麻疹患儿Toll样受体2-p38有丝分裂素激活蛋白激酶信号途径缺陷与免疫抑制的研究

目的检测麻疹患儿外周血Toll样受体2（TLR2）、p38有丝分裂素激活蛋白激酶（p38MAPK）和细胞因子的表达，探讨TLR2-p38MAPK信号途径在麻疹急性期导致的免疫抑制中的作用。方法选择2012年6月至2013年7月华中科技大学同济医学院附属荆州医院住院的麻疹患儿30例为麻疹组，30例健康体检儿童作为健康对照组。采用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测2组外周血单个核细胞（PBMC）TLR2mRNA、p38MAPKmRNA的表达；采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测血浆中干扰素-γ（IFN-γ）、肿瘤坏死因子-β（TNF-β）、白细胞介素（IL）-12、IL-6、IL-10的水平；采用流式细胞仪（FCM）和速率散射比浊法分别检测外周血淋巴细胞亚群及免疫球蛋白水平。结果1．麻疹组PBMCTLR2mRNA、p38MAPKmRNA表达均明显下降，与健康对照组比较差异均有统计学意义（P均〈0．05）。2．麻疹组血浆中IL-12、IFN-γ、TNF-β均明显下降，与健康对照组比较，差异均有统计学意义（P均〈0．05）；IL-6、IL-10均明显升高，与健康对照组比较差异均有统计学意义（P均〈0．05）。3．麻疹患儿组PBMCCD3＋、CD4＋、CD4＋／CD8＋、IgG、IgA均明显下降，与健康对照组比较，差异均有统计学意义（P均〈0．05）；CD19＋明显升高，与健康对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）；CD8＋及IgM与健康对照组比较差异均无统计学意义（P均〉0．05）。结论TLR2mRNA、p38MAPKmRNA在急性期麻疹患儿PBMC中呈低水平表达。急性期麻疹患儿同时存在不同程度的细胞免疫抑制、体液免疫抑制及细胞因子紊乱。TLR2-p38MAPK信号途径缺陷可能参与了麻疹免疫抑制的形成。

p38有丝分裂素激活蛋白激酶在白蛋白刺激肾小管上皮细胞表达调节激活正常T细胞表达和分泌细胞因子中的作用

目的探讨p38有丝分裂素激活蛋白激酶(p38MAPK)对白蛋白诱导的大鼠肾小管上皮细胞表达调节激活正常T细胞表达和分泌细胞因子(RANTES)及核因子-κB(NF-κB)活性的影响。方法培养大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E),分别加入不同浓度白蛋白(5、15、30 g/L)或/和SB203580(p38MAPK抑制剂),应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western印迹法分别检测RANTES mRNA及蛋白表达水平;应用凝胶迁移率变动分析检测NF-κB的活性变化;p38MAPK的磷酸化水平分析采用Western印迹法。结果白蛋白呈浓度和时间依赖性上调RANTES mRNA及蛋白表达水平,呈时间依赖性激活NF-κB活性,白蛋白明显刺激了p38MAPK磷酸化水平增高,SB203580可抑制白蛋白刺激的RANTES表达与NF-κB活性。结论白蛋白通过p38MAPK信号通路刺激RANTES的表达和NF-κB的活性。

金合欢素对丝裂原蛋白激酶p38α活性抑制作用的研究

目的探讨金合欢素对丝裂原蛋白激酶p38α(p38αMAPK)的抑制作用。方法应用分子对接软件Autodock Vina将金合欢素与靶酶三维晶体结构1KV2的活性位点进行分子对接,而后利用脂多糖诱导的小鼠RAW 264.7细胞炎症模型验证金合欢素对p38αMAPK的抑制作用。结果金合欢素可结合于1KV2的活性位点处而阻碍底物三磷腺苷的进入,对p38αMAPK的生物学功能产生抑制作用。与模型组相比,阳性对照药地塞米松和金合欢素不同浓度干预后可明显下调小鼠RAW 264.7细胞炎症模型细胞上清液中一氧化氮和肿瘤坏死因子-α水平(P<0.05)。结论金合欢素可能是通过作用于p38αMAPK活性位点而发挥抗炎的药理活性。

有丝分裂原激活蛋白激酶p38在佐剂关节炎大鼠滑膜及肺组织的表达

目的研究有丝分裂原激活蛋白激酶（MAPK）-p38在佐剂关节炎（AA）大鼠滑膜及肺组织中表达，探讨类风湿关节炎（RA）的发病机制。方法给大鼠右后足跖部皮下注射完全弗氏佐剂（CFA）复制RA的动物模型-AA。用原位杂交法检测p38mRNA在AA大鼠滑膜及肺组织中的表达。结果AA大鼠滑膜和肺组织p38mRNA阳性细胞的平均灰度值（0～255，深～浅）明显低干正常大鼠（P〈0．01）。AA大鼠滑膜的巨噬细胞，成纤维细胞和淋巴细胞的胞浆内均有p38mRNA的表达。肺组织中p38mRNA主要表达于巨噬细胞，单核细胞及浸润的淋巴细胞中。结论AA大鼠p38mRNA过表达与AA的滑膜及肺部病变有关，可能在RA的发病中有重要作用。

血管紧张素Ⅱ对人脐静脉内皮细胞p38丝裂素激活蛋白激酶通路的作用

目的 探讨血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）激活人脐静脉内皮细胞（HUVECs）p38丝裂素激活蛋白激酶（p38MAPK）信号转导通路的作用.方法 用含20%胎牛血清的DMEM培养基与CO2培养箱（5%CO2＋95%空气）培养HUVECs.待细胞生长至80%融合时,无血清培养16 h后分组：（1）AngⅡ不同时点观察组：用AngⅡ（终浓度100 nmoL/L）分别刺激细胞0.5、10、15、30、45 min和60 min.（2）AngⅡ不同剂量作用组：分别用终浓度为0、10、100、1000 nmol/L和10 000 nmol/L的AngⅡ刺激细胞15 min.（3）AngⅡ＋p38MAPK特异性抑制剂SB202190组：在AngⅡ（终浓度100 nmol/L）刺激前30 min,分别将1000 nmol/L和5000 nmol/L（终浓度）的SB202190加入培养基,共同孵育30 min.上述各组作用一定时间后收集细胞,用Western blot方法测定细胞p38MAPK磷酸化表达.结果 AngⅡ（100 nmol/L）可诱导HUVECs p38MAPK磷酸化表达,15～30 min达到高峰,分别升高2.25和2.51倍（P〈0.005,n=5）,随时间呈峰形变化 AngⅡ呈剂量依赖性诱导HUVECs p38MAPK磷酸化,在AngⅡ100 nmol/L时p38MAPK磷酸化表达即有明显增强,在AngⅡ刺激剂量为1000 nmol/L和10 OOO nmol/L时,p38MAPK磷酸化表达分别增加2.03和2.11倍（P〈0.005,n=5） p38MAPK特异性抑制剂SB202190可显著抑制HUVECs p38MAPK磷酸化,且呈剂量依赖性,5000 nmoL/L SB202190的抑制率为53.9%（P〈0.01,n=6）.结论 Ang Ⅱ可激活人脐静脉内皮细胞p38MAPK信号通路.

低氧通过p38丝裂素激活蛋白激酶途径刺激人肾间质成纤维细胞表达结缔组织生长因子

目的:研究低氧条件下人肾间质成纤维细胞表达结缔组织生长因子(connectivetissuegrowthfactor,CTGF)及其可能的信号途径,从而探讨低氧导致肾间质纤维化的分子机制。方法:以人肾间质成纤维细胞TK173作为研究对象,应用Westernblot技术,检测低氧标记蛋白分子,低氧诱导因子-1α(hypoxiainducedfactor-1α,HIF-1α)蛋白作为低氧标记物;比较低氧(1%O2,体积分数)和正常氧(21%O2,体积分数)条件下TK173细胞培养12,24,48h后CTGF蛋白水平;低氧刺激TK173细胞30min,1h,6h和12h,运用抗磷酸化抗体检测丝裂素激活蛋白激酶(MAPKs)活化;在低氧刺激半小时前分别加入p38、细胞外信号调节激酶(ERK1/2)、c-Jun-N末端蛋白激酶(JNK)信号通路特异阻断剂SB203580,PD98059,SP600125,低氧培养24h后检测细胞CTGF蛋白水平。用RT-PCR技术分析CTGFmRNA水平变化。结果:TK173细胞正常氧组仅有HIF-1α蛋白微弱表达,低氧组有高水平HIF-1α蛋白表达。在低氧条件下培养12h后细胞CTGF蛋白增加,24h时CTGF蛋白表达最强,是正常氧组的(2.1±0·1)倍,至48h降至对正常氧组水平;同时低氧培养刺激CTGFmRNA表达,在1h时开始增加,6h时达高峰为正常氧组的(6.6±1·0)倍,24h后恢复基础水平。低氧可以活化MAPKs,JNK在30min达到高峰,ERK1/2、p38在刺激1h时达高峰,6h减弱,12h减至基础水平;应用ERK1/2抑制剂PD98059和JNK抑制剂SP00125不能减弱低氧刺激CTGF蛋白表达增加的效应,但应用P38活化抑制剂SB203580可以明显减少低氧刺激的CTGF蛋白和mRNA的增加。结论:低氧可刺激人肾间质成纤维细胞表达CTGF,并且该作用依赖p38通路的活化。

木犀草素阻断p38 MAPK通路对宫颈癌细胞增殖、迁移、侵袭和上皮间质转化的抑制作用研究

目的探讨木犀草素通过调控p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路对宫颈癌细胞增殖、迁移、侵袭和上皮间质转化(EMT)的影响。方法子宫颈鳞状细胞癌SiHa细胞系经不同浓度木犀草素处理24 h,细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞活力以筛选最适木犀草素作用浓度,后将SiHa细胞分为对照组、木犀草素组、阳性药物组、抑制剂组和激活剂组,干预24 h后,采用倒置显微镜、细胞增殖试剂盒、划痕、Transwell小室和蛋白免疫印迹法测定细胞形态、增殖、迁移、侵袭及EMT和p38 MAPK通路相关蛋白表达的情况。结果根据CCK-8法确定木犀草素最适作用浓度为10μmol/L。与对照组相比,木犀草素组和阳性药物组细胞的生长受到抑制,增殖率、迁移率、侵袭数,以及波形蛋白(Vimentin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和纤维连接蛋白(FN)表达水平、p-p38 MAPK/p38 MAPK比值降低(P<0.05),E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达水平上升(P<0.05);与木犀草素组相比,SB203580增强了、茴香霉素抑制了木犀草素对SiHa细胞的上述作用(P<0.05)。结论木犀草素可通过阻断p38 MAPK通路抑制SiHa细胞的增殖、迁移、侵袭及EMT进程。

基于p38 MAPK/NF-κB信号通路探讨藏红花素对糖尿病心肌病大鼠的影响

目的基于p38丝裂原活化蛋白激酶/核因子-κB(p38 MAPK/NF-κB)信号通路探讨藏红花素对糖尿病心肌病(DCM)大鼠的影响。方法取45只Wistar大鼠,随机选择8只作为正常组,其余大鼠采用高糖高脂饮食12周并负荷一次性30 mg/kg链脲佐菌素的方法构建DCM模型。将32只造模成功的大鼠随机分为模型组、藏红花素组、藏红花素+p38 MAPK抑制剂组和藏红花素+p38 MAPK激动剂组,每组8只。藏红花素组给予50 mg/kg藏红花素腹腔注射,藏红花素+p38 MAPK抑制剂组给予50 mg/kg藏红花素和5 mg/kg SB203580腹腔注射,藏红花素+p38 MAPK激动剂组给予50 mg/kg藏红花素和2 mg/kg ANS腹腔注射,正常组和模型组给予等体积生理盐水腹腔注射,均1次/d。连续注射12周后,心脏超声检测大鼠心功能指标[左心室收缩末期压(LVESD)、左心室舒张末期压(LVEDD)、左心室短轴缩短率(LVFS)],ELISA法检测血清心肌酶[谷草转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)]和炎症因子[白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]水平,苏木精-伊红、马森染色观察心肌组织病变和纤维化情况,RT-PCR法、免疫组织化学法检测心肌组织中p38 MAPK、NF-κB p65、转化生长因子-β1(TGF-β1)、I型胶原蛋白(Col-I)mRNA和蛋白表达情况。结果与模型组比较,藏红花素组、藏红花素+p38 MAPK抑制剂组大鼠LVESD、LVEDD及血清AST、LDH、CK-MB、IL-1β、IL-18、TNF-α水平均明显降低(P均<0.05),LVFS明显升高(P<0.05);心肌组织病变和纤维化情况均明显改善,心肌组织损伤评分和胶原容积分数均明显降低(P均<0.05);心肌组织中p38 MAPK、NF-κB p65、TGF-β1、Col-I mRNA相对表达量和蛋白表达积分吸光度均明显降低(P均<0.05)。与藏红花素组比较,SB203580可显著增强藏红花素对DCM大鼠心功能指标、心肌酶和炎症因子水平、心肌组织病变和纤维化情况、p38 MAPK/NF-κB信号通路相关因子mRNA和蛋白表达的调控作用,ANS则明显逆转藏红花素对DCM大鼠的上述作用。结论藏红花素可能通过抑制p38 MAPK/NF-κB信号通路减轻炎症反应和组织纤维化,从而对DCM大鼠起到保护作用。

p38丝裂原激活蛋白激酶抑制剂对脓毒症早期大鼠心肌中炎性因子和细胞凋亡蛋白表达的影响

目的探讨脓毒症时心肌损害的原因及p38丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)抑制剂的保护作用。方法将84只雄性SD大鼠随机分为对照组、实验组和治疗组(n=28)。实验组和治疗组采用腹腔注射内毒素(10 mg/kg)制作脓毒症模型,治疗组同时加p38MAPK抑制剂SB203580予以干预,对照组腹腔注射生理盐水。在不同时间点观察大鼠血清脑钠素(BNP)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)的浓度及心肌组织中TNF-α、IL-6、凋亡蛋白caspase-9的表达情况。结果实验组大鼠血清TNF-α、IL-6进行性升高。对照组心肌组织中仅有微量TNF-α、IL-6及caspase-9表达,而实验组心肌组织中则大量表达。血清TNF-α、IL-6浓度及心肌中caspase-9的表达与心肌损害程度呈显著正相关。应用SB203580后,治疗组血清TNF-α、IL-6浓度显著降低,心肌中caspase-9的表达也减少。但各组血清BNP浓度之间差异无统计学意义,均在正常范围之内。结论 TNF-α、IL-6的大量释放及其在心肌中的表达是脓毒症心肌损害的原因之一,p38MAPK抑制剂SB203580可对脓毒症大鼠心肌损害起保护作用。

落新妇苷对心脏移植排斥反应中活化T细胞p38丝裂原激活蛋白激酶信号传导通路的影响

目的:用小鼠心脏移植急性排斥反应体外模型,探讨落新妇苷对心脏移植排斥反应中活化T细胞p38丝裂原激活蛋白激酶(p38MAPK)信号传导通路的影响。方法:分离BALB/C小鼠心肌细胞(2×105个.mL-1)和C57BL/6小鼠的脾细胞(1×106个.mL-1),前者做刺激细胞,后者做反应细胞,进行混合细胞培养,建立小鼠心脏移植急性排斥反应体外模型。实验分3组:对照组,心肌细胞与脾细胞混合培养;落新妇苷组,在对照组基础上加入落新妇苷(15mg.L-1);落新妇苷加p38MAPK抑制剂组,在对照组基础上加入落新妇苷(15mg.L-1)和p38MAPK抑制剂SB203580(5μmol.L-1)。TUNEL法检测T淋巴细胞凋亡情况。RT-PCR和Western blot法检测T细胞p38MAPK表达情况。结果:落新妇苷组T细胞凋亡指数和p38MAPK表达均明显高于对照组(P<0.01)。落新妇苷加p38MAPK抑制剂组T细胞凋亡指数和p38MAPK表达均明显低于落新妇苷组(P<0.01),而与对照组相比差异无显著性(P>0.05)。结论:落新妇苷诱导心脏移植排斥反应中活化T细胞凋亡与其激活p38MAPK信号传导通路有关。

肿瘤坏死因子-α激活人肺微血管内皮细胞p38丝裂原激活蛋白激酶信号通路

目的 建立体外人肺微血管内皮细胞 (HPMEC)培养技术 ,观察肿瘤坏死因子 α(TNF α)对HPMECp38丝裂原激活蛋白激酶 (MAPK)活性的影响。方法 ( 1)建立体外人肺微血管内皮细胞培养模型 ;( 2 )采用Westernblot和免疫复合物激酶技术检测TNF α对HPMECp38MAPK的活化作用。结果 ( 1)TNF α可迅速诱导HPMECp38MAPK的磷酸化和活化 ,在一定程度上呈时间、剂量依赖关系 ;( 2 )p38MAPK特异性阻断剂———SB2 0 35 80可显著抑制由TNF α诱导的p38MAPK活化。结论 TNF α激活p38MAPK信号通路 。

p38丝裂原激活蛋白激酶基因重组慢病毒载体的构建及其在建立人前列腺癌稳定细胞株中的应用

目的构建p38丝裂原激活蛋白激酶基因(MAPK)重组慢病毒载体并建立表达外源性p38基因的人前列腺癌稳定细胞株。方法采用限制性内切酶酶切、T4 DNA连接酶连接等方法,将EGFP/p38融合基因插入慢病毒载体pTYF-EF1α-IRES-EGFP中,构建启动子EF1α调控的EGFP/p38共表达慢病毒载体pTYF-EF1α-EGFP/p38,经酶切鉴定后,利用慢病毒三质粒系统,通过脂质体法转染包装细胞HEK 293T细胞,收集病毒上清后转导人前列腺癌DU145细胞株,经有限稀释法筛选重组EGFP/p38稳定细胞株,用Western blotting检测细胞总p38的表达,用计数法绘制细胞的生长曲线。结果经酶切鉴定,成功构建EGFP/p38重组慢病毒载体,并包装慢病毒,检测病毒悬液的滴度为4.7×106 TU/ml,利用此病毒悬液感染DU145细胞,成功筛选到EGFP/p38稳定表达细胞株,Western blotting显示该细胞株能稳定表达外源性EGFP/p38融合蛋白,这种过表达p38的细胞株的生长速度明显低于对照组。结论成功构建p38 MAPK重组慢病毒载体并建立了表达外源性p38 MAPK基因的稳定细胞株EGFP/p38-DU145,细胞内p38过表达能够抑制DU145细胞的增殖。

p38丝裂原激活蛋白激酶对人胚胎肾293细胞一氧化氮合酶基因转录的调控

目的探讨p38 丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)家族四种亚型对诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因的转录调控。方法以人胚胎肾293(HEK 293)细胞为靶细胞,采用脂质体(LPS)介导的细胞基因共转染技术、荧光素酶报告基因技术,分别将FLAG-tagged p38 MAPK 4种亚型、含有鼠iNOS基因启动子区的荧光素酶报告基因质粒(piNOS-Luc)、空载体(pcDNA3)、β-半乳糖苷酶表达质粒(pCMV-β)共转染,检测并比较荧光素酶相对活性。结果(1)未加刺激时,在HEK 293细胞中,p38 MAPK中仅有p38α能够诱导iNOS基因启动子的转录活性;(2)在LPS刺激下,p38 MAPK 4种亚型均能够诱导iNOS启动子的转录活性,其中,p38β所诱导的转录活性最高,p38α的诱导作用亦很明显。结论(1)LPS能够在HEK 293细胞中诱导iNOS基因转录活性;(2)在HEK 293细胞中,p38 MAPK参与了静息时及LPS刺激下对iN-OS基因的转录调控。

N-乙酰半胱氨酸影响p38有丝分裂原活化蛋白激酶对顺铂诱导急性肾损伤的保护作用

目的研究N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)对顺铂(cisplatin,CDDP)诱导大鼠急性肾损伤(acute kidney in-jury,AKI)后组织细胞凋亡的影响和与p38有丝分裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen activated protein kinase,p38MAPK)的关系。方法静脉注射CDDP制备大鼠AKI模型。大鼠随机分为正常对照组、AKI模型对照组、NAC低剂量组(50 mg.kg-1)、NAC中剂量组(100 mg.kg-1)、NAC高剂量组(200 mg.kg-1)、特异性p38MAPK抑制剂SB203580组(10mg.kg-1)。大鼠预先连续给药3 d,给予CDDP,再继续给药5 d。TUNEL法进行细胞凋亡检查。试剂盒测定肾脏组织caspase-3。Western blot测定caspase-3、Bax、Bcl-2、磷酸化p38MAPK(phosphorylated p38MAPK,p-p38MAPK)表达。结果与正常对照组相比,CDDP诱导AKI模型组肾组织凋亡细胞增加,caspase-3、Bax、p-p38MAPK表达升高,Bcl-2表达降低(P<0.01)。与AKI模型组相比,NAC与SB203580减少凋亡细胞、降低肾脏组织caspase-3、Bax、p-p38MAPK表达和增加Bcl-2表达(P<0.01)。结论 NAC可有效防治CD-DP诱导大鼠AKI,并与p38MAPK相关。

p38分裂原激活蛋白激酶在小肠缺血再灌注损伤中的作用研究进展

目前国内外学者对于小肠缺血再灌注损伤的发病机制已经进行了一系列研究,其中分子机制成为研究热点.本文就p38分裂原激活蛋白激酶（p38 mitogen activated protein kinase,p38MAPK）在小肠缺血再灌注损伤发病机制中的作用（包括p38MAPK与氧化应激、炎症细胞因子、肠黏膜屏障功能、细胞凋亡的关系）以及p38MAPK在脏器缺血预处理、缺血后处理等干预措施中的研究现状作一综述.

cAMP对胰岛素刺激的NIH3T3细胞丝裂原激活蛋白激酶活性的抑制作用

目的 探讨 c AMP- PKA信号途径对胰岛素激活的 Ras-丝裂原激活蛋白激酶 (MAPK)信号途径的影响。 方法 以 3-异丁基 - 1-甲基黄嘌呤 (IBMX)提高细胞内环腺苷酸 (c AMP)浓度 ,藉四唑蓝比色法 (MTT法 )和蛋白免疫印迹试验分别观察 c AMP对胰岛素刺激的小鼠成纤维细胞 (NIH3T3细胞 )的生长增殖和胞内丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)活性的影响。 结果 IBMX(0 .5 mmol/ L )抑制静息的和胰岛素 (10 m U / m L )刺激的 NIH3T3细胞的增殖 ,作用呈时间依赖性。在胰岛素 (10 m U/ m L)刺激的 NIH3T3细胞 ,MAPK出现酪氨酸磷酸化 ;而以 IBMX(0 .5 mmol/L)预处理细胞 30 min后 ,再以胰岛素作用 10 min,胰岛素刺激的 MAPK的酪氨酸磷酸化受抑制。 结论 c AMP可通过抑制 MAPK磷酸化活化对

己酮可可碱对p38丝裂原激活蛋白激酶激活的影响

目的:观察己酮可可碱(PTX)对p38丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)激活的影响,探讨PTX保护内皮细胞单层通透性的机制。方法:建立内皮细胞单层损伤模型,随机分为脂多糖(LPS)-A组、LPS-B组、LPS+PTX-A组及LPS+PTX-B组,分别以不同终浓度LPS及PTX刺激不同时间,以Western印迹杂交技术检测内皮细胞p38MAPK活性。结果:LPS组,随着LPS刺激时间的延长及刺激浓度的增大,磷酸化的p38MAPK亮度逐渐增强;LPS+PTX组,磷酸化的p38MAPK亮度随着PTX刺激时间的延长及刺激浓度的增大而逐渐减弱。结论:PTX可通过降低p38MAPK的活性而起保护内皮细胞通透性的作用。

脑缺血预适应大鼠脑内p38丝裂原激活蛋白激酶磷酸化水平和蛋白表达量的测定

目的初步探讨p38丝裂原激活蛋白激酶(p38 MAPK)在大鼠脑缺血预适应(IPC)形成中的作用。方法选用成年雄性Sprague-Dawley大鼠复制整体脑缺血预适应模型。将大鼠随机分为空白对照(control)、假手术(SI)、缺血预适应或缺血耐受(IT)、外周伤害对照(PNC)、外周伤害耐受(PNT)5组。应用SDS-PAGE、Western blot等实验方法,借助Gel Doc和Versa Doc凝胶成像系统,半定量检测脑躯体感觉皮层、海马组织内p38 MAPK的磷酸化水平和蛋白表达量。结果经脑IPC后,大鼠躯体感觉皮层和海马组织内p38 MAPK磷酸化水平和蛋白表达量与各自对照组相比均未见显著性差异(P>0.05,n=6)。结论大鼠大脑躯体感觉皮层和海马组织内p38 MAPK可能未以磷酸化水平和蛋白表达量改变的形式参与脑缺血预适应的形成。

p38丝裂原激活蛋白激酶特异性抑制剂SB203580减轻小鼠气道炎症及黏液高分泌

目的探讨小鼠吸入丙烯醛后是否出现气道黏液高分泌及其产生机制,观察p38丝裂原激活蛋白激酶(p38MAPK)信号通路在气道炎症损伤、黏液高分泌中的作用,以及应用p38MAPK特异性抑制剂SB203580干预后对气道炎症、MUC5AC的影响。方法64只小鼠随机分为四组丙烯醛模型组、丙烯醛+SB203580治疗组、生理盐水对照组和SB203580对照组,每组16只小鼠。于第7和21d各组随机处死8只,采集支气管肺泡灌洗液(BALF)和肺组织标本。BALF作细胞总数及分类计数,石蜡包埋肺组织切片HE染色观察形态学,AB-PAS染色了解气道杯状细胞和黏液物质,免疫组织化学及RT-PCR方法进行黏蛋白基因半定量分析,Western-Blot定量分析信号通路蛋白。结果小鼠吸入丙烯醛21d后出现明显的气道炎症和黏液高分泌,经SB203580治疗后,炎性细胞浸润减少,杯状细胞增生改善,黏液分泌明显减轻。丙烯醛模型组、丙烯醛+SB203580治疗组的AB-PAS阳性着色面积比较差异有统计学意义[(15.54±0.93)%比(9.82±0.56)%,P<0.01];丙烯醛模型组与丙烯醛+SB203580治疗组之间MUC5AC阳染积分光密度比较差异有统计学意义(0.153±0.017比0.066±0.007,P<0.01)。拮抗p38MAPK后,MUC5ACmRNA表达量下降(7d0.934±0.061,21d1.041±0.026),与模型组相应时间点比较差异有统计学意义(P<0.01)。治疗组磷酸化p38MAPK表达与模型组比较明显下调(0.844±0.014比1.004±0.039,P<0.01)。结论小鼠吸入丙烯醛模型中,p38MAPK信号通路调控MUC5AC基因转录,SB203580可减轻气道炎症和气道黏液高分泌。

尿激酶型纤溶酶原激活物和p38促丝裂原激活蛋白激酶信号通路与头颈肿瘤侵袭

细胞外基质降解是肿瘤侵袭的前提,尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)在其降解过程中发挥着重要的作用,p38促丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)信号通路可通过对uPA的调节参与肿瘤的侵袭。本文就uPA和p38MAPK信号通路在头颈肿瘤的发生和侵袭中的作用作一综述。