原花青素对Aβ_(25-35)诱导PC12细胞凋亡的影响及其机制的研究

目的 探讨原花青素(Procyanidins，PC)对β淀粉样肽25～35(β amyloid peptide25-35，Aβ25-35)诱导PCI2细胞凋亡的影响及其机制。方法 采用MTT比色法分析细胞存活率，Hoechst 33258-P1荧光染色法检测凋亡，RT-PCR检测P53和bcl-2基因mRNA表达，Western blot检测P53和Bcl-2蛋白表达。结果 不同剂量PC预处理PC12细胞1h可剂量依赖性对抗Aβ25-35引起的凋亡，提高细胞的存活率，减少Aβ25-35引起的核固缩，凝聚和碎裂，降低P53 mRNA表达以及P53蛋白表达，增加bcl-2mRNA表达以及Bcl-2蛋白表达。结论 PC可剂量依赖性对抗Aβ25-35对PC12细胞的毒性作用，其机制可能与下调凋亡基因P53和上调抗凋亡基因Bcl-2表达有关。

姜黄素对β-淀粉样肽(25-35)诱导去血清培养PC12细胞周期异常与细胞凋亡的影响

目的:探讨姜黄素(Cur)对β-淀粉样肽(25-35)(βamyloid peptide-25-35,Aβ25-35)诱导体外去血清培养的PC12细胞周期异常与凋亡的影响。方法:PC12细胞用常用的去血清培养使细胞同步于G0期,用MTT比色法分析细胞存活率,流式细胞仪检测分析细胞周期与凋亡,Hoechst33258荧光染色观察细胞核凋亡的形态学改变,RT-PCR和Western blot从mRNA及蛋白水平检测p21基因的变化。结果:用不同终浓度(0,1.25,2.5,5,10,20μmol.L-1)Cur预处理去血清培养的PC12细胞1 h,再用Aβ25-35处理24 h,细胞存活率增加;Aβ25-35引起的S期细胞百分率明显减少,凋亡率明显降低(P<0.01),亚二倍体峰消失;核固缩、碎裂减少;p21 mRNA表达和P21蛋白表达增加。结论:Cur可以影响Aβ诱导的去血清培养PC12细胞周期分布及减少凋亡,可能与上调p21的表达有关。

NRG1β对脑缺血再灌注大鼠P35/P25表达和细胞凋亡影响

目的探讨脑缺血再灌注损伤后神经调节素1β(NRG1β)对Cdk5信号通路中P35/P25表达和细胞凋亡的影响。方法成年健康雄性Wistar大鼠50只,假手术组(Sham组)10只,其余用线栓法建立大脑中动脉缺血再灌注损伤模型,将造模成功30只大鼠随机分为模型组(MCAO组)、治疗组(NRG组)和抑制剂组(Ros组),每组10只。NRG组和Ros组大鼠经颈内动脉分别注射NRG1β和Roscovitine各5μL进行干预治疗,Sham组和MCAO组大鼠注射0.1 mol/L PBS 5μL。用改良神经功能缺损评分(mNSS评分)测试大鼠神经功能,甲苯胺蓝染色观察神经细胞形态结构,TUNEL法检测细胞凋亡,免疫组化和Western blot方法检测神经细胞内P35/P25的表达。结果与Sham组比较,MCAO组mNSS评分显著升高,凋亡神经细胞数量增多,P35/P25表达显著增强;NRG组和Ros组大鼠神经细胞形态结构较MCAO组显著改善,mNSS评分下降,细胞凋亡减少;NRG组大鼠P35/P25表达较MCAO组显著下降,差异均有显著性(F=74.34~151.31,P<0.01)。NRG组与Ros组各指标比较差异均无显著性(P>0.05)。结论脑缺血再灌注损伤发生后,NRG1β可以抑制Cdk5信号通路中P35/P25的表达,减少神经细胞凋亡,发挥神经保护作用。

p35基因对MnCl_2诱导PC12细胞凋亡的作用

目的:探讨p35基因对氯化锰(MnCl2)诱导的PC12细胞凋亡的作用。方法:将p35基因转染PC12细胞得到可稳定表达p35基因的PC12/p35细胞株,使用相差显微镜观察、MTT染色和流式细胞分析等方法检测p35基因对MnCl2诱导的PC12细胞凋亡的作用。结果:p35基因在PC12细胞中的稳定表达可以有效地抑制MnCl2诱导的PC12细胞凋亡。结论:p35基因对MnCl2诱导的PC12细胞具有保护作用。

细胞周期依赖性蛋白激酶5／P25激酶活性与RCS大鼠视网膜神经细胞凋亡的关系

背景视网膜色素变性（RP）是眼科常见的遗传性、致盲性眼病，可能与阿尔茨海默病等慢性神经退行性疾病具有共同的病理生理机制，细胞周期依赖性蛋白激酶5（Cdk5）与光感受器细胞及视网膜神经节细胞正常功能的维持相关，可能是引起RP光感受器细胞凋亡的途径，有可能成为新的治疗靶点。目的探讨Cdk5／P25激酶活性在RCS大鼠视网膜神经细胞凋亡中的作用。方法SPF级RCS变性大鼠及RCS—rdy‘正常对照大鼠各18只，按随机数字表法亚分至出生后17、25、35d组，每亚组各6只大鼠。各组大鼠分别在相应时间点直接处死后摘除眼球，并取视网膜组织，以Westernblot法检测大鼠视网膜组织中Cdk5、P35、P25蛋白的表达和tau蛋白磷酸化水平，并利用紫外分光光度计用光谱法测定两组不同Et龄大鼠视网膜组织吸光度（A。）峰值的变化，定量分析各组Cdk5／P25激酶的活性。结果P35蛋白在17日龄的RCS大鼠和RCS—rdy’大鼠的视网膜组织中表达水平（A。）差异无统计学意义（t=0．52，P〉0．05），25日龄和35日龄RCS大鼠视网膜组织中P35蛋白表达水平分别为2．20±0．48、1．23±0．14，明显高于RCS—rdy’大鼠的1．43±O．13和0．93±0．10，差异均有统计学意义（t：3．78、4．28，P〈0．05）；P25蛋白在17日龄的RCS大鼠及RCS—rdy’大鼠的视网膜组织中均未检测到，但在25日龄和35Et龄的RCS大鼠视网膜组织中表达水平（A。）为0．300~0．003、0．230＋0．004，明显高于RCS—rdy’大鼠的0．040±0．004和0．070±0．004，差异均有统计学意义（t=121．81、77．51，P〈0．01）；Cdk5蛋白在各Et龄的RCS大鼠视网膜组织中的表达水平与RCS—rdy’大鼠相比差异均无统计学意义（t=-0．60、0．19、1．62，P〉0．05）；17日龄RCS大鼠和RCS—rdy’大鼠视网膜组织中Cdk5／P25激酶活性差异无统计学意义（t=0．19，P〉0．05），25日龄和35日龄的RCS大鼠视网膜组织中Cdk5／P25激酶活性分别为0．0058±0．0005、0．0056±O．0004，明显高于RCS—rdy’大鼠的0．0038±O．0003和0．0032±0．0007，差异均有统计学意义（t=8．07、5．97，P〈0．01）；25日龄和35日龄RCS大鼠视网膜组织中tau蛋白磷酸化水平明显高于RCS—rdy’大鼠，差异均有统计学意义（t=4．71、3．17，P〈0．05）。结论RCS大鼠视网膜组织中Cdk5／P25激酶活性与P25蛋白表达水平和tau蛋白磷酸化水平的变化趋势一致，提示P25表达增加可能诱导Cdk5／P25激酶活性升高，并通过磷酸化其作用底物引起视网膜神经细胞凋亡。

Cdk5及p35在NGF撤退诱导的已分化PC12细胞凋亡中的作用研究

目的:探讨Cdk5及p35在神经生长因子(NGF)撤退诱导的PC12细胞凋亡中的作用机制。方法:建立NGF撤退诱导的已分化PC12细胞凋亡模型,Western blotting检测Cdk5及p35在凋亡过程中表达变化情况,利用Cdk5特异性抑制剂Roscovitine预处理已分化PC12细胞,检测其对NGF撤退诱导的凋亡作用影响,向已分化PC12细胞转染真核表达质粒pCMV-p35-IRES-Cdk5,检测过表达Cdk5/p35对PC12细胞凋亡的影响。结果:NGF撤退36h会引起已分化PC12细胞出现典型的DNA Ladder凋亡特征,MTT检测结果也显示,NGF撤退对PC12细胞的损伤呈时间依赖性;Roscovitine预处理已分化PC12细胞可以抑制NGF撤退诱导的细胞凋亡率,但不影响Cdk5/p35蛋白表达水平;向已分化PC12细胞中转染真核表达质粒后,能检测到Cdk5/p35蛋白的过表达,并引起PC12细胞出现凋亡样改变。结论:Cdk5及p35的活化与NGF撤退诱导的已分化PC12细胞凋亡过程密切相关,抑制Cdk5的活化有抑制细胞凋亡保护神经元的作用。

转细胞凋亡抑制基因OpIAP和p35增强小麦对纹枯病的抗性

OpIAP（Orgyiapseudotsugatainhibitorofapoptosisprotein）是黄杉毒蛾核型多角体病毒中编码细胞凋亡抑制蛋白（inhibitorofapoptosisprotein,IAP）的基因,p35基因编码苜蓿斜纹夜蛾核型多角体病毒中具细胞凋亡抑制作用的35kDa蛋白。本研究人工合成了OpIAP和p35基因,构建了同时含有OpIAP和p35表达盒的转双价基因载体pUbi：p35-RSS1P：Myc-OpIAP,两基因分别由玉米泛素基因启动子（Ubiquitin,Ubi）和水稻蔗糖合酶-1启动子（sucrosesynthase-1promoter,RSS1P）驱动。通过基因枪介导法将该载体导入小麦品种扬麦16,获得双价转基因小麦。对T0-T2代植株,利用PCR、RT-PCR、qRT-PCR及Westernblot分析,确认导入的外源OpIAP和p35基因能够在4个转双价基因小麦株系中遗传并表达。用来源不同、致病力不同的禾谷丝核菌强致病株型R0301和WK207对转双价基因小麦的T1、T2代植株分别进行纹枯病抗性鉴定,结果表明,与受体扬麦16相比,双价转基因小麦的T1、T2代植株对纹枯病的抗性明显提高,说明OpIAP和p35基因的表达可以增强转基因小麦对来源不同、致病力不同的禾谷丝核菌的抗性。

杆状病毒p35基因延缓昆虫细胞凋亡

构建了以新霉素抗性基因为筛选标记的带有ｐ３５基因的转移载体ｐ３５ＩＥ１Ｎｅｏ，以此载体转染Ｓｆ９细胞，经Ｇ４１８筛选得到染色体上稳定整合质粒ｐ３５ＩＥ１Ｎｅｏ的Ｓｆ９细胞，克隆化培养后取名为Ｓｆ９－３５．经细胞原位杂交实验证明，Ｓｆ９－３５细胞的染色体ＤＮＡ上含有ｐ３５基因；经放线菌素Ｄ处理后的细胞核酸电泳检测，证实Ｓｆ９－３５具有抗凋亡特性能够支持凋亡抑制基因缺失的ｖＡｃΔｐ３５病毒复制；发现ｐ３５基因在细胞内组成型表达只能延缓ｖＡｃΔｐ３５感染及放线菌素Ｄ处理诱发的细胞凋亡的过程，而不能完全阻止其诱发的细胞凋亡．

miR-103a-3p通过调控FEZF1/CDC25A途径影响肝癌细胞的增殖和凋亡

目的探究miR-103a-3p在肝癌细胞的表达及其与锌指蛋白1(FEZF1)/细胞分裂周期25A蛋白(CDC25A)途径的关系。方法体外培养人肝癌Hep G2、BEL-7402细胞,将转染试剂、miR-103a-3p阴性对照质粒、miR-103a-3p mimis质粒分别转染细胞,命名为空白对照组、miR-103a-3p阴性转染组、miR-103a-3p过表达组。实时定量PCR(qRT-PCR)检测miR-103a-3p mRNMA表达;MTT法检测细胞增殖情况;平板细胞克隆形成试验检测菌落形成情况;流式细胞仪检测细胞凋亡以及周期分布情况;蛋白免疫印迹法(WB)检测细胞中FEZF1、CDC25A蛋白表达情况;荧光素酶活性检测miR-103a-3p与FEZF1靶向调控关系。结果在Hep G2细胞、BEL-7402细胞中,与空白对照组、阴性转染组相比,miR-103a-3p过表达组miR-103a-3p mRNA表达显著升高(P<0.05)。随着细胞培养时间延长,miR-103a-3p过表达组细胞抑制率逐渐升高,在同一时间点,与空白对照组、阴性转染组相比,miR-103a-3p过表达组细胞抑制率均升高(P<0.05)。与空白对照组、阴性转染组相比,细胞菌落数量显著降低,细胞凋亡率显著升高,G0/G1期DNA含量升高,S期细胞DNA含量下降,FEZF1、CDC25A蛋白表达均降低(P<0.05)。荧光素酶活性测定显示,在3'UTR-Wt的细胞中,与阴性转染组相比,miR-103a-3p过表达组荧光素酶活性显著降低(P<0.05);而3'UTR-Mut的细胞中,阴性转染组与miR-103a-3p过表达组荧光素酶活性无显著差异(P>0.05)。结论 miR-103a-3p过表达后能够抑制肝癌细胞的增殖,引起细胞周期G0/G1期阻滞,促进其凋亡,其机制可能与靶向调控FEZF1/CDC25A表达有关。

沉默p35表达引起肾小球足细胞凋亡的研究

目的研究周期素蛋白依赖性激酶-5(Cdk5)激活剂p35表达在肾小球足细胞损伤中的作用。方法分别培养离体分化成熟的肾小球足细胞、并分离纯化肾小球,应用免疫印迹法和免疫沉淀、同位素标记等方法检测Cdk5和p35的表达及Cdk5的活性,同时观察小鼠肾小球发育成熟的时间周期和体外成熟分化足细胞的发育成熟时间周期中Cdk5和p35在肾小球发育和足细胞分化的不同时期的表达。并以分化成熟的离体足细胞为研究对象,分为正常细胞组和p35 siRNA组(p35表达沉默组),应用免疫印迹法观察2组中足细胞标志物WT1及促凋亡蛋白Cleaved caspase3的表达及凋亡。结果 Cdk5及其激活剂p35在成熟分化肾小球足细胞、分离纯化肾小球中均有表达;在小鼠肾小球发育过程中(胚胎14、18、22 d、生后2 d及成年鼠)p35的表达随肾小球发育成熟的程度而增强(P<0.05),在不同分化成熟时期的足细胞(0、2、4、6、8 d)中得到同样的结果(P<0.05);沉默p35的表达(p35 SiRNA组),可引起足细胞特异性标志物,WT1表达减少,表示细胞凋亡的Cleaved caspase3蛋白增加,说明足细胞受到损伤、细胞内结构发生改变。结论 Cdk5及其激活剂p35在足细胞中均有表达,p35的表达随足细胞分化成熟而增加;沉默p35的表达可引起足细胞促凋亡蛋白Cleaved caspase3增多,WT1数量减少,说明p35在维持足细胞的功能和形态中起重要作用。

氯化钴对PC12细胞的凋亡作用

目的 确定氯化钴(CoCl2 )对PC12细胞的影响。方法 构建CoCl2 诱导的PC12细胞模型,检测CoCl2 对PC12细胞的毒性作用;将Caspases的抑制基因p3 5转染PC12细胞得到可稳定表达p3 5基因的细胞株PC12 p3 5 ,检测p3 5对CoCl2 诱导的PC12细胞的作用;检测Caspases特异性多肽抑制剂Z VAD FMK对CoCl2 诱导的PC12细胞的作用。结果 分别以10 0、3 0 0、5 0 0、70 0和10 0 0 μmol LCoCl2 诱导PC12细胞2 4h或以5 0 0 μmol LCoCl2 分别诱导PC12细胞12、2 4、3 6、48和60h后,PC12细胞存活率均明显下降(P <0 0 1) ,并与CoCl2 诱导的时间和浓度呈正相关;细胞亚显微结构检测,流式细胞分析和DNA片段化结果也表明5 0 0 μmol LCoCl2 诱导PC12细胞2 4h可使PC12细胞出现明显凋亡特征。构建可稳定表达Caspase蛋白酶抑制基因p3 5的PC12细胞株,或分别加入5 0和10 0 μmol LCaspases多肽抑制剂Z VAD FMK预处理PC12细胞1h后,以5 0 0 μmol LCoCl2 诱导PC12细胞2 4h ,形态学观察结果,细胞存活率检测和流式细胞分析均表明p3 5基因和Z VAD FMK均可有效地抑制CoCl2 诱导的PC12细胞凋亡(P <0 0 1)。结论 CoCl2 可诱导PC12细胞凋亡。

LncRNA OIP5-AS1调节miR-25-3p/SOX4轴对高糖诱导的人肾小管上皮细胞生物学过程的影响

目的 探讨长链非编码RNA Opa相互作用蛋白5-反义转录物1(lncRNA OIP5-AS1)对高糖诱导的人肾小管上皮细胞增殖、凋亡和氧化应激损伤的影响及分子机制。方法 体外培养人肾皮质近曲小管上皮细胞HK-2,分为正常葡萄糖组(NG组)、高糖组(HG组)、HG+si-NC组、HG+si-OIP5-AS1组、HG+miR-NC组、HG+miR-25-3p组、HG+si-OIP5-AS1+inhibitor-NC组、HG+si-OIP5-AS1+miR-25-3p inhibitor组。转染48 h后,实时荧光定量PCR(qPCR)检测细胞中lncRNA OIP5-AS1、miR-25-3p和性别决定区Y框蛋白4(SOX4)m RNA水平;CCK-8法检测细胞活力;检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性;流式细胞术分析细胞凋亡情况;检测细胞中丙二醛(MDA)水平和超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性;DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)的产生;Western blot实验检测细胞中SOX4、B细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)和裂解的Caspase-3(Cleaved-Caspase-3)蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验确认miR-25-3p与lncRNA OIP5-AS1和SOX4的靶向关系。结果 与NG组相比,HG组细胞中lncRNA OIP5-AS1和SOX4 mRNA和蛋白表达水平升高,miR-25-3p水平降低(P<0.05);敲低lncRNA OIP5-AS1可显著下调SOX m RNA和蛋白水平,上调miR-25-3p水平,增加HK-2细胞活力和SOD、CAT活性以及Bcl-2蛋白水平,降低细胞凋亡率、LDH活性、MDA、ROS水平、Bax蛋白水平及Cleaved-Caspase-3/Caspase-3比值(P<0.05);上调miR-25-3p表达与敲低lncRNA OIP5-AS1的作用一致;在敲低lncRNA OIP5-AS1的基础上,下调miR-25-3p可明显减弱lncRNA OIP5-AS1敲低对高糖诱导的HK-2细胞氧化应激损伤的保护作用(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验显示lncRNA OIP5-AS1和miR-25-3p,以及miR-25-3p和SOX4之间存在结合位点。结论 lncRNA OIP5-AS1可能通过miR-25-3p/SOX4轴促进高糖诱导的HK-2细胞损伤。

Fractalkine通过激活p38MAPK信号通路调控狼疮性肾炎小鼠Treg细胞凋亡

目的:探讨趋化因子Fractalkine(FKN)对狼疮性肾炎(LN)小鼠Treg细胞凋亡的影响及机制。方法:构建LN小鼠模型,使用FKN中和抗体(Anti-FKN)、p38MAPK信号通路的抑制剂(SB203580)、p38MAPK信号通路的激活剂(U-46619)作用于正常小鼠及模型小鼠,采用免疫组化检测小鼠肾组织中FKN、磷酸化p38(p-p38)及Foxp3的蛋白表达;采用免疫磁珠法分选模型小鼠脾脏CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞,使用腺病毒转染细胞的方式敲低FKN的表达水平,同时使用p38MAPK信号通路抑制剂(SB203580)及激活剂(U-46619)干预细胞。采用Western blot验证FKN敲低的成功转染、检测p38、p-p38、Foxp3、凋亡相关因子(Bax、Bcl-2及Cyt-c)的蛋白表达。结果:LN小鼠肾组织中的FKN及磷酸化p38MAPK的表达明显上调,低表达FKN可降低LN小鼠肾组织及Treg细胞中FKN和p-p38的表达,增加Foxp3的表达,同时增加细胞内抗凋亡因子Bcl-2蛋白的表达,而减少促凋亡因子Bax及Cyt-c蛋白的表达。p38MAPK信号通路抑制剂对上述因子的作用与低表达FKN相似,其激活剂可以逆转这些因子在LN小鼠Treg细胞中的表达。结论:FKN可能通过激活p38MAPK信号通路参与调控LN小鼠Treg细胞凋亡,为阐明LN的发病机制提供了实验依据。

miR-25-3p靶向ADAM15保护脓毒症诱导的人脐静脉内皮细胞损伤

目的探讨miR-25-3p是否靶向去整合素金属蛋白酶15(ADAM15)保护脓毒症诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤。方法以脂多糖(LPS)诱导HUVEC模拟脓毒症内皮细胞损伤。实时定量PCR、免疫印迹法检测LPS诱导后HUVEC中miR-25-3p和ADAM15表达量。噻唑蓝(MTT)实验、流式细胞术分析miR-25-3p和ADAM15表达对LPS处理的HUVEC活力、凋亡的影响。试剂盒检测丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)释放量以及乳酸盐脱氢酶(LDH)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性。双荧光素酶实验和免疫印迹法分析miR-25-3p对ADAM15的调控作用。结果LPS诱导后HUVEC中miR-25-3p表达量显著降低(P<0.05),ADAM15表达量显著增加(P<0.05)。过表达miR-25-3p或沉默ADAM15后LPS诱导的HUVEC活力、SOD和GSH-Px活性显著升高(P<0.05),凋亡率、MDA含量以及LDH释放量显著降低(P<0.05)。miR-25-3p直接靶向结合ADAM15并负调控其表达。过表达ADAM15显著减弱miR-25-3p过表达对LPS处理的HUVEC活力、凋亡、氧化损伤的影响(P<0.05)。结论miR-25-3p靶向ADAM15可拮抗LPS诱导的HUVEC损伤,miR-25-3p/ADAM15途径是脓毒症内皮细胞损伤的潜在靶点。

一个新的凋亡抑制蛋白P49的表达及氨基酸序列分析

从海灰翅夜蛾核型多角体病毒 (SpliNPV)中新发现的p4 9基因可抑制病毒感染引起的草地贪夜蛾细胞Sf9的凋亡 用杆状病毒表达系统BactoBac克隆表达并收获P4 9蛋白 ,发现所测定的表达蛋白的氨基酸序列与由核苷酸推导的氨基酸序列一致 ,证明p4 9基因经克隆转染后得到正确表达 P4 9蛋白上 91TVTDG95 氨基酸序列为Caspase识别结构 比较P35和P4 9蛋白 ,两蛋白同源性约为 4 8.8% 。

高糖环境诱导胰岛表达p25引起胰岛细胞损伤的研究

目的探讨在高糖环境中p25的表达及其对胰岛细胞损伤及胰岛素分泌的影响。方法实验分为db/db小鼠组(糖尿病组,n=5)和C57/BL小鼠组(正常对照组,n=5),进一步将从C57/BL小鼠胰岛分离的胰岛细胞组分为正常糖浓度糖刺组(5m M)和高浓度糖刺激组(30m M)。研究对象均为雄性小鼠,鼠龄13周,进行胰岛(islets)分离,培养及胰腺组织病理切片。用免疫印迹测定蛋白表达,酶联免疫法测定胰岛素分泌水平,免疫组化染色测定胰岛细胞凋亡。结果 p25在C57/BL组和C57/BL正常糖浓度刺激组的胰岛细胞均无表达,与之比较,p25在db/db组和C57/BL高糖刺激组的胰岛细胞均有明显的表达(P<0.05);与C57/BL组相比较,cleaved caspase3在db/db组胰岛细胞中的表达明显增加(P<0.05);与C57/BL组和C57/BL正常糖浓度组相比较,胰岛素分泌在db/db组和C57/BL高糖刺激组均明显减少(P<0.05)。结论高糖环境可刺激胰岛表达p25,引起胰岛细胞凋亡,减少胰岛素分泌。

两种昆虫杆状病毒诱导的细胞凋亡

首次发现粉纹夜蛾多粒包埋核多角体病毒（Ｔｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａｎｉｍｕｌｔｉｃａｐｓｉｄｎｕｃｌｅａｒｐｏｌｙ－ｈｅｄｒｏｓｉｓｖｉｒｕｓ，ＴｎＭＮＰＶ）和中国棉铃虫单粒包埋核多角体病毒（Ｈｅｌｉｏｔｈｉｓａｒｍｉｇｅｒａｓｉｎｇｌｅｃａｐ－ｓｉｄｎｕｃｌｅａｒｐｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓｖｉｒｕｓ，ＨａＳＮＰＶ）分别诱导斜纹夜蛾细胞Ｓｌ－ｚｓｕ－１和粉纹夜蛾细胞Ｔｎ－５Ｂ１－４发生典型的细胞凋亡．Ｓｌ－ｚｓｕ－１和Ｔｎ－５Ｂ１－４的细胞凋亡分别开始于病毒感染后１０ｈ和２４ｈ左右，其高峰期细胞凋亡率分别为９５％～１００％和６０％左右．约１０％的Ｔｎ－５Ｂ１－４细胞产生病毒包涵体．感染复数为５的病毒可诱导２种细胞的凋亡率达到高峰．ＴｎＭＮＰＶ和ＨａＳＮＰＶ的ＤＮＡ不能诱导细胞凋亡，只有用含芽生病毒的接种液攻击细胞才能诱导细胞凋亡．

斜纹夜蛾核多角体病毒抑制苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒诱导的斜纹夜蛾细胞凋亡

野生型苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒 (Autographacalifornicamulticapsidnucleopolyhedrovirus,AcMNPV)感染斜纹夜蛾 (Spodopteralitura)细胞系Sl zsu 1,可引起典型的细胞凋亡 ;但可以在草地夜蛾 (Spodopterafrugiperda)细胞Sf 9中复制并形成多角体 .比较了AcMNPV p35基因在病毒感染两种细胞的复制和转录情况 ,认为 p35在非受纳细胞中及时有效的表达能阻止细胞发生凋亡 ;共感染实验结果表明 ,斜纹夜蛾核多角体病毒(Spodopteralituramulticapsidnucleopolyhedrovirus,SpltMNPV)可以抑制AcMNPV诱导的细胞凋亡并可帮助病毒进行复制 ,推测SpltMNPV基因组中与 p35同源的 p4

昆虫杆状病毒细胞凋亡相关基因的研究进展

细胞凋亡(Apoptosis)或细胞程序性死亡(Programmed cell death,PCD),最早被Kerr(1972)定义为一种有秩序、受控制并按某种预定程序发展的细胞生理性自然死亡过程.

维生素D_3和他莫西芬对乳腺癌细胞凋亡影响

目的研究受1,25二羟维生素D3调控的雌激素受体α表达载体联合他莫西芬对雌激素受体阴性乳腺癌细胞凋亡的影响及其机制。方法将本室构建的含有4个拷贝维生素D反应元件(VDRE)和胸苷激酶启动子(Tk)的VDRE-Tk-ERα表达载体转染到MDA-MB-231细胞中,利用免疫荧光法检测1,25二羟维生素D3对雌激素受体α(ERα)的诱导表达并通过末端原位法检测1,25二羟维生素D3联合他莫西芬诱导转染该表达质粒的MDA-MB-231凋亡诱导效应。用免疫印迹(Western blot)法检测细胞核因子κB(NFκB)P65活性亚单位表达以及核转位情况的变化。结果1,25二羟维生素D3能够有效诱导MDA-M-231VDRE-ERα细胞内ERα的表达,在此基础上与他莫西芬联合作用较对照和单独作用组能够有效诱导该乳腺癌细胞发生凋亡。与此同时,NFκB P65活性亚单位的表达以及核转位均受到不同程度的抑制。结论利用1,25二羟维生素D3可通过靶控外源性雌激素受体α的表达进而调控NFκB P65活性亚单位的表达及活性,从而诱导细胞发生凋亡并最终恢复乳腺癌细胞对他莫西芬的化疗敏感性。