布氏杆菌抗原蛋白pbp39基因重组穿梭质粒的构建与鉴定

为构建融合表达PBP39-P276的E.coli-分枝杆菌穿梭载体,分别以布氏杆菌(Brucella abortus)基因组DNA和PMD 18-T-p276质粒为模板,通过PCR扩增得到约1206bp的pbp39抗原基因和276bp的p276基因序列,将pbp39基因与穿梭表达质粒pMV361重组,得到重组质粒pMV361-pbp39,再将p276基因序列克隆至pMV361-pbp39中,得到重组质粒pMV361-pbp39-p276。质粒pMV361-pbp39-p276经PCR扩增鉴定证实,克隆基因pbp39和抗原基因p276正确插入载体pMV361。重组质粒pMV361-pbp39-p276可望在卡介苗(BCG)中分泌性表达布氏杆菌的免疫保护性抗原蛋白PBP39-P276,该质粒的构建成功为发展新型布氏杆菌疫苗奠定了基础。

SH2B1基因及miR-276-3p对猪背部脂肪沉积的影响

本试验旨在研究SH2B衔接因子蛋白1(SH2B adaptor protein 1,SH2B1)基因在猪不同组织和生长发育各阶段背部脂肪中的表达情况,预测调控该基因的miR-276-3p对猪背部脂肪表达的影响。应用实时荧光定量PCR技术检测SH2B1基因在猪脂肪、下丘脑等6种组织,以及在30、60、90、120和180 d猪背部脂肪组织中的相对表达量。靶标预测SH2B1基因的调控miRNA,并通过实时荧光定量PCR检测miR-276-3p对该基因的调控作用。结果显示,SH2B1基因在猪的6种组织中均有表达,且在脂肪组织中表达量最高,在肌肉组织中表达量最低。在猪生长发育各阶段背部脂肪中SH2B1基因均有表达,在前期(30和60 d)表达量较低,在中、后期(90、120和180 d)持续高表达,且显著高于前期表达量(P<0.05)。高、低背膘厚组背部脂肪中miR-276-3p与SH2B1基因均呈差异表达,且两者表达呈相反趋势,miR-276-3p在高背膘厚组中的表达量显著低于低背膘厚组(P<0.05),而SH2B1基因在高背膘厚组中的表达量却显著高于低背膘厚组(P<0.05)。miR-276-3p可通过靶向负调控SH2B1基因,影响猪背部脂肪的沉积。本试验结果为进一步深入研究猪背部脂肪沉积和背膘厚差异的分子机制提供参考。

miR-276-3p在白纹伊蚊幼虫几丁质代谢调控中的作用研究

目的探讨miR-276-3p在白纹伊蚊幼虫几丁质代谢中的作用,为实现利用几丁质代谢相关miRNA防控白纹伊蚊提供新的靶标。方法合成miR-276-3p特异性模拟物agomir和抑制剂antagomir的壳聚糖纳米颗粒,通过饲喂法过表达或抑制白纹伊蚊幼虫体内miR-276-3p的表达。利用反转录实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测幼蚊体内miR-276-3p的相对表达量,利用生化分析法测定幼蚊及蛹的几丁质含量变化,并统计幼蚊存活率、化蛹率及蛹的羽化率。表达量差异比较使用two-way方差分析,几丁质含量两组间比较使用t检验,存活率差异分析采用乘积极限法的log-rank检验和Mantel-Cox检验。结果miR-276-3p agomir壳聚糖纳米颗粒可有效过表达白纹伊蚊幼虫体内miR-276-3p的表达量,第1和第3天后表达量较对照分别上调73.96%(F=932.401,P<0.001)、16.95%(F=114.551,P=0.047);miR-276-3p antagomir壳聚糖纳米颗粒可有效抑制miR-276-3p的表达,第1和第5天后表达量较对照分别下调13.42%(F=293.632,P<0.001)和1.49%(F=69.542,P=0.014);过表达miR-276-3p导致幼虫几丁质含量上升了25.34%(t=85.838,P=0.019),幼虫存活率下降,第8天较对照组差异有统计学意义(χ^(2)=77.490,P=0.020),化蛹率为70.00%,低于对照组的90.00%;抑制miR-276-3p表达导致白纹伊蚊幼虫与蛹的几丁质含量分别下降了40.06%(t=71.811,P=0.028)和46.82%(t=92.147,P=0.011)。结论miR-276-3p对于白纹伊蚊幼虫的几丁质含量、存活率及化蛹率存在显著影响,相关研究结果为利用miRNAs调控白纹伊蚊幼虫的几丁质代谢,进而实现蚊虫防控提供了基础资料。