针刺原俞配穴法对失眠大鼠脑组织p38MAPK信号通路的影响

目的:基于p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路探讨针刺原俞配穴法治疗失眠的作用机制。方法:将50只大鼠随机分成五组,即空白组、模型组、原穴组、背俞组、原俞配组,每组10只。除空白组外,其余四组采用腹腔注射氯苯丙氨酸混悬液(PCPA)造模,造模成功后对各组实施相应干预措施,空白组与模型组大鼠仅抓取、不予针刺治疗;原穴组针刺双侧“神门”“太冲”;背俞组针刺双侧“心俞”“肝俞”;原俞配穴组针刺双侧“神门”“太冲”“心俞”“肝俞”。治疗结束后观察各组大鼠一般状态,检测大鼠血清白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、下丘脑组织p38MAPK蛋白及mRNA的表达。结果:与空白组相比,模型组大鼠体重下降显著,皮毛晦暗凌乱,焦躁,血清IL-6、TNF-α浓度和下丘脑中的p38MAPK的mRNA、蛋白明显升高(P<0.01)。与模型组相比,原穴组、背俞组、原俞配组大鼠体重下降较少,皮毛凌乱,精神状态有明显改善,焦躁症状明显减轻,血清中IL-6、TNF-α浓度和下丘脑中的p38MAPK的mRNA表达量和蛋白水平明显下降(P<0.05),且原俞配穴组效果优于原穴组、背俞组。结论:针刺可以改善失眠大鼠的睡眠情况,且原俞配穴效果更佳,其可能是通过抑制p38MAPK信号通路,降低炎症反应发挥作用。

紫草素对过敏性紫癜性肾炎小鼠肾功能、炎症及p38MAPK/NF-κB信号通路的影响

目的:探讨紫草素对过敏性紫癜性肾炎(HSPN)小鼠肾功能、炎症及p38MAPK/NF-κB信号通路的影响。方法:建立HSPN小鼠模型,将造模成功小鼠随机分为模型组、环磷酰胺组(给予环磷酰胺22 mg/kg)、紫草素低剂量组(给予紫草素5 mg/kg)、紫草素高剂量组(给予紫草素10 mg/kg),每组12只;另外取12只小鼠不进行处理,正常饲养作为对照组。各组小鼠给予相应药物干预28 d。全自动生化分析仪和酶联免疫吸附法分别检测小鼠肾功能和血清炎症指标;HE染色观察肾脏组织病理学变化;荧光定量PCR和蛋白印迹法分别检测肾脏组织中p38MAPK、NF-κB mRNA和蛋白表达。结果:对照组小鼠肾脏组织肾小管及肾小球结构清晰,无炎性细胞浸润、系膜增生情况;与对照组相比,模型组小鼠出现肾脏组织炎性细胞浸润、系膜增生现象严重,肾小管萎缩,肾小球血管网结构模糊、血管充血等病理损伤,血清肌酐(SCr)、血尿素氮(BUN)、24 h尿液中尿蛋白(24 h UP)、血清白细胞介素(IL-6、IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、肾脏组织p38MAPK、NF-κB mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.05);与模型组相比,环磷酰胺组、紫草素低、高剂量组小鼠肾脏组织炎性细胞浸润、肾小管上皮细胞空泡变性及肿胀等现象得到改善,SCr、BUN、24 h UP、血清IL-6、IL-1β、TNF-α、肾脏组织p38MAPK、NF-κB mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.05);紫草素高剂量组上述指标改善效果优于紫草素低剂量组(P<0.05)。结论:紫草素可改善HSPN小鼠肾功能和炎症反应,减轻肾脏病理损伤,其机制可能与抑制p38MAPK/NF-κB信号通路的激活有关。

三七总皂苷通过p38 MAPK通路抑制内毒素诱导的小胶质细胞活化

目的:探讨三七总皂苷(PNS)通过p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)通路对脂多糖(LPS)诱导活化的BV2小胶质细胞中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响。方法:将BV2小胶质细胞分为空白对照组(Control)、LPS激活组和LPS+三七总皂苷干预组(LPS+PNS)。CCK-8法检测BV2小胶质细胞的活力,确定最适合的药物干预浓度。利用Western Blot和免疫荧光检测BV2小胶质细胞中p38 MAPK和TNF-α的表达及p38 MAPK磷酸化水平(p-p38 MAPK)变化。结果:与空白对照组相比,PNS对BV2小胶质细胞的细胞活力无显著差异,最终选定100 mg/L作为药物干预浓度。Western Blot、免疫荧光结果提示,LPS激活后,BV2小胶质细胞中TNF-α的表达显著升高,p38 MAPK磷酸化水平增加(P<0.05);PNS干预后,与LPS激活组相比,TNF-α表达显著下降,p38 MAPK磷酸化水平降低(P<0.05)。使用p38 MAPK通路抑制剂(SB203580)作用后,PNS联合SB203580组(LPS+PNS+SB203580)中,TNF-α表达及p38 MAPK磷酸化水平变化与LPS+PNS组相比无显著差异(P>0.05)。此外,p38 MAPK在各组的变化无显著性差异(P>0.05)。结论:PNS可能通过p38 MAPK通路抑制活化的BV2小胶质细胞分泌的炎性因子TNF-α的表达。

川芎多糖调节p38 MAPK/NF-κB信号通路对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响

目的:探讨川芎多糖(LCPS)调节p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)/核因子-κB(NF-κB)信号通路对大鼠心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的影响。方法:将144只大鼠数字编码后按照随机数字表法分为假手术组、模型组、盐酸维拉帕米(VH)组(20 mg/kg)和LCPS低剂量组(50 mg/kg)、LCPS中剂量组(100 mg/kg)、LCPS高剂量组(200 mg/kg),每组24只大鼠。给药预处理14 d后,采用阻断冠状动脉左前降支30 min制备MIRI大鼠模型。再灌注2 h后,通过2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色法、心脏超声法、苏木精-伊红(HE)染色法检测大鼠心肌梗死面积、心功能指标[左室舒张末期压力(LVEDP)、左室收缩末期压力(LVESP)、左室内压最大上升速率(+dp/dt_(max))、左室内压最大下降速率(-dp/dt_(max))]和心肌组织病理变化;酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清心肌酶和心肌组织炎性因子水平;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测心肌组织p38 MAPK/NF-κB信号通路相关蛋白表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠心肌梗死面积、LVEDP、病理评分、心肌酶[乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)]水平、炎性因子[白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α]水平、p-p38 MAPK、p-NF-κB p65蛋白相对表达量及p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-NF-κB p65/NF-κB p65比值升高,LVESP、+dp/dt_(max)、-dp/dt_(max)降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,VH组、LCPS中剂量组和LCPS高剂量组心肌梗死面积、LVEDP、病理评分、心肌酶水平、炎性因子水平、p-p38 MAPK、p-NF-κB p65蛋白相对表达量及p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-NF-κB p65/NF-κB p65比值降低,LVESP、+dp/dt_(max)、-dp/dt_(max)升高,差异均有统计学意义(P<0.05),且LCPS上述效应呈一定的剂量依赖性。除+dp/dt_(max)、-dp/dt_(max)、IL-1β外,LCPS高剂量组对其他指标的影响优于VH组(P<0.05)。结论:LCPS对大鼠MIRI和心功能有保护作用,其机制可能与抑制p38 MAPK/NF-κB信号通路及其介导的炎症反应有关。

P38 MAPK/NF-κB/NLRP3对脑卒中大鼠模型对神经元的影响

目的探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、核因子-κB(NF-κB)、核苷酸结合寡聚化结构域样蛋白3信息通路(NLRP3)对脑卒中大鼠模型脑神经元的影响。方法将大鼠分为假手术组、模型组、p38 MAPK阻断剂(SB203580)组,分别干预2w,检测各组大鼠脑梗死体积百分比,Zea Longa分值,海马组织神经元的损伤和凋亡,以及海马组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL-6)和IL-1β的水平,p38 MAPK(p-p38 MAPK)中各主要蛋白表达。结果模型组脑梗死体积百分比相较于假手术组明显升高(P<0.05),p38 MAPK阻断剂组脑梗死体积百分比较模型组减少(P<0.05);模型组Zea Longa评分相较于假手术组明显升高,(P<0.05),p38 MAPK阻断剂组Zea Longa评分较模型组减少(P<0.05);p38 MAPK阻断剂组相较于模型组则呈明显的下降表现。模型组海马组织IL-6、L-1β和TNF-α水平相较于假手术组均明显升高(P<0.05);p38 MAPK阻断剂组相较于模型组呈现明显的下降(P<0.05)。模型组在p38 MAPK/NF-κB/NLRP3蛋白的表达上,相较于假手术组呈明显升高(P<0.05);p38 MAPK阻断剂组相较于模型组呈明显的下降(P<0.05)。结论阻断p38 MAPK可抑制p38 MAPK/NF-κB/NLRP3信号通路,促使炎症反应进入受抑状态,弱化神经元凋亡表现,来发挥对缺血性脑卒中模型大鼠脑损伤的保护效果。

息肉样脉络膜视网膜病变患者泪液p38 MAPK mRNA、 Sirt1 mRNA水平与康柏西普治疗效果的关系

目的探讨息肉样脉络膜视网膜病变(PCV)患者泪液p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)mRNA、沉默信息调节因子2相关酶1(Sirt1)mRNA水平与康柏西普治疗效果的关系。方法选取2020年8月至2022年4月该院94例PCV患者作为观察组,根据康柏西普治疗效果分为效果良好亚组、效果较差亚组,选取同期年龄、性别匹配的健康体检者94例作为对照组。2组均检测泪液p38 MAPK mRNA、Sirt1 mRNA及血管内皮生长因子(VEGF)水平。分析泪液p38 MAPK mRNA、Sirt1 mRNA水平与VEGF的相关性。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析泪液p38 MAPK mRNA、Sirt1 mRNA及VEGF对康柏西普治疗效果的预测价值。采用多因素Logistic回归分析康柏西普治疗效果的影响因素。结果观察组治疗前、治疗12周泪液p38 MAPK mRNA及VEGF水平高于对照组,Sirt1 mRNA水平低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);观察组治疗12周泪液p38 MAPK mRNA及VEGF水平低于治疗前,Sirt1 mRNA水平高于治疗前,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗前、治疗12周泪液p38 MAPK mRNA水平与VEGF水平呈正相关(r=0.717、0.338,P<0.001),治疗前、治疗12周泪液Sirt1 mRNA水平与VEGF水平呈负相关(r=-0.766、-0.396,P<0.001)。94例PCV患者随访1年,息肉完全消退率为40.66%。效果较差亚组治疗前、治疗12周p38 MAPK mRNA及VEGF水平高于效果良好亚组,Sirt1 mRNA水平低于效果良好亚组,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗12周泪液p38 MAPK mRNA、Sirt1 mRNA及VEGF联合预测PCV患者康柏西普治疗效果的曲线下面积(AUC)大于单项指标预测的AUC(P<0.05)。p38 MAPK mRNA、Sirt1 mRNA均是PCV患者康柏西普治疗效果的影响因素(P<0.05)。结论PCV患者p38 MAPK mRNA、Sirt1 mRNA表达异常,二者均与康柏西普治疗效果有关。

地黄合剂介导p38 MAPK通路对糖尿病大鼠主动脉的影响

目的研究地黄合剂抑制p38有丝分裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen activated protein kinase,p38 MAPK)对糖尿病大鼠主动脉蛋白羰基和炎症因子的影响。方法50只SPF大鼠均分为5组,分别为正常组、糖尿病组、氯沙坦组、低剂量地黄(合剂)组、高剂量地黄(合剂)组,除正常组外,其他组大鼠建立糖尿病大鼠模型,对其用药,麻醉抽血,开腹取出主动脉,采用放免法、苏木素-伊红染色法(HE染色法)、蛋白印迹法(Western blot)等检测大鼠基本指标、主动脉病理学变化情况、p38 MAPK通路相关蛋白情况、蛋白羰基相关指标水平、炎性因子情况并进行对比分析。结果与正常组相比,糖尿病组大鼠体质量下降,血糖和血管紧张素2升高(P<0.05);氯沙坦组和高剂量地黄组体质量明显升高,血糖和血管紧张素2降低(P<0.05);低、高剂量地黄组组织形态均有不同程度的变化,高剂量地黄组和氯沙坦组大鼠细胞变化减轻程度最为明显(P<0.001),低剂量地黄组次之(P<0.05)。与糖尿病组相比,正常组大鼠的p38 MAPK、cAMP反应元件结合蛋白1(cAMP response element-binding protein 1,CREB1)、MAPK激酶3/6(MAPK kinase3/6,MKK3/6)、环氧化酶2(cyclooxygenase 2,COX2)水平明显升高,丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶1(MAP kinase phosphatase-1,MKP-1)降低(P<0.05),低、高剂量地黄组p38 MAPK、COX2明显降低(P<0.05),氯沙坦组和高剂量地黄组p38 MAPK、CREB1、MKK3/6、COX2水平显著降低,MKP-1明显升高(P<0.05);丙二醛(malondialdehyde,MDA)明显降低(P<0.05);超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶(gbutathione peroxidase,GSH-px)显著升高(P<0.05)。与糖尿病组相比,氯沙坦组炎性因子肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein,MCP-1)、C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)、白细胞介素6(interleukin 10,IL-10)明显降低(P<0.001);低剂量地黄组TNF-α、MCP-1、IL-10有所降低(P<0.05),高剂量地黄组TNF-α、MCP-1、IL-10显著降低(P<0.001)。结论高剂量地黄合剂的药效与氯沙坦相当,能够有效阻断p38 MAPK信号通路,改善糖尿病大鼠主动脉的病理组织结构,降低主动脉蛋白羰基水平,抑制氧化还原反应的发生,降低炎性因子水平。

白藜芦醇对慢性阻塞性肺疾病大鼠 p38丝裂原活化蛋白激酶/核因子-κB信号通路的影响

目的:探讨白藜芦醇对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/核因子-κB(NF-κB)信号通路的影响。方法:将50只SD大鼠随机分为正常组,模型组,白藜芦醇低剂量组、白藜芦醇中剂量组、白藜芦醇高剂量组,每组10只。模型组及白藜芦醇组采用烟熏联合脂多糖气道内注射法复制COPD大鼠模型,模型构建成功后,白藜芦醇低、中、高剂量组大鼠分别灌胃给予5、15、45 mg/(kg·d)白藜芦醇,正常组及模型组给予等量0.9%氯化钠溶液,连续28 d。HE染色观察肺组织病理形态,分光光度法检测丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)水平,酶联免疫吸附(ELISA)法检测肺组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白介素-8(IL-8),基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)含量,Western blot检测p38MAPK/NF-κB信号通路相关蛋白表达情况。结果:与模型组比较,白藜芦醇低、中、高剂量组肺泡结构较为完整,有少量炎性细胞浸润,TNF-α、IL-8、MDA、MMP-9含量降低、p38 MAPK、核因子κB抑制因子α(IκB α)及NF-κB p65表达下调,SOD活性及TIMP-1含量升高。结论:白藜芦醇能够缓解COPD大鼠肺损伤,可能与抑制p38 MAPK/NF-κB信号通路有关。

Xuebijing alters tumor necrosis factor-alpha, interleukin-1beta and p38 mitogen activated protein kinase content in a rat model of cardiac arrest following cardiopulmonary resuscitation

We established a rat model of cardiac arrest by clamping the endotracheal tube of adult rats at expiration. Twenty-four hours after cardiopulmonary resuscitation, nerve cell injury and expression of tumor necrosis factor-α, interleukin-1β, and p38 mitogen activated protein kinase content were increased. Rats injected with Xuebijing, a Chinese herb compound preparation, exhibited normal cellular structure and morphology, dense neuronal cytoplasm, and decreased tumor necrosis factor-α, interleukin-1β, and p38 mitogen activated protein kinase expression at 24 hours following cardiopulmonary resuscitation. These data suggest that Xuebijing can attenuate neuronal injury induced by hypoxia and reperfusion during cardiopulmonary resuscitation.

TGF-β1-Smad/p38 MAPK信号通路及炎症因子指标与脓毒症肾损伤患者肾功能的相关性分析

目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)-丝/苏氨酸激酶受体(Smad)/p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路及炎症因子指标与脓毒症肾损伤患者肾功能的相关性。方法回顾性分析2019年1月至2022年12月联勤保障部队第970医院收治的82例脓毒症患者的临床资料,根据患者是否发生急性肾损伤分为观察组(脓毒症肾损伤,n=25)和对照组(脓毒症无肾损伤,n=57)。比较两组患者肾功能指标(尿素氮、肌酐)、信号通路(TGF-β1、Smad7、p38 MAPK)、炎症因子指标[白细胞介素17(IL-17)、降钙素原]的水平,分析TGF-β1-Smad/p38 MAPK信号通路及炎症因子指标与肾功能的相关性。结果观察组尿素氮、肌酐水平分别为(10.56±2.89)mmol/L、(141.25±20.49)μmol/L,均显著高于对照组[(5.42±1.07)mmol/L、(101.14±12.71)μmol/L],差异均有统计学意义(P<0.05)。观察组TGF-β1、p38 MAPK蛋白水平分别为(42.04±9.04)μg/L、40.68±4.18,均显著高于对照组[(33.21±7.48)μg/L、21.12±3.07],Smad7蛋白水平为(102.26±6.32)ng/L,显著低于对照组[(125.74±9.77)ng/L],差异均有统计学意义(P<0.05)。观察组IL-17、降钙素原水平分别为(44.21±12.63)、(4.79±1.04)μg/L,均显著高于对照组[(32.36±8.27)、(4.02±0.87)μg/L],差异均有统计学意义(P<0.05)。经相关性分析,TGF-β1、p38 MAPK、IL-17、降钙素原与尿素氮、肌酐呈正相关(P<0.05),Smad7与尿素氮、肌酐均呈负相关(P<0.05)。结论TGF-β1-Smad/p38 MAPK信号通路可激活炎症因子,影响肾功能,TGF-β1、Smad7、p38 MAPK、IL-17、降钙素原水平能够反映脓毒症肾损伤患者的病情发展程度。

槲皮素调控p38 MAPK/NF-κB/NLRP3信号通路对大鼠分泌性中耳炎的作用机制

目的 探究槲皮素(quercetin, Que)对大鼠分泌性中耳炎(secretory otitis media, SOM)的作用及机制。方法 选取雄性SD大鼠48只,随机性分为对照组(Control)、模型组(Model)、Que组(100 mg·kg^(-1))、Que+p38 MAPK激动剂组(100 mg·kg^(-1)Que+2 mg·kg^(-1)Anisomycin),每组各12只。除Control组外,其余各组大鼠均采取腹腔注射卵清蛋白复制分泌性中耳炎大鼠模型,造模成功后,各组大鼠进行相应干预21 d。给药干预结束后,苏木精-伊红(HE)染色观察各组大鼠中耳组织形态学变化;酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-18及中耳灌洗液中IFN-γ、IL-4水平;实时定量PCR (RT-qPCR)和Western blot检测中耳黏膜组织p38 MAPK/NF-κB/NLRP3信号通路相关mRNA及蛋白表达变化。结果 与Control组相比,Model组大鼠表现中耳内黏膜层增厚,伴有大量炎性细胞浸润,血清炎性因子TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-18及中耳灌洗液中IL-4增加,IFN-γ降低(P <0.01),中耳黏膜组织p-p38MAPK/MAPK、p-NF-κB/NF-κB、NLRP3、ASC、pro-caspase-1、cleaved-caspase-1、IL-1β、IL-18蛋白及mRNA表达水平均明显升高(P <0.01)。与model组相比,Que能够明显改善中耳内黏膜增厚,抑制炎性细胞浸润,降低TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-18、IL-4及中耳黏膜组织p38 MAPK/NF-κB/NLRP3通路mRNA和蛋白表达,升高IFN-γ(P <0.05或P <0.01)。与Que组相比,Anisomycin能够逆转Que对SOM大鼠的保护作用。结论 Que能够有效改善SOM发生、发展,其机制与抑制p38 MAPK/NF-κB/NLRP3信号通路介导的炎性反应相关。

黄芪多糖调控p38 MAPK/NF-κB通路减轻脂多糖诱导鼻黏膜上皮细胞炎症损伤的实验研究

目的探讨黄芪多糖(astragalus polysaccharide,Asp)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的鼻黏膜上皮细胞(nasal mucosal epithelial cell,NMEC)炎症损伤的影响及作用机制。方法取人NMEC细胞株分为对照组、LPS组、Asp组、Anisomycin组和Asp+Anisomycin组。CCK-8法检测细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡率;免疫荧光法检测p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)阳性表达;免疫组织化学法检测磷酸化核因子κB(phosphorylated nuclear factor kappa B,p-NF-κB)阳性表达;酶联免疫吸附测定检测白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、细胞间黏附因子(intercelluar adhesion molecule,ICAM)-1水平;蛋白质印迹法检测黏蛋白2(mucin 2,MUC2)、p38 MAPK、磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)、核因子κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)、p-NF-κB蛋白表达。结果LPS处理的NMEC细胞增殖降低、炎症因子分泌增加、凋亡率升高、p38 MAPK/NF-κB通路磷酸化途径激活(P<0.05)。Asp可阻断p38 MAPK/NF-κB途径,缓解NMEC炎症损伤及凋亡(P<0.05)。Anisomycin可逆转Asp的上述作用(P<0.05)。结论Asp可通过抑制p38 MAPK/NF-κB途径,抑制炎症反应,缓解LPS诱导的NMEC炎症损伤及凋亡。

松果菊苷对尿毒症大鼠肾损伤的影响及机制

目的研究松果菊苷(ECH)对尿毒症(URE)大鼠肾损伤的影响及机制。方法采用5/6肾切除法建立URE大鼠模型。建模成功的大鼠分为尿毒症(URE)组、ECH低剂量[10 mg/(kg·d)]组、ECH中剂量组[20 mg/(kg·d)]、ECH高剂量组[40 mg/(kg·d)]和ECH高剂量+茴香霉素[p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路激活剂]组[ECH-H+Ani组,40 mg/(kg·d)ECH+2 mg/(kg·d)茴香霉素],另设假手术组,每组12只。各药物组灌胃相应的ECH,ECH-H+Ani组再尾静脉注射茴香霉素,每天1次,连续给药8周。检测大鼠血清中肿瘤细胞因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、血尿素氮(BUN)、β2-微球蛋白(β2-MG)、血肌酐(Scr)、中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白(NGAL)、肾损伤分子1(KIM-1)、胱抑素C(Cys-C)水平,24 h尿蛋白(24 h UP)和肾组织中丙二醛(MDA)水平、超氧化物歧化酶(SOD)活性;观察肾组织病理学变化;检测大鼠肾组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-上皮钙黏素(E-cadherin)阳性表达率和p38 MAPK、核因子κB(NF-κB)p65的磷酸化水平。结果与URE组相比,ECH各剂量组大鼠肾小球肿胀及上皮细胞损伤坏死明显减轻,炎症细胞浸润明显减少;肾损伤评分和TNF-α、IL-1β、IL-6、BUN、Scr、β2-MG、24 h UP、NGAL、KIM-1、Cys-C、MDA水平及α-SMA阳性表达率、p38 MAPK和NF-κB p65的磷酸化水平均呈剂量依赖性降低而SOD活性和E-cadherin阳性表达率均呈剂量依赖性升高(P<0.05)。茴香霉素可显著逆转高剂量ECH对URE大鼠肾损伤及相关指标的改善作用(P<0.05)。结论ECH可能通过抑制p38 MAPK/NF-κB信号通路激活来抑制URE大鼠的炎症反应和氧化应激反应,增强肾功能,改善肾损伤。

清胰逐瘀攻毒方治疗急性胆源性胰腺炎临床疗效及对炎症因子、p38MAPK蛋白表达水平的影响

目的:观察清胰逐瘀攻毒方联合常规治疗急性胆源性胰腺炎的临床疗效及对血清炎症因子、丝裂原活化蛋白激酶p38 (p38MAPK)蛋白表达水平的影响。方法:选取120例急性胆源性胰腺炎患者作为研究对象,采用随机数字表法分为对照组和研究组各60例。对照组给予常规治疗,研究组在对照组基础上给予清胰逐瘀攻毒方治疗。治疗7 d后,比较2组临床疗效及不良反应情况,以及2组治疗前后中医证候积分、胰腺外分泌功能[血淀粉酶(AMY)、尿淀粉酶(UAMY)]、炎症因子[降钙素原(PCT)、可溶性细胞间黏附分子-1 (sICAM-1)、肿瘤坏死因子-α (TNF-α)、白细胞介素-8 (IL-8)]及p38MAPK蛋白表达水平。结果:研究组总有效率为90.00%,对照组73.33%,2组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,2组恶心呕吐、胸脘痞满、腹痛拒按、口干口渴、大便黏结、小便短赤或短涩等中医证候评分均较治疗前降低(P<0.05),且研究组上述各项评分均低于对照组(P<0.05)。治疗后,2组AMY、UAMY水平均较治疗前降低(P<0.05),且研究组AMY、UAMY水平均低于对照组(P<0.05)。治疗后,2组血清PCT、TNF-α、IL-8、sICAM-1、p38MAPK蛋白表达水平均较治疗前降低(P<0.05),且研究组上述各项指标均低于对照组(P<0.05)。治疗期间,2组均未出现严重不良反应。结论:清胰逐瘀攻毒方辅助治疗急性胆源性胰腺炎效果确切,能够有效减轻临床症状,改善胰腺外分泌功能,下调血清炎症因子及p38MAPK蛋白表达水平,且安全性良好。

P38信号通路调控帕金森病小鼠黑质NF-κB和iNOS的表达

目的探讨P38丝裂原活化蛋白激酶(P38 MAPK)信号通路与核因子NF-κB、一氧化氮合酶(inducible nitricoxide,iNOS)之间的关系,通过给予P38 MAPK特异性抑制剂SB203580,研究P38 MAPK信号通路在1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)制备的帕金森病(PD)小鼠模型的作用机制。方法将小鼠随机分为模型组、干预组和对照组。观察小鼠行为学变化,采用免疫组织化学和免疫蛋白印迹法观察小鼠黑质酪氨酸羟化酶(TH)、磷酸化P38(p-P38)、NF-κB和iNOS的表达变化;以及给予SB203580后对上述变化的影响。结果与对照组相比,模型组小鼠出现典型PD症状,TH阳性神经元明显丢失、蛋白水平下降,P38 MAPK信号通路被激活,其磷酸化产物p-P38表达明显增多,NF-κB和iNOS表达也明显增加;经SB203580干预处理后,上述变化均减轻。结论 P38 MAPK信号通路可能参与激活NF-κB、iNOS而诱导PD模型小鼠黑质多巴胺能神经元的损伤,采用SB203580抑制P38 MAPK信号通路可对PD模型小鼠多巴胺神经元起到保护作用。

乳房炎奶牛乳腺组织中TLR4/p38的表达差异分析

[目的]本文旨在探究p38通路及相关因子与乳房炎的关系。[方法]选择正常和患临床乳房炎2组共6头荷斯坦奶牛进行研究。收集2组奶牛的乳样、血样以及组织样品,利用石蜡包埋和HE切片染色对奶牛乳腺组织进行观察,通过实时荧光定量PCR(RT-q PCR)对p38、TLR4、TNF-α和IL-1βmRNA水平的表达进行分析,通过ELISA和Western blot对p38、TLR4、TNF-α和IL-1β蛋白水平的差异表达进行分析。[结果]患乳房炎奶牛乳腺组织中p38、IL-1β和TNF-αmRNA水平表达显著升高(P<0.05)。ELISA结果表明:两组样品中炎症因子TNF-α和IL-1β的表达水平差异显著(P<0.05)。组织Western blot结果显示,临床乳房炎奶牛的组织中TLR4、p38以及磷酸化p38(p-p38)的表达量与对照组相比差异显著(P<0.05)。[结论]p38信号通路相关蛋白在发生临床性乳房炎的奶牛乳腺组织中的表达量与正常奶牛的表达量差异显著,提示了p38通路在乳房炎的发病过程中可能起着重要的作用。

关黄柏多糖对大鼠痛风性肾病的改善作用及机制研究

目的研究关黄柏多糖(PAP)对大鼠痛风性肾病(GN)的改善作用,并通过丝裂原激活蛋白激酶p38(p38 MAPK)/核因子κB(NF-κB)/肿瘤坏死因子α(TNF-α)信号通路初步探讨其作用机制。方法将60只大鼠按体重分层后随机分为正常组(水)、模型组(水)、别嘌醇组(阳性对照,20 mg/kg)和PAP高、中、低剂量组(100、50、25 mg/kg,以生药量计),每组10只。除正常组外,其余各组大鼠均采取1500 mg/kg氧嗪酸钾和100 mg/kg腺嘌呤联合灌胃14 d构建GN模型。造模成功后,各组大鼠灌胃相应药物/水,每天1次,连续28 d。末次给药后,检测大鼠肾功能相关生化指标[尿酸、肌酐(Cr)、血尿素氮(BUN)、黄嘌呤氧化酶(XOD)],观察大鼠肾组织病理形态学变化,检测大鼠肾组织中单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、TNF-α、白细胞介素6(IL-6)蛋白表达水平和p38MAPK、NF-κB p65蛋白的磷酸化水平。结果与正常组比较,模型组大鼠肾小管扩张,肾小球结构损坏,并伴有炎症浸润与纤维化;尿酸、Cr、BUN、XOD含量以及MCP-1、TNF-α、IL-6蛋白表达水平和p38 MAPK、NF-κB p65蛋白的磷酸化水平均显著升高(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,PAP各剂量组大鼠的肾组织病理症状均有不同程度改善;PAP高、中剂量组大鼠尿酸、Cr、BUN、XOD含量以及MCP-1、TNF-α、IL-6蛋白表达水平和p38 MAPK、NF-κB p65蛋白的磷酸化水平均显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论PAP具有抗GN的作用,其机制可能与抑制p38 MAPK/NF-κB/TNF-α信号通路的激活有关。

丹参化学成分及丹参提取物对脂多糖刺激大鼠肝脏枯否细胞内P38和NF-κB信号通路蛋白表达的影响

目的探讨丹参化学成分及丹参提取物对脂多糖(LPS)刺激大鼠肝脏枯否细胞(KC)内P38和核转录因子-κB(NF-κB)信号通路蛋白表达的影响。方法采用胶原酶消化法自SD大鼠肝脏中分离、培养KC。60 ng/mlLPS作用原代培养的KC 12 h后,加入丹参提取物及分离纯化的丹参化学成分——丹参新醌乙、丹参新酮、丹参醇A、丹参酮Ⅰ、异丹参酮Ⅰ、丹参新醌甲、隐丹参酮、丹参酮ⅡA、丹参酚酸B各100μg/ml,以及NF-κB信号通路蛋白特异性阻断剂PDTC、P38通路特异性阻断剂SB239063各100μg/ml,加上阴性对照组及LPS组共14组。继续培养12 h后,提取各组细胞总蛋白,免疫印记法(Western Blot)检测NF-κB65、磷酸化NF-κB65(p-NF-κB65)、NF-κB抑制蛋白(IκB)、P38丝裂原活化蛋白激酶(P38MAPK)、磷酸化P38MAPK(p-P38MAPK)和c-fos等蛋白的表达。结果与LPS组相比,PDTC可下调活化KC内p-P38MAPK和p-NF-κBp65的表达,上调NF-κBp65和IκB的表达,而对c-fos和P38MAPK的表达无明显影响;SB239063可下调活化KC内P38MAPK、p-NF-κBp65和c-fos的表达,上调NF-κBp65和IκB的表达,而对p-P38MAPK的表达无明显影响。所有丹参成分和丹参提取物均能不同程度下调活化KC内p-P38MAPK、p-NF-κB65和c-fos的表达,其中以丹参新酮、丹参醇A、丹参酮Ⅰ、异丹参酮Ⅰ、丹参新醌甲和隐丹参酮的抑制作用最为明显。结论对于LPS激活的KC,丹参化学成分和丹参全提取物均可不同程度下调其P38和NF-κB信号通路蛋白的活性,该作用可能是丹参控制肝内炎症反应的主要机制之一。

升降散对脓毒症大鼠心肌p38^(MAPK)蛋白磷酸化水平的影响

目的:探讨升降散保护脓毒症心肌损伤的分子机制。方法:将雄性成年SD大鼠随机分为正常组、模型组、升降散组和p38抑制组。采用盲肠结扎穿孔术(CLP)制备脓毒症大鼠模型,造模后4、8、12、24h进行观察。升降散组和p38抑制组大鼠分别于造模前2h给予升降散灌胃和SB203580皮下注射。留取腹主动脉血标本和心脏组织作相关检测。观察和检测各时间点大鼠死亡率、血清心肌肌钙蛋白I(cTnI)、B型利钠肽(BNP)、白介素-6(IL-6)水平以及心肌p-p38^(MAPK)蛋白、p-p38^(MAPK) mRNA、IL-6mRNA的表达。结果:模型组大鼠24h死亡率25%,升降散组、p38抑制组大鼠死亡率均为15%,组间差异无统计学意义。模型组大鼠血清cTnI、BNP升高;升降散组cTnI造模后8、12、24h较模型组改善(P<0.001),BNP造模后4、12、24h较模型组改善(P<0.05)。升降散组和p38抑制组cTnI、BNP造模后各时间点差异无统计学意义。模型组大鼠血清IL-6升高,升降散组各时间点IL-6改善(P<0.001)。模型组大鼠心肌各时间点p-p38^(MAPK)蛋白水平升高,升降散组各时间点p-p38^(MAPK)蛋白水平均改善(P<0.05)。模型组大鼠心肌p-p38^(MAPK) mRNA表达升高,升降散组p-p38^(MAPK) mRNA在8、12、24h改善(P<0.05)。模型组大鼠心肌IL-6mRNA升高,升降散组和p38抑制组造模后4、8、12h均改善(P<0.05),升降散组IL-6mRNA造模后12h下降优于p38抑制组(P<0.05)。结论:升降散可有效降低脓毒症早期大鼠血清cTnI和BNP。升降散改善脓毒症心肌损伤可能与其下调脓毒症早期大鼠心肌p-p38^(MAPK)蛋白水平,降低p-p38^(MAPK) mRNA、IL-6mRNA表达,从而抑制过度炎症反应有关。

CCK-8降低TNF-α诱导的大鼠RSC-364细胞增殖及p38 MAPK活性

目的 观察硫酸化八肽胆囊收缩素（CCK-8）对TNF-α诱导大鼠成纤维样滑膜细胞株RSC-364细胞增殖及丝裂原活化蛋白激酶p38（p38 MAPK）活性的影响.方法 采用噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞增殖;Western blot技术检测p38 MAPK活性.结果TNF-α（50 μg/L）孵育5 min,p38 MAPK磷酸化水平升高,15 min达高峰,2 h恢复基础水平;孵育15 min时,p38 MAPK磷酸化程度随其剂量（10、25、50 μg/L）的增大而增加.CCK-8（10^-10～10^-6 mol/L）剂量依赖性降低TNF-α诱导的细胞增殖及磷酸化p38 MAPK的激活,此作用可被CR1409和CR2945拮抗.SB203580（10 μmol/L）可抑制TNF-α引起的细胞增殖.结论 CCK-8通过降低p38 MAPK磷酸化水平而抑制TNF-α激活的RSC-364细胞增殖,该作用可能由CCK-A和CCK-B受体共同介导.