长链非编码RNA母系表达基因8通过微小RNA-495-3p调控急性髓性白血病细胞高迁移率族蛋白A1表达及对细胞增殖、凋亡的作用机制研究

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)母系表达基因8(MEG8)通过微小RNA-495-3p(miR-495-3p)调控急性髓性白血病细胞(AML)高迁移率族蛋白A1(HMGA1)表达及对细胞增殖、凋亡的机制。方法:选取50例经确诊为AML患者的骨髓活检标本与52例健康骨髓捐赠者骨髓标本,常规培养人AML细胞株HL-60,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法骨髓单个核细胞中lncRNA MEG8 mRNA表达。将HL-60细胞分为六组,即HL-60组(HL-60细胞)、si-NC组(转染si-NC)、si-lncRNA MEG8组(转染si-lncRNA MEG8)、mimic-NC组(转染mimic-NC)、miR-495-3p mimic组(转染miR-495-3p mimic)、si-lncRNA MEG8+miR-495-3p mimic组(转染si-lncRNA MEG8+miR-495-3p mimic),CCK-8法检测培养24、48、72 h各组细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot法检测细胞中HMGA1表达,双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA MEG8、miR-495-3p、HMGA1之间的关系。结果:与对照组相比,观察组lncRNA MEG8 mRNA表达升高(P<0.05)。与miR NC+MEG8 WT组比较,miR-495-3p mimic+MEG8 WT组荧光素酶活性下降(P<0.05),与miR NC+HMGA1 WT组比较,miR-495-3p mimic+HMGA1 WT组荧光素酶活性下降(P<0.05)。与HL-60组、si-NC组、mimic-NC组比较,si-lncRNA MEG8组、miR-495-3p mimic组和si-lncRNA MEG8+miR-495-3p mimic组24、48 h细胞增殖能力均显著下降,si-lncRNA MEG8+miR-495-3p mimic组细胞增殖率最低(P<0.05)。与HL-60组、si-NC组和mimic-NC组比较,si-lncRNA MEG8+miR-495-3p mimic组HL-60细胞凋亡率高于si-lncRNA MEG8组和miR-495-3p mimic组(均P<0.05)。与HL-60组、si-NC组和mimic-NC组比较,si-lncRNA MEG8+miR-495-3p mimic组HMGA1蛋白表达低于si-lncRNA MEG8组和miR-495-3p mimic组(均P<0.05)。结论:沉默lncRNA MEG8可能通过上调miR-495-3p来下调HMGB1,来抑制HL-60细胞的恶性生物学行为,可为探索AML潜在治疗靶点提供了新思路。

NEAT1、miR-27a-3p在阿尔茨海默病患者血清和脑脊液中的表达关系

目的:探究长链非编码RNA核富含丰富的转录本1(long chain non-coding RNA nuclear-enriched abundant transcript 1, LncRNA NEAT1)、miR-27a-3p在阿尔茨海默病(Alzheimer disease, AD)患者血清和脑脊液中的表达关系及意义。方法:选择2019年10月至2021年9月天津市第五中心医院神经内科收治的AD患者66例作为病例组,根据临床痴呆评定量表(clinical dementia rating, CDR)评分分为轻度组(≤1分,n=41)与中重度组(>1分,n=25);另取同期门诊其他就诊患者血清和脑脊液标本66例志愿者作为对照组。收集所有受试者的一般资料并评估认知程度,采用实时荧光定量PCR检测血清和脑脊液miR-27a-3p、NEAT1表达水平,酶联免疫吸附试验检测脑脊液β-淀粉样前体蛋白裂解酶1(β-site amyloid precursor protein cleaving enzyme 1,BACE1)、β淀粉样蛋白(amyloid β,Aβ)40和Aβ42水平,采用Spearman法分析血清miR-27a-3p、NEAT1水平与简易精神状态检测量表的相关性,采用Pearson法分析血清miR-27a-3p、NEAT1水平与Aβ沉积平均标准摄取值比率(standardized uptake value ratio, SUVR)及脑脊液miR-27a-3p、NEAT1、BACE1、Aβ42、Aβ40水平的相关性。结果:MMSE评分[21 (17,25),9(7,11)vs. 27 (21,34)]、MoCA评分[17 (12,21),10 (7,13)vs. 27 (21,31)]、血清miR-27a-3p水平(0.55±0.13,0.46±0.06 vs. 0.97±0.22)、脑脊液miR-27a-3p(0.48±0.10,0.35±0.10 vs. 1.03±0.31)、Aβ42水平[(303.55±36.77) ng/L,(231.45±34.14) ng/L vs.(499.99±53.63) ng/L]及Aβ42/Aβ40比值(0.030±0.008, 0.022±0.007 vs. 0.048±0.010)轻度组、中重度组AD患者均低于对照组(P均<0.05),且中重度组AD患者较轻度组低(P均<0.05);血清NEAT1水平(2.31±0.64,3.13±0.76 vs. 1.05±0.20)、SUVR(1.50±0.29,1.76±0.52 vs. 0.74±0.15)及脑脊液NEAT1(3.51±1.24,4.30±1.65 vs. 1.01±0.23)、BACE1水平[(55.78±5.98)μg/L,(72.32±16.08)μg/L vs.(21.39±3.73)μg/L]轻度组、中重度组AD患者均高于对照组(P均<0.05),且中重度组AD患者较轻度组高(P均<0.05)。AD患者血清NEAT1水平与SUVR及脑脊液NEAT1、BACE1呈正相关(r=0.350,0.606,0.341,P<0.05),与MMSE评分、MoCA评分呈负相关(r=-0.473,-0.482,P均<0.05);血清miR-27a-3p水平与脑脊液miR-27a-3p水平、MMSE评分、MoCA评分呈正相关(r=0.695,0.424,0.412,P<0.05),与SUVR及脑脊液BACE1水平呈负相关(r=-0.521、-0.447,P均<0.05)。结论:NEAT1、miR-27a-3p在AD患者血清及脑脊液中表达趋势具有一致性,NEAT1水平均升高,miR-27a-3p水平均降低,二者水平呈负相关,与AD患者脑中Aβ沉积程度有关,并参与AD的病情进展。

bta-miR-27a-5p的生物信息学分析及其对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响

为了探究bta-miR-27a-5p的生物学特性及其对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响,试验利用miRBase数据库对不同物种间miR-27a-5p的保守性进行分析,并构建了miR-27a-5p的系统进化树;利用TargetScan和miRWalk在线网站预测bta-miR-27a-5p的靶基因,并对靶基因进行GO功能注释和KEGG信号通路分析;利用实时荧光定量PCR方法检测在不同月龄夏南牛不同器官中bta-miR-27a-5p基因的相对表达量;最后通过实时荧光定量PCR方法、Western-blot检测、三酰甘油浓度测定和油红O染色探究过表达bta-miR-27a-5p后对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响。结果表明:不同物种miR-27a-5p的成熟序列保守性较高;牛miR-27a-5p基因与山羊的亲缘关系最近,与非洲爪蟾的亲缘关系最远;bta-miR-27a-5p靶基因主要在细胞过程、生物过程、细胞、细胞部分、结合等GO条目上富集,并富集在胰岛素抵抗、细胞衰老、脂肪细胞因子等信号通路中;bta-miR-27a-5p基因可在夏南牛的多个器官中表达,且12月龄夏南牛脂肪组织中的相对表达量均显著低于0月龄和24月龄(P<0.05);过表达bta-miR-27a-5p基因可显著或极显著抑制C/EBPα、PPARγ和FABP4基因和蛋白质表达(P<0.05或P<0.01),并显著或极显著降低3T3-L1前脂肪细胞内脂滴和三酰甘油浓度(P<0.05或P<0.01)。说明bta-miR-27a-5p在不同物种间高度保守,在不同月龄夏南牛脂肪组织中显著差异表达,并且能抑制3T3-L1前脂肪细胞分化,bta-miR-27a-5p基因可能是调控牛脂肪生成的候选miRNA。

Bcl-3、cyclin D1、P53、Ki-67蛋白在乳腺导管内增生性病变的表达及其意义

目的探讨B细胞淋巴瘤因子3(Bcl-3)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、P53基因编码蛋白和增殖细胞核蛋白(Ki-67)在乳腺导管内增生性病变中的表达及应用价值。方法采用免疫组化检测乳腺普通型导管增生(UDH)、柱状上皮病变(CCL)、非典型导管增生(ADH)和导管原位癌(DCIS)组织中Bcl-3、cyclin D1、P53和Ki-67蛋白的表达。结果Bcl-3、cyclin D1、P53、Ki-67蛋白在UDH中均少量表达;在CCL、ADH和DCIS中均明显表达,且随着病变的级别升高,阳性率逐渐增高(P<0.05);Bcl-3、cyclin D1、P53和Ki-67蛋白在CCL、ADH和DCIS中着色强阳性(++~+++)的表达,差异有统计学意义(P<0.05)。结论Bcl-3、cyclin D1、P53和Ki-67蛋白的表达在乳腺导管内增生性病变的病理诊断、鉴别诊断及指导临床治疗方面有较高应用价值,可显著提高乳腺导管内增生性病变的诊断准确率。

子宫内膜异位症不同r-AFS分期患者血清Furin,TGF-β,VEGF,netrin-1水平表达及Furin基因P1启动区r2071410 C/T位点多态性分析

目的了解子宫内膜异位症(endometriosis,EMT)不同r-AFS分期患者血清弗林蛋白酶(Furin)、肿瘤生长因子-β(tumor growth factor-β,TGF-β)、血管生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及神经轴突导向因子-1(neuron towards axon guidance factor-1,netrin-1)水平表达及Furin基因P1启动区r2071410 C/T位点多态性,探讨其与深圳地区EMT发病的相关性。方法选取2021年5月~2023年1月深圳市龙华区人民医院确诊的EMT患者102例为EMT组,并根据r-AFs分期法将EMT组分为I~II期和III~IV期。同时收集同期非EMT患者78例为对照组。采用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清Furin,TGF-β,VEGF及netrin-1水平,并采用反转录-实时荧光定量聚合酶链反应法(reverse transcription-real time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)分析Furin基因P1启动区r2071410 C/T位点多态性。结果EMT组患者血清Furin(140.84±47.02pg/ml),TGF-β(376.46±82.36ng/L)和VEGF水平(167.67±53.02ng/L)明显高于对照组(55.49±13.67pg/ml,216.37±15.04ng/L,102.27±8.45ng/L),而netrin-1水平(48.37±15.20pg/ml)明显低于对照组(165.85±15.63pg/ml),差异具有统计学意义(t=28.409,20.347,16.915,36.653,均P<0.05)。III~IV期患者血清Furin(192.41±20.62pg/ml),TGF-β(452.61±72.03ng/L)和VEGF水平(201.84±28.01ng/L)明显高于I~II期(78.05±16.54pg/ml,283.75±56.92ng/L,126.07±19.35ng/L),而netrin-1水平(37.95±11.34pg/ml)明显低于I~II期(61.05±9.52pg/ml),差异有统计学意义(t=31.071,18.054,19.183,21.625,均P<0.05)。经Pearson/Spearman相关性分析结果显示,Furin与TGF-β,VEGF水平及临床分期呈正相关(r=0.6149,0.7526,0.7905,均P<0.05),而与netrin-1水平呈负相关(r=-0.6701,均P<0.05)。EMT组患者Furin基因P1启动区r2071410 C/T位点TT基因型和T等位基因频率(42.16%,55.39%)明显高于对照组(7.69%,19.87%),且III~IV期TT基因型和T等位基因频率(51.79%,65.18%)比I~II期(30.43%,43.48%)明显升高,差异具有统计学意义(χ^(2)=26.500,46.472,4.721,9.626,均P<0.05)。EMT组不同基因型患者血清Furin水平差异具有统计学意义(F=51.286,P<0.001),其中TT基因型患者血清Furin水平(216.29±68.53pg/ml)明显高于CC(83.04±21.37pg/ml)和CT基因型(89.18±20.95pg/ml),差异具有统计学意义(t=27.146,25.719,均P<0.01),但CC与CT基因型之间差异无统计学意义(t=1.326,P>0.05)。结论EMT患者血清Furin水平明显升高,且与TGF-β,VEGF,netrin-1水平及临床分期呈一定相关性;同时Furin基因P1启动区r2071410 C/T位点呈多态性分布,其中TT基因型患者血清Furin水平升高更为明显,可能与深圳地区EMT发病有关。

PTEN基因稳定转染联合辐射对肿瘤细胞周期进程及G_1期激酶抑制蛋白P27^(kip1)表达的影响

目的:研究辐射诱导表达载体pEgr-hPTEN体外转染对人脑胶质瘤SHG-44细胞周期进程及G1期激酶抑制蛋白P27表达的影响。方法:脂质体包裹重组载体体外转染肿瘤细胞并经G418筛选稳定表达细胞株,光学显微镜和透射电镜观察稳定转染细胞形态,以Western blotting法检测PTEN基因的辐射诱导表达情况,应用流式细胞术研究稳定转染联合0~10Gy X-射线照射对胶质瘤细胞周期进程及P27kip1的表达。结果:稳定转染PTEN基因的SHG-44细胞PTEN蛋白的相对表达量可被辐射诱导增强,5Gy以内PTEN蛋白的相对表达量随照射剂量增加而增加;稳定转染细胞超微结构有明显的退行性改变,可见核内染色质趋边的类似早期凋亡的改变;稳定转染联合X-射线照射细胞周期发生明显改变,细胞从G1期到S期发生阻滞,细胞周期相关蛋白P27表达上调。结论:PTEN基因稳定转染联合辐射可诱导肿瘤细胞G1期阻滞,并与P27kip1表达上调有关。

p27kip1基因对食管癌细胞DNA复制及蛋白质合成的影响

目的 :研究p2 7kip1基因对人食管癌细胞EC -970 6的DNA复制及蛋白质合成的影响。方法 :重组体腺病毒Ad -p2 7kip1转染EC -970 6细胞 ,采用细胞生长计数、[3H] -TdR、[3H] -Leucine掺入法、流式细胞术 ,研究其对食管癌细胞DNA复制及蛋白合成的影响。结果 :Ad -p2 7kip1组细胞生长明显受抑 ,[3H] -TdR和 [3H ] -Leucine掺入量均明显减少 ,与对照组比较P <0 0 1;食管癌细胞的增殖明显受抑制。结论 :p2 7可有效抑制食管癌细胞的增殖活性 ,这与其抑制食管癌细胞DNA复制及蛋白质合成有关。

鼻咽癌组织HSP27与P53、P21癌基因蛋白表达相关性研究

探讨鼻咽癌 (nasopharyngeal carcinoma,NPC)组织中热应激蛋白 2 7(heat stress protein 2 7,HSP2 7) ,P5 3及 P2 1癌基因蛋白表达水平及其相互关系 ,采用间接免疫荧光染色和 SABC相结合的双重荧光染色法 ,分析 3种蛋白在鼻咽癌发生、发展及预后中的作用。结果发现 :32例 NPC中 HSP2 7,P5 3和 P2 1阳性表达比例 (阳性率 )分别为83.8%、 5 0 %、 93.8% ;8例鼻咽增生性炎症组织中三者比例为 4/ 8、 0 / 8、 4/ 8;4例正常组织则全部阴性表达。 HSP2 7、P5 3、 P2 1的共表达以 HSP2 7与 P2 1的共表达最为显著 ,且与 NPC恶性程度和临床分期有关。提示 :HSP2 7及 P2 1阳性表达可能是 NPC发生的早期变化 ,可将二者联合作为 NPC早期诊断及预防的敏感生物标志物。

p27^(Kip1)基因及蛋白在骨肉瘤中的表达及其意义

目的探讨p27Kip1基因在骨肉瘤MG-63、U2细胞株及骨肉瘤组织中的表达情况及其与骨肉瘤生物学行为的关系。方法培养人骨肉瘤细胞MG-63、U2和人成骨细胞OB;以半定量RT-PCR技术检测3种细胞中p27Kip1基因的mRNA表达情况。以免疫细胞化学染色技术检测MG-63、U2及OB中p27Kip1蛋白的表达情况。以免疫组织化学方法检测骨肉瘤、骨软骨瘤、正常骨3种组织中p27Kip1蛋白的表达情况,并探讨其与临床病理学特征之间的关系。结果p27Kip1基因mRNA的表达在人骨肉瘤细胞MG-63、U2和人成骨细胞OB中没有差别。p27Kip1蛋白的表达在OB中高于MG-63和U2,MG-63和U2间p27Kip1蛋白的表达没有差别。骨肉瘤组织的p27Kip1蛋白表达低于骨软骨瘤组织和正常骨组织,p27Kip1蛋白表达与Enneking外科分期及是否发生转移相关。结论骨肉瘤细胞、组织p27Kip1蛋白表达明显降低;p27Kip1蛋白的表达可作为骨肉瘤预后判断的一个有价值的指标。

1,25-二羟维生素D3对子宫内膜癌HEC-1-A细胞增殖与S期激酶相关蛋白及抑癌基因p27表达的影响

目的 观察1,25-二羟维生素D3对人子宫内膜癌HEC-1-A细胞增殖及S期激酶相关蛋白（Skp2）基因、抑癌基因p27表达的影响,探讨其抗癌机制.方法 应用免疫组织化学方法检测人子宫内膜癌HEC-1-A细胞表达维生素D受体（VDR） 选用人子宫内膜癌HEC-1-A细胞进行体外培养,用CCK-8法测定不同浓度1,25-二羟维生素D3作用细胞后不同时间后细胞生长抑制率,流式细胞仪进行细胞周期分析,采用荧光实时定量聚合酶链反应（PCR）及蛋白质印迹法检测Skp2/p27基因表达的变化.结果 人子宫内膜癌HEC-1-A细胞表达VDR,且定位于细胞核内 1×（10-8～10-6）mol/L浓度的1,25-二羟维生素D3作用于HEC-1-A细胞1～5 d范围内各不同浓度处理组细胞生长增殖均受到明显抑制,并且随着作用浓度增加,细胞增殖能力逐渐下降 1,25-二羟维生素D3能增加G0/G1期细胞比例,降低S、G2/M期细胞比例,从而降低细胞增殖指数（P＜0.01） 在mRNA、蛋白质水平上,能降低Skp2表达,而p27mRNA减少,p27蛋白表达明显增加.结论 1,25-二羟维生素D3对人子宫内膜癌HEC-1-A细胞有抑制作用,可能是通过转录水平下调Skp2基因表达,同时由于Skp2的减少增加p27蛋白稳定性,减少其降解,从而产生抑癌作用.

skp2及p27Kip1蛋白与晚期胃癌患者临床预后的关系

目的探讨细胞S期激酶相关蛋白(skp)2及p27Kip1蛋白与晚期胃癌患者临床预后的关系。方法选取2013年5月至2015年1月开滦点医院林西医院收治130例晚期胃癌患者,免疫组化法检测skp2和p27Kip1蛋白表达水平,采用单因素和多因素Cox回归模型,探讨skp2和p27Kip1蛋白表达与晚期胃癌临床预后的关系。结果晚期胃癌组织skp2和p27Kip1阳性表达在不同卡氏功能状态(KPS)评分、肿瘤直径、手术、腹腔淋巴结转移、肝转移、临床分期及组织学分化患者中差异存在统计学意义(P<0.05),而性别、年龄、化疗、放疗及腹水等指标差异未见统计学意义(P>0.05)。年龄、KPS评分、肿瘤直径、手术、化疗、放疗、腹腔淋巴结转移、肝转移、腹水、临床分期、组织学分级、skp2蛋白表达和p27Kip1蛋白表达水平是晚期胃癌患者5年存活的影响因素。Cox回归分析结果显示,KPS评分(≤60分)、组织学分级(低分化)、腹腔淋巴结转移、skp2蛋白阳性表达和p27Kip1蛋白阴性表达是晚期胃癌患者预后的独立危险因素(P<0.05)。结论晚期胃癌组织中skp2蛋白阳性表达和p27Kip1蛋白阴性表达是晚期胃癌临床预后差的独立危险因素,可作为晚期胃癌治疗方案、预后评估等方面的有效指标。

p27^(KIP1)-绿色荧光蛋白融合基因在HCC-9204细胞中的瞬时表达

目的 :观察 p2 7KIP1 绿色荧光蛋白 (GFP)融合蛋白在肝癌细胞系HCC 92 0 4中的表达及定位。方法 :根据p2 7KIP1基因的编码顺序 ,应用PCR技术将 p2 7KIP1基因 3′末端终止密码TAA突变为TGT ,并通过基因重组技术将其与GFP基因融合。再采用脂质体转染法 ,将 p2 7KIP1 GFP融合基因转入HCC 92 0 4细胞中 ,用荧光显微镜观察其表达情况。结果 :DNA序列测定的结果显示 ,p2 7KIP1基因与基因库中已收录的 p2 7KIP1的序列相比较 ,仅有 1个核苷酸的差异。荧光显微镜显示 ,在转染GFP基因的HCC 92 0 4 /GFP细胞中 ,荧光均匀地分布于整个细胞 ;而在转染融合基因 p2 7KIP1 GFP的HCC 92 0 4 /GFP p2 7细胞中 ,绿色荧光主要见于核内。结论 :转染的HCC 92 0 4细胞能高效表达融合基因p2 7KIP1 GFP ,且定位于细胞核内 ,与 p2 7KIP1基因的表达方式相同。

人热敏瞬时受体通道1基因转染对猫角膜内皮细胞P27蛋白表达的影响

目的:探讨人热敏瞬时受体通道1(TRP1)基因转染对猫角膜内皮细胞P27蛋白表达的影响,探讨热敏TRP1基因对角膜内皮细胞增殖周期的作用,为该基因应用于人角膜内皮细胞提供理论依据。方法:将20只健康足月幼猫随机分为实验组和对照组,每组10只,麻醉后取角膜内皮细胞进行培养,培养后实验组细胞通过脂质体介导的方法转染人热敏TRP1基因,对照组采用5.0μL PBS代替表达载体加入培养基。RT-PCR观察人热敏TRP1基因mRNA表达水平,Western blotting观察猫角膜内皮细胞内P27蛋白的表达。继续培养96h观察目的基因转染对细胞分裂再生活性的影响。结果:细胞培养、加热后钙离子流入明显增多;人热敏TRP1基因转染后RT-PCR结果显示。实验组条带密度显著高于对照组(t=2.21,P=0.037);Western blotting结果显示,实验组P27蛋白表达显著高于对照组,差异有统计学意义(t=2.53,P=0.021);实验组和对照组有丝分裂指数、G1期细胞比例差异均有统计学意义(χ2=3.26,χ2=4.18,P<0.05)。结论:人热敏TRP1基因转染可以增加猫角膜内皮细胞P27蛋白表达,抑制角膜内皮细胞增殖。

宫颈腺癌中HPV感染与Skp2、p27^kip1蛋白表达的研究

目的 探讨S期激酶相关蛋白2（Skp2）和细胞周期调控因子p27^kip1在宫颈腺癌发生发展中的作用，分析高危型人乳头瘤病毒（HPV）感染与Skp2、p27^kip1蛋白表达关系。方法 采用组织微阵列技术结合原位杂交和免疫组化（二步法）检测HPV16／18DNA和Skp2、p27^kip1蛋白在86例宫颈腺癌和24例慢性宫颈炎组织中的表达。结果 宫颈腺癌组HPV16／18DNA与Skp2蛋白阳性表达率分别为65．1％和68．6％，均显著高于慢性宫颈炎组（P〈0．01）。p27^kip1蛋白在宫颈腺癌组中的阳性表达率为55．8％，明显低于慢性宫颈炎组（P〈0.05）。HPV16／18感染与宫颈腺癌病理分级和组织学类型无明显相关性，但与Skp2表达里正相关（P〈0．05），与p27^kip1表达呈负相关（P〈0．05）。Skp2表达与宫颈腺癌的病理分级有关，G2、G3组阳性表达率均明显高于G1组（P〈0．05）。Skp2和p27^kip1表达与宫颈腺癌组织学类型有明显相关性。结论 宫颈康癌的发生与HPV16／18感染及Skp2、p27^kip1蛋白的表达异常相关，三者协同作用导致宫颈腺癌恶性发展。

人乳头瘤病毒感染对宫颈腺癌中p27^kip1蛋白表达的影响

目的探讨人乳头瘤病毒（HPV）感染对宫颈腺癌中细胞周期调控因子p27^kip1蛋白表达的影响以及二者在宫颈腺癌发生过程的作用。方法采用原位杂交和免疫组化（二步法）检测24例慢性宫颈炎和86例宫颈腺癌组织的HPV16／18DNA和p27^kip1蛋白表达情况。结果HPV16/18DNA在宫颈腺癌组织中的阳性率为65．1％，显著高于慢性宫颈炎组织8．3％（P〈0．01）。p27^kip1蛋白表达在宫颈腺癌组织中的阳性率为55．8％，明显低于慢性宫颈炎组织79.2％（P〈0．05）．HPV16／18感染与宫颈腺癌的组织学类型无关，但与p27^kip1表达呈负相关（P〈0．05）。p27^kip1表达与官颈腺癌组织学类型有明显相关性，透明细胞腺癌p27^kip1阳性表达率明显低于其它类型宫颈腺癌（P〈0．05）。结论HPV16／18感染可能引起p27^kip1蛋白表达异常，从而导致宫颈腺癌发生。

S相激酶相关蛋白和P27kip1蛋白表达与胃癌临床病理特征的相关性研究

在本次研究中主要分析细胞5相激酶相关蛋白以及P27kip1与胃癌的临床关系。方法 本次研究中针对67例临床诊断为胃癌的患者,利用免疫组化S-P法检测Skp2和P27kip1蛋白的表达情况,结果 在胃癌患者中Skp2蛋白表达率达33.33%,而对于正常患者来说,胃组织Skp2蛋白表达率为10.73%,两组数据具有明显统计差异。除此之外,根据研究发现Skp2蛋白阳性表达率与患者的肿瘤大小、年龄,性别以及病灶位置无明显关系,但与患者的肿瘤分化程度具有紧密联系。Skp2与P27kip1的表达是呈现负相关关系的。结论 临床上Skp2异常表达会从一定程度上加速细胞周期转化,以促进胃癌症状发生,在胃癌发生中,泛素-蛋白酶体途径发挥重要作用。

非小细胞肺癌组织EMSY、PIDD表达与同源重组修复基因的相关性及其临床意义

目的研究非小细胞肺癌(NSCLC)组织中EMSY转录抑制因子(EMSY)、p53诱导的死亡结构域蛋白1(PIDD)表达与同源重组修复基因表达的相关性及临床意义。方法选择2022年1月—2023年4月河北北方学院附属第一医院呼吸与危重症医学科诊治NSCLC患者80例。采用实时荧光定量PCR检测癌组织及癌旁组织中EMSY、PIDD表达与同源重组修复基因人乳腺癌易感基因1(BRCA1)、切除修复交叉互补基因1(ERCC1),核糖核苷酸还原酶亚单位1(RRM1)表达。Pearson相关分析EMSY、PIDD表达与同源重组修复基因表达的相关性;分析EMSY、PIDD表达与NSCLC临床病理相关参数的关系及在NSCLC诊断中的价值。结果NSCLC癌组织中EMSY、PIDD、BRCA1、ERCC1、RRM1 mRNA相对表达量均高于癌旁组织(t/P=30.176/<0.001,27.821/<0.001,25.075/<0.001,16.680/<0.001,25.610/<0.001)。NSCLC癌组织中EMSY、PIDD mRNA与BRCA1、ERCC1、RRM1 mRNA表达均呈正相关(r/P=0.654/<0.001,0.712/<0.001,0.584/<0.001;0.724/<0.001,0.661/<0.001,0.563/<0.001)。低分化程度、有淋巴结转移及TNM分期Ⅲ期NSCLC癌组织EMSY、PIDD mRNA表达分别显著高于高中分化程度、无淋巴结转移及TNM分期Ⅰ~Ⅱ期NSCLC癌组织(t/P=13.693/<0.001,13.380/<0.001,12.197/<0.001;10.289/<0.001,11.130/<0.001,9.405/<0.001)。EMSY、PIDD mRNA及两项联合诊断NSCLC的AUC分别为0.834、0.802、0.906,两项联合诊断的AUC大于单一指标(Z=4.751、5.257,P均<0.001)。结论EMSY、PIDD在NSCLC癌组织中表达升高,与同源重组修复基因表达及不良临床病理特征有关,两者联合有助于NSCLC的诊断。

ERCC1、K-ras、TP-73在替雷利珠单抗联合TP化疗方案治疗非小细胞肺癌中的评估价值

目的研究探讨核苷酸切除修复交叉互补基因1(ERCC1)、Kirsten-Rous肉瘤病毒蛋白(K-ras)、肿瘤蛋白P73(TP73)在替雷利珠单抗结合紫杉醇+顺铂(TP)化疗方案治疗NSCLC中的评估价值。方法选取2020年1月至2021年12月本院收治的126例NSCLC肺癌患者为研究对象,按随机抽签法分为对照组、观察组,各63例。对照组以TP化疗方案治疗,观察组增加替雷利珠单抗治疗。评估组间临床疗效、肿瘤标记蛋白、免疫指标、生存周期、不良反应。结果观察组患者的客观缓解率为69.84%(44/63)高于对照组患者为52.38%(33/63),观察组疾病控制率为82.54%(52/63),高于对照组患者为66.67%(42/63)(P<0.05)。化疗1周期、化疗3周期、化疗6周期时,观察组ERCC1、K-ras、TP-73水平均低于对照组(P<0.05)。治疗后观察组免疫功能补体C3、补体C4、CD40细胞低于对照组,NK细胞高于对照组(P<0.05)。观察组患者的TTP、PFS、总生存期均高于对照组(P<0.05)。观察组不良反应发生率为19.05%(12/63),对照组为12.70%(8/63),组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论替雷利珠单抗联合TP化疗方案治疗肺癌有良好的治疗效果,能够改善患者免疫功能,延长患者生存周期,治疗安全性较好,且ERCC1、K-ras、TP-73水平变化可反映替雷利珠单抗联合TP化疗方案在肺癌治疗中的效果,在综合疗效评估中有较高的应用价值。

LncRNA PVT1对弥漫大B细胞淋巴瘤细胞活性的影响及其机制

目的 探究长链非编码RNA(LncRNA)浆细胞瘤变体异位基因1(PVT1)对弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)细胞生物学行为的影响,并分析其潜在机制。方法 收集41例DLBCL病人和15例淋巴结反应性增生(RLH)病人的组织标本,体外培养人正常B淋巴细胞GM12878和人DLBCL细胞(OCI-Ly3、U2932、TMD8),对TMD8细胞进行转染,将其分为control组(只转染Lipofectamine-2000)、si-NC组(转染si-NC)、inhibitor-NC组(转染inhibitor-NC)、si-PVT1组(转染si-PVT1)、miR-145-5p inhibitor组(转染miR-145-5p inhibitor)、si-PVT1+miR-145-5p inhibitor组(转染si-PVT1和miR-145-5p inhibitor)。应用qRT-PCR方法检测各组细胞PVT1 mRNA和miR-145-5p表达,Western Blot方法检测CDK6蛋白表达,CCK-8法检测TMD8细胞增殖,流式细胞术检测TMD8细胞周期变化,Transwell实验检测TMD8细胞迁移和侵袭能力,RNA pull down和双荧光素酶报告基因法验证PVT1、miR-145-5p与细胞周期蛋白依赖性激酶6(CDK6)的靶向关系。结果 DLBCL组织PVT1 mRNA、CDK6蛋白的表达水平高于RLH组织,miR-145-5p表达低于RLH组织(t=14.264~24.445,P<0.05)。与GM12878细胞比较,OCI-Ly3、U2932、TMD8细胞中PVT1 mRNA、CDK6蛋白表达均增加,miR-145-5p表达均减少(F=69.557~234.718,P<0.05)。6组细胞PVT1 mRNA、miR-145-5p、CDK6蛋白表达及增殖率、G0/G1期细胞比例、S期细胞比例、迁移和侵袭细胞数差异有统计学意义(F=25.589~319.150,P<0.05);与control组比较,si-PVT1组细胞PVT1 mRNA、CDK6蛋白、增殖率、S期细胞比例、迁移和侵袭数量降低,miR-145-5p表达、G0/G1期细胞比例升高(P<0.05),miR-145-5p inhibitor组呈相反变化(P<0.05);下调miR-145-5p表达可减弱敲低PVT1对TMD8细胞恶性生物学行为的抑制作用(P<0.05)。过表达PVT1 mRNA增高CDK6蛋白表达、细胞增殖率、S期细胞比例、迁移和侵袭数量,降低miR-145-5p表达、G0/G1期的细胞比例(F=38.025~327.887,P<0.05)。miR-145-5p是PVT1的靶基因,且miR-145-5p可靶向下调CDK6表达。结论 敲低PVT1可抑制DLBCL细胞恶性生物学行为,其作用机制可能与调控miR-145-5p/CDK6轴有关。

LncRNA FOXD3-AS1靶向miR-127-3p对AngⅡ诱导的血管平滑肌细胞的影响

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)叉头盒转录基因D3反义RNA1(FOXD3-AS1)对血管紧张素(Ang)Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法采用0.001 mol/L的AngⅡ处理人主动脉VSMCs。实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测FOXD3-AS1和miR-127-3p的表达水平。CCK-8、流式细胞术、Transwell、Western印迹检测细胞活力、凋亡、迁移、侵袭及磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)和蛋白激酶B(AKT)的磷酸化水平。双荧光素酶报告基因实验和RT-qPCR验证FOXD3-AS1和miR-127-3p的靶向调控关系。结果AngⅡ诱导后VSMCs细胞存活率、迁移和侵袭细胞数、FOXD3-AS1、p-PI3K和p-AKT表达显著升高,凋亡率、miR-127-3p表达显著降低(P<0.05)。抑制FOXD3-AS1表达或过表达miR-127-3p后,AngⅡ处理的VSMCs细胞存活率、迁移和侵袭细胞数、p-PI3K和p-AKT表达显著降低,凋亡率显著升高(P<0.05)。FOXD3-AS1靶向负性调控miR-127-3p表达。抑制FOXD3-AS1能够逆转抑制miR-127-3p对AngⅡ处理的VSMCs细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭及p-PI3K和p-AKT表达的影响(P<0.05)。结论抑制FOXD3-AS1能够降低AngⅡ诱导的VSMCs细胞增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡,其机制可能与上调miR-127-3p和抑制PI3K/AKT信号通路有关。