氯化镉对大鼠肾上皮细胞丝裂原活化蛋白激酶表达及其磷酸化的影响

目的 探讨氯化镉染毒大鼠正常肾上皮（normal rat kidney epithelial,NRK）细胞对丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）表达及其磷酸化水平的影响.方法 应用不同剂量（0、1、5、10、20、40 μmol/L）氯化镉染毒NRK细胞24 h和同一剂量氯化镉（10 μmol/L）于不同时间（0、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 h）染毒NRK肾细胞.采用蛋白免疫印迹法检测氯化镉染毒后NRK细胞中MAPK表达水平,并用磷酸化抗体检测MAPK磷酸化水平.结果 不同氯化镉剂量和不同染毒时间染毒NRK细胞,发现MAPK表达无明显改变,但MAPK磷酸化蛋白表达量较对照组升高.氯化镉浓度在10 μmol/L时p-ERK1/2表达明显,表达量为1. 00±0.06;20 μmol/L和40 μmol/L剂量组表达量分别为2.58±0.11、2.76±0.23,比10 μmol/L组高1.58倍和1.76倍,差异有统计学意义（F=827.70,P＜0.01）;氯化镉浓度为20 μmol/L（2.47±0.20）和40 μmol/L（3.73±0.25）时p-p38MAPK表达量比对照组（1.00±0.02）高1.47倍和2.73倍,差异有统计学意义（F=280.06,P＜0.01）.p-ERK1/2和p-p38MAPK表达量与氯化镉浓度存在剂量-效应关系（p-ERK1/2相关系数为r=0.919,t=4.69,P=0.009;p-p38MAPK相关系数为r=0.945,t=5.79,P=0.004）.MAPK磷酸化蛋白表达水平也与染毒时间相关,p-ERK1/2在染毒1 h（1.26±0.11）时表达明显,染毒4 h（1.51±0.07）和8 h（3.53±0.23）时表达量是对照组（1.00±0.02）的1.5倍和3.5倍,差异有统计学意义（F=427.82,P＜0.001）;p-p38MAPK在染毒1 h（1.31±0.07）时表达也明显增加,染毒4 h（3.53±0.32）和8 h（4.41±0.38）时表达水平是对照组（1.00±0.03）的3.5倍和4.4倍,差异有统计学意义（F=280.06,P＜0.001）.结论 氯化镉染毒NRK细胞可引起MAPK蛋白磷酸化水平明显升高,可能与MAPK的激活有关.

P38MAPK信号通路在肾脏缺血再灌注损伤中作用的研究进展

肾脏缺血再灌注损伤（RIRI）是泌尿外科手术中最常见的一种病理过程，可见于肾脏手术、肾移植和体外震波碎石等；也是临床上常见的导致急性肾损伤（AKI）的重要原因。缺血后再灌注所致肾损伤的机制十分复杂，在临床中至今没有发现可防治RIRI的特效药物。已知P38丝裂原活化蛋白激酶（P38MAPK）信号传导途径的激活是导致RIRI的机制之一，笔者就近年以来有关于P38MAPK信号通路在RIRI中作用机制进行综述，可望为临床更好防治RIRI提供新的靶点。

p38MAPK参与胰蛋白酶诱导的食管上皮细胞炎症

目的 研究p38 MAPK在胰蛋白酶（trypsin）诱导食管黏膜上皮细胞炎症反应中的机制.方法 原代培养食管黏膜上皮细胞,使用胰蛋白酶进行刺激,观察p38 MAPK磷酸化程度;给予p38 MAPK抑制剂SB203580（1、10 μmol/L）进行干预治疗,观察炎症相关指标的变化.结果 胰蛋白酶刺激剂量依赖地增加了p38 MAPK磷酸化,提示胰蛋白酶激活了食管黏膜上皮细胞中的p38MAPK通路;SB203580治疗抑制了胰蛋白酶诱导的炎症因子白介素8（IL-8）、环氧酶2（COX2）、肿瘤坏死因子α（TNFα）的mRNA表达水平,同时抑制了胰蛋白酶诱导的食管上皮细胞中诱导性一氧化氮合酶（iNOS）的蛋白表达和细胞中一氧化氮（NO）的生成.结论 p38 MAPK通过调节IL-8、COX2、TNFα、iNOS等炎症相关因子参与了胰蛋白酶诱导的食管黏膜上皮损伤.

SB203580对肠缺血再灌注大鼠p38 MAPK及细胞凋亡的影响

目的:探讨大鼠肠缺血再灌注(IR)时p38 MAPK特异性抑制剂SB203580对p38 MAPK、凋亡调控因子及凋亡细胞表达的影响。方法:Wistar大鼠30只随机分为对照组(C组)、缺血再灌注组(Ⅰ组)和SB203580组(S组)(n=10),采用肠IR模型检测p38 MAPK、Bcl-2、Bax、TNF-及凋亡指数的水平。结果:Ⅰ组中p38 MAPK、凋亡调控因子及凋亡细胞的表达均显著高于C组(P<0.05),而S组中p38 MAPK、TNF-α及凋亡细胞的表达减少,Bcl-2/Bax比值增高(P<0.05)。结论:SB203580抑制了小肠组织中p38 MAPK通路的活化,从而增加了Bcl-2的表达、减少了Bax和TNF-α的释放,在缓解细胞凋亡的过程中起到了重要的作用。

尤瑞克林对脑缺血再灌注损伤大鼠模型p38M APK信号通路的影响

目的探讨尤瑞克林对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠模型的神经保护作用及其可能的机制。方法 60只SD大鼠随机分为3组:假手术组、缺血再灌注损伤模型组和尤瑞克林治疗组,用线栓法制作大鼠大脑中动脉脑缺血再灌注损伤模型,缺血2 h再灌注24 h后,观察各组大鼠神经行为学评分,HE染色观察神经细胞组织形态变化,免疫组化法检测磷酸化p38MAPK的表达,TUNEL法检测凋亡细胞。结果与假手术组比较,模型组大鼠神经行为学评分明显升高(P<0.01),HE染色神经细胞受损明显(P<0.01),脑组织磷酸化p38MAPK表达水平、凋亡神经细胞数量明显增加(P<0.01)。与模型组比较,尤瑞克林治疗组大鼠的神经功能缺损得到改善、神经元形态结构损伤减轻、磷酸化p38MAPK表达水平以及神经细胞凋亡数量回降(P<0.01)。结论尤瑞克林对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠有神经保护作用,其机制可能与抑制p38MAPK活化、减少神经细胞凋亡有关。

uPA和P-P38在肝癌组织中的表达及相关性研究

目的探讨尿激酶型纤溶酶原激活剂（uPA）和磷酸化P38（P—P38）在原发性肝癌（PHC）中的表达及其意义。方法采用免疫组织化学S-P法检测34例原发肝癌组织、14例癌旁正常肝组织中uPA和P-P38的表达情况。结果原发性肝癌组织中uPA和P—P38表达定位于细胞浆和细胞核，其表达明显高于癌旁正常肝组织（P〈0．05）。二者的表达与性别、年龄、肿瘤大小等没有相关性（P〉0．05），与淋巴结转移、组织分化及癌栓等有关（P〈0．05），二者之间比较表达呈明显正相关（P〈0．05）。结论二者在原发性肝癌呈高表达。且与原发性肝癌的发生、发展和转移密切相关。

P13K、P38MAPK及ERK1／2抑制剂对EGF诱导的血管平滑肌细胞迁移的实验研究

目的探讨P13K抑制剂Wortmannin、P38MAPK抑制剂SB202190及ERK1／2抑制剂PD98059对表皮生长因子（EGF）诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞（VSMCs）迁移的影响。方法以1％FCS血清孵育为对照，用EGF（10ng／ml）刺激，平行加入PD98059（PD组）、SB202190（SB组）和Wortmannin（WT），划痕损伤实验分析VSMCs迁移情况。结果划痕后24h，EGF组VSMCs迁移较对照组明显（P〈0．01），WT组、SB组及PD纽与EGF组相比都明显抑制VSMCs迁移（P〈0．01），但三个抑制剂组之间差异无统计学意义（P〉0．05）；划痕后30h，EGF组VSMCs迁移仍较对照组明显（P〈0．01），WT组、SB组及PD组与EGF组相比则明显抑制VSMCs迁移（P〈0．叭），且三个抑制剂组之间差异有统计学意义，其中sB组较WT组和PD组抑制VSMCs的迁移更明显（P〈0．01）。结论EGF诱导VSMCs迁移可能通过P13K、P38MAPK及ERK1／2途径起作用，且P38MAPK途径作用更明显。

谷胱甘肽对糖基化终产物诱导平滑肌细胞增殖的影响

目的探讨糖基化终产物(AGEs)对大鼠胸主动脉平滑肌细胞的增殖作用和还原型谷胱甘肽(GSH)对AGEs介导的动脉平滑肌细胞增殖作用的抑制机制。方法以体外培养的大鼠胸主动脉平滑肌细胞为实验模型,分为8组,每组12孔,每孔细胞密度1×105/ml,与不同浓度的AGEs共同培养,并用不同浓度的GSH干预。分别用噻唑蓝(MTT)比色法测定血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和用ELISA测定细胞的磷酸化p38丝裂原蛋白激酶(p-p38 MAPK)的浓度来探讨平滑肌增殖的机制和干预因素。结果 (1)AGEs对VSMC MTT吸光度的影响:经过AGEs干预,B、C、D组(吸光度值分别为0.43±0.15,0.49±0.16,0.48±0.18)与对照组比较,VSMC MTT的吸光度值增高(P<0.01)。但随着AGEs浓度增加,B、C、D组间MTT吸光度值差异无统计学意义(P>0.05)。(2)GSH对AGEs干预的VSMC MTT吸光度的影响:在加入GSH的AGEs干预组,F、G、H组(吸光度值分别为0.35±0.10,0.33±0.11,0.28±0.08)与AGEs(25 mg/L)对照组比较,MTT吸光度值下降(P<0.01)。但随着GSH浓度增加,F、G、H组组间差异无统计学意义(P>0.05)。(3)AGEs对VSMC内p-p38 MAPK的影响:经过AGEs干预后,p-p38 MAPK吸光度值增加(P<0.01),B组(0.65±0.17)、C组(0.85±0.26)、D组(0.94±0.17)分别为对照组(0.26±0.06)的2.5、3.2和3.6倍(P<0.01)。随AGEs浓度增加,C、D组与B组相比,p-p38 MAPK显著增加(P<0.01)。(4)GSH对AGEs干预的VSMC内p-p38 MAPK的影响:在加入GSH的AGEs干预组,F、G、H组(吸光度值分别为0.36±0.09,0.28±0.07,0.26±0.07)与B组即AGEs对照组比较,p-p38 MAPK吸光度降低(P<0.01),与对照组相比分别下降45%、56%和60%(P<0.01)。随着GSH浓度增加,G、H组与F组相比,p-p38 MAPK逐渐降低(P<0.01)。结论 (1)AGEs具有促进VSMC增殖的作用,其作用机理可能与激活了p-p38 MAPK信号传导通路有关。(2)GSH对AGEs介导的VSMC增殖具有抑制作用,其作用机制可能与抑制了p-p38 MAPK信号传导通路有关。