PAK6低表达对乳腺癌细胞增殖、迁移的影响及机制

目的观察p21激活激酶6(PAK6)低表达对乳腺癌细胞增殖、迁移的影响,并探讨其作用机制。方法常规培养人正常乳腺上皮细胞(MCF-10A)及乳腺癌细胞系(MDA-MB-435S、MCF-7、MDA-MB-361),用qRT-PCR法检测各细胞中PAK6 mRNA表达,乳腺癌细胞中PAK6 mRNA相对表达量均高于MCF-10A,其中MCF-7中最高,将MCF-7作为实验细胞。将MCF-7随机分为si-NC组、si-PAK6组,分别用脂质体2000转染NC siRNA(对照小干扰RNA)和抑制PAK6表达的小干扰RNA(PAK6 siRNA)。转染24 h收集细胞,用qRT-PCR法检测细胞内PAK6 mRNA表达,CCK-8法检测细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞转移能力,Western blotting法检测细胞内磷酸化PI3K(pPI3K)、磷酸化AKT(pAKT)蛋白表达。结果si-NC组、si-PAK6组PAK6 mRNA相对表达量分别为1.06±0.12、0.45±0.08。与si-NC组比较,si-PAK6组PAK6 mRNA相对表达量低(P<0.05)。si-NC组、si-PAK6组细胞增殖率分别为(100.00±0.00)%、(47.37±7.41)%。与si-NC组比较,si-PAK6组细胞增殖率低(P<0.05)。si-NC组、si-PAK6组穿膜细胞数分别为(89.63±8.37)、(28.58±5.21)个。与si-NC组比较,si-PAK6组穿膜细胞数少(P<0.05)。pPI3K蛋白在si-NC组、si-PAK6组的相对表达量分别为1.42±0.20、0.75±0.11,pAKT蛋白相对表达量分别为1.59±0.18、0.81±0.14。与si-NC组比较,si-PAK6组pPI3K、pAKT蛋白相对表达量均低(P均<0.05)。结论抑制PAK6表达可阻止乳腺癌细胞增殖、迁移,其作用机制与抑制PI3K/AKT信号通路激活有关。

基于PAK6和Wnt/β-catenin信号通路的苦参碱对肺癌放疗敏感性的影响研究

目的探究苦参碱对肺癌放疗敏感性的影响和作用机制。方法人非小细胞肺癌A549细胞分为对照组、2 Gy放疗组、4 Gy放疗组、苦参碱组、苦参碱联合2 Gy组、苦参碱联合4 Gy组、甘氨双唑钠联合2 Gy组、甘氨双唑钠联合4 Gy组,通过克隆形成、细胞增殖、细胞凋亡评价苦参碱对A549细胞放疗敏感性的影响;建立裸鼠皮下移植瘤模型,分为对照组、5 Gy放疗组、苦参碱组、苦参碱联合5 Gy组、甘氨双唑钠联合5 Gy组,记录小鼠瘤体积;Western blotting法检测A549细胞和小鼠瘤组织中β-连环蛋白(β-catenin)、p21激活蛋白激酶6(p21-activated protein kinase,PAK6)、c-myc、半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)的表达。结果与单独放疗组相比,苦参碱联合放疗组A549细胞克隆形成、细胞增殖显著降低(P<0.001),细胞凋亡显著增加(P<0.001),裸鼠肿瘤体积显著降低(P<0.001),细胞和裸鼠肿瘤组织中PAK6、c-myc、磷酸化β-catenin蛋白表达显著下调(P<0.05、0.01、0.001),Caspase-3蛋白表达显著上调(P<0.001)。结论苦参碱通过干扰PAK6表达,抑制Wnt/β-连环蛋白(Wnt/β-catenin)信号通路,从而提高肺癌的放疗敏感性。

PAK6表达与乳腺癌放疗患者放疗敏感性的关系

目的探讨P21激活蛋白激酶6(PAK6)表达与乳腺癌放疗患者放疗敏感性的关系。方法以MDA-MB-453乳腺癌细胞株为未转染组,小干扰RNA(siRNA)为对照组,细胞转染PAK6 siRNA为观察组,采用Western印迹及QRT-PCR检测各组PAK6表达情况,并分别给予每组单次0、1、3、5 Gy的放射治疗剂量,采用CCK-8检测细胞增殖情况,采用流式细胞仪监测细胞凋亡情况。采用Western印迹检测细胞中酶切Caspase-3蛋白水平。结果未转染组与对照组PAK6蛋白、PAK6 mRNA水平均高于观察组(P均<0.05);未转染组与对照组在0、1、3、5 Gy放疗剂量下乳腺癌细胞增殖高于观察组(P<0.05),乳腺癌细胞凋亡低于观察组(P<0.05);观察组酶切Caspase-3表达水平高于未转染组与对照组(P<0.05);相对未转染组与对照组,观察组细胞存货分数降低,放疗增敏比为1.774。结论干扰乳腺癌细胞中PAK6表达,能抑制乳腺癌细胞增生,促进乳腺癌细胞凋亡,增加乳腺癌患者放疗敏感性,其机制可能与PAK6的表达水平会影响酶切Caspase-3蛋白水平有关。