小型猪复合麻醉颉颃剂对大鼠各脑区p-p38蛋白及c-myc mRNA表达的影响

旨在研究小型猪复合麻醉颉颃剂对大鼠不同脑区p-p38蛋白及c-myc mRNA表达的影响,探讨小型猪复合麻醉颉颃剂的催醒机制。将18只大鼠随机分为C组(对照组)、J组(麻醉颉颃剂组)。J组又分为2个亚组,即J1组(注射小型猪专用复合麻醉颉颃剂5min)、J2组(注射小型猪专用复合麻醉颉颃剂1h)。各组大鼠到达相应的时间点后断头处死,分离大脑皮层、小脑、海马、脑干和丘脑,用Western blot的方法检测p-p38蛋白的表达量,实时荧光定量PCR方法检测c-myc基因mRNA的转录量。试验结果显示大鼠大脑皮层、丘脑和脑干的p-p38蛋白和c-myc mRNA的相对表达量显著升高,而小脑和海马的p-p38蛋白和c-myc mRNA的相对表达量显著降低。综合试验结果,小型猪复合麻醉颉颃剂能够影响p-p38蛋白和c-myc mRNA的表达,这可能是其产生催醒作用的机制之一。

小型猪复合麻醉剂对大鼠中枢神经系统p-p38MAPK蛋白表达的影响

为研究小型猪复合麻醉剂(XFM)对大鼠中枢神经系统p-p38蛋白表达的影响,将30只大鼠分为对照组(C组)和麻醉剂组(M组),M组又分为4个亚组:M1组(注射XFM后大鼠翻正反射消失即刻)、M2组(注射XFM后大鼠翻正反射消失后1h)、M3组(注射XFM后大鼠翻正反射恢复即刻)和M4组(注射XFM后大鼠翻正反射恢复后1h),各组大鼠到达预定的时间点后分别采取脑组织,应用RT-PCR法检测脑内p38 mRNA转录量,应用Western blot方法检测中枢神经系统中p-p38蛋白的表达量。大鼠注射XFM后,与对照组比较,试验组大鼠大脑皮层和丘脑p38mRNA转录量显著降低(P<0.05),在苏醒过程中有所恢复,但仍显著低于对照组(P<0.05);大脑皮层和丘脑内p-p38蛋白的相对表达量,在M1、M2组的时间点显著低于对照组(P<0.05或P<0.01);大鼠注射XFM后,与对照组比较,试验组大鼠小脑、海马、脑干内p38mRNA转录量显著升高(P<0.05),在苏醒过程中仍显著高于对照组(P<0.05);小脑、海马、脑干内p-p38蛋白的表达量,在M1组、M2组、M3组显著升高,与对照组相比差异显著(P<0.05或P<0.01),在M4组表达量下降,与对照组相比差异不显著(P>0.05)。结果表明,XFM诱导大鼠大脑皮层、丘脑内p38 mRNA及p-p38蛋白表达下调,p38 mRNA及磷酸化蛋白的改变可能是XFM作用的机制之一。

急性心肌梗死大鼠心肌组织ROS对p38蛋白表达的影响

目的通过测定急性心肌梗死(AMI)大鼠心肌组织中活性氧(ROS)含量及p38蛋白表达水平,初步探寻ROS与p38蛋白的潜在关系。方法将30只健康成年雄性SD大鼠随机分为对照组、假手术组(sham组)和心肌梗死模型组(AMI组)。AMI组大鼠开胸并结扎冠脉前降支建立心肌梗死模型,结扎成功6、12、24 h后无痛处死大鼠获取心肌组织;对照组大鼠不做任何处理,sham组大鼠开胸冠脉穿线但不结扎。术后无痛处死各组大鼠并获取心肌组织,比色法测定ROS,Realtime PCR测定p38mRNA表达,westblot测定总p38及磷酸化p38蛋白。结果 AMI组大鼠心肌组织中ROS含量随心梗时间延长逐步升高,含量显著高于对照组和假手术组,差异有统计学意义(P<0.05);AMI组大鼠心肌组织中p38 mRNA明显升高,其含量随心梗时间延长逐步下降,差异有统计学意义(P<0.05);3组大鼠心肌组织中p38总蛋白含量差异无统计学意义(P>0.05);磷酸化p38蛋白含量差异有统计学意义(P<0.05),结扎冠脉6 h后磷酸化p38蛋白含量最高,随后逐步下降。结论心肌梗死后大量ROS产生可能参与了p38蛋白的磷酸化。

ARE——基因表达转录后调控的重要元件之一

位于一些基因3'端非翻译区的富含A、U元件(AREs)是目前公认的能够在转录后水平调节mRNA稳定性的元素之一。它兼具介导相关因子mRNA衰变及增强某些mRNA稳定性的作用,ARE结合蛋白及P38 MAPK信号传导通路在此过程中作用关键,miRNA与其也有密切联系。

脂多糖可影响及调控牙髓干细胞的增殖与迁移

背景:大量研究证明人牙髓干细胞是一种具有高度自我更新能力以及多向分化潜能的细胞。目的:研究脂多糖激活人牙髓干细胞后对细胞增殖及迁移的影响,并探索脂多糖对TLR4、矿化相关基因及MAPK信号通路的影响。方法:脂多糖模拟深龋时细菌入侵牙髓的微环境。取人牙髓组织,采用组织块酶消化法分离培养人牙髓干细胞,①以0,0.1,1,10mg/L脂多糖干预1,3,5,7d,以MTT法检测脂多糖对人牙髓干细胞增殖能力;②将第3代人牙髓干细胞分为对照组和1mg/L脂多糖处理组,以细胞免疫荧光检测牙髓干细胞中Toll样受体4的表达,以反转录PCR检测矿化相关基因碱性磷酸酶、牙本质涎磷蛋白和骨桥素mRNA表达变化;③取0.1,1,10mg/L脂多糖干预24h牙髓干细胞,以Transwell小室检测细胞的迁移能力;④以1mg/L脂多糖刺激牙髓干细胞0,15,30,60,120min,以Western blot检测促分裂原活化蛋白激酶信号通路的蛋白p38及ERK1/2的活化水平。实验方案经海南省干部疗养院伦理委员会批准(伦理审批号:20180410)。结果与结论:与对照组(0mg/L脂多糖)相比,脂多糖组细胞增殖能力均下降,人牙髓干细胞中Toll样受体4表达增加,矿化相关基因牙本质涎磷蛋白、骨桥素和碱性磷酸酶mRNA的表达水平增加,迁移细胞数量增加,且随着脂多糖作用时间的延长被激活的p-p38及p-ERK1/2蛋白表达随之增强。提示脂多糖对牙髓干细胞的增殖能力、迁移能力有不同程度影响,且Toll样受体4以及促分裂原活化蛋白激酶信号通路蛋白可能参与脂多糖调控的牙髓干细胞定向分化过程。

TF/FⅦa体外诱导大肠癌LOVO细胞系表达MMP-7mRNA的研究

目的观察组织因子/活性凝血七因子(TF/FⅦa)诱导大肠癌 LOVO 细胞系表达基质金属蛋白酶7(MMP-7)mRNA 及信号传导途径。方法构建靶向组织因子基因干扰的 RNAi 质粒并稳定转染 LOVO 细胞获得 TFRNAi LOVO 细胞系,Western blot 检测干扰效率;RT-PCR 观察100 nmol/L FⅦa刺激0、4、8、12、24 h 后 LOVO 细胞中 MMP-7mRNA 的变化,Northern blot 证实时间效应及测定0、10、50、100、200 nmol/L FⅦa刺激后的 MMP-7mRNA 水平;100 nmol/L FⅦa分别刺激LOVO 细胞0、4、8、12、16、24 h,Western blot 测定 p-P38的水平;Northern blot 分别检测预先使用10 mmol/L P38阻断剂 SB203580 0.5 h 再以100 nmol/L FⅦa刺激 LOVO 细胞8 h 及100 nmol/L FⅦa刺激 TFRNAi LOVO 细胞系8 h 后 MMP-7mRNA 水平。结果 Northern blot 结果显示 FⅦa刺激MMP-7mRNA 表达存在时间、浓度依赖性;Western blot 测定 FⅦa刺激 p-P38表达存在时间依赖性。应用 P38通路阻断剂 SB203580后 MMP-7mRNA 基因表达下降59.2%,转染组织因子干扰质粒的LOVO 细胞中,MMP-7mRNA 的表达水平较 LOVO 细胞组下降48%。结论活性Ⅶ因子与组织因子结合诱导体外大肠癌 LOVO 细胞系表达 MMP-7mRNA,其机理可能与 P38通路有关。

p-ERK-1及相关因子在子宫内膜癌中的表达及意义

目的检测子宫内膜癌组织中p-ERK-1、p-p38和ERK-1 mRNA表达情况并探讨其意义。方法采用原位分子杂交方法和免疫组织化学S-P法检测60例子宫内膜癌、32例正常子宫内膜组织中三者的表达情况。结果子宫内膜癌组织中p-ERK-1和p-p38表达定位于细胞核,ERK-1 mRNA的表达于细胞浆,其阳性表达率分别为68.33%(41/60)、55.00%(33/60)和78.33%(47/60),明显高于正常子宫内膜组织(P<0.05)。p-ERK-1、p-p38蛋白和ERK-1 mRNA的表达与淋巴结转移、临床分期及病理分期有关(P<0.05);在子宫内膜癌组织中p-ERK-1蛋白和ERK-1 mRNA表达存在一致性(P<0.05),三者之间表达呈正相关(P<0.05)。结论 p-ERK-1、p-p38蛋白和ERK-1 mRNA在子宫内膜癌呈高表达,且与子宫内膜癌的发生、发展和转移密切相关。