补肾健脾活血方含药血清调控P38信号通路促进去卵巢大鼠BMSCs成骨分化研究

目的:观察补肾健脾活血方含药血清调控P38信号通路定向诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化的机制。方法:切除SD大鼠双侧卵巢,造成大鼠去势,建立骨质疏松症模型,分离、纯化、培养与传代大鼠BMSCs。随机分为正常组、模型组、成骨诱导组、中药组。茜素红染色检测各组的钙化结节情况,放免分析方法测定骨钙素(BGP)含量,免疫组织化学方法检测成骨标记物碱性磷酸酶(ALP)、骨桥蛋白(OPN)、活化蛋白激酶(P38)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达。结果:培养7天、14天钙化结节数、BGP含量,正常组、成骨诱导组、中药组与模型组比较,差异均有非常显著性意义(P<0.01);成骨诱导组、中药组与正常组比较,差异均有非常显著性意义(P<0.01);成骨诱导组与中药组比较,差异均无显著性意义(P>0.05)。正常组和模型组可见少量ALP、OPN阳性细胞,成骨诱导组、中药组较正常组和模型组见大量ALP、OPN阳性细胞(P<0.01)。模型组较正常组P38、TNF-α表达低,中药组P38、TNF-α表达上调。结论:补肾健脾活血方含药血清通过激活P38信号传导通路,上调成骨细胞转录因子表达,促进去势大鼠BMSCs向成骨分化。

加味天雄散对弱精子症患者精子P38MAPK/ERK信号通路的影响

研究加味天雄散对弱精子症患者精液p38MAPK/ERK信号传导通路的影响。方法:临床选取弱精子症患者分为正常组、弱精组、补肾组、健脾组、全方组,分别对补肾、健脾、全方组给予3个月的治疗,治疗后观察3组患者的精液常规指标,并测定5组ERK、P38磷酸化和蛋白表达水平。结果:各组与治疗前比较,A级精子和A+B级精子百分率均上升,差异有统计学意义;与对照组、补肾组、健脾组治疗后比较,全方组A级精子和A+B级精子百分率改善更明显,差异有统计学意义;与正常组比较,弱精组患者精子ERK蛋白表达明显升高,全方组ERK蛋白表达较补肾组降低更为明显;与正常组比较,弱精组患者精子P38表达及PP38明显升高,全方组P38表达及PP38较补肾组降低更为明显。结论:补肾健脾治法可以改善弱精子症患者精子活力,可能与抑制p38MAPK/ERK信号通路有关。

MAPK信号传导通路在人参多糖诱导K562细胞凋亡中的作用

目的探讨人参多糖诱导白血病细胞K562凋亡的机制。方法取对数生长期的K562细胞,调整密度为5×105个/m L,对照组予以常规培养;人参多糖（GPS）组加入400 mg/L GPS。采用流式细胞仪（MTT法）检测GPS对K562细胞增殖的影响;免疫细胞化学方法检测细胞中P-P38蛋白定位及表达量的变化。Western blotting检测细胞中P38及P-P38蛋白的变化。结果 GPS对K562细胞在体外有明显的增殖抑制作用,在100~800 mg/L质量浓度范围内,其抑制作用呈浓度依赖性,在400 mg/L时达到细胞的半数抑制率,且在48 h时抑制率达到高峰;免疫细胞化学显示,P-P38蛋白主要分布在胞浆,与对照组相比,P-P38蛋白表达明显增强,且向胞核转移。Western blotting检测结果显示P38总蛋白无明显变化（P〉0.05）;P-P38蛋白有增加趋势,且在作用48 h后增加明显（P〈0.05）。结论 GPS能促进K562细胞凋亡,其促凋亡机制可能是通过P38MAPK信号传导通路实现的。

脑CYP2E1参与脂多糖诱导的神经元损伤

目的研究脂多糖(LPS)所致炎症与脑细胞色素P4502E1和CYP2E1之间的相互影响。方法采用具有胆碱能神经元特征的IMR-32人神经母细胞瘤细胞系,分别给予低剂量(0.1 mg·L^(-1))和高剂量(1.0 mg·L^(-1))LPS处理24 h,检测LDH和SOD活性。在LPS处理前45 min,分别加入p38抑制剂SB203580和ERK抑制剂U0126处理IMR-32细胞,观察MAPK信号系统对神经元CYP2E1表达的影响。采用具有多巴胺能神经元特征的SH-SY5Y人神经母细胞瘤细胞系建立高表达CYP2E1细胞系,并与正常SH-SY5Y细胞同时给予低剂量(0.1 mg·L^(-1))和高剂量(1.0 mg·L^(-1))LPS处理24 h后检测LDH和SOD活性。结果与对照组相比,高剂量LPS处理IMR-32细胞,SOD的活力下降15.0%(P<0.01),LDH上升1.38倍(P<0.01),CYP2E1 mRNA升高1.25倍(P<0.01),蛋白水平升高1.19倍(P<0.05)。p38和ERK抑制剂可拮抗高剂量LPS对CYP2E1的诱导作用。低剂量LPS处理CYP2E1高表达SH-SY5Y细胞,LDH的升高幅度较非高表达的对照组上升了1.28倍(P<0.01),SOD活力下降幅度增加了3.53倍(P<0.01);高剂量LPS使得CYP2E1高表达SH-SY5Y细胞LDH的升高幅度较非高表达的对照组上升了1.54倍(P<0.01),SOD活力下降幅度增加了2.17倍(P<0.01)。结论 LPS可上调神经元所表达的CYP2E1水平,其调控作用可能与ERK和p38信号传导通路相关。高表达CYP2E1加剧LPS对神经元的损伤,提示CYP2E1参与了炎症所致神经细胞损伤的病理过程。