p38丝裂原素激活的蛋白激酶在调节低氧诱导人内皮细胞分泌血管内皮生长因子过程中的作用(英文)

血管内皮细胞中血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)的合成增加在促进血管新生的过程中起着非常重要的作用。然而低氧诱导VEGF分泌的细胞内信号转导机制还不是很清楚。人脐静脉内皮细胞系(ECV304)在低氧或常氧的状态下培养12-24h后分别用实时定量PCR和Westernblot的方法来检测VEGFmRNA的表达及ERK1/2和p38激酶的磷酸化水平。分泌到培养液中的VEGF蛋白用酶联免疫吸附(ELISA)的方法来检测。业已报道,ERK的抑制剂PD98059能够抑制低氧诱导的VEGF基因的表达,根据这个报道,我们发现在低氧情况下,ECV304细胞的ERK1/2磷酸化水平增高以及VEGF的合成增加等这些变化也能被PD98059所抑制。本次实验的新发现是p38激酶的激活在低氧诱导VEGF合成增加中的作用。p38激酶的抑制剂SB202190能抑制低氧诱导的VEGF合成增加。这些数据首次直接证实了p38激酶在低氧诱导人内皮细胞分泌VEGF增加过程中的作用。

p38丝裂原素活化蛋白激酶在慢性鼻-鼻窦炎黏膜中的表达及意义

尽管大量的研究揭示了各种细胞因子、炎性介质等在慢性鼻-鼻窦炎发病机制中的作用,然而,进一步的研究却表明阻断或封闭某些炎性介质或细胞因子并不能达到抑制炎症反应的目的.近年的研究发现,在哮喘、慢性阻塞性肺病和变应性鼻炎中,丝裂原素活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase, MAPK)的活化与各种细胞因子、炎性介质的释放有关[1,2].慢性鼻-鼻窦炎的黏膜病理生理学改变与哮喘、变应性鼻炎同属呼吸道黏膜炎症反应、且密切相关[3].我们推测,慢性鼻-鼻窦炎发病机制中可能亦存在经MAPK信号转导通路信号的干预和调控.本研究应用免疫组化方法检测MAPK信号转导通路家族成员p38MAPK在慢性鼻-鼻窦炎钩突黏膜上皮中的表达.报告如下.

p38MAPK在慢性鼻炎大鼠嗅黏膜中的表达及意义

目的研究慢性鼻炎大鼠嗅黏膜p38信号蛋白的表达,探讨慢性鼻炎嗅觉疾病的发病机制,为临床治疗慢性鼻炎鼻窦炎性嗅觉疾病提供理论依据。方法采用免疫组化S-P法测定20例慢性鼻炎大鼠嗅黏膜(慢性鼻炎组)和20例正常对照组大鼠嗅黏膜中p38信号蛋白的表达。结果慢性鼻炎组大鼠嗅黏膜上皮层和固有层嗅腺中p38丝裂原素活化蛋白激酶(p38mitogen-activated protein kinase,p38MAPK)的表达均高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。慢性鼻炎组大鼠嗅黏膜上皮层和固有层嗅腺中磷酸化的p38丝裂原素活化蛋白激酶(Phospho-p38mitogen-activated protein kinase,Phospho-p38MAPK)的表达均高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 p38信号传导通路在慢性鼻炎大鼠嗅黏膜疾病的发生发展中具有重要的调控作用。

p38 Mitogen-Activated Protein Kinase Is Required for Central Nervous System Myelination

p38MAPKs是一个激酶家族,负责调节包括细胞迁移、增生和分化在内的多种细胞功能。本文主要介绍p38对少突胶质细胞分化的调节作用。采用PD169316和SB203580抑制p38后,不同分化阶段少突胶质细胞特异性标志物的蛋白和mRNA的聚集减少,包括髓鞘碱性蛋白、髓鞘相关糖蛋白、鞘糖脂、半乳糖酰基鞘氨醇和硫脂。同时,细胞周期调节因子p27kip1和转录因子Sox10的表达也有显著的下降。最为重要的是,p38抑制剂能够通过少突胶质细胞完全和不可逆地阻断背根神经节神经元的髓鞘形成,并阻止轴-胶粘附分子Caspr的轴膜组装。本实验结果提示p38 MAPKs在OLGs成熟和启动髓鞘形成的关键调控步骤中扮演了重要角色。

右美托咪定对H9C2细胞内质网应激性损伤的影响及机制研究

目的研究右美托咪定(DEX)对H9C2心肌细胞内质网应激反应(ERS)的影响,探讨可能的发生机制。方法取正常培养的大鼠H9C2细胞,同时进行对照培养和缺氧/复氧(H/R)培养,其中H/R条件为5%CO2和95%N2密闭缺氧装置中缺氧3 h后,常氧条件下培养3 h。以含有1μmol/L DEX和1 mmol/L 4-苯基丁酸(4-PBA)的培养基提前孵育细胞1 h和24 h。采用低损伤法检测各组细胞上清液的乳酸脱氢酶(LDH)浓度、CCK-8法检测细胞活力、流式细胞术检测细胞凋亡率,以及RT-PCR和Western blot法检测内质网应激特异性分子葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)、Caspase-12的mRNA及蛋白表达情况。将H9C2细胞分设Control组、毒胡萝卜素(TG)组、4-PBA组以及p38丝裂素活化蛋白激酶(p38MAPK)抑制剂(SB202190)组并进行相应的干预,Western blot法检测各组p38MAPK和p-p38MAPK的表达,以及GRP78、CHOP、Caspase-12的mRNA及蛋白表达情况。结果与Control组相比,H/R组的H9C2细胞活力减低,细胞上清液LDH浓度增加,细胞凋亡率增加(P<0.05);与H/R组比较,DEX+H/R组的细胞活力明显增加,细胞上清液LDH浓度明显下降,细胞凋亡率下降(P<0.05);与DEX+H/R组比较,4-PBA+DEX+H/R组的H9C2细胞损伤被逆转,GRP78、CHOP、Caspase-12的mRNA及蛋白表达也进一步升高。在Control组、TG组和DEX+TG组之间,p38MAPK的表达均无统计学差异,但是TG组的p-p38MAPK表达明显增加,DEX能够抑制p-p38MAPK表达增加(P<0.05);与TG组比较,DEX+TG组的GRP78、CHOP、Caspase-12的mRNA及蛋白表达被抑制,但是DEX+SB202190+TG组的GRP78、CHOP、Caspase-12 mRNA及蛋白表达被逆转增高。结论DEX对H/R损伤下的H9C2心肌细胞具有保护作用,其作用机制与抑制细胞ERS有关,通过调控p38MAPK能够减轻细胞损伤和凋亡。

细菌脂多糖诱导离体鼻黏膜上皮细胞致炎后p38MAPK的活性变化及意义

目的:探讨细菌脂多糖(LPS)诱导离体鼻黏膜上皮细胞致炎后p38MAPK的活性变化及意义。方法:采用无血清原代培养法行正常鼻黏膜上皮细胞分离和培养,采用不同时间、不同浓度的LPS诱导培养的鼻黏膜上皮细胞致炎,应用WesternImmunoblotting法检测p38MAPK的活性变化及p38MAPK特异性抑制剂SB203580对其活性的抑制作用。结果:LPS(1mg/L)刺激后5～30min内和LPS浓度为0.01～1.00mg/L时,p38MAPK的活性增强;SB203580浓度为1.0～5.0μmol/L时,对p38MAPK活性的抑制作用最强。在LPS刺激之前20minSB203580可抑制p38MAPK活性;在LPS刺激后SB203580对p38MAPK活性的抑制作用甚微或无。结论:LPS刺激鼻黏膜上皮细胞致炎在30min内和浓度在1mg/L内是以时间和浓度“正依赖”方式导致p38MAPK的活化增强;特异性抑制剂SB203580对p38MAPK活性的抑制作用则是浓度在5μmol/L内以“正依赖”方式增强,且这种抑制作用仅在LPS刺激之前才发挥效应。

活血及活血解毒配伍中药含药血清对肿瘤坏死因子-α诱导人内皮细胞与中性粒细胞黏附及相关通路蛋白表达的影响

目的探讨活血及活血解毒配伍中药含药血清对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)与外周血中性粒细胞(PMN)黏附、炎症反应及相关通路蛋白的影响。方法采用随机数字表法将32只大鼠分为空白对照组、芎芍胶囊组、黄连胶囊组及芎芍胶囊加黄连胶囊组,每组8只,各给药组按临床等效剂量灌胃,采血制备含药血清。空白对照组予等体积蒸馏水作对照。常规方法培养HUVECs,以TNF-α(100 ng/m L)为刺激物,制备HUVECs细胞损伤模型。细胞分为5组:空白对照组、模型组、活血组、解毒组及活血解毒组。空白对照组及模型组给予正常大鼠血清,其他3组以10%含药血清干预24 h后收集细胞,应用孟加拉玫瑰红染色法观察HUVECs与PMN发生病理性黏附情况;酶联免疫法检测细胞上清液相关炎症因子E选择素(E-selectin)、细胞黏附分子-1(ICAM-1)及白细胞介素-1β(IL-1β)含量;Western blot法检测丝裂素活化蛋白激酶p38(p38MAPK)及细胞外信号调节激酶1/2(ERK 1/2)蛋白磷酸化水平。结果与空白对照组比较,模型组细胞出现明显的氧化损伤,PMN黏附数量明显增加,IL-1β、E-selectin及ICAM-1水平升高,且HUVEC上清p-p38MAPK、p-ERK 1/2蛋白表达增加(均P<0.01)。与模型组比较,活血组、解毒组及活血解毒组HUVECs与PMN黏附数量减少(P<0.05),细胞培养上清液IL-1β、E-selectin及ICAM-1水平降低(P<0.05,P<0.01),且内皮细胞p-p38MAPK、p-ERK 1/2蛋白表达降低(P<0.01)。结论活血及活血解毒含药血清能减轻TNF-α诱导的HUVECs损伤,抑制HUVECs-PMN黏附和黏附因子释放。其机制可能与调节内皮细胞MAPK通路p38MAPK、ERK 1/2蛋白磷酸化水平有关。

芹菜素对脂多糖致小鼠急性肺损伤的作用机制研究

目的观察芹菜素对脂多糖（LPS）诱导小鼠急性肺损伤（ALI）的影响，探讨其可能的作用机制。方法将40只健康雄性昆明小鼠按随机数字表法分为对照组、模型组及芹菜素低、中、高剂量组，每组8只。采用腹腔注射LPS 5mg／kg制备ALI模型；芹菜素低、中、高剂量组分别于制模前1h腹腔注射芹菜素10、25、50mg／kg进行干预。制模后6h进行指标检测，取右肺上叶行苏木素-伊红（HE）染色观察肺组织病理改变并对其进行病理评分，取右肺下叶称重测湿／干质量（W／D）比值，酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清及支气管肺泡灌洗液（BALF）中细胞间黏附分子-1（ICAM-1）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的含量，逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测p38丝裂素活化蛋白激酶（p38MAPK）、ICAM-1和TNF-α的mRNA表达。结果与对照组比较，模型组肺W／D比值增高（17．79±2．89比5．56±0．37，P〈0．05），肺组织病理评分增加（分：10．32±0．23比1．87±0．54，P〈0．05），血清及BALF中ICAM-1、TNF-α含量升高[血清中ICAM-1（ng／L）：21．4±2．7比14．3±3．5，TNF—α（ng／L）：254．8±10．6比1423±13．7；BALF中ICAM-1（ng／L）：20．3±2．4比11．5±3．2，TNF—α（ng／L）：230.3±5．8比110．5±11．2，均P〈0．05]，且p38MAPK、ICAM-1和TNF—α的mRNA表达亦明显升高（以对照组为1，p38MAPK、ICAM-1、TNF-α的相对表达量分别为4．42±0．37、4．89±0．27、3．28±0．13，均P〈0．05）；不同剂量芹菜素可减轻上述损伤效应，以中剂量组改善最为明显，肺W／D比值为13．28±1．21，血清中ICAM-1为（18．5±4．3）ng／L，TNF—α为（169．4±20．8）ng／L，BALF中ICAM-1为（17．8±3．5）ng／L，TNF-α为（150．4±7．1）ng／L，肺组织p38MAPK、ICAM-1、TNF—α的mRNA表达分别为2．99±0．28、3．97±0．17、2．87±0．27，与模型组比较差异均有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）。结论芹菜素可不同程度的拮抗LPS引起的小鼠ALI，以中剂量组改善效果最好，其保护作用可能与抑制p38MAPK信号通路活化、减少TNF—α和ICAM—1等炎症因子表达有关。