001）。结论MIIP的低表达和PAK1的过表达共同参与了子宫内膜癌的发生、发展，与子宫内膜癌的不良预后有关。MIIP和PAK1蛋白在子宫内膜癌中的表达呈负相关。

PAK4-LIMK1-Cofilin信号通路对非小细胞肺癌迁移及侵袭能力的影响

目的:探讨p21活化激酶4(PAK4)对非小细胞肺癌(NSCLC)侵袭和迁移能力的影响及相关机制。方法:PAK4-siRNA或阴性对照转染A549和NCI-H520细胞株,实时荧光定量PCR和Western blot分别检测细胞PAK4 mRNA和蛋白表达水平,Transwell小室法检测其对细胞侵袭和迁移能力的影响;Western blot检测其LIMK1、cofilin及其磷酸化水平;免疫共沉淀检测PAK4和LIMK1蛋白是否直接绑定;体外激酶分析实验检测LIMK1是否是PAK4的激酶底物;Western blot检测10例非小细胞肺癌组织中PAK4和磷酸化LIMK1的相关性;PAK4-siRNA和LIMK1质粒共转染A549和NCI-H520细胞后观察细胞迁移和侵袭能力变化。结果:沉默PAK4后A549和NCIH520细胞迁移和侵袭能力明显减弱(P<0.05);LIMK1和cofilin蛋白水平无显著变化,而磷酸化LIMK1和磷酸化cofilin水平显著下调;免疫共沉淀结果示PAK4与LIMK1相互绑定;激酶分析实验结果显示,激酶缺陷型PAK4(K350M)使LIMK1磷酸化的作用显著低于野生型PAK4或活化型PAK4(S445N)(P<0.05)。Western blot检测结果示非小细胞肺癌组织中PAK4表达上调的程度与磷酸化LIMK1含量呈正相关(P<0.05);PAK4-siRNA和LIMK1质粒共转染A549和NCI-H520细胞后,迁移和侵袭细胞数均高于PAK4-siRNA转染组(P<0.05)。结论:PAK4通过直接磷酸化LIMK1而促进非小细胞肺癌的迁移及侵袭能力。

AMPK、p38 MAPK信号通路参与调控电刺激诱导骨骼肌细胞PGC-1α基因表达

目的采用急性电刺激(acute electrical stimulation)C2C12成熟肌管细胞模型,结合使用相关信号激酶通路特异性抑制剂,探究急性电刺激所诱发的细胞内信号激酶对PGC-1α基因表达的调控作用。旨在从细胞水平揭示肌肉收缩刺激调控PGC-1α基因表达的分子机制。方法体外培养小鼠成肌细胞系C2C12细胞,采用脂质体法分别转染含小鼠PGC-1α启动子DNA全序列的质粒(p2533)及装载有能够与PGC-1α全长基因序列相结合GAL4DNA结合区域的p Bind载体,细胞在转染后分化5-6 d形成成熟肌管,5 Hz,10 V强度急性电刺激2 h后即刻收集各组细胞,进行总蛋白或双荧光素酶检测。抑制剂处理组分别采用40μM Compound C(CC,AMPK抑制剂)与10μM BIRB796(BIRB,p38抑制剂)处理细胞。结果与对照组(CON)相比,电刺激组(STIM)细胞PGC-1α启动子活性显著增高52%(P<0.05),PGC-1α辅激活转录活性显著增高35%(P<0.05),同时伴随PGC-1α蛋白由细胞质向细胞核迁移的现象。此外,与CON组相比,STIM组细胞AMPK、p38信号激酶通路磷酸化水平显著上调(P<0.05),在分别采用AMPK、p38抑制剂处理后,其磷酸化水平显著受到抑制(P<0.01)。结论急性电刺激可诱导骨骼肌细胞PGC-1α转录水平以及翻译后蛋白水平活性上调,这一作用部分是通过AMPK或p38信号通路实现的。

IQGAP1在人骨髓瘤细胞中过表达且与ERK相互作用

目的:探讨含IQ模序的GTP酶活化蛋白1(IQ motif-containing GTPase-activating protein 1,IQGAP1)在骨髓瘤细胞中的过表达及其机制。方法:RT-PCR和Western blotting检测RPMI8226和U266细胞IQGAP1表达;使用不同的寡核苷酸序列构建沉默人IQGAP1的shRNA质粒(clone 1、clone 2、clone 3和clone 4)、转染RPMI8226细胞,RT-PCR和Western blotting检测其IQGAP1表达;Western blotting检测RPMI8226-shIQGAP1组(clone 1)、RPMI8226-shRNA阴性对照组和RPMI8226未转染组细胞p-ERK1/2、ERK1/2、Akt、p-AKT、STAT3和p-STAT3水平,免疫共沉淀确定IQGAP1和ERK的关系。结果:IQGAP1在RPMI8226和U266骨髓瘤细胞株中过表达,使用shRNA表达质粒沉默RPMI8226细胞IQGAP1后,IQGAP1表达减少,在有或无血管内皮生长因子(VEGF)/白细胞介素6(IL-6)作用下检测RPMI8226-shIQGAP1组(clone 1)细胞增殖明显下降。进一步检测3组细胞p-ERK1/2、ERK1/2、AKT、p-AKT、STAT3和p-STAT3蛋白水平,与RPMI8226-shRNA阴性对照组和RPMI8226未转染组相比,RPMI8226-shIQGAP1组ERK1/2磷酸化水平下降70.2%,免疫共沉淀法明确在RPMI8226细胞中IQGAP1和ERK存在相互作用。结论:IQGAP1在骨髓瘤细胞中的过表达可能与MAPK途径的ERK相互作用有关。

表没食子儿茶素没食子酸酯对人大肠癌株SW620增殖的抑制及与PAK1基因表达的相关性研究

目的观测表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)对人大肠癌SW620细胞增殖及SW620细胞表达PAK1的影响。方法用终浓度为40μmol/L、60μmol/L和80μmol/L的EGCG干预人大肠癌细胞株SW620,在0、24、48和72h不同时间点上用噻唑蓝(MTT)比色法检测EGCG对SW620细胞生长的影响;并以SW620细胞空白组为对照,用蛋白免疫印迹(Western blot)检测不同EGCG作用48h时SW620细胞PAK1的表达水平变化。结果EGCG对大肠癌SW620细胞增殖有显著的抑制作用,而且与SW620细胞空白对照组相比,EGCG处理组细胞的PAK1蛋白表达受到显著抑制。结论EGCG抑制大肠癌SW620细胞增殖的机制可能与EGCG通过调控大肠癌细胞的PAK1表达相关。

沉默p21活化激酶1表达对人黑素瘤A375细胞凋亡及侵袭能力的影响

目的探讨shRNA沉默p21活化激酶1(p21-activated kinase 1,PAK1)基因表达对人黑素瘤A375细胞凋亡、迁移及侵袭能力的影响.方法对数生长期人黑素瘤A375细胞随机分为转染组(转染PAK1特异性shRNA)、阴性对照组(转染NC-shRNA)、空白对照组(不进行转染).转染后培养72 h,采用实时荧光定量PCR法检测A375细胞PAK1mRNA相对表达量,采用Western blot法检测A375细胞PAK1及p-PAK1蛋白相对表达量,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,采用Transwell小室实验检测细胞迁移、侵袭能力.结果转染后培养72 h,转染组PAK1 mRNA相对表达量(0.45±0.07)、PAK1蛋白相对表达量(0.53±0.01)、p-PAK1蛋白相对表达量(0.21±0.03)均低于阴性对照组(0.98±0.04、0.65±0.02、0.38±0.04)、空白对照组(1.00±0.08、0.67±0.51、0.36±0.02)(P<0.05),细胞凋亡率[(11.20±0.21)%]高于阴性对照组[(5.86±0.51)%]、空白对照组[(5.43±0.03)%](P<0.05),迁移细胞数[(47.00±2.23)个]、侵袭细胞数[(30.00±4.44)个]较阴性对照组[(76.00±4.85)、(54.00±3.67)个]、空白对照组[(77.90±4.97)、(56.00±4.12)个]少(P<0.05),阴性对照组上述各指标与空白对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05).结论沉默PAK1基因表达可促进人黑素瘤A375细胞凋亡,降低其迁移及侵袭能力.

Rac1和Pak1在胃癌中的表达及意义

目的:探讨胃癌组织中Ras相关的C3肉毒素底物1(Ras related C3 botulinum toxinsubstrate 1,Racl)和p21蛋白活化激酶1(p21-activated kinase 1,Pak1)蛋白的表达特点及其与胃癌侵袭、转移的关系。方法:收集60例胃癌及20例癌旁正常组织标本,采用免疫组织化学方法检测Rac1和Pak1的蛋白表达水平。结果:在胃癌组织中Rac1和Pak1的表达阳性率均高于周围正常组织(P<0.05);Rac1和Pak1的表达呈正相关(r=0.383,P<0.01),它们的表达均与肿瘤分化程度、浸润深度、Lauren分型和有无淋巴结转移有关。结论:Rac1和Pak1的表达与胃癌浸润、转移密切相关,并有可能作为反映其生物学行为的一种新型标志物。