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非洲猪瘟病毒p30-54融合蛋白基因的构建、表达及其多克隆抗体制备 被引量:6
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作者 李杰 张星星 +6 位作者 郭晶 孟庆玲 乔军 张国武 王晓婷 李妍 才学鹏 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2018年第9期126-130,共5页
为了制备反应原性良好的非洲猪瘟病毒(ASFV)血清学诊断抗原,根据ASFV p30和p54基因序列,通过大肠杆菌密码子优化后分别体外合成全长的p30和p54基因,利用重叠延伸PCR(SOE-PCR)将2个基因片段串联,构建p30-54融合基因。将构建的融合基因片... 为了制备反应原性良好的非洲猪瘟病毒(ASFV)血清学诊断抗原,根据ASFV p30和p54基因序列,通过大肠杆菌密码子优化后分别体外合成全长的p30和p54基因,利用重叠延伸PCR(SOE-PCR)将2个基因片段串联,构建p30-54融合基因。将构建的融合基因片段克隆入p ET-28a(+)表达载体中,构建原核表达载体p ET-p30-54,转化至E. coli BL21(DE3)感受态细胞中,用IPTG诱导表达,检测融合蛋白的反应原性,并制备抗该融合蛋白的多克隆抗体。SDS-PAGE检测结果显示,表达的p30-54融合蛋白分子质量为47. 1 ku; Western blot分析显示,该融合蛋白可被ASFV阳性血清特异性识别,表明其具有良好的反应原性。将p30-54融合蛋白用Ni-NTA亲和层析柱纯化后免疫小鼠,成功制备了抗ASFV p30-54融合蛋白多克隆抗体。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 p30-54融合蛋白 大肠杆菌表达系统 多克隆抗体 反应原性
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非洲猪瘟病毒P30-54融合蛋白在杆状病毒表达系统中的表达及反应原性研究
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作者 李杰 张星星 +6 位作者 郭晶 张国武 王晓婷 李妍 才学鹏 孟庆玲 乔军 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2019年第3期684-688,共5页
【目的】非洲猪瘟(ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起的一种严重危害猪养殖业的急性烈性传染病。【方法】为了制备特异性强、敏感性高的ASFV血清学诊断用抗原,本研究利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达了ASFV P30-54融合蛋白基因。将P30... 【目的】非洲猪瘟(ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起的一种严重危害猪养殖业的急性烈性传染病。【方法】为了制备特异性强、敏感性高的ASFV血清学诊断用抗原,本研究利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达了ASFV P30-54融合蛋白基因。将P30-54融合蛋白基因克隆入杆状病毒转座载体质粒pFastBac1中,构建重组质粒pFastBac-P30-54;将重组质粒转化DH10 Bac感受态细菌进行重组,经抗性与蓝白斑筛选得到杆状病毒重组质粒Bacmid-P30-54;将reBacmid-P30-54转染sf9细胞,获得重组杆状病毒reAcMNPV-P30-54。将获得的reAcMNPV-P30-54接种sf9细胞,待细胞出现CPE时收集细胞,用间接免疫荧光试验(IFA)和SDS-PAGE进行分析重组蛋白的表达情况;通过Western blot检测重组蛋白的反应原性。【结果】在重组杆状病毒中成功表达P30-54蛋白,该重组蛋白可与ASFV多克隆抗体发生免疫学反应。【结论】证实该重组蛋白具有良好的反应原性。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 p30-54融合蛋白 杆状病毒表达系统 反应原性
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Porcine Immunoglobulin Fc Fused P30/P54 Protein of African Swine Fever Virus Displaying on Surface of S. cerevisiae Elicit Strong Antibody Production in Swine 被引量:8
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作者 Chen Chen Deping Hua +5 位作者 Jingxuan Shi Zheng Tan Min Zhu Kun Tan Lilin Zhang Jinhai Huang 《Virologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2021年第2期207-219,共13页
African swine fever virus(ASFV)infects domestic pigs and European wild boars with strong,hemorrhagic and high mortality.The primary cellular targets of ASFV is the porcine macrophages.Up to now,no commercial vaccine o... African swine fever virus(ASFV)infects domestic pigs and European wild boars with strong,hemorrhagic and high mortality.The primary cellular targets of ASFV is the porcine macrophages.Up to now,no commercial vaccine or effective treatment available to control the disease.In this study,three recombinant Saccharomyces cerevisiae(S.cerevisiae)strains expressing fused ASFV proteins-porcine Ig heavy chains were constructed and the immunogenicity of the S.cerevisiae-vectored cocktail ASFV feeding vaccine was further evaluated.To be specific,the P30-Fcγand P54-Fcαfusion proteins displaying on surface of S.cerevisiae cells were produced by fusing the Fc fragment of porcine immunoglobulin IgG1 or IgA1 with p30 or p54 gene of ASFV respectively.The recombinant P30-Fcγand P54-Fcαfusion proteins expressed by S.cerevisiae were verified by Western blotting,flow cytometry and immunofluorescence assay.Porcine immunoglobulin Fc fragment fused P30/P54 proteins elicited P30/P54-specific antibody production and induced higher mucosal immunity in swine.The absorption and phagocytosis of recombinant S.cerevisiae strains in IPEC-J2 cells or porcine alveolar macrophage(PAM)cells were significantly enhanced,too.Here,we introduce a kind of cheap and safe oral S.cerevisiae-vectored vaccine,which could activate the specific mucosal immunity for controlling ASFV infection. 展开更多
关键词 African swine fever virus(ASFV) S.cerevisiae porcine immunoglobulin Fc p30-Fcγ/p54-Fcαfusion proteins
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