细胞周期蛋白激酶抑制调控蛋白p21在HHV-8病毒裂解复制周期的作用

目的研究细胞周期蛋白激酶抑制调控蛋白p21对人类疱疹病毒8型(human herpesvirus 8,HHV-8)病毒裂解复制周期的影响。方法组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase,HDAC)抑制剂SAHA预处理后,倒置荧光显微镜观察红色荧光蛋白(RFP)阳性的iSLK.219细胞数,实时定量PCR检测TREx-K-Rta BCBL-1细胞中HHV-8病毒相关基因的mRNA水平。脂质体转染p21-siRNA后,免疫印迹法检测iSLK.219和TREx-K-Rta BCBL-1细胞中p21蛋白表达,计算RFP阳性iSLK.219细胞百分率,检测TREx-K-Rta BCBL-1细胞中ORF50和PAN的mRNA水平,CCK-8法和台盼蓝染色观察细胞存活情况。结果SAHA显著增强iSLK.219细胞RFP阳性率、TREx-K-Rta BCBL-1细胞中HHV-8裂解复制周期相关基因ORF50、PAN及K8.1的mRNA水平和p21蛋白表达,差异有统计学意义(P<0.05)。siRNA沉默p21后,iSLK.219细胞RFP阳性率、TREx-K-Rta BCBL-1细胞中HHV-8裂解复制周期相关基因ORF50和PAN mRNA水平显著下降,差异有统计学意义(P<0.05),且保护SAHA介导的TREx-K-Rta BCBL-1细胞死亡。结论抑制HDAC活性通过调控p21促进HHV-8病毒裂解复制。

微小RNA-103a-3p通过肿瘤蛋白53调控凋亡抑制剂1/P53对骨质疏松症的影响

目的探讨微小RNA(miR)-103a-3p调控细胞肿瘤蛋白53调控凋亡抑制剂1(TRIAP1)对成骨细胞分化以及去卵巢小鼠骨量的影响。方法MC3T3-E1细胞分为正常对照(NC)组、miR-103a-3p-NC组、miR-103a-3p模拟(mimc)组、miR-103a-3p mimic+TRIAP1-NC组、miR-103a-3p mimic+TRIAP1 mimic组。Real-time PCR检测细胞miR-103a-3p、TRIAP1、P53的mRNA表达,MTT法和流式细胞术检测细胞增殖及凋亡,免疫荧光染色和茜红素染色检测细胞骨架F-actin表达和矿化情况,ELISA检测细胞碱性磷酸酶(ALP)活性。24只雌性小鼠设为sham组、骨质疏松症(OP)组、miR-103a-3p antagonist-NC组和miR-103a-3p antagonist组,每组6只摘取双侧卵巢制备OP模型,sham组仅分离卵巢组织周围脂肪。测定骨组织miR-103a-3p、TRIAP1、P53、ALP、骨钙素(OCN)、骨桥蛋白(OPN)的mRNA表达,microCT测定骨密度(BMD)、骨矿物质含量(BMC),HE染色观察骨组织病理改变。结果细胞转染miR-103a-3p mimic后,miR-103a-3p及P53表达升高、TRIAP1表达降低,细胞增殖降低、凋亡增加,F-actin表达减弱,钙结节数量减少,ALP活性降低(P<0.01);而在增加转染TRIAP1 mimic后,以上miR-103a-3p mimics导致的结果均得到显著逆转(P<0.01)。OP组小鼠骨组织miR-103a-3p、P53表达升高,TRIAP1、ALP、OCN、OPN基因表达降低,BMD、BMC降低,骨组织结构破坏(P<0.05);miR-103a-3p antagonist组小鼠骨组织miR-103a-3p及P53表达降低,TRIAP1、ALP、OCN、OPN基因表达升高,BMD、BMC升高,骨组织结构改善(P<0.05)。结论MiR-103a-3p可介导TRIAP1/P53抑制成骨细胞增殖及矿化,而miR-103a-3p拮抗治疗可减少OP小鼠骨量丢失。

蛋白激酶全抑制分析揭示KG-1细胞增殖的分子机制

目的:通过分析KG-1细胞对各种蛋白激酶抑制剂的反应,探讨其增殖的分子机制。方法:采用CCK-8法、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western-blot检测各种蛋白激酶抑制剂对KG-1细胞增殖、相关基因mRNA表达水平以及FGFR1下游信号通路蛋白磷酸化水平的影响。结果:NVP-BGJ398和PD173074有效抑制KG-1细胞的增殖,表明FGFR及其下游信号通路在KG-1细胞增殖过程中具有关键作用。使用FGFR抑制剂处理后,p-FGFR1和p-STAT5水平显著下降(P<0.001),p-Akt水平稍有下降(P<0.05),并未影响p-ERK水平(P>0.05)。结论:FGFR1OP2-FGFR1主要作用于下游STAT5信号通路,以促进细胞增殖。蛋白激酶全抑制分析是一种可靠而直接的方法,可用于确定癌细胞增殖的分子机制。

周期蛋白依赖性蛋白激酶抑制物1A相互作用锌指蛋白1在临床相关疾病中的研究进展

周期蛋白依赖性蛋白激酶抑制物1A相互作用锌指蛋白1(Ciz1)作为细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂p21^(Cip1/Waf1)的互相作用蛋白,不仅参与哺乳动物DNA复制,还参与细胞周期、细胞凋亡等生物学活动的调节。Ciz1在常见肿瘤(如肺癌、尤因肉瘤、结肠癌、胆囊癌、前列腺癌、乳腺癌)中过表达,表明Ciz1可能是肿瘤生长的驱动因素。Ciz1还与阿尔茨海默病、肌张力障碍等疾病发生相关。深入研究Ciz1与临床相关疾病的关系,可能为多种疾病的治疗提供新靶点。

组蛋白H3K27me3沉默子重塑上调胃黏膜高级别上皮内瘤变磷酸甘油醛激酶1表达

目的 绘制胃黏膜高级别上皮内瘤变(High-Grade Intraepithelial Neoplasia, HGIN)组织的组蛋白H3K27me3沉默子图谱,寻找沉默子调控的重要靶基因。方法 从本院内镜中心收集HGIN与正常胃黏膜组织各24例,采用H3K27me3染色体靶向切割和标签化(Cleavage Under Target&Tagmentation, CUT&Tag)测序技术捕获基因组修饰区域。通过生物信息学分析比较两类组织的沉默子信号特征以及差异;整合RNA测序数据及高通量染色体构象捕获技术(Hi-C)公共数据,分析沉默子重塑调控的靶基因及调控的潜在生物学过程。结果 与正常胃黏膜相比,HGIN组织H3K27me3修饰数量减少,信号强度全局性降低,呈现H3K27me3信号峰重塑现象;转录组差异分析结果显示,与正常胃黏膜组织相比,HGIN共有8 887个差异表达基因,其中表达上调基因4 335个,表达下调基因4 552个,其中CTNNB1等肿瘤发生相关基因显著上调;整合分析表观组学和转录组学数据,发现沉默子丢失可能在转录水平上调氨基酸生物合成、精氨酸与脯氨酸代谢和糖酵解等关键代谢基因,如糖酵解关键酶磷酸甘油醛激酶1(phosphoglycerate kinase1,PGK1)表达,进而促进胃黏膜上皮内瘤变。结论 组蛋白H3K27me3沉默子信号丢失是HGIN表观重塑特征之一,沉默子丢失可能与PGK1等糖酵解和氨基酸代谢基因表达紊乱相关。

叉头蛋白转录因子3a／p27激酶抑制蛋白1及氧化应激介导紫铆因抗肺腺癌的机制

目的观察紫铆因（Butein）的抗肺腺癌作用及叉头蛋白转录因子3a（FOX03a）／p27激酶抑制蛋白1（p27kipl）和氧化应激在该过程中的作用。方法常规培养A549细胞，分别给予25、50、100μmol／L的Butein处理24h后，检测细胞活力、细胞迁移能力、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶（Caspase）-3活性、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）氧化酶活性、活性氧（ROS）含量、总谷胱甘肽（GSH）水平，从而明确Butein通过激活氧化应激抑制A549细胞。Westernblot法检测FOX03a、p27kipl、B淋巴细胞瘤-2（bcl-2）、bcl-2相关x蛋白（bax）的表达水平。进而采用小干扰RNA（siRNA）干扰法敲减FOX03a表达并检测FOX03a、p27kipl以及bax、bcl-2的表达水平，从而明确FOX03a／p27kipl通路在该过程中的作用。结果25、50、100μmol／L的Butein处理A549细胞24h后，细胞活力分别下降到（78．3±4．6）％、（63．5±4．8）％和（40．1±4．1）％（t=10．330，P=0．000），细胞划痕间距增大到（120．0±8．4）％、（150．0±10．6）％和（175．0±11.1）％（t=4．777，P=0．001）。Butein处理后Caspase-3、NADPH氧化酶的活性增强，ROS含量增多，总GSH减少。Westernblot结果显示Butein激活了FOX03a／p27kipl通路，上调了bax／bcl-2的比值。siRNA处理后阻断了FOX03a／p27kip1通路，逆转了Butein引起的bax的增多和bcl-2的减少。结论Butein能显著抑制肺腺癌A549细胞增殖和迁移，该作用可能是通过激活FOX03a／p27kipl信号通路和细胞内氧化应激进而诱导细胞凋亡实现的。

血清胸苷激酶1、细胞角质蛋白19片段抗原21-1及dickkopfWNT信号通路抑制剂1对食管癌的诊断价值

目的探讨血清胸苷激酶1(TK1)、细胞角质蛋白19片段抗原21-1(CYFRA21-1)及dickkopf WNT信号通路抑制剂1(DKK1)对食管癌的诊断价值。方法选取62例食管癌患者作为食管癌组,59例健康体检者作为对照组。对比两组受试者TK1、CYFRA21-1、DKK1水平,对比不同分期食管癌患者TK1、CYFRA21-1、DKK1水平,分析TK1、CYFRA21-1、DKK1单独及联合检测对食管癌的诊断价值。结果食管癌组患者TK1、CYFRA21-1、DKK1水平均明显高于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。Ⅲ~Ⅳ期食管癌患者TK1、CYFRA21-1、DKK1水平均明显高于Ⅰ~Ⅱ期患者,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。TK1+CYFRA21-1+DKK1联合检测诊断食管癌的灵敏度和特异度分别为88.50%、79.10%,曲线下面积为0.779(95%CI:0.695~0.864),均高于三者单独检测。结论TK1、CYFRA21-1、DKK1联合检测有利于提高食管癌的诊断效能,防止误诊漏诊,三者对其病情评估具有一定参考价值。

血清基质金属蛋白酶-9、可溶性尿激酶型纤溶酶原激活物受体及纤溶酶原激活物抑制因子-1联合检测预测老年慢性心力衰竭患者预后的价值

目的 探讨血清基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、可溶性尿激酶型纤溶酶原激活物受体(suPAR)及纤溶酶原激活物抑制因子-1(PAI-1)表达与老年慢性心力衰竭(CHF)患者心功能分级及预后的关系。方法 选取廊坊市中医医院收治的108例CHF患者及同期50例健康体检者分别作为研究组和对照组。采集受试者血液标本,测定血清MMP-9、suPAR及PAI-1水平。比较不同纽约心脏病协会(NYHA)心功能分级患者及不同预后患者的血清指标差异,并分析各血清指标对不良预后的预测价值。结果 与对照组相比,研究组血清MMP-9、suPAR、PAI-1水平更高,差异有统计学意义(P<0.05)。NYHA分级Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级CHF患者的血清MMP-9、suPAR、PAI-1水平呈逐渐升高趋势,差异均有统计学意义(P<0.05)。随访1年的结果显示,预后良好65例,预后不良43例,预后不良率为39.81%(43/108)。与预后良好患者相比,预后不良患者的年龄更大,合并高血压率更高,左室射血分数(LVEF)更低,左室舒张末期内径(LVEDD)、MMP-9、suPAR及PAI-1水平更高,差异有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归分析显示,年龄、MMP-9、suPAR、PAI-1均是老年CHF患者预后不良的危险因素,LVEF是老年CHF患者预后不良的保护因素(P<0.05)。血清MMP-9、suPAR、PAI-1单独检测及3项联合检测的曲线下面积(AUC)分别为0.711、0.829、0.768和0.840,3项联合检测的敏感度为88.21%,特异度为79.46%。结论 老年慢性CHF患者的血清MMP-9、suPAR、PAI-1表达水平与心功能分级及预后不良密切相关。

NEAT1、miR-27a-3p在阿尔茨海默病患者血清和脑脊液中的表达关系

目的:探究长链非编码RNA核富含丰富的转录本1(long chain non-coding RNA nuclear-enriched abundant transcript 1, LncRNA NEAT1)、miR-27a-3p在阿尔茨海默病(Alzheimer disease, AD)患者血清和脑脊液中的表达关系及意义。方法:选择2019年10月至2021年9月天津市第五中心医院神经内科收治的AD患者66例作为病例组,根据临床痴呆评定量表(clinical dementia rating, CDR)评分分为轻度组(≤1分,n=41)与中重度组(>1分,n=25);另取同期门诊其他就诊患者血清和脑脊液标本66例志愿者作为对照组。收集所有受试者的一般资料并评估认知程度,采用实时荧光定量PCR检测血清和脑脊液miR-27a-3p、NEAT1表达水平,酶联免疫吸附试验检测脑脊液β-淀粉样前体蛋白裂解酶1(β-site amyloid precursor protein cleaving enzyme 1,BACE1)、β淀粉样蛋白(amyloid β,Aβ)40和Aβ42水平,采用Spearman法分析血清miR-27a-3p、NEAT1水平与简易精神状态检测量表的相关性,采用Pearson法分析血清miR-27a-3p、NEAT1水平与Aβ沉积平均标准摄取值比率(standardized uptake value ratio, SUVR)及脑脊液miR-27a-3p、NEAT1、BACE1、Aβ42、Aβ40水平的相关性。结果:MMSE评分[21 (17,25),9(7,11)vs. 27 (21,34)]、MoCA评分[17 (12,21),10 (7,13)vs. 27 (21,31)]、血清miR-27a-3p水平(0.55±0.13,0.46±0.06 vs. 0.97±0.22)、脑脊液miR-27a-3p(0.48±0.10,0.35±0.10 vs. 1.03±0.31)、Aβ42水平[(303.55±36.77) ng/L,(231.45±34.14) ng/L vs.(499.99±53.63) ng/L]及Aβ42/Aβ40比值(0.030±0.008, 0.022±0.007 vs. 0.048±0.010)轻度组、中重度组AD患者均低于对照组(P均<0.05),且中重度组AD患者较轻度组低(P均<0.05);血清NEAT1水平(2.31±0.64,3.13±0.76 vs. 1.05±0.20)、SUVR(1.50±0.29,1.76±0.52 vs. 0.74±0.15)及脑脊液NEAT1(3.51±1.24,4.30±1.65 vs. 1.01±0.23)、BACE1水平[(55.78±5.98)μg/L,(72.32±16.08)μg/L vs.(21.39±3.73)μg/L]轻度组、中重度组AD患者均高于对照组(P均<0.05),且中重度组AD患者较轻度组高(P均<0.05)。AD患者血清NEAT1水平与SUVR及脑脊液NEAT1、BACE1呈正相关(r=0.350,0.606,0.341,P<0.05),与MMSE评分、MoCA评分呈负相关(r=-0.473,-0.482,P均<0.05);血清miR-27a-3p水平与脑脊液miR-27a-3p水平、MMSE评分、MoCA评分呈正相关(r=0.695,0.424,0.412,P<0.05),与SUVR及脑脊液BACE1水平呈负相关(r=-0.521、-0.447,P均<0.05)。结论:NEAT1、miR-27a-3p在AD患者血清及脑脊液中表达趋势具有一致性,NEAT1水平均升高,miR-27a-3p水平均降低,二者水平呈负相关,与AD患者脑中Aβ沉积程度有关,并参与AD的病情进展。

维甲酸对人胃癌细胞HGC-27增殖、细胞周期及细胞周期素依赖性激酶抑制蛋白(P16、P21、P27)表达的影响

目的 观察维甲酸 (RA)作用人胃癌细胞系GHC - 2 7后 ,细胞增殖、细胞周期及细胞周期素依赖性激酶抑制蛋白 (CKIs) (P16、P2 1、P2 7)表达的变化 ,探讨RA抑制HGC 2 7增殖 ,促进其分化的作用机制。方法 不同浓度RA作用HGC 2 7细胞后 ,MTT法检测细胞增殖情况 ,流式细胞仪检测细胞周期 ,Westermblot、Northernblot分别检测CKIs(P16、P2 1、P2 7)蛋白、mRNA水平。结果 在一定浓度范围之内 ,RA能抑制HGC 2 7细胞增殖 ,细胞周期发生G1→S期阻滞 ,并上调P2 1、P2 7的蛋白、mRNA水平 ,但对P16的蛋白、mRNA水平没有影响。结论 RA能通过上调CKIs尤其是P2 1、P2 7的表达而抑制HGC 2 7增殖 ,促进其分化。

细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂p27kip1在翼状胬肉中的表达

目的 探讨细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂p2 7kip1在翼状胬肉中的表达及其在翼状胬肉发病机制中的作用。方法 采用免疫组化法对手术切除的翼状胬肉标本和正常结膜组织进行增殖性核抗原及细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂 p2 7kip1蛋白检测。结果 正常结膜组织中和翼状胬肉中增殖性核杭原表达分别为 0 .2 6 8± 0 .0 2 1和 0 .4 75± 0 0 4 6 (P<0 .0 5 ) ,p2 7kip1分别为 0 .4 2 3± 0 .0 31和 0 .2 4 2± 0 0 17(P <0 .0 5 )。结论 结膜中细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂p2 7kip1的低表达可能与翼状胬肉的发生、发展有关。

激素性股骨头坏死患者微小核糖核酸、骨形态发生蛋白-2、1型纤溶酶原激活物抑制剂表达水平及其临床意义

目的探讨激素性股骨头坏死患者血清微小核糖核酸-672-5p(miR-672-5p)、微小核糖核酸-29b(miR-29b)、骨形态发生蛋白-2(BMP-2)、1型纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)表达水平及其对激素性股骨头坏死的预测价值。方法选取2020年3月至2023年3月河南科技大学第一附属医院收治的116例激素性股骨头坏死患者作为病例组,根据国际骨循环研究会(ARCO)分期标准将其分为Ⅰ期组(41例)、Ⅱ期组(30例)和Ⅲ期组(45例),另选本院同期125例健康体检者作为对照组。比较病例组和对照组及不同ARCO分期激素性股骨头坏死患者血清miR-672-5p、miR-29b、BMP-2、PAI-1水平,利用受试者工作特征(ROC)曲线分析各指标的预测价值。结果病例组患者的血清miR-672-5p、miR-29b、PAI-1水平高于对照组,血清BMP-2水平低于对照组,组间差异有统计学意义(P<0.05)。Ⅲ期组患者血清miR-672-5p、miR-29b、PAI-1水平高于Ⅱ期组和Ⅰ期组,Ⅱ期组高于Ⅰ期组(P<0.05);Ⅲ期组患者血清BMP-2水平低于Ⅱ期组和Ⅰ期组,Ⅱ期组低于Ⅰ期组(P<0.05)。激素性股骨头坏死患者血清miR-672-5p、miR-29b、PAI-1水平与ARCO分期呈正相关,BMP-2与ARCO分期呈负相关(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清miR-672-5p、miR-29b、BMP-2、PAI-1预测激素性股骨头坏死的AUC值均大于0.8(P<0.05),表明均具有较高的预测激素性股骨头坏死的效能。结论激素性股骨头坏死患者血清miR-672-5p、miR-29b、PAI-1呈高表达,而血清BMP-2呈低表达,四者均具有较高的预测激素性股骨头坏死的效能。

细胞周期蛋白激酶抑制蛋白p27^(kip1)在肿瘤预后中的研究现状

细胞增殖是可调控的 ,细胞周期正向和负向调节因素参与其中。目前已发现细胞周期蛋白 /周期蛋白激酶抑制剂同细胞周期G1期的调控有关。这些抑制剂中 ,p2 7kip1的研究特别受重视 ,在G1期细胞周期蛋白 /周期蛋白激酶复合物的调节中起主要作用。p2 7高表达可引起G1期阻滞 ,抑制多种癌细胞的生长。目前仅在少数种类的肿瘤中检测了p2 7的免疫活性。在结肠癌和乳腺癌中 ,p2 7低表达与肿瘤进展和低生存率相关。研究证明p2

细胞周期蛋白依赖激酶抑制剂——p27kip1研究进展

p2 7kip1是一个广谱的周期蛋白依赖激酶抑制剂 ,在细胞周期的调控中起重要的作用 ,本文综述 p2 7kip1的发现 ,p2 7kip1的功能、作用机制以及 p2

S相激酶相关蛋白和P27kip1蛋白表达与胃癌临床病理特征的相关性研究

在本次研究中主要分析细胞5相激酶相关蛋白以及P27kip1与胃癌的临床关系。方法 本次研究中针对67例临床诊断为胃癌的患者,利用免疫组化S-P法检测Skp2和P27kip1蛋白的表达情况,结果 在胃癌患者中Skp2蛋白表达率达33.33%,而对于正常患者来说,胃组织Skp2蛋白表达率为10.73%,两组数据具有明显统计差异。除此之外,根据研究发现Skp2蛋白阳性表达率与患者的肿瘤大小、年龄,性别以及病灶位置无明显关系,但与患者的肿瘤分化程度具有紧密联系。Skp2与P27kip1的表达是呈现负相关关系的。结论 临床上Skp2异常表达会从一定程度上加速细胞周期转化,以促进胃癌症状发生,在胃癌发生中,泛素-蛋白酶体途径发挥重要作用。

细胞周期蛋白激酶抑制蛋白p27kip1在头颈肿瘤预后中的研究

细胞增殖是可调控的,恶性肿瘤的本质在于细胞周期调节失控。目前已发现细胞周期蛋白/细胞周期蛋白 激酶抑制剂与细胞周期G_1期调控有关,其中p27kip1负性调节细胞增殖,在G_1期细胞增殖调节中发挥重要作用。目前研究发现p27kip1的表达与头颈部恶性肿瘤的发展、预后密切相关,是很有价值的预后预测指标。

乳腺癌中细胞周期依赖性蛋白激酶抑制蛋白p27^(Kip1)表达水平

目的 :探讨p2 7Kip1蛋白在乳腺癌中的表达水平与乳腺癌生物学行为的关系和对预后的影响。方法 :用免疫组化法检测了 132例乳腺癌和 16例正常乳腺组织中p2 7Kip1蛋白的表达水平 ,对其中有完整随访资料的 90例乳腺癌进行了临床病理学特征和生存时间关系的分析。结果 :p2 7Kip1蛋白在正常乳腺组织中高表达率为 10 0 % (16/ 16) ;在乳腺癌中高表达率为 4 0 15 % (5 3/ 132 ) ,低表达率为 5 9 85 %(79/ 132 ) ,差异有显著性 (P <0 0 0 5 )。不同类型的乳腺癌中p2 7Kip1蛋白的表达水平差异无显著性 (P>0 1)。乳腺癌组织p2 7Kip1蛋白表达水平与病理组织学分级、肿瘤内坏死、核分裂数、腋淋巴结转移情况、局部复发和远处转移显著相关 (P <0 0 0 5 ) ,与肿块大小、年龄、ER水平、月经状况无显著关系。生存关系分析显示p2 7Kip1蛋白低表达的乳腺癌患者生存率明显低于p2 7Kip1蛋白高表达者 (P <0 0 0 1)。Cox模型则显示p2 7Kip1蛋白是乳腺癌的一个独立的预后标志物。结论 :①p2 7Kip1蛋白的表达水平与乳腺癌的组织学类型无关 ;②p2 7Kip1蛋白是检测乳腺癌预后有价值的独立指标 ,有助于临床选择高危复发病例 ;③p2

电针夹脊穴对腰椎间盘退变兔髓核细胞Cav-1和p38 MAPK蛋白表达的影响

目的 通过观察电针夹脊穴对腰椎间盘退变(intervertebral disc degeneration, IDD)兔髓核细胞中小窝蛋白1(caveolin 1,Cav-1)及p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase, p38 MAPK)蛋白表达的影响,探讨电针延缓IDD髓核细胞衰老的作用机制。方法 采用随机数字表法将25只雄性新西兰大白兔随机分为正常组、假模型组、模型组、模型+电针组及模型+假电针组,每组各5只。造模方式采用加压器对L_4~L_5椎间盘进行200 N压力持续轴向加压28天,通过磁共振成像(magnetic resonance imaging, MRI)判断是否造模成功。正常组兔予以自然喂养,不予任何干预;模型组兔使用加压器对L_4~L_5椎间盘加压28天,造模成功后不作任何治疗;假模型组兔同模型组造模方法,保留加压装置及克氏针但不完成椎体加压及干预治疗;模型+电针组兔在模型组的基础上,自造模成功后第1天起予以双侧L_4~L_5夹脊穴电针治疗,电针强度为1~2mA,每次20 min, 1次/天,6天为1疗程,每个疗程间隔1天,共4个疗程;模型+假电针组兔同模型+电针组方法,但在针刺夹脊穴时仅接上电针不接通电流。实验周期结束后,观察各组兔一般情况、MRI下椎间盘信号强度并进行Pfirrmann分级,并采用Western blot法检测椎间盘髓核细胞中Cav-1及p38 MAPK蛋白表达。结果 与正常组兔比较,假模型组兔的一般情况无明显变化,MRI下椎间盘信号差异较小;模型组兔一般情况变差,MRI下椎间盘信号为黑色低信号表现;模型+电针组兔一般情况明显缓解改善,MRI下椎间盘信号增强呈灰-白信号表现,质地更均匀;模型+假电针组兔一般情况较差,无明显改善,MRI下椎间盘呈灰黑色信号,未见明显信号改善。同正常组兔比较,假模型组兔椎间盘Pfirrmann评分、椎间盘髓核细胞Cav-1蛋白表达、p38 MAPK蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05),模型组兔椎间盘Pfirrmann评分、椎间盘髓核细胞Cav-1蛋白表达、p38 MAPK蛋白表达显著升高(P均<0.05);与模型组、模型+假电针组兔比较,模型+电针组兔椎间盘Pfirrmann评分、椎间盘髓核细胞Cav-1蛋白表达、p38 MAPK蛋白表达明显降低(P均<0.05)。结论 电针可能通过下调椎间盘髓核细胞中Cav-1及p38 MAPK蛋白表达以延缓髓核细胞衰老所致的IDD。

miR-17-5p对缺血性脑卒中大鼠的神经保护作用及其对细胞外调节蛋白激酶1/2信号通路的影响

目的:观察miR-17-5p对缺血性脑卒中大鼠的神经保护作用及其对胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)信号通路的影响。方法:将大鼠随机数字法分为模型组、miR-17-5p mimics组、miR-17-5p inhibitor组。建模后,模型组经尾静脉注射10 mL/kg生理盐水,miR-17-5p mimics组、miR-17-5p inhibitor组分别经尾静脉注射7μL miR-17-5p mimics、miR-17-5p inhibitor与RNAi脂质体转染试剂的混合溶液。各组大鼠苏醒后的24 h进行神经功能评分,测定脑梗死体积、大鼠脑组织含水量,检测缺血侧大脑皮质细胞凋亡率,caspase-3、Bax、Bcl-2和ERK1/2蛋白表达。结果:miR-17-5p mimics组的神经功能障碍评分、脑梗死体积、脑组织含水量、缺血侧大脑皮质细胞凋亡率明显低于模型组,miR-17-5p inhibitor组的神经功能障碍评分、脑梗死体积、脑组织含水量、缺血侧大脑皮质细胞凋亡率显著高于其他2组;miR-17-5p mimics组大鼠缺血脑组织中caspase-3、Bax蛋白表达明显低于模型组,Bcl-2、p-ERK1/2蛋白表达高于模型组;miR-17-5p inhibitor组大鼠缺血脑组织中caspase-3、Bax、p-ERK1/2蛋白表达显著高于其他2组,Bcl-2蛋白表达低于其他2组。结论:miR-17-5p对缺血性脑卒中大鼠的脑损伤具有一定的保护作用,miR-17-5p可抑制ERK1/2信号通路激活。

沉默HMGB1通过抑制p38 MAPK信号通路减少LPS或IL-17A诱导的中耳腔上皮细胞的炎症与凋亡

目的:探讨高迁移率族蛋白B1(High Mobility Group Protein 1,HMGB1)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)或白细胞介素-17A(interleukin-17A,IL-17A)诱导人中耳腔上皮细胞(human middle ear epithelial cells,HMEEC)的炎症反应与凋亡的调控作用与机制。方法:培养HMEEC细胞系。将HMEEC分为对照组、LPS组、LPS联合短发夹RNA(shRNA)沉默质粒阴性对照处理组(LPS+shNC组)、LPS联合shRNA沉默HMGB1处理组(LPS+shHMGB1组)、LPS联合p38-丝裂原激活的蛋白激酶(p38 MAPK)抑制剂SB202190处理组(LPS+SB202190组)、IL-17A组、IL-17A+shNC组、IL-17A+shHMGB1组、IL-17A+SB202190组。酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测TNF-α、IL-1β和IL-6的水平变化。用Western blot检测粘蛋白5AC(mucoprotein 5AC,MUC5AC)、粘蛋白8(mucoprotein 8,MUC8)、p38 MAPK、磷酸化的p38 MAPK(p-p38 MAPK)、E26样蛋白1(E-twenty-six like 1 protein,ELK1)、B细胞淋巴瘤2蛋白(B-cell lymphoma 2 protein,Bcl-2),以及Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)的表达。流式细胞术检测细胞的凋亡。结果:与对照组比,LPS组或IL-17A组的HMEEC的凋亡率都增加,且HMGB1、MUC5AC、MUC8、TNF-α、IL-1β、IL-6、p38、p-p38、ELK1、Bax的表达水平升高,而Bcl-2的表达水平降低(均P<0.05)。与LPS组或IL-17A组比,LPS+shHMGB1组或IL-17A+shHMGB1组的凋亡率都降低,且HMGB1、MUC5AC、MUC8、TNF-α、IL-1β、IL-6、p38、p-p38、ELK1、Bax的表达水平都减少,而Bcl-2的表达水平升高(均P<0.05)。与LPS组或IL-17A组比,LPS+SB202190组或IL-17A+SB202190组的的凋亡率都降低,MUC5AC、MUC8、TNF-α、IL-1β、IL-6、p38、p-p38、ELK1、Bax的表达水平都降低,而Bcl-2的表达水平升高(均P<0.05)(均P<0.05)。结论:沉默HMGB1通过抑制p38 MAPK信号通路减少LPS或IL-17A诱导的HMEEC的炎症与凋亡。