不同月龄p21^HBsAg/HBsAg和p21^HBX/HBX转基因小鼠血清酶含量的测定

目的测定p21HBsAg/HBsAg和p21HBX/HBX转基因小鼠纯合型及野生型小鼠的血清酶,探讨各种血清酶在两种纯合型小鼠及野生型小鼠的变化规律。方法采用荷兰半自动生化分析仪Ⅱ对于肝功能相关的7种血清酶进行测定,应用SSPS10统计学软件进行T检验及方差分析比较。结果p21HBsAg/HBsAg和p21HBX/HBX转基因小鼠不同年龄、不同的指标雌雄之间差异显著,并且随着年龄的变化,雌雄之间的变化规律不同。结论p21HBsAg/HBsAg和p21HBX/HBX转基因小鼠的血清酶在不同的年龄具有一定的变化规律,说明p21HBsAg/HBsAg和p21HBX/HBX转基因小鼠的血清酶具有一定的特征,为其功能性研究及临床检验具有重要参考价值。

不同月龄p21^HBsAg/HBsAg和p21^HBX/HBX转基因小鼠血清代谢产物的测定

目的测定p21^HBsAg/HBsAg和p21^HBX/HBX转基因小鼠及野生型小鼠的血清代谢产物，探讨各种血清代谢产物在两种转基因小鼠及野生型小鼠的变化规律。方法对p21^HBsAg/HBsAg和p21^HBX/HBX转基因小鼠不同月龄4种代谢产物血清总胆红素（TBILI）＼尿酸（UA）、肌酐（CRE）和尿素氮（BUN）进行测定并分析比较。结果p21^HBsAg/HBsAg和p21^HBX/HBX转基因小鼠不同月龄、不同的指标雌雄之间t检验差异显著，并且随着年龄的变化，雌雄之间的变化规律不同。结论p21^HBsAg/HBsAg和p21^HBX/HBX转基因小鼠的血清代谢产物在不同的年龄具有一定的变化规律。

不同月龄p21^HBsAg/HBsAg和p21^HBXIHBX转基因小鼠几种血液生化指标测定

目的测p21^HBsAg/HBsAg和p21^HBXIHBX转基因小鼠及野生型小鼠的血清生化指标，探讨几种血清生化指标在两种转基因小鼠及野生型小鼠的变化规律。方法对p21^HBsAg/HBsAg和p21^HBXIHBX转基因小鼠不同月龄11种血清生化指标进行测定并分析比较。结果p21^HBsAg/HBsAg和p21^HBXIHBX转基因小鼠不同月龄、不同的指标雌雄之间t检验差异显著，并且随着月龄的变化，雌雄之间的变化规律不同。结论p21^HBsAg/HBsAg和p21^HBXIHBX基因的转入对小鼠的血清生化指标具有一定的影响。

大剂量HBsAg疫苗对HBV转基因小鼠细胞免疫调节的研究

目的 研究大剂量HBsAg疫苗对HBV转基因小鼠 (Tg鼠 )细胞免疫应答的影响。方法 Tg鼠 4 8只 ,每只注射 6 μg(相当于人产生抗体剂量的 180倍 )的HBsAg疫苗后 ,用流式细胞术、氚 胸腺嘧啶核苷 (3 H TdR)掺入法和ELISA法 ,分别检测其树突状细胞(DC)、T淋巴细胞增殖及其诱生细胞因子IL 2、IFN γ的水平。结果 大剂量HBsAg疫苗组DC表面共刺激分子CD80、CD86和I Ek的阳性百分率 (% )均高于对照组 (P <0 0 5 ) ,特异T淋巴细胞增殖能力 8个月的cpm值 (10 0 77 2± 85 74 0 )显著高于 1周的 (5 32 9 1± 30 86 0 ) (P <0 0 5 ) ;其诱生细胞因子的水平 8个月时IL 2 (46 2 4± 12 2 5pg/ml)、IFN γ(976 1± 5 4 4 1pg/ml)显著高于 1周时IL 2 (15 6 1±78 7)、IFN γ(5 8 3± 4 9 5 ) (P <0 0 1)。结论 大剂量HBsAg疫苗能够增强Tg鼠细胞免疫应答能力 ,恢复对乙型肝炎抗原的应答。

p21活化激酶在APP/PS1转基因AD小鼠模型海马内表达的年龄变化(英文)

阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)与突触障碍密切相关,p21活化激酶(p21-activated kinase,PAK)在突触功能调节中起重要作用。然而,PAK与AD病理学变化之间的关系,尚不清楚。本实验用分子生物学及组织化学等方法检测了不同周龄APP/PS1转基因AD小鼠模型海马中PAK3(PAK的代表性亚型)、pPAK(磷酸化的PAK)和Aβ42(含42个氨基酸片断的Aβ多肽)的表达水平以及神经元的形态学变化。Western Blot结果显示,海马中PAK3的表达,在不同年龄的APP/PS1转基因AD模型小鼠和非转基因小鼠中,均没有显著性差别;而pPAK表达则出现显著性降低(32周),并且随年龄增长进一步下降。Aβ42的水平在转基因AD小鼠模型海马中增加较早(22周),并随年龄的增长而显著增加。Nissl染色显示,转基因AD小鼠模型海马神经元无明显数量变化;而Golgi银染法显示,转基因AD小鼠模型海马神经元的树突显著变形、紊乱。这些结果说明,在APP/PS1转基因AD小鼠模型PAK表达正常,但PAK的磷酸化过程出现了异常,导致其活性不足。Aβ42的毒性作用可能是导致pPAK活性下降的原因,而pPAK的下降又可能是影响海马神经元树突发育、造成其变形、紊乱的直接原因。

抗-FasL治疗HBsAg转基因小鼠慢性肝炎的初步观察

目的探讨抗-FasL治疗慢性乙型肝炎及阻断肝纤维化的可行性。方法自行建立HBsAg转基因小鼠慢性肝炎模型,选择30只作为研究对象,将其随机分为抗-FasL抗体腹腔注射治疗组(实验组)和生理盐水腹腔注射治疗组(对照组)。自实验次日起进行血清ALT动态监测,并通过TUNEL细胞凋亡检测了解肝细胞损伤的动态变化。治疗3个月时结束实验,对小鼠肝组织进行病理学检查。结果HBsAg转基因小鼠慢性肝炎模型建立的时间越长,ALT水平、Fas/FasL阳性细胞表达和细胞凋亡率也越来越高;慢性肝炎HBsAg转基因小鼠的ALT水平随着注射抗-FasL时间的延长,ALT水平越来越低;而且该组血清HA、hpcIII、LN、IV-C、PLD水平及Fas、FasL阳性细胞表达、细胞凋亡率均明显低于未注射抗-FasL组。结论抗-FasL具有抗肝损伤作用,能阻止小鼠肝纤维化的发展,有望成为人体慢性肝炎及纤维化的临床治疗的方法。

HBV转基因小鼠HBsAg的表达

本文研究了两种不同繁育方法培育的乙型肝炎病毒（ＨｅｐａｔｉｔｉｓＢ Ｖｉｒｕｓ，ＨＢＶ）转砂眼习ＨＢｓＡｇ的表达情况。结果显示ＨＢＶ转基因纯合子小鼠ＨＢｓＡｇ表达率明显高于ＨＢＶ转基因杂合子小鼠。用ＨＢｓＡｇ疫苗免疫后发现表达ＨＢｓＡｇ的小鼠对ＨＢｓＡｇ形成免疫耐受，而虽有ＨＢＶ基因整合但不表达ＨＢｓＡｇ的小鼠对ＨＢｓＡｇ的不能形成免疫耐受。

CIK细胞与HBsAg疫苗联合作用对于转基因乙型肝炎小鼠的影响

目的观察细胞因子激活的杀伤细胞（cytokine induced kill cell, CIK ）与乙型肝炎表面抗原 （Hepatitis B surface antigen, HBsAg ）疫苗联合应用对于乙型肝炎病毒转基因小鼠 （ Hepatitis B virus transgenic mice, HBV-Tg）的治疗作用。方法给予HBV-Tg小鼠腹腔注射CIK细胞及皮下注射HBsAg疫苗，观察外用血中HBVDNA水平变化，流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群改变，并用HE染色观察肝脏的组织病理改变。结果给予HBV-Tg小鼠CIK细胞治疗后，其外周血中HBVDNA载量减少，CD3^＋、CD4^＋及CD8^＋细胞增加，CIK细胞与HBsAg疫苗联合作用后，该作用明显加强。结论应用CIK细胞与HBsAg疫苗作用于慢性乙型肝炎小鼠后，两者可协同作用降低外周血中的病毒含量，并增强免疫作用。

大剂量重组HBsAg对HBV转基因小鼠细胞免疫调节作用

目的 利用免疫耐受HBV转基因小鼠动物模型研究大剂量基因重组HBsAg对其免疫调节作用 ,观察对HBV基因表达的影响。方法 比较不同免疫次数、免疫周期、免疫剂量对转基因小鼠所诱生的Th1类细胞因子和T细胞增殖的影响 ,同时检测血清中HBsAg和HBVDNA的含量。结果 多次免疫 9个月后的IL -2 ,IFNγ ,T细胞增殖的水平分别是免疫 1周时的 2 ,17,2倍 ,同时疫苗组的HBsAg的滴度在 6个月时较对照组明显降低 ,9个月时显著降低 ,HBVDNA的检测结果是疫苗组下降 10 2 的有 3只 ,而对照组没有。 9周内免疫一次和两次 ,高、中、低剂量组与对照组所诱生的IL -2水平差异均无显著性。结论 大剂量的基因重组HBsAg可以诱导出高水平的Th1类细胞因子 ,抑制HBV的基因表达 ,打破免疫耐受 。

HBsAg转基因小鼠模型的建立及其用于基因治疗研究初探

目的构建HBsAg转基因小鼠模型,并利用其进行基因治疗研究。方法显微注射外源基因pcDNAHBsAg至FVB小鼠原核,注射胚胎移植到同期发情的假孕受体出生个体,经PCR和Southern检测获得阳性转基因小鼠。通过ELISA方法比较分析转基因小鼠经pcDNAHBsAg质粒基因免疫后抗体产生的情况。结果PCR结合Southern检测到了HBsAg阳性小鼠。基因免疫有抗体产生。结论得到的HBsAg转基因小鼠,基因免疫可诱发转基因小鼠产生抗体。

氧化苦参碱对乙型肝炎病毒转基因小鼠乙肝抗原表达的影响

目的：研究氧化苦参碱抗乙型肝炎病毒的作用，并初步探讨其作用机制。方法：以乙型肝炎病毒全基因组转基因小鼠ＩＣＲ－ＴｇＮ（ＨＢＶａｄｒ１．２）ＳＭＭＵ 为动物模型，运用ＥＬＩＳＡ和免疫组化的方法检测小鼠肝脏内乙肝抗原含量。结果：分别予氧化苦参碱１００， ２００， ３００ ｍ ｇ／ｋｇ 腹腔注射，１次／ｄ，３０ ｄ 后，乙型肝炎病毒转基因小鼠肝脏内ＨＢｓＡｇ 和ＨＢｃＡｇ 的含量较空白对照组（予等体积生理盐水腹腔注射）均有明显的下降，且对两者作用一致；进一步的研究表明氧化苦参碱２００ ｍ ｇ／ｋｇ 作用１０ ｄ，２０ ｄ 时小鼠肝脏内ＨＢｓＡｇ 和ＨＢｃＡｇ 的含量较治疗前有明显的下降。结论：氧化苦参碱能降低乙型肝炎病毒转基因小鼠肝脏内ＨＢｓＡｇ 和ＨＢｃＡｇ 的含量，有抗乙型肝炎病毒作用。

乙肝病毒前S/S抗原的重组表达质粒对HBV转基因小鼠的免疫治疗效应

目的:观察重组表达质粒pcDNA3.1-S2S和pcDNA3.1-S1S2S对HBVDNA复制和抗原表达的抑制效果.方法:以能表达乙肝表面抗原主蛋白S(HBsAg)的重组真核表达质粒为骨架,构建了分别含有HBV前S1抗原和/或前S2抗原编码基因的pcDNA3.1-S1S2S,pcDNA3.1-S2S,并各以100μg肌肉接种C57BL/6HBVDNA转基因小鼠,2,4wk后各加强免疫1次.然后动态检测小鼠血清HBVDNA水平的变化、抗-HBs和前S2抗体的诱生,以及肝组织内HBsAg、前S2抗原的消长情况.结果:小鼠肝组织内HBsAg,前S2抗原呈逐渐减弱的趋势,8wk后各有1/3的小鼠已不能检出.pcDNA3.1-S1S2S组接种后4,8,12wk抗-HBs阳转率分别为50%、67%、100%,明显高于pcDNA3.1-S2S组(17%、33%、50%)(P<0.05);而前S2抗体阳转率均低于17%.接种后8wk,12wk,pcDNA3.1-S1S2S组和pcDNA3.1-S2S组小鼠血清HBVDNA水平明显下降,均低于自身接种前、接种后4wk以及同期对照组(P<0.05).结论:重组表达质粒pcDNA3.1-S2S和pcDNA3.1-S1S2S接种,能够抑制转基因小鼠体内的HBV复制,而重组质粒中S1基因的共表达使抑制作用得到增强.

大剂量HBsAg对HBV转基因小鼠T细胞免疫调节的研究

目的:研究大剂量HBsAg对HBV转基因小鼠其T细胞免疫效果的影响。方法:用大剂量血源性HBsAg免疫HBV转基因小鼠,采用ELISA方法观察转基因小鼠所诱生的HBsAg特异性Th1类细胞因子的水平,ELISPOT方法检测不同免疫方案对小鼠HBsAg特异性分泌IFN-γT细胞数量的影响,同时检测对小鼠淋巴细胞增殖的影响。结果:HBsAg组免疫后脾细胞产生的Th1类细胞因子(IFN-γ、IL-2)、HBsAg特异性分泌IFN-γT细胞及T细胞增殖水平较对照组显著增加(P<0.05)。结论:大剂量的HBs-Ag可以诱导乙肝转基因小鼠产生高水平Th1类细胞因子并打破免疫耐受。

重组抗HBsAg单链抗体在HBV转基因小鼠体内作用的研究

目的 研究重组人源抗HBsAg单链抗体 (HBscFv)在HBV转基因小鼠体内的活性作用 ,探讨HBV转基因小鼠作为HBsAg特异性抗体的结合活性评价模型的可行性。方法 工程菌表达的HBscFv包涵体经固定化金属螯合层析和分子排阻层析两步纯化后 ,分步透析复性。复性后的HBscFv(0 .9g L)经尾静脉注射HBV转基因小鼠 ,一定时间后测定鼠血清中HBsAg的浓度 ,计算抗体注射前后HBsAg浓度下降的百分比 (结合率 ) ,同时以人血源HBsAbIgG(40U ml)和生理盐水作为对照。结果 两步纯化获得纯度达到 98%的重组HBscFv。HBscFv制品能够结合转基因小鼠体内的HBsAg,其结合率为 (30 .4 7± 9.85 ) % ,与生理盐水组差异有显著性 (P <0 .0 0 1) ,与HBsAbIgG组差异无显著性(P >0 .0 5 ) ;对照品HBsAbIgG的结合率为 (39.0 0± 7.4 3) % ,与生理盐水组差异也有显著性 (P <0 .0 0 1)。比较HBscFv和HBsAbIgG的结合率及其浓度 ,求得HBscFv的结合效价为 31.5 8U mg。结论 HBscFv在转基因小鼠体内具有特异性结合HBsAg活性 ,HBV转基因小鼠可发展为评价HBsAg特异性抗体的体内结合活性的候选模型。

乙型肝炎病毒转基因鼠孕期应用拉米夫定和干扰素的疗效及安全性研究

目的 观察乙型肝炎病毒(HBV)转基因鼠孕期使用拉米夫定和干扰素,对降低HBV水平的作用及其对母胎安全性的影响。方法 将高滴度表达HBsAg的HBV转基因鼠35只分成5个研究组,每组7只。研究组1和研究组2分别从孕第5天(孕早期)和孕第10天(孕中期)开始给予拉米夫定100mg/(kg·d)直至分娩;研究组3和研究组4从孕第5天和孕第10天分别给予干扰素5MU/(m2·2d);研究组5给予生理盐水。检测各研究组实验鼠用药前、后血中HBsAg、HBVDNA等水平的变化。另选18只普通孕鼠(清洁级)分为对照组1、对照组2及对照组3(每组6只),分别给予拉米夫定、干扰素和生理盐水(剂量与研究组相同)。观察各研究组及各对照组实验鼠、胎鼠及新生鼠的安全性相关指标。结果 (1)HBsAg滴度变化:研究组1实验鼠,用药后平均血清HBsAg滴度由用药前的(166±98)ng/ml降至用药后的(82±59)ng/ml,用药前后血清HBsAg滴度比较,差异有统计学意义(P<0 .05);研究组2实验鼠,用药后平均血清HBsAg滴度虽由用药前的( 159±49 )ng/ml也降至用药后的(82±60)ng/ml,但用药前后血清HBsAg滴度比较,差异均无统计学意义(P>0 .05);其余各组实验鼠用药前后血清HBsAg滴度比较,差异均无统计学意义(P>0 .05)。(2)HBVDNA滴度变化:研究组1和研究组2的HBVDNA阳性鼠。

复制型HBV转基因小鼠模型建立与推广应用

乙型肝炎（Hepatitis B）是一个严重的全球公共卫生问题，约20亿人曾感染过HBV，其中3．5亿为慢性（终生）感染者。而我国目前仍是乙型病毒性肝炎的第一大国，一般人群HBsAg阳性率为9．32％，现症病人达3千万人，每年的治疗费用达千亿元。2008年6月11日，国家有关部门审议并原则通过了艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治国家科技重大专项实施方案，标志了我国对HBV的研究进入了新的发展历史时期，将为有效降低HBV的携带率和乙型病毒性肝炎的发病率，促进对乙肝病毒的研究将起到巨大的推动作用。

Sall2和p21与肌萎缩侧索硬化症海马区病变关系分析

目的检测SOD1-G93A突变型肌萎缩侧索硬化症(ALS)转基因小鼠海马中婆罗双树样基因-2(Sall2)和细胞周期抑制因子p21的表达变化及其与ALS海马区病变的关系。方法将33对SOD1-G93A突变型ALS转基因小鼠和同窝野生型(WT)小鼠于95d、108d和122d分别取材,应用RT-PCR、Western blot和免疫组织化学染色实验检测Sall2和p21不同发病时期海马中mRNA和蛋白水平表达变化及其在海马中的表达规律。结果与同窝WT小鼠相比,Sall2 mRNA和蛋白在ALS转基因小鼠海马中108d、122d表达均下调,p21 mRNA水平无明显变化,p21蛋白在108d、122d表达均上调(P<0.05)。免疫组织化学染色结果显示,与同窝WT小鼠相比,122d龄ALS转基因小鼠海马中Sall2免疫反应性降低,而p21免疫反应性升高。结论ALS转基因小鼠中Sall2和p21的表达异常与ALS海马区病变密切相关。