耐力训练对糖尿病大鼠骨骼肌p38信号激酶的调节作用

目的:研究不同强度的耐力训练对糖尿病大鼠骨骼肌细胞丝裂素活化蛋白激酶p38活性的调节作用,为制订适宜的糖尿病运动疗法程序提供分子生物学依据。方法:雄性SD大鼠34只,尾静脉注射链脲霉素,建立糖尿病模型。然后随机分为低强度运动组(E1,n=6)、高强度运动组(E2,n=6)、低强度运动加胰岛素治疗组(EI1,n=6)、高强度运动加胰岛素治疗组(EI2,n=6)、非胰岛素治疗非运动组(C,n=5)和胰岛素治疗非运动组(CI,n=5)。耐力训练采用活动平板,胰岛素皮下注射,共8周。运用化学发光法测定p38活性。结果:训练8周前后,EI1组安静血糖下降46%(P<0.01),其余各组血糖无明显下降。单次运动前后E1组、EI1组、EI2组和CI组血糖均见明显下降,其中EI1组血糖降低尤为显著达83%(P<0.01)。骨骼肌p38活性在EI1组显著高于其余各组(P<0.05),E1组显著高于E2组、C组、CI组(P<0.05)。结论:低强度运动训练以及低强度运动训练加胰岛素治疗均能显著提高糖尿病大鼠骨骼肌细胞p38信号激酶,提示低强度运动训练加胰岛素治疗是内源性胰岛素缺乏性糖尿病的适宜治疗方案。

阿托伐他汀钙对甲状腺功能减退大鼠甲状腺功能、免疫应答及JNK/p38 MAPK信号通路的影响

目的探讨阿托伐他汀钙对甲状腺功能减退大鼠甲状腺功能、免疫应答及c-Jun氨基末端激酶/p38丝裂原活化蛋白激酶(JNK/p38 MAPK)信号通路的影响。方法将30只健康成年雄性SD大鼠随机分为对照组(control组)、甲状腺功能减退组(PTU组)以及阿托伐他汀钙治疗组(ACT组),每组10只。PTU组及ACT组大鼠每天颈背皮下注射PTU,连续28 d;control组每只大鼠皮下注射0.3 mL生理盐水代替PTU。PTU处理2周后,ACT组大鼠灌胃阿托伐他汀钙生理盐水溶液3 mL(含阿托伐他汀钙5 mg/kg),每天给药1次;对照组按相同方法灌胃等量生理盐水。每周测量大鼠体质量、进食及饮水量的变化。通过组织病理切片观察各组大鼠甲状腺组织病理变化。酶联免疫吸附法(ELISA)测定大鼠血清中三碘甲状腺原氨酸(T3)、甲状腺素(T4)、促甲状腺激素(TSH)、干扰素γ(IFN-γ)和白细胞介素-4(IL-4)水平;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测IFN-γ、IL-10、Foxp3和IL-4的mRNA水平;蛋白免疫印迹(Western blot)检测p-JNK/JNK和p-p38/p38 MAPK水平。结果与control相比,PTU诱导的甲状腺功能减退大鼠体质量降低,食物和水消耗减少,差异有统计学意义(P<0.05)。阿托伐他汀钙治疗2周后,PTU大鼠体质量损失受到抑制,食物和水的消耗改善,差异有统计学意义(P<0.05)。阿托伐他汀钙可提高甲状腺功能减退大鼠血清T3、T4水平,降低血清TSH水平,差异有统计学意义(P<0.05)。阿托伐他汀钙治疗可减轻PTU诱导的滤泡细胞增生及相关肥厚变化等组织病理学改变,增加卵泡大小,差异有统计学意义(P<0.05)。阿托伐他汀钙治疗后增加了PTU大鼠的脾脏质量,降低了甲减大鼠IFN-γmRNA的表达,但增加了IL-10 mRNA、Foxp3 mRNA和IL-4 mRNA的表达,差异有统计学意义(P<0.05)。阿托伐他汀钙治疗后,甲状腺功能减退大鼠甲状腺组织中p-JNK/JNK和p-p38/p38 MAPK水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论阿托伐他汀钙治疗甲状腺功能减退症具有促使甲状腺激素失衡正常化、平衡Th1/Th2细胞因子、抑制JNK/p38 MAPK信号通路活化的功能。

丹皮酚通过调节p38丝裂原活化蛋白激酶对缺血性脑卒中大鼠神经炎症的影响

目的探讨丹皮酚对缺血性脑卒中大鼠神经炎症的影响及其机制。方法使用SPF级雄性SD大鼠构建缺血性脑卒中大鼠模型,将大鼠分为假手术组(Sham组)、模型组(Model组)、丹皮酚组(Paeonol组,20 mg/kg丹皮酚)、丹皮酚联合p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)激活剂组(Paeonol+Anisomycin组,20 mg/kg丹皮酚+2 mg/kg Anisomycin)。造模48 h后观察大鼠神经功能缺损评分,检测脑梗死体积,使用TUNEL染色及免疫荧光染色观察神经元凋亡及小胶质细胞激活情况,酶联免疫吸附测定法检测缺血半暗带区脑组织肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β和IL-6水平,Western blot检测p-p38 MAPK、p38 MAPK蛋白表达。结果与Sham组比较,Model组大鼠神经功能损伤严重,脑组织出现白色梗死灶,神经功能缺损评分及脑梗死体积、神经元凋亡率、小胶质细胞数量及TNF-α、IL-1β和IL-6水平、p-p38 MAPK蛋白表达水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与Model组比较,Paeonol组大鼠神经功能缺损评分及脑梗死体积、神经元凋亡率、小胶质细胞数量及TNF-α、IL-1β和IL-6水平、p-p38 MAPK表达水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与Paeonol组比较,Paeonol+Anisomycin组大鼠神经功能缺损评分及脑梗死体积增加,且丹皮酚改善缺血性脑卒中大鼠脑损伤及炎症反应的作用可被Anisomycin逆转(P<0.05)。结论丹皮酚可能通过抑制p38 MAPK通路,抑制小胶质细胞激活及炎症反应,减轻缺血性脑卒中引起的脑损伤。

基于p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路探讨中医药治疗慢性阻塞性肺疾病的研究进展

慢性阻塞性肺疾病(Chronic Obstructive Pulmonary Disease,COPD)是呼吸科临床上的常见病、多发病,已经给社会经济造成沉重的负担。目前临床上西医治疗该病多以抗生素、吸入激素、支气管扩张剂、茶碱类药物等为主要治疗药物,但目前仍存在些许问题,如长期反复抗生素导致耐药菌产生、吸入激素造成肺炎风险增加和长期用药患者依从性不高等问题。因此,探寻新型、高效、简便、廉价的药物和治疗模式是目前阶段研究的重点方向。我国中医中药具有多年历史,凭借其“整体观念、辨证论治、药简便廉”的自身独特优势,在COPD的预防和治疗中积累了相当丰富的临床经验。近年来,国内外对于中医药与p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 Mitogen-activated Protein Kinase,p38MAPK)信号通路的研究络绎不绝,该文通过筛选相关研究与文献,从中医角度探讨COPD的病因病机、辨证论治、发病机制、p38MAPK信号通路与COPD的关系,基于该通路的中医药对COPD的干预进行系统归纳和整理,研究发现某些单味中药、提取物、中药复方能通过调控p38MAPK信号通路的激活,抑制下游某些促炎因子如肿瘤坏死因子-α(Tumor Necrosis Factor-α,TNF-α)、白细胞介素(Interleukin,IL)-6、IL-1β等炎症因子的释放,减轻气道炎症、抑制气道重塑,从而改善COPD患者呼吸道的通气功能。这些研究均为推动中医药的现代化和治疗COPD提供了一定的理论基础和诊疗思路。

黄芪甲苷对慢性间歇性缺氧诱导的遗尿症大鼠TLR4-p38 MAPK通路的影响

目的 探讨黄芪甲苷对慢性间歇性缺氧诱导的遗尿症大鼠Toll样受体4(Toll-like receptor-4,TLR4)/p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase, p38 MAPK)信号通路的影响。方法 将SD大鼠随机分为对照组、模型组、黄芪甲苷低剂量组、黄芪甲苷中剂量组、黄芪甲苷高剂量组、去氨加压素组、脂多糖组、黄芪甲苷高剂量+脂多糖(Lipopolysaccharide, LPS)组,每组12只。除对照组外,其他组均需采用慢性间歇性缺氧诱导的方法构建遗尿症大鼠模型,各组大鼠每天于进入动物舱前1 h进行给药处理,1次/d,持续4周。末次处理24 h后,检测各组大鼠24 h排尿量及膀胱漏尿点压(bladder leak point pressures, BLPP)值的变化;ELISA法检测大鼠血清中抗利尿激素(antidiuretic hormone, ADH)含量;HE染色检测大鼠膀胱组织病理变化;比色法检测大鼠膀胱组织中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)活性、丙二醛(malonic dialdehyde, MDA)含量;Western blot检测大鼠膀胱组织中P2X3、TLR4、p-p38蛋白表达。结果 与对照组比较,模型组大鼠膀胱组织病理损伤严重,24 h排尿量增多,BLPP值变小,ADH含量、SOD活性降低,MDA含量和P2X3、TLR4、p-p38蛋白表达升高(P<0.05);与模型组比较,黄芪甲苷低剂量组、黄芪甲苷中剂量组、黄芪甲苷高剂量组、去氨加压素组大鼠膀胱组织病理损伤减轻,24 h排尿量减少,BLPP值变大,ADH含量、SOD活性升高,MDA含量和P2X3、TLR4、p-p38蛋白表达降低,LPS组大鼠膀胱组织病理损伤加剧,24 h排尿量增多,BLPP值变小,ADH含量、SOD活性降低,MDA含量和P2X3、TLR4、p-p38蛋白表达升高(P<0.05);与黄芪甲苷高剂量组比较,黄芪甲苷高剂量+LPS组大鼠膀胱组织病理损伤严重,24 h排尿量增多,BLPP值变小,ADH含量、SOD活性降低,MDA含量和P2X3、TLR4、p-p38蛋白表达升高(P<0.05)。结论 黄芪甲苷可能通过抑制TLR4/p38MAPK信号通路改善慢性间歇性缺氧诱导的大鼠遗尿症。

木犀草素阻断p38 MAPK通路对宫颈癌细胞增殖、迁移、侵袭和上皮间质转化的抑制作用研究

目的探讨木犀草素通过调控p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路对宫颈癌细胞增殖、迁移、侵袭和上皮间质转化(EMT)的影响。方法子宫颈鳞状细胞癌SiHa细胞系经不同浓度木犀草素处理24 h,细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞活力以筛选最适木犀草素作用浓度,后将SiHa细胞分为对照组、木犀草素组、阳性药物组、抑制剂组和激活剂组,干预24 h后,采用倒置显微镜、细胞增殖试剂盒、划痕、Transwell小室和蛋白免疫印迹法测定细胞形态、增殖、迁移、侵袭及EMT和p38 MAPK通路相关蛋白表达的情况。结果根据CCK-8法确定木犀草素最适作用浓度为10μmol/L。与对照组相比,木犀草素组和阳性药物组细胞的生长受到抑制,增殖率、迁移率、侵袭数,以及波形蛋白(Vimentin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和纤维连接蛋白(FN)表达水平、p-p38 MAPK/p38 MAPK比值降低(P<0.05),E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达水平上升(P<0.05);与木犀草素组相比,SB203580增强了、茴香霉素抑制了木犀草素对SiHa细胞的上述作用(P<0.05)。结论木犀草素可通过阻断p38 MAPK通路抑制SiHa细胞的增殖、迁移、侵袭及EMT进程。

断奶应激对仔猪肠形态、肠黏膜屏障和p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路的影响

本试验旨在研究早期断奶仔猪肠黏膜屏障变化及其对p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路的影响。选取21日龄"杜×长×大"仔猪12窝,每窝选取2～3头平均体重为(5.8±0.4)kg的仔猪断奶,为断奶组,每窝剩下的仔猪不断奶继续哺乳至35日龄,为哺乳组,分别于仔猪22、24、28和35日龄屠宰取样,每次每组6头。结果表明:与哺乳组相比,断奶组空肠绒毛高度和绒毛高度/隐窝深度在22、24和28日龄均显著降低(P<0.05),隐窝深度均显著提高(P<0.05),35日龄上述指标断奶组与哺乳组差异不显著(P>0.05)。断奶组在断奶后的不同时间肠形态发生了变化,断奶仔猪24和28日龄空肠绒毛高度/隐窝深度显著低于22日龄(P<0.05),35日龄断奶仔猪空肠绒毛高度和绒毛高度/隐窝深度显著高于22、24和28日龄(P<0.05)。与哺乳组相比,血浆D-乳酸含量和二胺氧化酶活性在断奶后不同时间均显著提高(P<0.05),35日龄断奶组仍显著高于哺乳组(P<0.05)。与22日龄断奶仔猪相比,24日龄p38 MAPK磷酸化水平与总水平的比值显著增加(P<0.05),并达到高峰,随后此比值随着日龄的延长逐渐降低。结果提示,21日龄仔猪断奶后肠形态和肠黏膜屏障受损,在35日龄肠形态基本恢复,但是肠道通透性仍未恢复,仔猪断奶后肠道通透性的恢复滞后于形态学重建,断奶应激激活了p38 MAPK信号通路。

胡黄连苷Ⅱ干预脑缺血/再灌注损伤后p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路的作用机制

目的探讨胡黄连苷Ⅱ对脑缺血/再灌注损伤后p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)通路的影响及其神经保护作用机制。方法成年健康雄性Wistar大鼠150只,应用线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞/再灌注(MCAO/R)模型,按照随机对照原则,动物分为假手术组、模型组、胡黄连苷组、茴香霉素(p38 MAPK激活剂)组、茴香霉素+胡黄连苷组和SB203580(p38 MAPK抑制剂)组和SB203580+胡黄连苷组。改良神经功能评分(m NSS)法评价大鼠神经行为功能,HE染色观察神经细胞的形态结构,TUNEL法检测细胞凋亡,免疫组织化学法检测脑组织磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)表达水平,Western blotting检测大鼠皮质区p-p38 MAPK、磷酸化MAPK激活的蛋白激酶2(p-MK2)、磷酸化胞质磷脂酶A2(p-cPLA2)、白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)。结果假手术组大鼠无神经功能缺损。模型组大鼠神经功能缺损评分升高,皮质区神经细胞损伤加重,脑梗死体积增大,凋亡细胞增多,p-p38 MAPK、p-MK2、p-cPLA2、IL-6及TNF-α蛋白表达增强。胡黄连苷组、SB203580组和SB203580+胡黄连苷组大鼠皮质区神经元损伤较轻,凋亡细胞数量明显减少,p-p38 MAPK、p-MK2、p-cPLA2以及IL-6蛋白表达较模型组明显降低。茴香霉素组、茴香霉素+胡黄连苷组各项指标与模型组相近,脑梗死体积较大,神经功能缺损较重,p-p38 MAPK、p-MK2、p-cPLA2以及IL-6蛋白表达升高。结论脑缺血损伤后激活p38 MAPK信号通路介导神经元凋亡和炎症反应,胡黄连苷Ⅱ可能通过降低p38 MAPK通路的活化,抑制神经元凋亡和炎症反应从而保护神经系统。

紫草素对肺炎链球菌引起的肺炎小鼠细胞外信号调节激酶/p38丝裂素活化蛋白激酶/核苷酸结合寡聚化结构域样蛋白3信号通路及肺血管通透性的影响

目的探究紫草素对肺炎链球菌引起的肺炎小鼠细胞外信号调节激酶/p38丝裂素活化蛋白激酶/核苷酸结合寡聚化结构域样蛋白3(ERK/p38/NLRP3)信号通路及肺血管通透性的影响。方法采用肺炎链球菌悬液50 L滴加BALB/c小鼠破损鼻黏膜建立肺炎链球菌性肺炎模型,成模小鼠采用随机数字表法分为模型组、紫草素低、中、高浓度组及头孢呋辛酯组,另取鼻腔滴加50 L生理盐水BALB/c小鼠为对照组,每组10只,紫草素低、中、高浓度组分别给予紫草素12.5 mg/kg、25.0 mg/kg、50.0 mg/kg,头孢呋辛酯组给予头孢呋辛酯50.0 mg/kg,对照组、模型组给予等量生理盐水,每天1次,连续灌胃7 d。末次给药12 h后处死小鼠,检测各组小鼠左肺湿/干重比值(W/D),每组采用随机数字表法选取4只小鼠进行1%伊文氏蓝5 mL/kg尾静脉注射检测肺血管通透性,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肺组织白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达量,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)及蛋白质印迹法(WB)分别检测肺组织ERK、p38、NLRP3 mRNA及蛋白表达。结果与对照组比较,模型组小鼠肺组织W/D比值[(4.49±0.27)%比(3.02±0.15)%]、肺血管通透性[(0.091±0.009)g/mg比(0.034±0.004)g/mg]、IL-1β[(567.29±14.65)pg/mL比(102.46±6.73)pg/mL]、TNF-α[(417.16±12.89)pg/mL比(83.59±6.28)pg/mL]、ERK、p38、NLRP3 mRNA及蛋白表达水平均显著增加(P<0.05);与模型组比较,紫草素低、中、高浓度组小鼠肺组织W/D比值、肺血管通透性、IL-1β、TNF-α表达量、ERK、p38、NLRP3 mRNA及蛋白表达水平均依次降低(P<0.05),紫草素高剂量组均低于头孢呋辛酯组(P<0.05)。结论紫草素可减轻肺炎链球菌性肺炎小鼠肺组织损伤、炎症反应及肺血管通透性,可能与抑制ERK/p38/NL‐RP3信号通路有关。

p38丝裂原活化蛋白激酶信号调控脂多糖所致程序性死亡配体1表达介导免疫麻痹研究

目的:探讨脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)调控树突状细胞(Dendritic Cell,DCs)免疫共抑制分子程序性死亡配体1(Programmed Death-Ligand 1,PD-L1)表达介导免疫麻痹的机制。方法:以LPS刺激小鼠DCs建立脓毒血症免疫麻痹体系,采用流式细胞术和BrdU细胞增殖实验分别检测LPS所致树突状细胞PD-L1表达和抗原特异性T细胞增殖反应。结果:LPS显著上调DCs免疫共抑制分子PD-L1表达,并抑制DCs介导的T淋巴细胞增殖反应(P<0.0001)。p38丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated Protein Kinase,MAPK)抑制剂——SB203580能显著降低LPS所致PD-L1的高水平表达。SB203580和PD-L1封闭抗体均能显著逆转DCs介导的T淋巴细胞增殖反应的抑制现象(P<0.0001)。结论:LPS上调DCs免疫共抑制分子PD-L1是T细胞免疫反应低下麻痹的主要原因。阻断p38 MAPK信号有助于改善脂多糖所致PD-L1高表达介导的树突状细胞免疫麻痹。

儿茶素抑制p38 MAPK磷酸化减轻脂多糖诱导的大鼠心肌细胞凋亡、炎症及氧化损伤

为了研究儿茶素对脂多糖(LPS)诱导的大鼠心肌细胞(H9C2)氧化损伤、炎症和凋亡的影响以及对p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的调控作用,本研究体外培养H9C2细胞,并将其分为对照组(不做干预处理)、LPS组(10μg/mL LPS处理)、不同浓度儿茶素组(在LPS组基础上以20、40、80、160 nmol/L儿茶素处理)、SB203580组(10μg/mL LPS+1μmol/L SB203580处理)、抑制剂组(10μg/mL LPS+160 nmol/L儿茶素+1μmol/L p38MAPK通路抑制剂SB203580处理)和激活剂组(10μg/mL LPS+160 nmol/L儿茶素+10μmol/L p38 MAPK通路激活剂C16-PAF处理)。药物干预处理24 h后,用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)测定细胞活力;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测炎症因子白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-10(IL-10)的含量;丙二醛(MDA)和超氧化物岐化酶(SOD)试剂盒检测氧化应激因子MDA和SOD在细胞上清液中的表达水平;Hoechst 33258染色法测定细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法测定天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)和p38 MAPK通路相关蛋白表达水平。与对照组相比,LPS组细胞活力显著降低(P<0.05);与LPS组相比,添加160 nmol/L儿茶素后细胞活力显著升高(P<0.05),最终选择160 nmol/L儿茶素作为儿茶素组进行后续试验。后续试验中,与对照组相比,LPS组SOD、IL-10含量显著降低(P<0.05),MDA、IL-6含量、细胞凋亡数、Caspase-3、p-p38 MAPK蛋白表达显著升高(P<0.05);与LPS组相比,儿茶素组和SB203580组显著扭转了上述指标的变化(P<0.05);与儿茶素组相比,抑制剂组中的SB203580增强了上述指标的变化,而激活剂组中的C16-PAF则减弱了儿茶素对LPS诱导的H9C2细胞的作用(P<0.05)。本研究表明,儿茶素可显著抑制LPS诱导的大鼠心肌H9C2细胞的凋亡、炎症和氧化应激损伤,其作用机制或与抑制p38 MAPK通路的信号转导相关。

尿激酶型纤溶酶原激活物和p38促丝裂原激活蛋白激酶信号通路与头颈肿瘤侵袭

细胞外基质降解是肿瘤侵袭的前提,尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)在其降解过程中发挥着重要的作用,p38促丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)信号通路可通过对uPA的调节参与肿瘤的侵袭。本文就uPA和p38MAPK信号通路在头颈肿瘤的发生和侵袭中的作用作一综述。

达格列净通过p38丝裂原活化蛋白激酶抑制高糖诱导的人肾小球足细胞损伤

目的探讨达格列净通过p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路对D-葡萄糖诱导的人肾小球足细胞凋亡、自噬、炎症反应及氧化损伤的影响。方法体外培养人肾小球足细胞(HGPCs),分为对照组(5 mmol/L D-葡萄糖)、D-葡萄糖组(30 mmol/L D-葡萄糖)、达格列净组(30 mmol/L D-葡萄糖+50μmol/L达格列净)、抑制剂组(30 mmol/L D-葡萄糖+10μmol/L p38 MAPK通路抑制剂SB 203580)、达格列净+抑制剂组(30 mmol/L D-葡萄糖+50μmol/L达格列净+10μmol/L SB 203580)和达格列净+激活剂组(30 mmol/L D-葡萄糖+50μmol/L达格列净+10μmol/L p38 MAPK通路激活剂C16-PAF)。对照组与D-葡萄糖组用D-葡萄糖干预24 h;其他组D-葡萄糖干预24 h后相应药物继续干预24 h。采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测细胞活力;采用Hoechst 33258染色法检测细胞凋亡率;采用ELISA检测白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、丙二醇(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)的表达水平;采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测酵母ATG6同源物(Beclin-1)、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)mRNA表达水平;采用Western印迹法检测Beclin-1、LC3Ⅱ、p53、p38 MAPK及p-p38 MAPK蛋白表达。结果与对照组相比,D-葡萄糖组细胞活力降低(P<0.05),达格列净组细胞活力升高(P<0.05),细胞凋亡率,IL-1β、IL-6、TNF-α、MDA、Beclin-1、LC3ⅡmRNA和蛋白、p53和p-p38 MAPK蛋白水平升高(P<0.05),SOD水平降低(P<0.05)。与D-葡萄糖组相比,达格列净组和抑制剂组细胞凋亡率、IL-1β、IL-6、TNF-α、MDA、Beclin-1、LC3ⅡmRNA和蛋白、p53和p-p38 MAPK蛋白水平降低(P<0.05),SOD水平升高(P<0.05)。与达格列净组相比,达格列净+抑制剂组细胞凋亡率、IL-1β、IL-6、TNF-α、MDA、Beclin-1、LC3ⅡmRNA和蛋白、p53和p-p38 MAPK蛋白水平进一步降低(P<0.05),SOD水平进一步升高(P<0.05);达格列净+激活剂组与达格列净+抑制剂组变化趋势相反,与达格列净组差异有统计学意义(P<0.05)。结论达格列净可抑制高糖诱导的人HGPCs的凋亡、自噬、炎症反应及氧化损伤,其作用机制可能与抑制p38 MAPK通路信号转导相关。

从P38丝裂原活化蛋白激酶信号通路探讨金天格胶囊防治膝骨关节炎临床研究

目的基于检测P38丝裂原活化蛋白激酶信号通路中相关指标及其临床症状积分,探讨金天格胶囊防治膝骨关节炎的临床疗效及其可能机制。方法符合诊断标准、纳入标准、排除标准78例膝关节炎患者,按就诊顺序,1∶1随机分为治疗组和对照组,治疗组予金天格胶囊、对照组予阿伦磷酸钠,连续干预12周,分别收集治疗前、治疗后1周、4周及12周症状积分变化;应用荧光定量PCR技术检测治疗前及治疗12周后关节液中P38α、P38γ、MMP-13变化。结果治疗组总有效率76.92%,对照组总有效率58.97%,经统计学比较,治疗组明显优于对照组(P<0.05)。治疗前,两组患者VAS计分分别为(6.20±1.71)、(6.27±1.86),经比较无统计学意义(P>0.05),具有可比性;治疗后,两组患者VAS评分均呈下降趋势,治疗后1周两组患者VAS积分比较无统计学意义;治疗后4周、12周治疗组VAS积分低于对照组,经统计学比较,有显著性差异(P<0.05)。治疗前,KOA患者P38-MAPK信号通路中相关指标及MMP-13 mRNA变化均呈上升趋势;治疗后,治疗组MKK4、P38αmRNA变化较治疗前比较,无明显差异(P>0.05);而P38γ、MMP13 mRNA变化呈下降趋势,较治疗前比较,有统计学差异(P<0.05)。结论金天格胶囊具有明确缓解膝关节炎疼痛效用,其疗效机制可能与调节P38丝裂原活化蛋白激酶信号通路,较少MMP-13表达相关。

红景天苷介导p38 MAPK信号通路抑制脂多糖诱导的心肌细胞焦亡及氧化损伤

目的 探究红景天苷对脂多糖(LPS)诱导的大鼠心肌细胞焦亡和氧化损伤及p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路的调控作用。方法 体外培养大鼠心肌H9C2细胞,分为对照组、LPS组、LPS+10、20、40、80μmol/L红景天苷组,筛选出最佳浓度红景天苷后,又分组:对照组、LPS组、LPS+20μmol/L红景天苷组、SB203580组、LPS+20μmol/L红景天苷+SB203580组和LPS+20μmol/L红景天苷+C16-PAF组。干预24 h后,用酶联免疫吸附试验检测白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、氧化应激因子丙二醛(MDA)和超氧化物岐化酶(SOD)的表达水平。细胞计数试剂盒-8(CCK-8)测定细胞活力;实时荧光定量PCR测定细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3 mRNA表达情况;蛋白免疫印迹法测定p38 MAPK信号通路相关蛋白、Cyclin D1、Caspase-3、Caspase-1、Gasdermin-D(GSDMD)和核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎性小体蛋白表达水平。结果 与对照组相比,LPS组IL-6和TNF-α表达水平显著升高,细胞活力显著降低(P<0.05);与LPS组相比,LPS+20、40、80μmol/L红景天苷组IL-6和TNF-α含量显著降低(P<0.05),LPS+20μmol/L红景天苷组细胞活力显著升高(P<0.05),所以选择抑炎效果且细胞活力提高更佳的LPS+20μmol/L红景天苷组加入p38 MAPK信号通路抑制剂SB203580和激活剂C16-PAF进行后续实验。与对照组相比,LPS组细胞SOD含量、Cyclin D1 mRNA及蛋白表达水平显著降低(P<0.05),MDA含量、Caspase-3 mRNA和蛋白表达水平、Caspase-1、GSDMD、NLRP3以及p-p38 MAPK蛋白表达显著升高(P<0.05);与LPS组相比,LPS+20μmol/L红景天苷组和SB203580组显著扭转了上述指标的变化(P<0.05)。与LPS+20μmol/L红景天苷组相比,加入p38 MAPK通路抑制剂后,LPS+20μmol/L红景天苷+SB203580组SOD含量、Cyclin D1 mRNA及蛋白表达水平显著升高(P<0.05),Caspase-3 mRNA和蛋白表达水平、MDA含量、Caspase-1、GSDMD、NLRP3以及p-p38 MAPK蛋白表达显著降低(P<0.05),LPS+20μmol/L红景天苷+C16-PAF组则显著扭转了上述指标的变化(P<0.05)。结论 红景天苷可抑制LPS诱导的大鼠心肌H9C2细胞的焦亡、氧化应激损伤和凋亡,促进细胞增殖,其作用机制可能与抑制p38 MAPK通路的信号转导相关。

阿魏酸钠对肺结核模型大鼠JNK/P38MAPK信号通路的调节作用及巨噬细胞凋亡的抑制作用研究

目的探讨阿魏酸钠对肺结核模型大鼠c-Jun氨基末端激酶(JNK)/P38丝裂原活化蛋白激酶(P38MAPK)信号通路的调节作用,以及对巨噬细胞凋亡的抑制作用。方法将90只SD大鼠随机法分为对照组(A组),模型组(B组),阿魏酸钠低、中、高剂量组(C1组、C2组、C3组)及阳性对照组(D组),每组15只。除A组外,其余大鼠均尾静脉注射结核杆菌悬液建立肺结核模型,C1组、C2组、C3组大鼠分别按50,100,150 mg/kg剂量灌胃给药,D组大鼠按10 m L/kg剂量灌胃康复新液,A组及B组大鼠灌胃等量生理盐水,所有大鼠均1天给药1次,连续给药12周。采用酶联免疫吸附法检测大鼠的血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素1β(IL-1β)水平,肺组织超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)水平,采用Annexin V-FITC/PI细胞凋亡法检测肺泡巨噬细胞凋亡率,采用苏木精-伊红染色法检查大鼠肺组织的病理学变化,采用实时荧光定量聚合酶链式法检测大鼠肺组织JNK和P38MAPK mRNA水平,采用蛋白质免疫印迹法检测大鼠肺组织JNK、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)、P38MAPK、磷酸化P38丝裂原活化蛋白激酶(p-P38MAPK)蛋白水平。结果与B组比较,C1组、C2组、C3组、D组大鼠血清TNF-α,IL-6,IL-1β水平,肺组织MDA,JNK mRNA,P38MAPK mRNA,JNK,p-JNK,P38MAPK,p-P38MAPK水平,以及肺组织巨噬细胞凋亡率均显著降低,肺组织SOD活性均显著升高(P <0.05);B组大鼠肺组织可见增生型肺结核结节、肺间质水肿及大量炎性细胞浸润、坏死细胞脱落,C1组、C2组、C3组、D组大鼠肺组织结构恢复,炎性细胞浸润及细胞脱落明显减轻。结论阿魏酸钠能明显降低肺结核模型大鼠炎性反应水平及肺组织氧化应激损伤程度,抑制肺泡巨噬细胞凋亡,改善大鼠肺组织病理学,其作用机制可能与调节JNK/P38MAPK信号通路有关。

甲泼尼龙对大鼠呼吸机相关肺损伤时p38MAPK信号通路的影响

目的探讨甲泼尼龙预先静脉注射对大鼠呼吸机相关肺损伤（VILI）的影响。方法将60只SD大鼠随机分为三组：对照组（C组）、机械通气（H组）和甲泼尼龙组（P组）。C组不行机械通气，自然呼吸空气；H组：大潮气量机械通气4h，吸入氧浓度为2l％；P组：机械通气前10rain静脉注射甲泼尼龙20mr,／kg。4h后放血处死大鼠，检测支气管灌洗液（BALF）中总蛋白、TNF—d、巨噬细胞炎性蛋白-2（MIP-2）的浓度，测定肺组织髓过氧化物酶（MPO）活性，测定肺干湿质量比（W／D）；Westernblot法检测磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶（P-p38MAPK）、抗丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1（MKP-1）的表达；观察各组肺组织病理变化和细胞凋亡情况。结果与C组比较，H组P-p38MAPK蛋白灰度值显著升高（F=4．26，P〈0．05），同时伴有BALF中总蛋白、TNF-α和MIP-2的浓度、MPO活性、肺组织细胞凋亡指数、W／D比均显著升高（均P〈0．05）；与H组比较，P组P-p38MAPK蛋白灰度值明显下降，MKP-1蛋白灰度值上升（F=4．26、3．95，均P〈0．05），同时伴有肺组织中BALF中总蛋白、TNF-α和MIP-2的浓度、MPO活性、肺组织细胞凋亡指数、W／D比均显著降低（均P〈0．05）。H组肺组织病理损伤较重。结论甲泼尼龙可抑制VILI发生、发展，其机制与增加MKP-1表达，抑制p38MAPK磷酸化，进而减轻肺组织炎症、水肿和细胞凋亡有关。

补肾益肝活血方含药血清对ERK/p38MAPK信号通路的影响

目的观察补肾益肝活血方含药血清对骨关节炎的细胞外信号调节激酶(ERK)/p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)信号通路的影响。方法 40只雌性SD大鼠随机分为对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,每组10只;补肾益肝活血方含药血清的制备:给予大鼠补肾益肝活血方3.2 g/(kg·d)灌胃,连续灌胃5 d,每日给药2次,最后一次灌胃后3 h,对SD大鼠进行腹主动脉采血,制备血清;软骨细胞分离:取新生SD乳大鼠肋骨处的软骨;原代培养:将清洗干净的软骨用0.2%Ⅱ型胶原蛋白酶和10%的胰蛋白酶消化后进行细胞传代;软骨细胞的鉴定:包括细胞形态观察、甲苯胺蓝染色、免疫组织化学染色;退变软骨细胞模型的建立及含药血清干预:将传至第2代的软骨细胞予10 ng/ml白细胞介素(IL)-1β诱导获得退变的软骨细胞,诱导退变24 h后弃培养液,分4组,分别用低、中、高剂量的补肾益肝活血方含药血清及20%空白血清进行干预,每组每个时间段设置6个复孔,做好标记及记录,分别于培养24 h、36 h、48 h后取1板运用MTT法检测干预后软骨细胞的活性,确定干预软骨细胞的最佳量效与时效关系;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组上清液中IL-1β和肿瘤坏死因子(TNF)-α的水平;Westem印迹法检测蛋白。结果在IL-1β诱导下,体外培养的大鼠关节软骨细胞退化,p38MAPK增高,与对照组相比,中、高剂量组的ERK、p38MAPK表达均显著下降(P<0.05)。结论 ERK、p38MAPK参与并介导了骨关节炎的发生和发展;补肾益肝活血方能够通过下调p38MAPK基因的表达,改善IL-1β介导的关节软骨细胞退化模型的软骨细胞进一步的退化。

高血脂通过低密度脂蛋白胆固醇受体与p38-MAPK信号通路加重脑缺血

目的初步探索p38-丝裂原激活蛋白激酶(p-38MAPK)与低密度脂蛋白胆固醇受体(LDLR)在高血脂加重脑缺血的作用。方法将大鼠分为假手术组(正常饲料)、正常+大脑中动脉栓塞(MCAO)组(正常饲料)与高脂+MCAO组(高脂饲料),喂养30天,行大脑中动脉线栓法(MCAO)造成局灶性脑缺血。测定血脂水平,通过神经活动评分、缺血脑组织梗死重量、TUNEL细胞凋亡、Western Blot测定p-p38蛋白表达、免疫荧光对LDLR与p-p38双染等指标,观察高脂饲料对脑缺血程度的影响。结果高脂+MCAO组血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)均显著高于正常+MCAO组(P<0.01)。高脂+MCAO组与正常+MCAO组比较,神经活动评分明显升高(P<0.01),且程度随时间加重(P<0.01),缺血脑组织重量明显增加(P<0.01);脑皮层细胞凋亡率明显增加(P<0.01),海马组织p-p38蛋白表达显著增加(P<0.01),位于海马组织CA1区;LDLR荧光染色明显增加,位于海马组织锥体细胞层。结论 LDLR与p-p38在高血脂加重脑缺血的作用位点不同,LDLR染色定位于海马组织锥体细胞层,p-p38定位在CA1区非锥体细胞层,提示高血脂加重脑缺血可能从LDLR受体和p38-MAPK信号通路途径(与巨噬细胞炎性环节有关)两个环节起作用。

补肾活血方对兔NPMSCs移植治疗退变椎间盘P 38 MAPK信号通路的影响

目的探讨补肾活血方对兔髓核间充质干细胞(nucleus pulposus-derived mesenchymal stem cells,NPMSCs)移植治疗退变椎间盘P 38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,P 38 MAPK)信号通路的影响。方法选取128只SPF级健康新西兰大白兔,其中2例用于NPMSCs的获取、纯化及培养,选取24只为假手术组(A组);兔退变椎间盘模型成功100只,模型组(B组,24只)、补肾活血方组(C组,24只)、NPMSCs移植组(D组,24只)、补肾活血方+NPMSCs移植组(E组,24只),死亡6只。每组在治疗前、治疗后1周、治疗后2周、治疗后3周4个时间点均处死6只兔,取相应椎间盘,采用酶联免疫测定每组大兔不同时间点椎间盘P 38 MAPK、基质金属蛋白酶3(matrix metalloproteinase 3,MMP-3)、基质金属蛋白酶7(matrix metalloproteinase 7,MMP-7)的表达。结果(1)各组变化趋势:A组、B组组内不同时间点P 38 MAPK、MMP-3、MMP-7蛋白相对表达差异无统计学意义(P>0.05);C组、D组、E组P 38 MAPK、MMP-3、MMP-7蛋白相对表达与治疗前、治疗后1周、治疗后2周、治疗后3周呈下降趋势,各组组内差异有统计学意义(P<0.01)。(2)与A组比较:B组、C组、D组、E组P38MAPK、MMP-3、MMP-7蛋白相对表达在治疗前、治疗后1周、治疗后2周、治疗后3周均升高,组间差异有统计学意义(P<0.01)。(3)与B组比较:C组、D组、E组P 38 MAPK、MMP-3、MMP-7蛋白相对表达在治疗前差异无统计学意义(P>0.05);在治疗后1周、治疗后2周、治疗后3周均降低,组间差异有统计学意义(P<0.01)。(4)与C组比较:D组P 38 MAPK、MMP-3、MMP-7蛋白相对表达在治疗前、治疗后1周、治疗后2周、治疗后3周时同期差异无统计学意义(P>0.05);E组P 38 MAPK、MMP-3、MMP-7蛋白相对表达在治疗后1周、治疗后2周、治疗后3周均降低,组间差异有统计学意义(P<0.01)。(5)与D组比较:E组P 38 MAPK、MMP-3、MMP-7蛋白相对表达在治疗后1周、治疗后2周、治疗后3周均降低,组间差异有统计学意义(P<0.01)。结论补肾活血方对兔NPMSCs移植治疗退变椎间盘具有协同作用;其机制可能与抑制P 38 MAPK信号通路,下调MMP-3、MMP-7蛋白相关。