槲皮素对口腔鳞癌细胞增殖凋亡等细胞生物学行为及p38/JNK MAPK信号通路的影响

目的:探讨槲皮素对口腔鳞癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭及p38/JNK MAPK信号通路的影响。方法:以体外培养的口腔鳞癌Tac8113细胞为研究对象,分别设置空白对照组,槲皮素低剂量组(25μmoL/L)、高剂量组(50μmoL/L)及阳性对照组(顺铂4μg/mL)。CCK-8法检测槲皮素对口腔鳞癌Tac8113细胞增殖的影响;流式细胞仪检测槲皮素对口腔鳞癌Tac8113细胞凋亡的影响;Transwell实验检测槲皮素对口腔鳞癌Tac8113细胞迁移、侵袭的影响;WB法检测p38/JNK MAPK信号通路相关蛋白表达。结果:与空白对照组相比,槲皮素低、高剂量组及阳性对照组Tac8113细胞增殖活力、迁移数及侵袭数均下降,凋亡率增加(P<0.05);与槲皮素低剂量组相比,槲皮素高剂量组及阳性对照组Tac8113细胞增殖活力、迁移数及侵袭数均下降,凋亡率增加(P<0.05),呈现剂量依赖性;槲皮素高剂量组及阳性对照组Tac8113细胞增殖活力、迁移数、侵袭数及凋亡率差异无统计学意义(P>0.05)。与空白对照组相比,槲皮素低、高剂量组p-p38、p-JNK及Caspase-3蛋白表达增加(P<0.05);与槲皮素低剂量组相比,槲皮素高剂量组p-p38、p-JNK及Caspase-3蛋白表达增加(P<0.05),呈现剂量依赖性;空白对照组、槲皮素低剂量组、槲皮素高剂量组、阳性对照组p38、JNK蛋白表达差异不显著(P>0.05)。结论:槲皮素可以降低口腔鳞癌Tac8113细胞的增殖活力、迁移和侵袭数,诱导Tac8113细胞凋亡,这可能是通过激活p38/JNK MAPK信号通路实现的。

DLEU1通过调控p38/JNK信号通路促进高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖和血管重塑的实验研究

目的:探讨淋巴细胞白血病缺失基因1(DLEU1)促进高血压大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖和血管重塑的机制及相关信号通路。方法:将12只DLEU1转基因大鼠(DTRs)随机分为DTRs组、p38组、JNK组,每组4只,分别经腹腔注射二甲基亚砜溶液、p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)特异性抑制剂SB203580、JNK抑制剂SP600125,并以Wistar大鼠(4只)为对照组,采用苏木精-伊红(HE)染色确定主动脉、心脏和肾脏的形态结构。通过转染DLEU1过表达质粒,构建DLEU1过表达的VSMCs,同时给予SB203580、SP600125干预,通过溴脱氧核苷尿嘧啶(BrdU)实验、细胞周期及迁移实验比较不同干预细胞的生物活性的差异。结果:DTR组大鼠血管腔面积显著减小、中膜增厚,肾组织中可见小动脉增生,血管壁和肾小球增厚,p38及JNK抑制剂可减轻DLEU1介导的血管中膜增厚的效应,增加中膜/管腔面积比,肾脏小动脉的病理改变也有所改善。实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测显示,转染过表达DLEU1质粒后,VSMCs中DLEU1的相对表达量显著提高(P<0.05),表明细胞模型构建成功。蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测发现,磷酸化p38和JNK蛋白的表达上调。DLEU1过表达导致细胞增殖率显著增加。经p38和JNK抑制剂处理后,细胞增殖率均有所下降(P<0.05)。p38和JNK抑制剂可显著阻断细胞周期,处理后,G0/G1期细胞比例均有所上升。过表达DLEU1可显著提高细胞中基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9的蛋白表达水平,而阻断p38和JNK可部分消除DLEU1对MMP-2和MMP-9蛋白表达的促进作用。Western Blot检测显示,DLEU1过表达细胞骨桥蛋白(OPN)蛋白表达水平明显上调,平滑肌22α(SM-22α)蛋白表达显著下调,经p38抑制剂和JNK抑制剂干预后,OPN蛋白表达水平明显降低,SM-22α蛋白表达水平上调。结论:高血压时DLEU1介导的VSMCs增殖和表型改变需要p38/JNK通路介导。

TLR_4/P38/JNK信号通路在海马神经元凋亡中的作用

目的:探讨Toll样受体4(TLR4)/P38/JNK信号通路在海马神经元凋亡中的作用及其机制,为神经退行性疾病(ND)的发病机制与防治研究提供新的实验依据。方法:采用体外培养7 d的新生大鼠海马神经元,免疫荧光双标法鉴定海马神经元纯度。用TLR4配体脂多糖(LPS)或TLR4抗体预处理海马神经元,以激活或阻断TLR4的作用。实验1设正常对照组、LPS组及TLR4抗体+LPS组;免疫荧光法检测P-P38,P-JNK的表达。实验2分为6组:正常对照组,LPS组,TLR4抗体+LPS组,SB202190(抑制P38)+LPS组,SP600125(抑制JNK)+LPS组,PD98059(抑制ERK)+LPS组;分别用TLR4抗体、P38、JNK及ERK的抑制剂预处理海马神经元后再给以LPS刺激24 h,Western blot法检测Bcl-2,Bax,Active-caspase-3的表达变化;流式细胞术检测海马神经元凋亡率。结果:LPS组海马神经元P-P38、P-JNK的表达明显高于正常对照组(P<0.01),TLR4抗体+LPS组P-P38,P-JNK表达显著低于LPS组(P<0.01)。与正常对照组相比,LPS组海马神经元Bcl-2/Bax表达减少、Active-caspase-3表达增加,海马神经元凋亡率增加(P<0.01)。而TLR4抗体+LPS组、SB202190+LPS组、SP600125+LPS组Bcl-2/Bax显著高于LPS组、Active caspase-3显著低于LPS组(P<0.01),海马神经元凋亡率显著低于LPS组(P<0.05,P<0.01)。PD98059+LPS组与LPS组海马神经元凋亡率无明显差异。结论:1海马神经元中有TLR4介导的P38/JNK信号通路。2海马神经元TLR4激活后,P-P38、P-JNK表达增加,使Bcl-2/Bax的比例降低和Active-caspase-3表达增加,从而促进海马神经元的凋亡。海马神经元凋亡过程中有TLR4介导的P38/JNK信号通路的参与。

芪参益气滴丸对大鼠心肌缺血再灌注损伤的MAPK/p38/JNK/ERK信号通路的研究

目的探讨芪参益气滴丸对大鼠心肌缺血再灌注损伤的MAPK/p38/JNK/ERK信号通路的研究。方法随机将大鼠分为假手术组(Sham)和心肌缺血再灌注组(I/R),后者又分为:模型组(I/R),芪参益气高剂量组(QSYQ-H)和低剂量组(QSYQ-L);血流动力学检测左心室收缩压峰值(LVSP)及左心室内压最大上升速率(+dp/dtmax)、左心室内压最大下降速率(-dp/dtmax);ELISA法检测血浆中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;qRT-PCR和蛋白质印迹法(Western blotting)检测心肌细胞p38,JNK,ERK mRNA和蛋白的水平。结果与假手术组比较,模型组大鼠LVSP和±dp/dtmax明显较低(P<0.01);与模型组相比,芪参益气滴丸高低剂量组大鼠LVSP和±dp/dtmax均显著升高,且芪参益气滴丸高及低剂量组呈浓度依赖效应,差异有统计学意义(P<0.01);与假手术组比较,模型组大鼠血浆中TNF-α、IL-1β和IL-6蛋白含量明显升高(P<0.01);与模型组相比,芪参益气滴丸高低剂量组大鼠血浆中TNF-α、IL-1β和IL-6蛋白含量明显降低,且芪参益气滴丸高及低剂量组呈浓度依赖效应,差异有统计学意义(P<0.01);与假手术组相比,模型组对大鼠心肌细胞p38、JNK和ERK mRNA和蛋白含量明显降低,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组相比,芪参益气滴丸高低剂量组大鼠心肌细胞p38、JNK和ERK mRNA和蛋白含量明显升高,且芪参益气滴丸高及低剂量组呈浓度依赖效应,差异有统计学意义(P<0.01)。结论芪参益气滴丸能减小大鼠心肌缺血再灌注的损伤程度,有可能是通过p38/JNK/ERK激活,抑制炎症相关因子TNF-α、IL-1β和IL-6的表达。

胡桃醌通过p38/JNK MAPK信号通路调控口腔鳞癌Tac8113细胞增殖和凋亡

目的:探讨胡桃醌通过p38/c-Jun氨基末端激酶(JNK)丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路调控口腔鳞癌Tac8113细胞增殖和凋亡。方法:体外培养口腔鳞癌Tac8113细胞,分别给予终浓度为0,5,10,20μmol·L^-1的胡桃醌,继续培养24 h,检测细胞增殖、细胞凋亡和活性氧(ROS)水平,同时检测Tac8113细胞中p38、p-p38、JNK、p-JNK和Caspase-3蛋白表达水平。结果:与空白对照组比较,给予胡桃醌处理后,Tac8113细胞增殖率降低,Tac8113细胞凋亡率和ROS水平增加(P<0.05),且随着胡桃醌剂量增加,细胞增殖率、凋亡率和ROS变化越显著(P<0.05)。与空白对照组比较,给予胡桃醌处理后,Tac8113细胞p38和JNK蛋白表达变化不显著(P>0.05);p-p38、p-JNK和Caspase-3蛋白表达增加(P<0.05),且随着胡桃醌剂量增加,增加越显著(P<0.05)。结论:胡桃醌可能通过激活p38/JNK MAPK信号通路来诱导Tac8113细胞凋亡,从而达到抑制Tac8113细胞的目的。

p38/JNK MAPK信号通路在Th细胞分化中的作用

p38/JNKMAPK信号转导通路与多种肿瘤或增殖性疾病关系密切,是一条关键的调节细胞增生和凋亡的通路,是潜在的治疗分子靶点。目前4条MAPK信号转导通路:ERK1/2、JNK、P38和ERK5已鉴定,其中p38/JNKMAPK在不同的水平和方式中对Th细胞分化起着重要作用。就近年来有关p38/JNKMAPK信号通路及其在Th细胞分化中的作用研究概况作一综述。

苏木提取物对动脉粥样硬化模型ApoE-/-小鼠氧化应激作用及对p38/JNK/ERK的影响

目的:通过建立动脉粥样硬化小鼠模型,观察苏木提取物对氧化应激的影响,并明确与p38/JNK/ERK信号通路的关系,进而探讨苏木提取物抗AS的作用机制。方法:所有小鼠适应性饲养2周后,将40只ApoE-/-小鼠随机分为,模型组、苏木提取物低、中、高剂量组,每组10只;10只相同遗传背景的C57BL/6J小鼠设为空白组,其中空白组小鼠给予普通饲料喂养,其余四组小鼠给予高脂饲料喂养8周进行模型复制,第9周开始灌胃,连续灌胃4周,12周后分离小鼠主动脉根部,制备石蜡切片,油红O染色观察小鼠主动脉窦脂质沉积情况;ELISA法检测小鼠主动脉中MDA、GSH-Px、SOD水平;Western blot法检测小鼠主动脉中p38、JNK、ERK蛋白磷酸化的表达。结果:苏木提取物低、中、高剂量组够降低AS模型小鼠主动脉窦脂质沉积水平;降低小鼠主动脉中MDA水平,升高主动脉中GSH-Px、SOD水平;并可下调小鼠主动脉中p38、JNK、ERK蛋白磷酸化的表达。结论:苏木提取物能够通过抗氧化应激途径发挥抗AS的作用,部分机制可能与抑制p38/JNK/ERK信号通路活化有关。

p38/JNK MAPK信号通路对MEHP致小鼠睾丸间质细胞凋亡的影响

目的探讨p38/c-Jun氨基末端激酶(JNK)丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路对邻苯二甲酸单(2-乙基己基)酯[mono(2-ethylhexyl)phthalate,MEHP]致小鼠睾丸间质(TM-3)细胞凋亡的影响及其作用机制。方法将对数生长期的TM-3细胞分别暴露于p38抑制剂SB203580(5、10、20、40μmol·L^(-1))、JNK抑制剂SP600125(2.5、5、10、20μmol·L^(-1))24 h后,采用CCK-8法检测细胞活性,确定后续SB203580及SP600125干预组染毒剂量;将TM-3细胞分别暴露于0、200、400、800μmol·L^(-1) MEHP、10μmol·L^(-1) SB203580+400μmol·L^(-1) MEHP和10μmol·L^(-1) SP600125+400μmol·L^(-1) MEHP溶液24 h后,光镜下观察细胞形态;CCK-8法检测细胞活性;Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡情况;荧光探针DCFH-DA法检测细胞活性氧(ROS)水平;免疫印迹法(Western blot)检测细胞p38、p-p38、JNK、p-JNK、Caspase-3和Caspase-9蛋白表达水平。结果与对照组相比,200、400、800μmol·L^(-1) MEHP剂量组ROS水平、凋亡率均升高(P均<0.05),细胞内p38和JNK蛋白表达水平差异均无统计学意义(P均>0.05),蛋白p-p38、p-JNK、Caspase-9和Caspase-3表达均增高(P均<0.05),且随着MEHP染毒剂量的升高,增高越明显(P均<0.05)。与400μmol·L^(-1) MEHP剂量组相比,SB203580干预组和SP600125干预组贴壁细胞数量增多,细胞间隙减小,细胞增殖率上升,细胞凋亡率和ROS水平均降低(P均<0.05),p38和JNK蛋白表达差异均无统计学意义(P均>0.05),p-p38、p-JNK、Caspase-9和Caspase-3蛋白表达均减少(P均<0.05)。结论MEHP可通过激活p38/JNK MAPK信号通路诱导TM-3细胞凋亡。

β-伴大豆球蛋白通过p38/JNK MAPK信号通路引起IPEC-J2细胞损伤

采用细胞体外培养技术,研究不同浓度7S(β-伴大豆球蛋白)对IPEC-J2(猪小肠上皮细胞)的影响。实验分为6组,A(对照组)、B(1 mg·m L^(-1)7S)、C(5 mg·m L^(-1)7S)、D(10 mg·m L^(-1)7S)、E(5 mg·m L^(-1)7S+1μmol·L^(-1)SP600125)、F(5 mg·m L^(-1)7S+1μmol·L^(-1)SB202190),24 h后,用CCK-8法检测细胞存活率,收集细胞用ELISA法检测NO、5-HT、IL-6和IL^(-1)0含量,用Western blot法检测p-JNK、p-p38、Bcl-2蛋白表达量,用PCR法检测Bad、Bax、Bcl-2、Bcl-xL和Caspase-3 m RNA相对表达量。检测结果表明:C组和D组的IPEC-J2细胞活性极显著降低(P <0. 01),E组和F组的细胞活性显著高于C组(P <0. 05),说明7S促进炎性细胞因子NO、5-HT和IL-6的分泌,降低IL^(-1)0的分泌,添加抑制剂使细胞因子NO、5-HT和IL-6分泌减少,IL^(-1)0的分泌增多;同时7S促进p-JNK、p-p38蛋白表达,降低Bcl-2蛋白表达,添加抑制剂可抑制p-JNK、p-p38蛋白表达,使Bcl-2蛋白表达增高。Bcl-2/Bax m RNA比值随7S浓度增加而降低,Bax/Bcl-xl比值随7S浓度增加而升高,Caspase-3 m RNA相对表达量随7S浓度增加而升高。添加抑制剂后Bcl-2/Bax比值增高,Bax/Bcl-xl比值降低,Caspase-3 m RNA降低。结果表明,7S通过p38/JNK MAPK信号通路引起仔猪肠上皮细胞损伤。

术前应用甲壳素衍生物对瘢痕疙瘩组织中TSG6-P38/JNK信号通路的影响

目的探究术前应用甲壳素衍生物对瘢痕疙瘩中肿瘤坏死因子α刺激基因6(TSG-6)-p38/c-Jun氨基末端激酶(JNK)通路的影响。方法选择自2019年10月至2021年8月,河北北方学院附属第一医院皮肤科收治的79例瘢痕疙瘩患者作为研究对象,接受手术切除治疗并根据术前是否使用甲壳素衍生物分为甲壳素组(42例)和对照组(37例),甲壳素组术前给予甲壳素凝胶涂抹,2次/d,连续14 d;对照组术前不接受任何治疗。手术中收集瘢痕疙瘩组织,采用HE染色检测病理改变,Western blot检测PCNA、Ki-67、TSG6、p-p38、p-JNK、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、裂解型caspase-3(Cleaved caspase-3)的表达水平,采用TUNEL法检测细胞凋亡率。结果与对照组比较,甲壳素组瘢痕疙瘩中炎症细胞浸润减少,PNCA、Ki-67、Bcl-2的表达水平降低,细胞凋亡率及TSG-6、Bax、Cleaved caspase-3的表达水平增加(P<0.05)。结论甲壳素衍生物调控瘢痕疙瘩中的细胞增殖及凋亡,这一作用与调控TSG6-p38/JNK通路有关。

叶酸通过JNK/p38 MAPK信号通路调节小鼠C2C12成肌细胞分化

目的:观察叶酸(folic acid,FA)对小鼠C2C12成肌细胞增殖和分化的影响并探讨其作用机制。方法:(1)在小鼠C2C12成肌细胞增殖阶段,采用不同浓度(0、2.5、5、10和20μmol/L)的FA处理C2C12细胞,显微镜下观察各组细胞的状态,MTT法检测细胞活力,EdU法检测细胞增殖情况。(2)在小鼠C2C12成肌细胞分化阶段,将细胞分为对照(control,Ctrl)组(0μmol/L FA)和FA组(10μmol/L FA),于分化的第2天和第4天,采用免疫荧光染色和Western blot检测成肌细胞分化相关蛋白成肌细胞决定蛋白1(myoblast determination protein 1,MyoD)、成肌蛋白(myogenin,MyoG)和肌球蛋白重链(myosin heavy chain,MyHC)的表达水平,并统计各组细胞肌管形成情况。(3)在小鼠C2C12成肌细胞分化第4天时,加入FA处理0、1、3和6 h,采用Western blot检测各时点c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)、磷酸化JNK(phosphorylated JNK,p-JNK)、p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)和磷酸化p38 MAPK(phosphorylated p38 MAPK,p-p38 MAPK)蛋白水平。(4)将分化4 d的小鼠C2C12成肌细胞分为Ctrl组、FA组、SP600125(JNK特异性抑制剂)组、SB2035805(p38 MAPK特异性抑制剂)组、FA+SP600125组和FA+SB203580组。C2C12成肌细胞先接受10μmol/L的SP600125或SB203580处理1 h,再经10μmol/L的FA处理24 h,FA组经10μmol/L FA处理24 h,Ctrl组不作处理。采用Western blot检测p-JNK、JNK、p-p38 MAPK、p38 MAPK和MyHC蛋白水平。结果:(1)与0μmol/L FA组相比,其余各浓度组的细胞数量明显增多,细胞活力显著提高(P<0.05),EdU阳性细胞率均显著增加(P<0.05)。(2)与Ctrl组相比,FA组MyoD、MyoG和MyHC的表达水平均显著提高(P<0.05),肌管融合指数显著增加(P<0.05或P<0.01)。(3)与0 h组相比,FA处理1、3和6 h后p-JNK/JNK和p-p38 MAPK/p38 MAPK的比值均显著升高(P<0.05或P<0.01),且随着处理时间的延长,p-JNK/JNK和p-p38 MAPK/p38 MAPK的比值呈现逐渐升高的趋势。(4)与Ctrl组相比,FA组p-JNK、p-p38 MAPK和MyHC蛋白水平显著升高(P<0.01);与FA组相比,FA+SP600125组p-JNK和MyHC蛋白水平显著降低(P<0.05),FA+SB203580组p-p38 MAPK和MyHC蛋白水平显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论:FA可以通过激活JNK/p38 MAPK信号通路促进小鼠C2C12成肌细胞分化。

基于JNK/p38 MAPK信号通路探讨黄芪对阿尔茨海默病大鼠认知功能的影响

目的:基于JNK/p38 MAPK信号通路探讨黄芪对阿尔茨海默病大鼠认知功能的影响。方法:将60只Wistar大鼠作为本研究对象,以其中的15只列为对照组,剩余大鼠分为模型组(15只)、西药治疗组(15只)、黄芪治疗组(15只),各予以0.9%NaCl用药处理、盐酸多奈哌齐治疗、黄芪甲苷治疗。对比四组大鼠各方面的变化情况。结果:对照组JNK、p38 MAPK表达量均低于其余三组,且黄芪治疗组JNK、p38 MAPK表达量均低于模型组和西药治疗组,差异具有显著性(P<0.05);对照组各炎性因子水平均低于其余三组,且黄芪治疗组各炎性因子水平均低于模型组和西药治疗组(P<0.05);对照组Morris水迷宫实验第2、3、4d的结果均优于其他三组,且黄芪治疗组Morris水迷宫实验第2、3、4d的结果均优于模型组和西药治疗组,差异具有显著性(P<0.05);对照组新物体识别(NOR)实验中的测试期总探索时间均短于其他三组,新物体偏爱指数均高于其他三组;且黄芪治疗组新物体识别(NOR)实验中的测试期总探索实践均短于模型组和西药治疗组,新物体偏爱指数均高于模型组和西药治疗组,差异具有显著性(P<0.05)。结论:黄芪治疗对于改善阿尔茨海默大鼠的认知功能具有优势,其药物作用机制与JNK/p38 MAPK信号通路存在一定联系。

比索洛尔通过ASK1-JNK/p38 MAPK信号通路改善缺血再灌注诱导的H9C2心肌细胞损伤的研究

目的:探讨比索洛尔对缺血再灌注(I/R)诱导的H9C2心肌细胞损伤的影响及其作用机制。方法:体外培养H9C2心肌细胞,将H9C2心肌细胞分为对照组(Control组)、缺氧/复氧(H/R)模型组(Model组)、比索洛尔组(Bisoprolol组)、比索洛尔+凋亡信号调节激酶1(ASK1)重组蛋白组(Bisoprolol+ASK1组)。除Control组外,其余各组H9C2心肌细胞均进行H/R损伤处理。采用细胞计数试剂盒(CCK8)法检测细胞活力;采用流失细胞术检测细胞凋亡;采用酶联免疫吸附试验检测细胞中心肌损伤标志物[乳酸脱氢酶(LDH)、心肌肌钙蛋白T(cTnT)]和炎症因子[白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)]水平;采用激光共聚焦检测细胞中钙离子浓度;采用蛋白质印迹法检测细胞中ASK1-c-Jun氨基末端激酶(JNK)/p38丝分裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路相关蛋白表达水平。结果:与Control组比较,Model组H9C2细胞活力、LDH和cTnT水平均降低,细胞凋亡率、IL-6、IL-1β和TNF-α水平均升高,细胞内钙离子浓度、p-ASK1/ASK1、p-JNK/JNK和p-p38 MAPK/p38 MAPK比值均升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与Model组比较,Bisoprolol组和Bisoprolol+ASK1组H9C2细胞活力、LDH和cTnT水平均升高,细胞凋亡率、IL-6、IL-1β和TNF-α水平均降低,细胞内钙离子浓度、p-ASK1/ASK1、p-JNK/JNK和p-p38 MAPK/p38 MAPK比值均降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与Bisoprolol组比较,Bisoprolol+ASK1组H9C2细胞活力、LDH和cTnT水平均降低,细胞凋亡率、IL-6、IL-1β和TNF-α水平均升高,细胞内钙离子浓度、p-ASK1/ASK1、p-JNK/JNK和p-p38 MAPK/p38 MAPK比值均升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:比索洛尔能够通过抑制炎症反应和钙超载,改善I/R诱导的H9C2心肌细胞损伤,其作用机制可能与抑制ASK1-JNK/p38 MAPK信号通路激活有关。

miR-149-3p调控JNK/p38 MAPK信号通路对髓核细胞凋亡、自噬和炎性反应的影响

目的探讨miR-149-3p通过调控JNK/p38 MAPK信号通路对髓核细胞凋亡、自噬和炎症反应的影响。方法体外分离大鼠髓核细胞,用IL-1β浓度为10 ng/ml建立模型组,细胞分为Con组(空白对照)、IL-1β组(IL-1β处理)、IL-1β+miR-NC组(IL-1β处理,转染miR-NC)、IL-1β+miR-149-3p组(IL-1β处理,转染miR-149-3p)、IL-1β+miR-149-3p+Anisomycin组(IL-1β和通路激活剂Anisomycin处理,转染miR-149-3p)。采用qRT-PCR检测miR-149-3p相对表达水平;MTT、流式细胞术实验检测细胞增殖和凋亡;Western blot检测Bax、Bcl-2、Beclin 1、LC3II/LC3I、JNK/p38 MAPK信号通路相关蛋白表达;ELISA检测TNF-α、IL-6、IL-8表达水平。结果IL-1β组内miR-149-3p相对表达量、细胞活性、Bcl-2蛋白表达明显低于Con组,凋亡率、Bax、Beclin 1、LC3II/LC3I蛋白表达、TNF-α、IL-6、IL-8表达水平、p-JNK、p-p38 MAPK蛋白表达明显高于Con组(P<0.05)。IL-1β+miR-149-3p组内miR-149-3p相对表达量、细胞活性、Bcl-2蛋白表达明显高于IL-1β+miR-NC组(P<0.05),凋亡率、Bax、Beclin 1、LC3II/LC3I蛋白表达、TNF-α、IL-6、IL-8表达水平、p-JNK、p-p38 MAPK蛋白表达明显低于IL-1β+miR-NC组。IL-1β+miR-149-3p+Anisomycin组的p-JNK、p-p38 MAPK蛋白表达、凋亡率、Bax、Beclin 1、LC3II/LC3I蛋白表达、TNF-α、IL-6、IL-8表达水平明显高于IL-1β+miR-149-3p组,细胞活性、Bcl-2蛋白表达明显低于IL-1β+miR-149-3p组(P<0.05)。结论上调miR-149-3p能促进IL-1β诱导的髓核细胞增殖,抑制细胞凋亡、自噬和炎性反应,其作用机制可能与激活JNK/p38 MAPK信号通路有关。

黄芩苷通过激活JNK/p38 MAPK通路诱导ALL Reh细胞凋亡

目的 探究黄芩苷对急性淋巴细胞白血病(ALL)细胞株Reh增殖和凋亡的影响及c-Jun氨基蛋白激酶(JNK)/p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)通路在其机制中的作用。方法 黄芩苷处理或联合活性氧(ROS)清除剂NAC共处理Reh细胞;流式细胞术检测细胞凋亡、胞内ROS水平和线粒体膜功能(MMP);免疫荧光实验观察凋亡细胞的数目及其形态变化。Western blotting免疫印迹检测Reh细胞内凋亡蛋白和信号通路蛋白的表达水平。结果 与对照组比较,黄芩苷组Reh细胞增殖被抑制,细胞凋亡率、促凋亡蛋白、ROS、JNK和p38磷酸化水平显著上升,抗凋亡蛋白表达下调,MMP明显受损(P<0.01)。NAC清除ROS后明显恢复细胞增殖,JNK和p38磷酸化水平明显下降,Survivin表达恢复(P<0.01)。结论 黄芩苷经激活JNK/p38 MAPK通路活化Caspase3/7,诱导Reh细胞凋亡。

苦参素通过p38/JNK信号途径对海马神经元凋亡的影响

探讨苦参素(oxymatrine,OMT)对海马神经元凋亡的影响及其机制。采用MTT法测定OMT对海马神经元存活率的影响;生物化学法测定OMT对LPS诱导的海马神经元乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放率的影响;Hochest 33342染色观察海马神经元凋亡形态;实时定量PCR(Real-time quantitative PCR,RT-q PCR)方法检测海马神经元中Bax,Bcl-2,Caspase-3 mRNA的表达;蛋白免疫印迹法(Western blot,WB)检测海马神经元中p38,p-p38,JNK,p-JNK,Bax,Bcl-2和Caspase-3的表达。结果发现,不同剂量的OMT(0.37~6.0 g·L^(-1))和海马神经元共培养24 h,海马神经元生长状态良好;LPS刺激后,海马神经元LDH释放率增加(P<0.01),JNK和p38的磷酸化水平明显增加(P<0.01),Bax/Bcl-2的比例及Caspase-3的表达上调(P<0.01),海马神经元凋亡增加。OMT预处理后,能明显降低海马神经元经LPS刺激后的LDH释放(P<0.05或P<0.01),减少p38和JNK磷酸化水平,降低Bax/Bcl-2的比例及Caspase-3的表达(P<0.01),海马神经元凋亡减少。综上,OMT能降低经LPS激活的p38和JNK磷酸化水平,下调Bax/Bcl-2的比例和Caspase-3的表达,从而抑制海马神经元凋亡。OMT通过p38/JNK信号途径抑制海马神经元的凋亡。

川崎病中IgM-AECA通过JNK、p38及NF-κB诱导内皮细胞ICAM-1的表达

目的川崎病(Kawasaki Disease,KD)大部分病人血清中存在抗内皮细胞受体抗体-IgM(IgM An-ti-endothelial cell antibodies,IgM-AECA)。该研究旨在探讨抗内皮细胞受体抗体(AECA)通过何种途径诱导内皮细胞细胞内吸附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)的表达以激活血管内皮细胞。方法检测30名KD患儿血清IgM-AECA浓度,并从17名AECA阳性KD患儿血清中提纯IgM-AECA,用IgM-AECA直接刺激人冠状动脉内皮细胞(human coronary artery endothelial cells,HCAEC)后,通过R T-PCR及ELISA方法检测ICAM-1 mR NA及蛋白的表达,同时应用了PD98059,SB203580,dimethylaminopurine(DMAP)和parthenolide,4种蛋白激酶阻断剂观察IgM-AECA通过何种途径激活HCAEC。结果 KD病人血清中的IgM-AECA可使HCAEC的ICAM-1 mRNA及蛋白表达明显增加,SB203580(p38阻断剂)、DMAP(JNK阻断剂)及parthenolide(NF-κB阻断剂)明显抑制ICAM-1的表达(均P<0.01),而PD98059(ERK1/2阻断剂)不能抑制ICAM-1的表达(P>0.05)。结论 KD病人血清中的IgM-AECA通过增强ICAM-1的表达来激活内皮细胞,IgM-AECA通过p38、JNK MAPK及NF-κB通路诱导ICAM-1的表达,IgM-AECA可能在KD冠状动脉病变的发生中发挥重要作用。

人参皂苷Rb1通过JNK/p38 MAPK途径减轻Aβ_(25-35)诱导的胎鼠皮层神经元tau蛋白过度磷酸化

探讨在Aβ25-35(beta-amyloid peptide(25-35),Aβ25-35)诱导的拟阿尔茨海默病样胎鼠皮层神经元tau蛋白过度磷酸化中,人参皂苷Rb1对tau蛋白磷酸化及JNK/p38 MAPK的可能作用。应用蛋白免疫印迹和免疫细胞化学染色的方法,观察tau蛋白磷酸化和JNK(c-jun N-terminal kinase)/p38 MAPK的表达情况。凝聚态Aβ25-35(20μmol.L-1)作用于皮层神经元12 h,tau蛋白的磷酸化水平明显增高,同时JNK/p38 MAPK的总量及其活性形式——磷酸化JNK/p38 MAPK的蛋白表达水平也增加,人参皂苷Rb1可以减轻tau蛋白的磷酸化水平及JNK/p38MAPK的蛋白水平。人参皂苷Rb1可通过JNK/p38 MAPK途径减轻Aβ25-35诱导的tau蛋白过度磷酸化。

血管紧张素Ⅱ激活p38 MAPK和JNK对诱导失血性休克血管反应性的保护作用

目的观察血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）激活p38MAPK和JNK在恢复失血性休克血管反应性中的作用。方法采用大鼠失血性休克模型（SD大鼠80只,体质量200-230g,雌雄各半）,观察AngⅡ处理对休克大鼠肠系膜上动脉（superior mesenteric artery,SMA）血管组织中p38MAPK和JNK的活性变化的影响,并用p38MAPK和JNK的特异性拮抗剂SB203580和SP600125,观察阻断p38MAPK和JNK对AngⅡ诱导的失血性休克血管反应性保护作用的影响。结果失血性休克大鼠肠系膜血管组织中p38MAPK的活性呈休克早期升高、休克晚期降低的趋势,在休克后0.5h和2h时p38MAPK的活性分别为正常对照的201.2%和53.2%（P〈0.01）;而JNK的活性水平随休克时间的延长而逐渐升高,休克2h时活性升为正常对照的308.8%（P〈0.01）。在休克晚期给予AngⅡ处理能明显升高休克血管p38MAPK和JNK活性水平,同时AngⅡ处理也升高了休克晚期肠系膜动脉血管的收缩反应性。p38MAPK的拮抗剂SB203580和JNK的拮抗剂SP600125均可拮抗AngⅡ诱导的p38MAPK和JNK激活,p38MAPK和JNK的活性分别降低为AngⅡ组的52.9%和44.8%（P〈0.05-0.01）;同时p38MAPK和JNK的拮抗剂也抑制了AngⅡ升高休克血管反应性的作用,使其分别降低为AngⅡ组的60.5%和65.0%（P〈0.01）。结论 p38MAPK和JNK参与AngⅡ对休克血管反应性的保护作用。

不同浓度硼替佐米对柔红霉素诱导的K562耐药细胞株ERK、JNK及P38表达的影响

本研究旨在观察蛋白酶体抑制剂硼替佐米(bortezomib,PS-341)对柔红霉素(daunorubicin,DNR)诱导的K562白血病耐药细胞株ERK、JNK及P38表达的影响,探讨硼替佐米逆转耐药的分子机制。用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)进行耐药细胞株和硼替佐米细胞毒性的判定。以100nmol/L DNR单用或联合应用1及10nmol/L PS-341作用于K562耐药细胞株36小时,检测各组ERK、JNK及P38的表达情况,检测各组细胞凋亡率。结果表明:与DNR组相比,PS-341联合DNR可抑制ERK和P38的表达,增加JNK的表达(p<0.05)。结论 :PS-341可显著抑制K562耐药细胞株ERK和P38的表达,增加JNK的表达;PS-341通过MAPK途径逆转细胞耐药,促进细胞凋亡。