CHD5基因启动子甲基化调控p19Arf/p53/p21Cip1信号通路促进急性髓系白血病发病的研究

目的:探讨急性髓系白血病患者(AML)骨髓中CHD5基因甲基启动子甲基化状态及其调控p19Arf/p53/p21Cip1信号通路促进AML发病的机制。方法:采用MSP检测AML组及对照组CHD5基因甲基化状态,应用实时定量RT-PCR和Westernblot检测CHD5、p19Arf、p53及p21Cip1的表达水平。结果:AML患者骨髓中CHD5基因甲基化率(39.06%)较对照组(6.67%)明显增高(P<0.05);CHD5基因甲基化与AML不同染色体核型相关(P=0.009),但与性别、年龄及临床分型无显著相关(P>0.05);AML患者CHD5相对表达水平明显低于对照组(P<0.05);存在CHD5甲基化AML患者p19Arf、p53及p21Cip1基因和蛋白表达水平较对照组降低。结论:AML患者CHD5基因启动子的高甲基化可导致CHD5、p19Arf、p53和p21Cip1表达水平下降,从而可能通过调控p19Arf/p53/p21Cip1途径减弱对白血病细胞增殖抑制作用,促进AML的发生。

大鼠增殖抑制基因通过P53-P21cip1途径抑制胶质瘤细胞增殖

目的:探究大鼠增殖抑制基因(r HSG)过表达抗C6大鼠胶质瘤细胞增殖的机制。方法:体外培养C6细胞,感染运载r HSG基因的腺病毒载体(Adv-r HSG-GFP),倒置显微镜及流式细胞仪分析腺病毒载体感染效率;应用流式细胞仪分析C6细胞周期;Western blot检测细胞r HSG蛋白、抑癌基因P53蛋白、细胞周期调控蛋白P21cip1、磷酸化及非磷酸化成视网膜细胞瘤蛋白(p-Rb,Rb)表达变化。结果:腺病毒可以高效的将目的基因导入C6靶细胞;Adv-r HSG-GFP组r HSG蛋白的表达量明显高于PBS组和Adv-GFP组(P<0.01);r HSG过表达的C6细胞停滞于G0/G1期细胞的数量明显增加(P<0.01);P53、P21cip1蛋白表达量明显增加(P<0.01),p-Rb蛋白表达降低(P<0.01),Rb蛋白表达无明显变化(P>0.05)。结论:r HSG可能通过P53-P21cip1途径抑制胶质瘤细胞增殖。

p21Cip1基因对V_(79-8)细胞周期的影响

为了探讨缺乏可测出Ｇ１、Ｇ２期Ｖ７９－８细胞株的细胞周期失调的分子机理，构建了人的周期负调控基因ｐ２１Ｃｉｐ１的可表达重组质粒ｐＸＪＳＣ，转染该细胞系，建立了高表达ｐ２１的Ｖ７９－８－ＳＣ细胞。以３ＨＴｄＲ放射自显影法，流式细胞光度术，细胞增殖曲线测定及免疫印迹技术，检测及比较了与细胞周期变化和增殖有关基因的表达，发现该细胞较对照细胞Ｖ７９－８－ｎｅｏＧ１期明显延长，Ｇ２期也稍有增加。与此同时，Ｇ１期调控的ｃｙｃｌｉｎＤ１、ＣＤＫ４、Ｉｄ基因表达明显下降，Ｇ２期调控基因ｃｙｃｌｉｎＢ１的表达也有所下降。结果表明：此细胞系的细胞周期缺陷可能由于ｐ２１Ｃｉｐ１。

周期蛋白依赖激酶抑制因子p21Cip1的研究进展

ｐ２１Ｃｉｐ１是广泛的ＣＤＫｃｙｃｌｉｎ抑制因子。它的表达受ｐ５３的正调控，也可不依赖于ｐ５３。它与ＰＣＮＡ结合抑制ＤＮＡ的复制，同时又允许ＤＮＡ损伤的切除修复。近两年的研究还表明它与细胞分化密切相关。

大鼠海马发育过程中神经元和星形胶质细胞p21Cip1的表达

目的研究大鼠海马发育过程中细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子p21Cip1在神经元和星形胶质细胞中的表达。方法应用免疫双标技术和流式细胞术检测p21Cip1在生后1d(P1),生后11d(P11),成年和老年大鼠的海马神经元和星形胶质细胞中的表达。结果 (1)p21Cip1在各个年龄组大鼠的海马神经元和星形胶质细胞中均有表达;(2)大鼠海马神经元和星形胶质细胞中p21Cip1在不同年龄组的表达趋势类似,均在P1表达水平最高;而从P11到老年组p21Cip1的表达则逐渐增高,且各组间p21Cip1的表达有显著性差异(P<0.05)。结论 p21Cip1在大鼠海马神经元和胶质细胞中的表达随着大鼠的发育而变化,这提示p21Cip1可能在大鼠海马的发育过程中起重要作用。

应用纳米技术研究p21cip1基因对人RPE增殖的抑制作用

目的:通过新兴的纳米粒子基因载体观察p21cip1基因对视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞增殖的抑制情况。方法:制备p21cip1基因纳米粒子,将其转染到培养的人RPE细胞,通过免疫组织化学检测p21cip1蛋白的表达,流式细胞仪检测细胞周期的相关细胞量的变化。结果:p21cip1纳米粒子的DNA含量为3%,包封效率为78%,p21cip1基因在体内由于PLGA-PVA载体的保护作用,可以维持比质粒更长时间的有效期,减少质粒易被生物体内核酸酶降解的问题。流式细胞仪检测显示转染了目的基因的RPE细胞发生G1期阻滞,细胞增殖明显受到抑制。免疫组织化学检测结果显示转染了目的基因的RPE细胞p21cip1蛋白表达明显增强。结论:p21cip1基因有可能作为一个目的基因,借助新兴的基因载体纳米粒子用于抑制细胞增殖的基因治疗。

P21CIP1/WAF1与子宫内膜样腺癌相关性研究

P21CIP1/WAF1是细胞周期重要的调控因子,在协调DNA的复制及修复,细胞的生长、分化和衰老过程中起重要作用。

P21CIP_1/WAF_1、CD_(44)V_6在恶性卵巢上皮性肿瘤的表达及与淋巴结转移相关研究

目的 :探讨细胞周期调控蛋白 P2 1CIP1 / WAF1 和细胞粘附分子 CD44 V6 在恶性卵巢上皮性肿瘤中的增殖、浸润、转移过程中的作用及相互关系。方法 :采用免疫组化方法 (im munohistochemical assay IHCA)检测 5 5例恶性卵巢上皮性肿瘤组织中 P2 1CIP1 / WAF1 蛋白和 CD44 V6 的表达。结果 :(1)恶性卵巢上皮性肿瘤中 P2 1CIP1 / WAF1总体阳性率为 5 5 .5 4% ,其中 期的阳性率为 2 1.43%低于 至 期的阳性率 6 5 .85 % (P<0 .0 5 ) ,伴有淋巴结转移的原发灶中的阳性率 31.5 7%明显低于无淋巴结转移的原发灶中的阳性率 6 6 .6 7% (P<0 .0 5 )。 (2 ) CD44 V6 在 到 期癌组织中表达阳性率差别无显著性 (P>0 .0 5 ) ,而在 、 期中强阳性 ( 、 )率 5 3.13%明显高于 、 期 13.0 4%(P<0 .0 5 ) ,在有淋巴结转移的原发灶中的强阳性率 (6 8.42 % )高于无淋巴结转移组 19.44 % (P<0 .0 1)。 (3) P2 1CIP1/ WAF1与 CD44 V6 在有淋巴结转移的原发灶中的表达呈负相关 (P<0 .0 5 )。结论 :P2 1CIP1 / WAF1 抑制恶性卵巢上皮性肿瘤增殖、浸润、转移 ,而 CD44 V6

反义p21Cipl抑制RA诱导人白血病细胞HL-60的分化

全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,at RA)可诱导缺乏内源p53基因的人白血病细胞HL-60的粒细胞分化,在此过程早期,人p21周期蛋白依赖激酶抑制因子(Cyclin-dependent Kinase interacting protein,Cipl)的表达即有所增加,并且不依赖p53。将反应p21Cipl重组质粒转染进HL-60细胞,建立锌调表达反义p21Cipl的细胞系HLAC,再用RA诱导,发现反义p21Cipl可部分抑制HL-60细胞的分化,而此时CDK4和cyclin D3的表达在HLAC中明显增加,证明p21Cipl参与了这一分化过程的起始,CDK4和cyclin D3可能与这一过程密切相关。

抑癌基因 P21CIP1/WAF1研究进展

近年来,细胞周期调控对肿瘤发展的影响越来越受到人们的关注。细胞周期调控有关的分子有:细胞周期蛋白(eyclin),细胞周期蛋白依赖性激酶(cyelin dependent kinese,CDK),磷酸化酶和细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白(cyclin dependent kinase inhibitor,CDI)。其中,cyclin的周期性积累与分解对细胞周期进程起着决定性作用,而CDI通过在细胞周期适当的时间点上负调节CDK的活性,从而在细胞周期的进程中起着关键性作用,CDI可划分为二大类:一类为CIP/KIP。

p21CIP1/WAF1蛋白和增殖细胞核抗原在子宫内膜癌中的表达

目的：研究细胞周期调控与子宫内膜癌的关系。方法：应用免疫组化技术对45份子宫内膜癌组织中P21CIP1／WAF1蛋白和增殖细胞核抗原（PCNA）进行检测。结果：45份子宫内膜癌组织中30份（66．7％）P21CIP1／WAF1蛋白阳性，对照组均为阳性（P＜0．01）、PCNA（＋）18份，（＋＋）21份。P21CIP1／WAF1阳性率与PCNA指数呈负相关（P＜0．05）。结论：子宫内膜癌的发生与细胞周期调控有关。

FoxF1和FoxF2转录因子通过抑制 p21Cip1 CDK调控早期胃癌能量代谢的机制

目的探讨FoxF1和FoxF2转录因子通过抑制p21Cip1 CDK调控早期胃癌能量代谢的机制。方法将对数生长期的HGC27细胞分为FoxF1组、FoxF2组和对照组,分别转染200 ng/mL pcDNA3.0-FoxF1、200 ng/mL pcDNA3.0-FoxF2和等体积的磷酸盐缓冲液,采用CCK法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell小室检测细胞迁移,蛋白质印迹检测蛋白表达,比色法检测葡萄糖、乳酸水平。结果转染24、36 h后,FoxF1组和FoxF2组的细胞增殖指数、迁移指数、p21Cip1、CDK1蛋白相对表达水平、葡萄糖、乳酸水平均显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),细胞凋亡指数、FoxF1和FoxF2蛋白相对表达量均显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),而FoxF1组和FoxF2组相比以上指标差异均无统计学意义(P>0.05)。结论FoxF1和FoxF2转录因子的高表达能抑制p21Cip1/CDK信号通路的激活,导致糖酵解水平降低,从而抑制细胞增殖与迁移,促进细胞凋亡。

大肠癌胃泌素、生长抑素的表达及比势与p16INK4a、p21CIP1、CDK2、CDK4的相关性研究

我们采用免疫组织化学SP法检测70例大肠癌组织中胃泌素（GAS）、生长抑素（SS）、p16INK4a、p21CIP1、CDK2及CDK4蛋白的表达隋况，探讨GAS、SS与细胞周期调控因子p16INK4a、p21CIP1、CDK2、及CDK4的相关性，了解GAS、SS对大肠癌细胞增殖周期的具体调控位点。

硫化氢对再生肝细胞中细胞周期蛋白D1和p21Cip／WAK-1的影响

目的观察肝细胞增殖时硫化氢对细胞周期蛋白D1（CyclinD1）和v21Cip／WAK-1的影响。方法肝穿刺获取慢性乙型肝炎患者肝组织，并分离培养肝细胞。所获肝细胞分为4组，前3组分别给予促肝细胞生长素（HGF组），炔丙基甘氨酸（PPG）和HGF（PPG＋HGF组），硫氢化钠（NariS）＋HGF（NaHs＋HGF组），剩余1组作为空白对照组。肝细胞培养24h后行台盼兰拒染实验及MTY比色法测定细胞增殖，利用去蛋白法检测细胞上清液中的硫化氢，免疫印迹（Western）检查细胞内p21Cip／WAK-1和CyclinD1变化情况。细胞洗涤后，提取各组细胞DNA，判定硫化氢对DNA的影响。结果培养后肝细胞的活性均超过90％。MTF比色法测定结果显示：与对照组比较，HGF组肝细胞增殖明显增强（0．713±0．207：0．411±0．113），且差异有统计学意义（t=6．943，P〈0．01）；与HGF组相比，PPG＋HGF组细胞增殖明显增强（0．965±0．329：0．713±0．207），差异有统计学意义（t=4．017，P〈0．05），NariS＋HGF组细胞增殖明显减弱（O．513±0．156：0．713±0．207），差异有统计学意义（t=5．328，P〈0．05）。Western实验结果显示，PPG＋HGF组p21cip／WAK-1表达增加而CychnDI表达降低，NaHS＋HGF组两者表达量呈相反趋势。HGF组和PPG＋HGF组DNA复制明显增加，而NaHS＋HGF组DNA无明显复制。结论硫化氢可能通过抑制细胞CyclinD1和增加p21Cip／WAK-1表达抑制肝细胞增殖。

非p53依赖途径c-myc对乳腺癌细胞p21Cipl基因调控及细胞凋亡的影响

目的观察非P53依赖途径突变型（T58A）与野生型c-myc（WT）对乳腺癌细胞P21cip1基因调控及细胞凋亡的影响。方法携带c-myc T58A与WT基因慢病毒表达载体分别感染乳腺癌细胞株HCC1937（细胞感染率为85% ）,未感染者及仅感染慢病毒者为A组（空白对照组）、B组（感染对照组），感染c-myc T58A及WT者为实验组C、D组。慢病毒P21cipl/SiRNA载体感染以上各组细胞，逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot检测感染前后各组c-myc、P21cip1的mRNA和蛋白表达,原位末端转移酶标记（TUNEL）检测细胞凋亡。结果与A、B组比较，C组和D组c-myc过表达（P 〈0. 001）。感染前，C组P21CipI含量显著高于A、B、D组（P 〈 0. 001），D组P21Cipl含量最低（p〈0.01），C组细胞凋亡率显著低于A、B、D组,D组凋亡率最高，凋亡率：A组为（5.5 ±0.5）%、B 组为（5. 8 ±0.3）%、C 组为（2. 8 ±0.3）%、D 组为（9. 8 ±0.8）% （P 〈0.01）;感染后，各自组内凋亡率较前明显提高（P〈0.05）。结论非P53依赖途径中，野生型c-myc可通过下调P21eipl基因表达促进细胞凋亡，突变后（T58A）此功能减弱，诱导细胞凋亡能力降低。

矮小症患儿的临床特征及重组人生长激素联合来曲唑对p21waf/cip1、25-OH-D水平的影响

目的探讨重组人生长激素(rh-GH)联合来曲唑治疗特发性矮小症(ISS)的临床价值及对患儿p21waf/cip1、25羟基维生素D(25-OH-D)水平的影响。方法选取86例ISS患儿,随机分为对照组与研究组,各43例;对照组给予rh-GH,研究组联合来曲唑治疗,疗程均为12个月。比较两组的骨龄、Ⅰ型胶原氨基酸延长肽(PINP)、预测终身高、p21waf/cip1、骨碱性磷酸酶(BALP)、25-OH-D、骨钙素(OC)、临床疗效及不良反应。结果研究组的疗效优良率(95.35%Vs 76.74%)高于对照组(P<0.05)。治疗前,两组的骨龄、PINP、预测终身高、BALP、OC、p21waf/cip1蛋白、25-OH-D差异无统计学意义(P>0.05);治疗12个月后,研究组的PINP、骨龄、25-OH-D、OC、预测终身高大于对照组,研究组的p21waf/cip1蛋白、BALP小于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。两组的总不良反应率(11.63%VS 6.98%)差异无统计学意义(P>0.05)。结论在rh-GH基础上联合来曲唑治疗ISS的疗效良好,能够有效改善患儿骨代谢指标与25-OH-D、p21waf/cip1水平,促进患儿身高增长与骨骼发育,提高患者终身高值。

紫薯花青素通过调节p53-p21^(Waf1/Cip1)信号通路对辐射致造血干/祖细胞衰老的保护作用

目的:探讨紫薯花青素(Solanum tuberosum anthocyanin,STA)对辐射致造血干细胞(hematopoietic stem cell,HSC)/造血祖细胞(hematopoietic progenitor cell,HPC)衰老起保护作用的分子机制。方法:将C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组、STA治疗组和STA预防组,利用X射线照射构建衰老细胞模型。给药后用血细胞分析仪检测各组小鼠血液指标;免疫磁性分选法分离纯化各组小鼠Sca-1^(+)HSC/HPC,并用衰老相关β-半乳糖苷酶(senescence-associated β-galactosidase,SA-β-Gal)染色试剂盒对其进行染色实验并计算各组阳性率;利用HSC/HPC混合集落(colony forming unit-mixture,CFU-Mix)数评价各组细胞形成HSC/HPC集落能力与分化潜能;流式细胞术分析细胞周期;实时定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,q PCR)检测p53和p21^(Waf1/Cip1)mRNA的表达;Western blot检测p53和p21^(Waf1/Cip1)蛋白的表达。结果:与对照组相比,模型组小鼠外周血指标红细胞、白细胞、血小板数均极显著降低(P<0.01),衰老细胞阳性率极显著增加(P<0.01),Sca-1^(+)HSC/HPC形成CFU-Mix的数量极显著减少(P<0.01),G0/G1期比例极显著升高(P<0.01),G2/M和S期比例极显著降低(P<0.01),p53和p21^(Waf1/Cip1)mRNA和蛋白的相对表达量极显著增加(P<0.01),STA治疗和STA预防均可分别显著和极显著恢复模型组小鼠以上指标,其中STA预防效果更好。结论:STA可以通过调节p53-p21^(Waf1/Cip1)信号通路保护受到辐射的HSC/HPC。

P21^(Cip/WAF1)及P27^(Kip1)与增殖细胞核抗原在人骨髓间充质干细胞向肝细胞分化过程中的表达

背景:P21Cip/WAF1、P27Kip1是两种重要的细胞周期的负调控因子,增殖细胞核抗原是反映干细胞增殖的指标。目的:观察体外诱导人骨髓间充质干细胞向肝细胞分化过程中P21Cip/WAF1,P27Kip1及增殖细胞核抗原的表达变化。设计、时间及地点:细胞学基因水平观察,于2006-12/2007-06在中山大学附属第二医院林百欣医学研究中心实验室完成。材料:骨髓来源于中山大学附属第二医院行骨髓穿刺的健康供者。方法:全骨髓贴壁筛选法体外分离培养人骨髓间充质干细胞,传至第5代后,加入含20μg/L肝细胞生长因子、10μg/L成纤维细胞生长因子4的opti-MEMI低血清培养基向肝细胞诱导分化。主要观察指标:诱导后RT-PCR检测细胞内P21Cip/WAF1,P27Kip1及增殖细胞核抗原基因mRNA的表达。结果:骨髓间充质干细胞向肝细胞定向诱导后0,1,3,5,7d,细胞内P21Cip/WAF1mRNA表达的相对量逐渐升高(P<0.01),P27Kip1mRNA表达的相对量无明显差异(P>0.05),增殖细胞核抗原mRNA表达的相对量除诱导后0,1d无明显差异(P>0.05)外,其余各时间点均逐渐降低(P<0.01)。结论:P21Cip/WAF1高表达抑制了骨髓间充质干细胞增殖,同时在其向肝细胞分化过程中起一定调控作用,P27Kip1可能并不起作用,增殖细胞核抗原的表达则与P21Cip/WAF1相反,呈逐步减少趋势。

前列腺癌p21^(CIP1/WAF1)和PCNA的表达及相关性研究

目的 研究 p2 1CIP1 /WAF1 及 PCNA在人前列腺癌标本中的表达及相关性 ,阐述它们与前列腺癌病理分级及临床分期的关系 .方法 以 36例确诊前列腺癌石蜡包埋存档标本作为研究对象 ,采用免疫组化 SABC法对其 p2 1CIP1 /WAF 1及PCNA进行检测 ,并应用图像分析仪判定 ,统计学处理 ,对前列腺癌的病理分级及临床分期进行了对比分析及相关性研究 .结果 p2 1CIP1 /WAF 1 及 PCNA的免疫组化阳性染色为棕黄色和 /或棕褐色 ,定位于细胞质或细胞核 .所得数据均经统计学处理 .在不同病理分级及临床分期之间差异均有显著性 ,同时还发现 PCNA与 p2 1CIP1 /WAF 1存在显著负相关性 .结论 p2 1CIP1 /WAF1表达与前列腺癌组织的病理分级及临床分期呈负相关性 ,在发病机制中可能涉及到 p2 1CIP1 /WAF1 和 PCNA调节通路的异常 .同时 ,作为一种检测方法 。

新型靶向组蛋白去乙酰化酶抑制剂的抗肿瘤作用及其机制

探讨3种新型靶向组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂D16,D22,D29的抗肿瘤活性作用及其抑制人宫颈癌细胞增殖的机制。MTT法检测D16,D22,D29对MCF-7、HCT-116、A549、HeLa以及K562的增殖抑制作用;测定D16,D22,D29对HDAC及其HDAC-1的酶活抑制作用;流式细胞术观察D16,D22,D29对HeLa细胞周期及凋亡诱导作用;Western blot测定D16,D22,D29对HeLa细胞中乙酰化组蛋白H3(Ac-H3),p21cip/WAF的蛋白表达影响。结果显示,D16,D22,D29明显抑制多种肿瘤细胞株的增殖,有效抑制HDAC及其HDAC-1的活性,其效果优于阳性对照药Vorinostat(SAHA),并诱导HeLa细胞产生G1期细胞周期阻滞及凋亡,Ac-H3及p21cip/WAF的蛋白水平明显上升。D16,D22,D29具有一定的抗肿瘤活性,其机制与诱导细胞周期阻滞和凋亡产生,促进p21cip/WAF的蛋白表达有关。