吡格列酮对脂多糖引起的大鼠海马有丝分裂原激活蛋白激酶p38信号传导通路的影响

吡格列酮（pioglitazone，Pio）能抑制脂多糖诱导的原代培养的星形胶质细胞炎症因子的释放，对抗谷氨酸诱导的神经细胞损伤，也有研究显示Pio通过抑制p38MAPK信号传导通路抑制LPS诱导的小胶质细胞炎症反应。但关于Pio对大鼠脑内炎症反应的抑制作用是否与p38MAPK信号传导通路有关目前尚未见报道，本研究通过大鼠脑室内注射LPS建立炎症反应动物模型，应用Western blot方法研究Pio对LPS引起的p38MAPK信号传导通路的影响。

N-乙酰半胱氨酸影响p38有丝分裂原活化蛋白激酶对顺铂诱导急性肾损伤的保护作用

目的研究N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)对顺铂(cisplatin,CDDP)诱导大鼠急性肾损伤(acute kidney in-jury,AKI)后组织细胞凋亡的影响和与p38有丝分裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen activated protein kinase,p38MAPK)的关系。方法静脉注射CDDP制备大鼠AKI模型。大鼠随机分为正常对照组、AKI模型对照组、NAC低剂量组(50 mg.kg-1)、NAC中剂量组(100 mg.kg-1)、NAC高剂量组(200 mg.kg-1)、特异性p38MAPK抑制剂SB203580组(10mg.kg-1)。大鼠预先连续给药3 d,给予CDDP,再继续给药5 d。TUNEL法进行细胞凋亡检查。试剂盒测定肾脏组织caspase-3。Western blot测定caspase-3、Bax、Bcl-2、磷酸化p38MAPK(phosphorylated p38MAPK,p-p38MAPK)表达。结果与正常对照组相比,CDDP诱导AKI模型组肾组织凋亡细胞增加,caspase-3、Bax、p-p38MAPK表达升高,Bcl-2表达降低(P<0.01)。与AKI模型组相比,NAC与SB203580减少凋亡细胞、降低肾脏组织caspase-3、Bax、p-p38MAPK表达和增加Bcl-2表达(P<0.01)。结论 NAC可有效防治CD-DP诱导大鼠AKI,并与p38MAPK相关。

普伐他汀对高糖培养肾小球系膜细胞P38促分裂原活化蛋白激酶信号通路的影响

目的探讨普伐他汀对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞(MC)p38促分裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号传导通路的影响。方法大鼠MC分别培养在正常糖5.5mmol·L-1(正常对照组),高糖25mmol·L-1(高糖组),葡萄糖25mmo.lL-1+p38MAPK特异性抑制剂SB203580(SB)10μmol.L-1,及葡萄糖25mmol·L-1+普伐他汀(PV)100μmol·L-1。ELISA法检测培养上清液Ⅳ型胶原(Col-Ⅳ)、纤连蛋白(FN)含量;Phospho-ELISA法检测胞浆及胞核内p38MAPK和磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)蛋白的表达;以及RT-PCR法检测p38MAPK mRNA的表达。结果与正常对照组比较,高糖组MC合成基质蛋白Col-Ⅳ,FN增多;胞浆及胞核内p-p38MAPK的表达增加。SB或PV干预能部分或完全逆转这一变化。与高糖组比较,SB干预后,上清液中Col-Ⅳ含量下降〔48h:(21.19±3.21)vs(16.75±1.93)μg·L-1,n=6,P<0.05〕、FN减少〔48h:(13.47±1.27)vs(12.01±0.85)μg·L-1,n=6,P<0.05〕;胞浆及胞核内p-p38MAPK表达显著下调。PV干预后,上清液中Col-Ⅳ含量下降〔48h:(21.19±3.21)vs(14.97±3.04)μg·L-1,n=6,P<0.05〕、FN减少〔48h:(13.57±1.27)vs(11.99±0.98)μg·L-1,n=6,P<0.05〕;胞核内p-p38MAPK表达显著下调,但对胞浆内p-p38MAPK的表达则无显著影响。各组总p38MAPK蛋白水平及p38MAPK mRNA表达则没有明显改变。结论PV能够显著下调高糖培养的MC胞核内p38MAPK信号传导通路的活化,进而减少胞外基质合成,达到对糖尿病肾病的治疗作用。

头针对急性脑缺血再灌注大鼠P38促分裂原活化蛋白激酶表达的影响

目的观察头针(电针)对急性脑缺血大鼠P38促分裂原活化蛋白激酶(P38MAPK)表达的影响。方法采用大脑中动脉线栓法制备脑缺血再灌注模型,头针组予电针治疗,各组分别于6h、24h、48h、72h进行大鼠神经功能缺损评分(NSS),Western bloting检测脑组织样本P38MAPK蛋白表达,Real-time PCR检测P38MAPK mRNA。结果脑缺血60min再灌流24h、48h、72h,头针组NSS显著低于模型组(P<0.05或P<0.01)。脑缺血60min再灌流6h、24h、48h和72h,P38MAPK在梗死侧脑组织中均有表达,且在24 h达到高峰,但头针组的表达明显低于模型组(P<0.05)。结论头针抗脑缺血的作用机制可能是通过抑制P38MAPK的表达,减轻脑缺血再灌注损伤,实现脑组织的保护作用。

p38蛋白激酶活性测定方法

蛋白激酶ｐ３８／ＨＯＣ１是ＭＡＰＫ家族重要组成部分，在全身性炎症反应、休克、细胞迁移、细胞凋亡、心血管疾病等方面具有重要作用，测定上述病理过程中Ｐ３８蛋白激酶活性，对于了解ｐ３８信号传导通路与疾病的关系以及ｐ３８信号传导通路作为某些疾病的治疗靶点提供理论依据。ｐ３８蛋白激酶活性有同位素和非同位素两种方法，目前主要用同位素方法测定，但非同位素方法具有无放射性污染、时间短、灵敏度高等特点。

p38丝裂原素激活的蛋白激酶在调节低氧诱导人内皮细胞分泌血管内皮生长因子过程中的作用(英文)

血管内皮细胞中血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)的合成增加在促进血管新生的过程中起着非常重要的作用。然而低氧诱导VEGF分泌的细胞内信号转导机制还不是很清楚。人脐静脉内皮细胞系(ECV304)在低氧或常氧的状态下培养12-24h后分别用实时定量PCR和Westernblot的方法来检测VEGFmRNA的表达及ERK1/2和p38激酶的磷酸化水平。分泌到培养液中的VEGF蛋白用酶联免疫吸附(ELISA)的方法来检测。业已报道,ERK的抑制剂PD98059能够抑制低氧诱导的VEGF基因的表达,根据这个报道,我们发现在低氧情况下,ECV304细胞的ERK1/2磷酸化水平增高以及VEGF的合成增加等这些变化也能被PD98059所抑制。本次实验的新发现是p38激酶的激活在低氧诱导VEGF合成增加中的作用。p38激酶的抑制剂SB202190能抑制低氧诱导的VEGF合成增加。这些数据首次直接证实了p38激酶在低氧诱导人内皮细胞分泌VEGF增加过程中的作用。

促分裂原活化的蛋白激酶信号通路与能量代谢的关系

能量代谢每时每刻都伴随着物质代谢在生命体内发生。生物通过利用物质代谢产生的高能磷酸化合物以维持各项生命功能的运转,不同状态下的细胞通过利用各种物质通过不同的通路进行不同的代谢方式。促分裂原活化的蛋白激酶(MAPK)通路作为生命体里广泛存在的一类信号蛋白,影响着细胞、生物体的生命活动。MAPK通路在能量代谢的各个环节起着非常重要的作用。通过研究MAPK通路中的胞外信号调节激酶(ERK)通路、Jun激酶(JNK)通路、P38通路均与能量代谢有关的蛋白、靶点、关键酶、转运体,与三大营养物质能量代谢相结合,从而为能量代谢相关的细胞功能进一步研究铺垫,并为今后治疗肿瘤性疾病、感染性疾病、代谢性疾病等提供新思路。

冲击波通过ATP释放、P2受体及激活p38MAPK激酶促进T细胞增殖和分泌白细胞介素2(英文)

背景:以往研究发现,冲击波可通过激活有丝分裂原激活蛋白激酶p38(p38MAPK),增强CD3和CD28激活的T细胞增殖和分泌白细胞介素2。目的:观察细胞内的ATP向外释放,是否为冲击波增强T细胞功能的潜在机制。设计:以细胞为观察对象,分组对照重复测量观察。单位:吉林大学第一医院骨科研究室。材料:KDE-2001体外冲击波碎石机(北京中科建安医疗技术公司制造)。MAPKp38抑制剂:SB2035801mg(BioSource Inc.,Camarillo,CA);检测磷酸化的p38MAPK试剂盒(Cell Signaling Tehchmology,Inc.U.S.A.);P2受体抑制剂:suramin50mg(BIOMOL ResearchLaboratories Inc,PA),用1.7492mL的IMDM培养基将50mg的suramin配成0.02mol/L的溶液。ATP酶:apyrase200U(Sigma,U.S.A.);P2X7受体阻滞剂:KN-62(BioSource Inc.,Camarillo,CA);p38MAPK抑制剂:SB2035801mg(BioSource Inc.,USA*542Flynn Roas,Camarillo,CA);检测ATP的生物荧光试剂盒/ATP BioluminescenceAssay Kit CLSⅡ(Roche Diagnostics GmbH,Mannheim,Germany)。方法:实验于2005-01/2006-12在吉林大学第一医院骨科研究室完成。①采用体外冲击波碎石机(工作电压7kV、电容0.3μF时,冲击波正相压强23MPa,能量密度0.18mJ/mm2)作用于T细胞,冲击波作用50￣400次。②用特异性的ATP试剂盒检测低能冲击波是否引起T细胞(人外周血单个核细胞和Jurkat T细胞)分泌ATP。③设无拮抗剂和抑制剂的阴性对照组。用人外周血单个核细胞检测低能冲击波对激活的T淋巴细胞增殖的影响,用Jurkat细胞检测低能冲击波对T淋巴细胞分泌白细胞介素2的影响,用抗-p38MAPK抗体及抗-磷酸化的p38MAPK(Thr180/Tyr182)抗体通过免疫印迹法测定Jurkat T细胞上的p38MAPK的表达及磷酸化。主要观察指标:T细胞外的ATP含量、细胞悬液中的白细胞介素2的含量、细胞的增殖和细胞p38MAPK的磷酸化程度。结果:①冲击波作用100,150,200,250,300,360和400次时较无冲击波作用时细胞外的ATP的含量明显增加(P<0.01),并且ATP的增加含量和冲击波的作用次数有依从关系。②加入apyrase,KN-62,suramin的植物血凝素激活的外周血单个核细胞细胞或CD3和CD28激活的Jurkat T细胞,在能量密度为0.18mJ/mm2的冲击波作用100,150,200,250,300,330次时,细胞对3H-TdR掺入量比没有加入apyrase、KN-62或suramin的阴性对照组低(P<0.01),细胞上清液中的的细胞介素-2的活性含量表现为明显增高(P<0.01)。加入ATP、KN-62或suramin后,冲击波激活Jurkat T细胞的p38MAPK的程度明显降低。结论:①低能冲击波能损伤细胞膜而不损伤其他细胞器,引起T淋巴细胞内的ATP过多向细胞外分泌,细胞外过量的ATP过多地激活了P2X7受体,激活细胞内的大量的p38MAPK,最后磷酸化的p38MAPK作为协同刺激因子增强激活的T淋巴细胞增殖及分泌白细胞介素2。②在低能冲击波对T淋巴细胞的功能调节上,T细胞分泌的ATP起到非常重要的作用。

沉默HMGB1通过抑制p38 MAPK信号通路减少LPS或IL-17A诱导的中耳腔上皮细胞的炎症与凋亡

目的:探讨高迁移率族蛋白B1(High Mobility Group Protein 1,HMGB1)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)或白细胞介素-17A(interleukin-17A,IL-17A)诱导人中耳腔上皮细胞(human middle ear epithelial cells,HMEEC)的炎症反应与凋亡的调控作用与机制。方法:培养HMEEC细胞系。将HMEEC分为对照组、LPS组、LPS联合短发夹RNA(shRNA)沉默质粒阴性对照处理组(LPS+shNC组)、LPS联合shRNA沉默HMGB1处理组(LPS+shHMGB1组)、LPS联合p38-丝裂原激活的蛋白激酶(p38 MAPK)抑制剂SB202190处理组(LPS+SB202190组)、IL-17A组、IL-17A+shNC组、IL-17A+shHMGB1组、IL-17A+SB202190组。酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测TNF-α、IL-1β和IL-6的水平变化。用Western blot检测粘蛋白5AC(mucoprotein 5AC,MUC5AC)、粘蛋白8(mucoprotein 8,MUC8)、p38 MAPK、磷酸化的p38 MAPK(p-p38 MAPK)、E26样蛋白1(E-twenty-six like 1 protein,ELK1)、B细胞淋巴瘤2蛋白(B-cell lymphoma 2 protein,Bcl-2),以及Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)的表达。流式细胞术检测细胞的凋亡。结果:与对照组比,LPS组或IL-17A组的HMEEC的凋亡率都增加,且HMGB1、MUC5AC、MUC8、TNF-α、IL-1β、IL-6、p38、p-p38、ELK1、Bax的表达水平升高,而Bcl-2的表达水平降低(均P<0.05)。与LPS组或IL-17A组比,LPS+shHMGB1组或IL-17A+shHMGB1组的凋亡率都降低,且HMGB1、MUC5AC、MUC8、TNF-α、IL-1β、IL-6、p38、p-p38、ELK1、Bax的表达水平都减少,而Bcl-2的表达水平升高(均P<0.05)。与LPS组或IL-17A组比,LPS+SB202190组或IL-17A+SB202190组的的凋亡率都降低,MUC5AC、MUC8、TNF-α、IL-1β、IL-6、p38、p-p38、ELK1、Bax的表达水平都降低,而Bcl-2的表达水平升高(均P<0.05)(均P<0.05)。结论:沉默HMGB1通过抑制p38 MAPK信号通路减少LPS或IL-17A诱导的HMEEC的炎症与凋亡。

地黄合剂介导p38 MAPK通路对糖尿病大鼠主动脉的影响

目的研究地黄合剂抑制p38有丝分裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen activated protein kinase,p38 MAPK)对糖尿病大鼠主动脉蛋白羰基和炎症因子的影响。方法50只SPF大鼠均分为5组,分别为正常组、糖尿病组、氯沙坦组、低剂量地黄(合剂)组、高剂量地黄(合剂)组,除正常组外,其他组大鼠建立糖尿病大鼠模型,对其用药,麻醉抽血,开腹取出主动脉,采用放免法、苏木素-伊红染色法(HE染色法)、蛋白印迹法(Western blot)等检测大鼠基本指标、主动脉病理学变化情况、p38 MAPK通路相关蛋白情况、蛋白羰基相关指标水平、炎性因子情况并进行对比分析。结果与正常组相比,糖尿病组大鼠体质量下降,血糖和血管紧张素2升高(P<0.05);氯沙坦组和高剂量地黄组体质量明显升高,血糖和血管紧张素2降低(P<0.05);低、高剂量地黄组组织形态均有不同程度的变化,高剂量地黄组和氯沙坦组大鼠细胞变化减轻程度最为明显(P<0.001),低剂量地黄组次之(P<0.05)。与糖尿病组相比,正常组大鼠的p38 MAPK、cAMP反应元件结合蛋白1(cAMP response element-binding protein 1,CREB1)、MAPK激酶3/6(MAPK kinase3/6,MKK3/6)、环氧化酶2(cyclooxygenase 2,COX2)水平明显升高,丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶1(MAP kinase phosphatase-1,MKP-1)降低(P<0.05),低、高剂量地黄组p38 MAPK、COX2明显降低(P<0.05),氯沙坦组和高剂量地黄组p38 MAPK、CREB1、MKK3/6、COX2水平显著降低,MKP-1明显升高(P<0.05);丙二醛(malondialdehyde,MDA)明显降低(P<0.05);超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶(gbutathione peroxidase,GSH-px)显著升高(P<0.05)。与糖尿病组相比,氯沙坦组炎性因子肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein,MCP-1)、C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)、白细胞介素6(interleukin 10,IL-10)明显降低(P<0.001);低剂量地黄组TNF-α、MCP-1、IL-10有所降低(P<0.05),高剂量地黄组TNF-α、MCP-1、IL-10显著降低(P<0.001)。结论高剂量地黄合剂的药效与氯沙坦相当,能够有效阻断p38 MAPK信号通路,改善糖尿病大鼠主动脉的病理组织结构,降低主动脉蛋白羰基水平,抑制氧化还原反应的发生,降低炎性因子水平。

脊髓TLR4/p38MAPK级联活化介导持续性术后痛时TNF-α的增加

目的:研究脊髓肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)在持续性术后痛中的作用及与Toll样受体4(TLR4)/p38有丝分裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)级联的关系。方法:选择鞘内置管成功的雄性SD大鼠120只,采用随机数字表法随机分为5组(每组24只):假手术组、持续性术后痛组、Toll样受体4小干扰RNA组(TLR4 si RNA组)、4-(4-氟苯基)-2-(4-甲磺酰基苯基)-5-(4-吡啶基)咪唑组(SB203580组)和重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子组(rh TNFR-Fc组)。按Flatters介绍的方法建立大鼠皮肤肌肉切口牵拉(skin/muscle incision and retraction,SMIR)持续性术后痛模型;在术前1天及术后第1、3、7、12和22天时测定大鼠机械缩足反应阈值(mechanical withdrawal threshold,MWT);按ELISA法测定脊髓TNF-α含量。结果:与术前基础值及假手术组比较,持续性术后痛组大鼠在术后第3、7、12和22天MWT明显降低(P<0.05),脊髓TNF-α含量在术后7、12和22天明显升高(P<0.05);与持续性术后痛组比较,TLR4 si RNA组和SB203580组大鼠在术后第3、7和12天,rh TNFR-Fc组在术后第7和12天MWT明显升高(P<0.05),TLR4 si RNA组、SB203580组和rh TNFR-Fc组大鼠脊髓TNF-α含量在术后第7、12和22天明显降低(P<0.05)。结论:脊髓TNF-α参与了大鼠SMIR持续性术后痛的形成,其增加与脊髓TLR4/p38MAPK级联的活化有关。

绞股蓝总皂苷对光老化HaCaT细胞中p38MAPK蛋白和c-Jun mRNA表达的抑制作用

目的:观察绞股蓝总皂苷含药血清对光老化HaCaT细胞p38促分裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)蛋白和Jun基因(c-Jun)mRNA表达的影响,探讨绞股蓝总皂苷含药血清抗皮肤光老化的作用机制。方法:采用中波紫外线(UVB)照射建立光老化HaCaT细胞模型,加低、中、高剂量绞股蓝总皂苷含药血清于光老化HaCaT细胞模型培养液中培养,并设空白对照组、空白血清组和UVB模型组。采用Western blotting和RT-PCR方法检测各组细胞p38MAPK蛋白和c-Jun mRNA的表达水平。结果:与空白对照组比较,UVB模型组细胞p38MAPK蛋白和c-Jun mRNA表达显著上调,差异有统计学意义(P<0.01);与UVB模型组比较,低、中和高剂量含药血清组细胞p38MAPK蛋白和c-Jun mRNA表达显著下调,差异有统计学意义(P<0.01);与空白血清组比较,低、中和高剂量含药血清组细胞p38MAPK蛋白和c-Jun mRNA表达下降(P<0.01)。结论:绞股蓝总皂苷含药血清可能通过抑制p38MAPK蛋白和c-Jun mRNA表达抑制皮肤光老化。

糖尿病大鼠肺组织p38 MAPK活性变化的研究

目的 :观测糖尿病大鼠肺组织的病理改变及p38MAPK活性的变化。方法 :复制糖尿病 (DM)大鼠模型 ,4周后观察其肺部组织病理改变 ;采用改良的Takay法测定蛋白激酶C(PKC)活性 ,蛋白质免疫印迹分析 (Westernblot)及免疫组化方法检测转化生长因子β1在DM大鼠肺组织表达变化并以原位杂交方法检测丝裂原激活的蛋白激酶p38(p38MAPK)活性。结果 :DM大鼠 4周后毛细血管壁及肺泡间隔增厚 ,肺间质胶原成份增多 ,TGF - β1在肺组织表达增多 ,肺组织PKC、p38MAPK活性增强。结论 :链脲菌素糖尿病大鼠肺组织高糖环境下细胞内外信号传导系统PKC -p38MAPK被激活 ,可能参与糖尿病肺部并发症的发生和发展。

补肾益肝活血方含药血清对ERK/p38MAPK信号通路的影响

目的观察补肾益肝活血方含药血清对骨关节炎的细胞外信号调节激酶(ERK)/p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)信号通路的影响。方法 40只雌性SD大鼠随机分为对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,每组10只;补肾益肝活血方含药血清的制备:给予大鼠补肾益肝活血方3.2 g/(kg·d)灌胃,连续灌胃5 d,每日给药2次,最后一次灌胃后3 h,对SD大鼠进行腹主动脉采血,制备血清;软骨细胞分离:取新生SD乳大鼠肋骨处的软骨;原代培养:将清洗干净的软骨用0.2%Ⅱ型胶原蛋白酶和10%的胰蛋白酶消化后进行细胞传代;软骨细胞的鉴定:包括细胞形态观察、甲苯胺蓝染色、免疫组织化学染色;退变软骨细胞模型的建立及含药血清干预:将传至第2代的软骨细胞予10 ng/ml白细胞介素(IL)-1β诱导获得退变的软骨细胞,诱导退变24 h后弃培养液,分4组,分别用低、中、高剂量的补肾益肝活血方含药血清及20%空白血清进行干预,每组每个时间段设置6个复孔,做好标记及记录,分别于培养24 h、36 h、48 h后取1板运用MTT法检测干预后软骨细胞的活性,确定干预软骨细胞的最佳量效与时效关系;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组上清液中IL-1β和肿瘤坏死因子(TNF)-α的水平;Westem印迹法检测蛋白。结果在IL-1β诱导下,体外培养的大鼠关节软骨细胞退化,p38MAPK增高,与对照组相比,中、高剂量组的ERK、p38MAPK表达均显著下降(P<0.05)。结论 ERK、p38MAPK参与并介导了骨关节炎的发生和发展;补肾益肝活血方能够通过下调p38MAPK基因的表达,改善IL-1β介导的关节软骨细胞退化模型的软骨细胞进一步的退化。

补肾活血方对兔NPMSCs移植治疗退变椎间盘P 38 MAPK信号通路的影响

目的探讨补肾活血方对兔髓核间充质干细胞(nucleus pulposus-derived mesenchymal stem cells,NPMSCs)移植治疗退变椎间盘P 38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,P 38 MAPK)信号通路的影响。方法选取128只SPF级健康新西兰大白兔,其中2例用于NPMSCs的获取、纯化及培养,选取24只为假手术组(A组);兔退变椎间盘模型成功100只,模型组(B组,24只)、补肾活血方组(C组,24只)、NPMSCs移植组(D组,24只)、补肾活血方+NPMSCs移植组(E组,24只),死亡6只。每组在治疗前、治疗后1周、治疗后2周、治疗后3周4个时间点均处死6只兔,取相应椎间盘,采用酶联免疫测定每组大兔不同时间点椎间盘P 38 MAPK、基质金属蛋白酶3(matrix metalloproteinase 3,MMP-3)、基质金属蛋白酶7(matrix metalloproteinase 7,MMP-7)的表达。结果(1)各组变化趋势:A组、B组组内不同时间点P 38 MAPK、MMP-3、MMP-7蛋白相对表达差异无统计学意义(P>0.05);C组、D组、E组P 38 MAPK、MMP-3、MMP-7蛋白相对表达与治疗前、治疗后1周、治疗后2周、治疗后3周呈下降趋势,各组组内差异有统计学意义(P<0.01)。(2)与A组比较:B组、C组、D组、E组P38MAPK、MMP-3、MMP-7蛋白相对表达在治疗前、治疗后1周、治疗后2周、治疗后3周均升高,组间差异有统计学意义(P<0.01)。(3)与B组比较:C组、D组、E组P 38 MAPK、MMP-3、MMP-7蛋白相对表达在治疗前差异无统计学意义(P>0.05);在治疗后1周、治疗后2周、治疗后3周均降低,组间差异有统计学意义(P<0.01)。(4)与C组比较:D组P 38 MAPK、MMP-3、MMP-7蛋白相对表达在治疗前、治疗后1周、治疗后2周、治疗后3周时同期差异无统计学意义(P>0.05);E组P 38 MAPK、MMP-3、MMP-7蛋白相对表达在治疗后1周、治疗后2周、治疗后3周均降低,组间差异有统计学意义(P<0.01)。(5)与D组比较:E组P 38 MAPK、MMP-3、MMP-7蛋白相对表达在治疗后1周、治疗后2周、治疗后3周均降低,组间差异有统计学意义(P<0.01)。结论补肾活血方对兔NPMSCs移植治疗退变椎间盘具有协同作用;其机制可能与抑制P 38 MAPK信号通路,下调MMP-3、MMP-7蛋白相关。

益气补肾活血方对佐剂关节炎大鼠JNK和P38MAPK的影响

目的:观察益气补肾活血方对佐剂关节炎大鼠滑膜JNK和P38MAPK的影响,探讨益气补肾活血方对类风湿关节炎的治疗机制。方法:以雷公藤多苷作为对照,采用益气补肾活血方对AA大鼠进行灌胃治疗。观测SD大鼠关节肿胀度,检测滑膜JNK和P38MAPK的磷酸化表达水平。结果:益气补肾活血方不仅能明显降低AA大鼠的关节肿胀度,又能明显降低AA大鼠滑膜JNK和P38MAPK的磷酸化表达水平。结论:益气补肾活血方能明显缓解RA的临床症状,该复方可能通过下调JNK和P38MAPK磷酸化表达水平,达到治疗RA的目的。

实时荧光定量PCR构建朊病相关蛋白p38 MAPK标准品质粒和标准曲线

为进一步揭示朊病的治病机理,根据GenBank中的小鼠p38MAPK的核苷酸序列设计特异性引物,经RT-PCR技术从N2a细胞中扩增和克隆了该蛋白的309 bp核苷酸片段。测序鉴定后,将重组质粒10倍系列稀释后作为标准模板,通过实时荧光定量PCR方法,建立了p38MAPK标准曲线及其直线回归方程。所构建的标准曲线的相关系数r2=0.999,说明成功构建小鼠N2a细胞p38MAPK基因的标准质粒和标准曲线,为研究朊病的发病机理奠定了分子生物学基础。

p38信号通路激活与肾小球硬化的研究进展

肾小球硬化是各种肾小球疾病发展的最终结局，是慢性。肾小球肾炎进展的主要原因。细胞内信号通路在肾小球硬化中的作用是目前研究的热点。MAPK（有丝分裂原激活的蛋白激酶）是调节细胞内一系列病理、生理功能改变的重要信号通路，p38MAPK通路在炎症、应激、细胞周期、凋亡等多种细胞生理／病理过程发挥着重要的作用，本文综述如下。

肺炎链球菌热休克蛋白40通过p38MAPK和JNK通路诱导小鼠巨噬细胞免疫应答

目的探讨肺炎链球菌热休克蛋白40(HSP40)引起小鼠巨噬细胞免疫应答的机制。方法表达、纯化重组HSP40蛋白(r HSP40),去除其中的脂多糖(LPS)。r HSP40处理C57BL/6野生小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMDM)后,反转录PCR检测BMDM中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、IL-1β、IL-23p19、IL-12p40、IL-12p35、IL-10的mRNA水平,ELISA检测TNF-α、IL-6、IL-12p40水平;r HSP40刺激后,ELISA检测野生型、Toll样受体2(TLR2)和TLR4缺陷的BMDM中TNF-α和IL-6的表达水平;丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)抑制剂预处理BMDM后,ELISA检测其对r HSP40诱导TNF-α和IL-6水平的影响;Western blot法检测p38MAPK和c-Jun氨基末端激酶(JNK)磷酸化水平。结果获得纯度90%以上的r HSP40;r HSP40可显著增强p38MAPK、JNK的磷酸化水平和TNF-α、IL-6的表达;p38MAPK和JNK抑制剂可显著抑制TNF-α和IL-6的表达;与野生BMDM相比较,TLR4缺陷的BMDM表达TNF-α和IL-6显著降低。结论 HSP40诱导小鼠巨噬细胞产生免疫应答受JNK及p38MAPK信号通路调控,并且此过程依赖TLR4。