丹皮酚通过调节p38丝裂原活化蛋白激酶对缺血性脑卒中大鼠神经炎症的影响

目的探讨丹皮酚对缺血性脑卒中大鼠神经炎症的影响及其机制。方法使用SPF级雄性SD大鼠构建缺血性脑卒中大鼠模型,将大鼠分为假手术组(Sham组)、模型组(Model组)、丹皮酚组(Paeonol组,20 mg/kg丹皮酚)、丹皮酚联合p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)激活剂组(Paeonol+Anisomycin组,20 mg/kg丹皮酚+2 mg/kg Anisomycin)。造模48 h后观察大鼠神经功能缺损评分,检测脑梗死体积,使用TUNEL染色及免疫荧光染色观察神经元凋亡及小胶质细胞激活情况,酶联免疫吸附测定法检测缺血半暗带区脑组织肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β和IL-6水平,Western blot检测p-p38 MAPK、p38 MAPK蛋白表达。结果与Sham组比较,Model组大鼠神经功能损伤严重,脑组织出现白色梗死灶,神经功能缺损评分及脑梗死体积、神经元凋亡率、小胶质细胞数量及TNF-α、IL-1β和IL-6水平、p-p38 MAPK蛋白表达水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与Model组比较,Paeonol组大鼠神经功能缺损评分及脑梗死体积、神经元凋亡率、小胶质细胞数量及TNF-α、IL-1β和IL-6水平、p-p38 MAPK表达水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与Paeonol组比较,Paeonol+Anisomycin组大鼠神经功能缺损评分及脑梗死体积增加,且丹皮酚改善缺血性脑卒中大鼠脑损伤及炎症反应的作用可被Anisomycin逆转(P<0.05)。结论丹皮酚可能通过抑制p38 MAPK通路,抑制小胶质细胞激活及炎症反应,减轻缺血性脑卒中引起的脑损伤。

p38促分裂原活化的蛋白激酶信号调控铁死亡参与运动改善2型糖尿病小鼠非酒精性脂肪性肝病

目的从运动调控细胞铁死亡的角度,探究8周跑台运动改善2型糖尿病(diabetes mellitus type 2,T2DM)合并非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)小鼠肝细胞脂肪变性的分子机制。方法选取8只8周龄健康m/m小鼠作为对照组(Con),32只同周龄db/db小鼠被随机分为db/db组、db+Exe组、db+SB203580组及db+Exe+SB203580组,每组8只。db+Exe组、db+Exe+SB203580组进行持续8周的中等强度跑台运动干预(40 min/d,5 d/周),db+SB203580组及db+Exe+SB203580组进行8周的p38促分裂原活化的蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)抑制剂SB203580腹腔注射处理(5 mg/kg,5 d/周),实验期间每周定时检测小鼠体重及空腹血糖。8周干预结束后,油红O及苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色法观察小鼠肝脏病理性改变状况,相应的酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)试剂盒测定血脂、肝功能、肝脏铁离子及氧化应激水平,定量反转录PCR(quantitative reverse transcriptase-mediated PCR,qRT-PCR)测定脂肪合成及氧化应激相关mRNA转录水平,免疫组织化学染色观察铁死亡相关蛋白质的表达水平,蛋白质印迹(Western blot,WB)法检测肝组织中脂质合成及铁死亡相关蛋白质表达水平。结果8周跑台运动降低了db/db小鼠体重、血糖、肝指数及血脂水平,改善其肝脏脂肪变性,下调肝组织Fe^(2+)、MDA、MCP-1、IL-6、SREBF1、ACC1表达水平,并上调了db/db小鼠肝组织中GSH含量及铁死亡相关蛋白质NRF2、HO-1、SLC7A11、GPX4蛋白表达水平。运动联合p38 MAPK抑制剂干预显著下调db/db小鼠肝组织ACC1、MCP-1、IL-6的mRNA及Fe^(2+)、MDA水平,并上调GSH水平。然而,与跑台运动组相比,运动联合p38 MAPK抑制剂组小鼠肝脏内Fe^(2+)、MDA、MCP-1、SREBF1表达显著上升,GSH及铁死亡相关蛋白质表达水平显著下降。此外,与单纯抑制剂组相比,运动联合抑制剂干预组小鼠肝组织铁蓄积及脂质过氧化现象明显改善。结论8周跑台运动可能是通过p38 MAPK依赖途径抑制肝细胞铁死亡,缓解肝细胞脂质过氧化及肝脏脂肪变性,从而改善T2DM小鼠的NAFLD。

重楼皂苷Ⅶ通过p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路对肝癌细胞恶性生物学行为的影响

目的 观察重楼皂苷Ⅶ对肝癌细胞恶性生物学行为的影响,并探讨相关机制。方法 于2021年6月至2022年6月,取对数期人肝癌HepG2细胞,分为对照组(常规培养)、重楼皂苷Ⅶ组(重楼皂苷Ⅶ0.8μmol/L)、SB203580[p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路抑制剂]组(SB203580 10μmol/L)、联合组(重楼皂苷Ⅶ0.8μmol/L、SB203580 10μmol/L)。噻唑蓝法检测细胞增殖能力;膜联蛋白Ⅴ(AnnexinⅤ)/碘化丙啶(PI)双染法检测细胞凋亡率;划痕实验检测细胞迁移能力;小室实验检测细胞侵袭能力;蛋白质印迹法检测细胞p38 MAPK、磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38 MAPK)、细胞外信号调节激酶(ERK)1/2、磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK1/2)蛋白表达。结果 与对照组24、48、72 h吸光度值,迁移率(74.33±9.37)%,凋亡率(3.25±0.78)%,p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-ERK1/2/ERK1/2及侵袭细胞数(364.92±47.99)个比较,重楼皂苷Ⅶ组24、48、72 h吸光度值,迁移率(11.21±3.35)%降低,凋亡率(39.87±8.94)%,p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-ERK1/2/ERK1/2升高,侵袭细胞数(54.84±7.41)个减少(P<0.05);SB203580组24、48、72 h吸光度值,迁移率(89.30±14.56)%升高,凋亡率(1.05±0.15)%,p-p38MAPK/p38 MAPK、p-ERK1/2/ERK1/2降低,侵袭细胞数(617.04±75.34)个增加(P<0.05)。与重楼皂苷Ⅶ组比较,联合组24、48、72 h吸光度值,迁移率(40.52±8.18)%升高,凋亡率(11.30±2.80)%,p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-ERK1/2/ERK1/2降低,侵袭细胞数(141.36±16.75)个增加(P<0.05);与SB203580组比较,联合组24、48、72 h吸光度值、迁移率降低,凋亡率、p-p38 MAPK/p38MAPK、p-ERK1/2/ERK1/2升高,侵袭细胞数减少(P<0.05)。结论 重楼皂苷Ⅶ可抑制肝癌HepG2细胞增殖、迁移及侵袭等恶性生物学行为,并诱导其凋亡,作用机制可能与激活p38 MAPK信号通路相关。

活性氧簇/p38丝裂原活化蛋白激酶级联反应对大鼠肾结石形成的影响及机制

目的探讨活性氧簇(ROS)/p38 MAPK级联反应对大鼠肾结石(KS)形成的影响及机制。方法50只SD大鼠随机分为对照组(正常喂养)、N-乙酰半胱氨酸(NAC)组(腹腔注射200 mg/kg NAC)、KS组(构建草酸钙KS模型)、KS+NAC组(构建草酸钙KS模型后腹腔注射200 mg/kg NAC)、KS+NAC+衣霉素(TM)组(构建草酸钙KS模型后腹腔注射200 mg/kg NAC与1 mg/kg TM),每组10只。给药结束4周后,测量大鼠24 h尿量与尿草酸(Ox),全自动生化仪检测血清肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)、尿酸(UA)水平,HE染色和Von Kossa染色观察肾组织病理学变化及晶体沉积情况,TUNEL染色检测肾组织细胞凋亡,试剂盒测定肾组织超氧化物歧化酶(SOD)活性与丙二醛(MDA)含量,二氢乙锭(DHE)荧光探针检测肾组织ROS水平,免疫组织化学染色检测肾组织微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)与葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的表达,Western blotting测定肾组织p-p38 MAPK/p38 MAPK与LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin1、GRP78和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)水平。结果与KS组比较,KS+NAC组Ox、血清BUN、Cr、UA水平降低(P<0.05),肾小管扩张程度减轻,草酸钙结晶减少,TUNEL阳性细胞率减少(P<0.05),SOD活性升高,MDA含量减少(P<0.05),ROS水平降低(P<0.05),LC3B与GRP78阳性染色水平降低(P<0.05),p-p38 MAPK/p38 MAPK、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin1、GRP78及CHOP蛋白相对表达量均下调(P<0.05);与KS+NAC组比较,KS+NAC+TM组Ox、血清BUN、Cr、UA水平升高(P<0.05),肾小管扩张明显、草酸钙结晶增多,TUNEL阳性细胞率增加(P<0.05),SOD活性降低而MDA含量增加(P<0.05),ROS水平升高(P<0.05),LC3B与GRP78阳性染色水平升高(P<0.05),同时,p-p38 MAPK/p38 MAPK、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin1、GRP78、CHOP蛋白相对表达量均上调(P<0.05)。结论ROS/p38 MAPK级联反应参与大鼠KS形成,其作用与其激活内质网应激介导的自噬途径有关。

甘草次酸通过抑制p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路促进脂多糖诱导的小胶质细胞M2极化

目的探究甘草次酸(GA)通过抑制p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路促进脂多糖(LPS)诱导的小胶质细胞M2极化。方法将小鼠BV2小胶质细胞分为阴性对照(NC)组、LPS组(100μg/ml LPS)、GA组(100μg/ml LPS+10μmol/L GA)、GA+抑制剂组(100μg/ml LPS+10μmol/L GA+10μmol/ml p38 MAPK通路抑制剂)、抑制剂组(100μg/ml LPS+10μmol/ml p38 MAPK通路抑制剂)和GA+激活剂组(100μg/ml LPS+10μmol/L GA+300 ng/ml p38 MAPK通路激活剂)。用细胞计数试剂盒8法测定细胞活力,酶联免疫吸附测定炎性因子水平,倒置显微镜观察细胞形态,Western blot检测精氨酸酶1(Arg-1)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及p38 MAPK通路相关蛋白表达水平。结果与LPS组比较,GA组和抑制剂组细胞足突增多、胞体变大、细胞间隔缩小,白细胞介素(IL)1β、IL-6、iNOS、P53蛋白、磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)表达显著降低(22.53±0.53、24.13±1.00 vs 29.56±1.46,10.37±0.59、10.16±0.21 vs 15.13±1.00,0.39±0.01、0.38±0.01 vs 1.12±0.01,0.34±0.01、0.31±0.01 vs 0.89±0.01,0.40±0.01、0.40±0.02 vs 0.88±0.01,P<0.05),IL-10、Arg-1表达显著升高(177.33±7.57、187.21±6.87 vs 64.67±11.50,0.41±0.01、0.44±0.03 vs 0.10±0.01,P<0.05)。与GA组比较,GA+抑制剂组细胞足突增多、胞体变大,IL-1β、IL-6、iNOS、P53蛋白、p-p38 MAPK表达显著降低,IL-10、Arg-1表达显著升高(P<0.05);GA+激活剂组细胞足突减少、胞体变小,IL-1β、IL-6、iNOS、P53蛋白、p-p38 MAPK表达显著升高,IL-10、Arg-1表达显著降低(P<0.05)。结论GA可通过阻断p38 MAPK信号通路促进LPS诱导的小鼠BV2小胶质细胞M2极化。

中药调控p38丝裂原活化蛋白激酶/核因子κB通路治疗肾纤维化研究进展

肾纤维化是一种慢性、动态且不可逆的病理改变,是慢性肾脏病进展的主要病理过程。p38丝裂原活化蛋白激酶/核因子κB(p38MAPK/NF-κB)信号参与炎症反应及氧化应激,在肾纤维化进展中发挥关键的调控作用。近年来中药通过靶向调控氧化应激及相关信号通路防治肾纤维化成为研究热点。研究表明单味中药及中药复方有效成分通过调控p38MAPK/NF-κB信号改善氧化应激损伤和炎症状态,发挥保护肾脏功能作用,且临床疗效较好。通过归纳中药调控p38MAPK/NF-κB信号通路干预肾纤维化机制的研究,为中医药防治本病提供参考。

基于p38丝裂原活化蛋白激酶通路探讨瑶医除闷汤药浴治疗膝骨关节炎大鼠的作用机制

目的基于p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)通路探讨瑶医除闷汤药浴治疗膝骨关节炎(KOA)模型大鼠的效果与作用机制。方法在60只8周龄雄性SPF级SD大鼠(体重200~220 g)中随机选取10只作为空白组,在实验第1、4天,于空白组右膝关节腔内注射0.1 ml生理盐水,其余大鼠注射0.1 mlⅡ型胶原蛋白酶与弗氏完全佐剂的混合乳剂(质量浓度为0.5 mg/ml)。第7天根据大鼠膝关节情况评估造模结果,将50只造模成功的大鼠按照随机数字表法分为模型组、双氯芬酸钠组及除闷汤高、中、低剂量组,每组10只。实验第8天,对除闷汤高、中、低剂量组进行药浴干预(浓度分别为49.00、24.50、12.25 g/L),模型组进行温水泡浴,双氯芬酸钠组于造模部位予0.01 g的1%双氯芬酸钠凝胶,空白组常规饲养,连续干预4周,干预期间观察各组一般情况。干预后观察各组膝关节解剖学情况,测量膝关节直径,采用苏木精-伊红(HE)染色观察膝关节软骨组织形态学改变。采用酶联免疫吸附试验检测各组血清中白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6、IL-10含量;采用免疫组织化学染色检测各组软骨组织中p38MAPK、磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)的表达水平。结果药物干预期间,空白组一般情况正常;模型组强迫运动时跛行,伴膝关节屈伸功能障碍;除闷汤各剂量组膝关节屈伸功能与步态逐渐恢复,双足跛行状态减少。干预后,空白组膝关节解剖可见滑膜平滑半透明,软骨透明光滑,关节面完整,HE染色可见软骨细胞排列规则清晰;模型组膝关节解剖可见滑膜增厚糜烂,软骨表面粗糙磨损,色泽灰暗,HE染色可见软骨基质减少甚至消失,软骨细胞大量减少,形态不规则;除闷汤各剂量组膝关节解剖及HE染色可见膝关节软骨有不同程度改善。模型组膝关节直径大于空白组,血清IL-1β、IL-6及软骨p38MAPK、p-p38MAPK、MMP-13表达均高于空白组,血清IL-10低于对照组(P<0.05)。除闷汤各剂量组膝关节直径小于模型组,血清IL-10高于模型组,软骨p-p38MAPK、MMP-13表达均低于模型组(P<0.05)。除闷汤高、中剂量组血清IL-1β、IL-6及软骨p38MAPK低于模型组和除闷汤低剂量组,IL-10高于除闷汤低剂量组(P<0.05)。除闷汤高剂量组膝关节直径小于除闷汤低、中剂量组,软骨p-p38MAPK、MMP-13表达低于除闷汤低剂量组,血清IL-10高于除闷汤低、中剂量组,软骨MMP-13表达低于除闷汤中剂量组(P<0.05)。结论瑶医除闷汤可能通过靶向抑制p38MAPK通路表达,减轻KOA大鼠的炎症反应,改善软骨退变。

振腹法对多囊卵巢综合征大鼠血糖、胰岛素水平及p38丝裂原活化蛋白激酶蛋白表达的影响

目的探讨振腹法治疗对多囊卵巢综合征(polycystic ovarian syndrome,PCOS)大鼠空腹血糖(Fasting plasma glucose,FPG)、血清胰岛素(fasting serum lisulin,FINS)、胰岛素抵抗指数(Homeostatic model assessment for insulin resistance,HOMA-IR)及卵巢p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)、磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38 mitogen-activated protein kinase,p-p38 MAPK)蛋白表达与卵巢组织结构的影响,为振腹法的临床应用推广提供科学依据。方法采用芳香酶抑制剂(来曲唑)造模法建立PCOS大鼠模型,将40只雌性SD大鼠随机分为空白组、模型组、二甲双胍组、振腹组,每组10只,各组大鼠给予相应药物连续灌胃21天。用葡萄糖氧化酶法测定FPG水平、酶联免疫吸附测定法测定空腹FINS水平,并计算HOMA-IR,比较各组的大鼠卵巢形态结构的差异;用蛋白免疫印迹法测定各组大鼠卵巢组织p38 MAPK、p-p38 MAPK蛋白表达量。结果与空白组相比,模型组大鼠卵巢出现囊性卵泡,卵巢皮质间质细胞明显增生,颗粒细胞层数减少;FPG、FINS、HOMA-IR水平升高(P<0.05),p38 MAPK、p-p38 MAPK表达量升高(P<0.05)。与模型组相比,二甲双胍组、振腹组大鼠卵巢囊性卵泡减少,颗粒细胞层增厚,可见卵母细胞,可见少量黄体;FPG、FINS、HOMA-IR水平降低(P<0.05),p38 MAPK、p-p38 MAPK表达量降低(P<0.05)。与二甲双胍组相比,振腹组大鼠FPG、p38 MAPK、p-p38 MAPK水平均相近(P>0.05)。结论振腹法可以改善PCOS模型大鼠卵巢结构,降低PCOS卵巢组织p38 MAPK、p-p38 MAPK蛋白表达水平,对PCOS血糖、胰岛素有一定调节作用,对PCOS伴胰岛素抵抗能有一定治疗作用,且振腹法在降低FPG水平上作用与二甲双胍作用相近。

电针颈夹脊穴对神经根型颈椎病模型大鼠小胶质细胞、P38丝裂原活化蛋白激酶和炎性因子表达的影响

目的:观察电针颈夹脊穴对神经根型颈椎病(CSR)模型大鼠疼痛行为学、脊髓背角中小胶质细胞激活标志物补体受体3(CR3)、P38丝裂原活化蛋白激酶(P38-MAPK)和炎性细胞因子表达的影响,探讨电针治疗CSR所致神经病理性疼痛的镇痛机制。方法:将72只雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、假手术组、电针组、胶质细胞抑制剂L-α-氨基己二酸(LAA)组和电针+LAA组,每组12只。空白组不做任何处置;假手术组仅暴露右侧C7脊神经,不结扎,并进行鞘内置管;模型组、电针组、LAA组及电针+LAA组结扎右侧C7脊神经建立神经根型颈椎病模型并进行鞘内置管。空白组不予任何干预;假手术组与模型组仅在电针组干预同时间点进行捆绑操作;电针组于术后第7天开始电针双侧C6、C7颈夹脊穴,20 min/次,1次/d,连续干预14 d;LAA组于术后第7天开始鞘内注射LAA,5 nmol/次,1次/d,连续干预14 d;电针+LAA组于术后第7天开始同电针组与LAA组进行电针双侧C6、C7颈夹脊穴及鞘内注射LAA干预。术后观察并记录大鼠患侧足底热缩足反射潜伏期(PWTL),采用免疫荧光法观察CR3、P38-MAPK表达水平,采用免疫组化法观察炎性细胞因子白介素1β(IL-1β)、白介素6(IL-6)、白介素18(IL-18)与肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达水平。结果:造模后第7天,模型组、电针组、LAA组与电针+LAA组PWTL明显下降,差异具有统计学意义(P<0.05);经干预后,电针组、LAA组和电针+LAA组治疗后患侧前足底PWTL均持续升高,术后14 d、21 d患侧前足底PWTL明显高于同时间节点模型组,差异具有统计学意义(P<0.05)。与空白组比较,假手术组大鼠脊髓背角CR3、P38-MAPK、IL-1β、IL-6、IL-18与TNF-α表达差异无统计学意义(P>0.05);与假手术组比较,模型组大鼠脊髓背角CR3、P38-MAPK、IL-1β、IL-6、IL-18与TNF-α表达明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,电针组、LAA组、电针+LAA组大鼠脊髓背角CR3、P38-MAPK、IL-1β、IL-6、IL-18与TNF-α表达均明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:电针颈夹脊穴可抑制小胶质细胞激活,下调P38-MAPK表达,减少炎性细胞因子IL-1β、IL-6、IL-18与TNF-α的生成,提示电针可能通过抑制小胶质细胞激活、降低P38-MAPK表达和抑制炎性细胞因子分泌以发挥镇痛作用。

基于c-Jun氨基末端激酶/p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路探讨阿魏酸钠对偏头痛大鼠炎症反应的抑制作用

目的 探讨阿魏酸钠(SF)通过调控JNK/p38 MAPK信号通路对偏头痛大鼠炎症反应的抑制作用。方法 腹腔注射硝酸甘油制备偏头痛大鼠模型,模型制作成功后随机分为模型组、SF低剂量(SF-L)组(50 mg/kg)、 SF高剂量(SF-H)组(100 mg/kg)、SF+JNK抑制剂(SF+SP600125)组(SF 100 mg/kg+SP600125 10 mg/kg)、 SF+JNK激活剂[SF+茴香霉素(AN)]组(SF 100 mg/kg+AN 5 mg/kg),每组12只,另取12只SD大鼠不做处理作为空白组。给药结束24 h后观察各组大鼠行为学变化,ELISA法检测血清中5-羟色胺(5-HT)、一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)水平,TUNEL染色观察脑组织神经元凋亡情况,免疫组织化学法检测脑组织中TNF-α、 IL-6、降钙素基因相关肽(CGRP)表达,Western blotting法检测脑组织中JNK/p38 MAPK通路相关蛋白的表达。结果 与空白组比较,模型组大鼠挠头次数以及爬笼次数明显增加,神经元凋亡率显著升高;血清5-HT含量显著降低,NO、TNF-α和IL-6水平显著升高;脑组织中TNF-α、IL-6和CGRP表达以及磷酸化JNK(p-JNK)/JNK、磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)/p38 MAPK比值均显著升高(均P<0.05)。与模型组比较,SF-L组、SF-H组大鼠挠头次数及爬笼次数显著减少,神经元凋亡率显著降低;血清中5-HT含量显著升高,NO、TNF-α和IL-6水平显著降低;脑组织中TNF-α、IL-6和CGRP表达以及p-JNK/JNK、p-p38 MAPK/p38 MAPK比值均显著降低(均P<0.05)。与SF-H组比较,SF+SP600125组能够显著增强SF对偏头痛大鼠的保护作用;SF+AN组能够显著逆转SF对偏头痛大鼠的保护作用。结论 SF可能通过抑制JNK/p38 MAPK信号通路的表达,有效抑制偏头痛大鼠神经源性炎症反应,减少神经元凋亡,实现对偏头痛大鼠的保护作用。

白藜芦醇对慢性阻塞性肺疾病大鼠 p38丝裂原活化蛋白激酶/核因子-κB信号通路的影响

目的:探讨白藜芦醇对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/核因子-κB(NF-κB)信号通路的影响。方法:将50只SD大鼠随机分为正常组,模型组,白藜芦醇低剂量组、白藜芦醇中剂量组、白藜芦醇高剂量组,每组10只。模型组及白藜芦醇组采用烟熏联合脂多糖气道内注射法复制COPD大鼠模型,模型构建成功后,白藜芦醇低、中、高剂量组大鼠分别灌胃给予5、15、45 mg/(kg·d)白藜芦醇,正常组及模型组给予等量0.9%氯化钠溶液,连续28 d。HE染色观察肺组织病理形态,分光光度法检测丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)水平,酶联免疫吸附(ELISA)法检测肺组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白介素-8(IL-8),基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)含量,Western blot检测p38MAPK/NF-κB信号通路相关蛋白表达情况。结果:与模型组比较,白藜芦醇低、中、高剂量组肺泡结构较为完整,有少量炎性细胞浸润,TNF-α、IL-8、MDA、MMP-9含量降低、p38 MAPK、核因子κB抑制因子α(IκB α)及NF-κB p65表达下调,SOD活性及TIMP-1含量升高。结论:白藜芦醇能够缓解COPD大鼠肺损伤,可能与抑制p38 MAPK/NF-κB信号通路有关。

基于p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路探讨中医药治疗慢性阻塞性肺疾病的研究进展

慢性阻塞性肺疾病(Chronic Obstructive Pulmonary Disease,COPD)是呼吸科临床上的常见病、多发病,已经给社会经济造成沉重的负担。目前临床上西医治疗该病多以抗生素、吸入激素、支气管扩张剂、茶碱类药物等为主要治疗药物,但目前仍存在些许问题,如长期反复抗生素导致耐药菌产生、吸入激素造成肺炎风险增加和长期用药患者依从性不高等问题。因此,探寻新型、高效、简便、廉价的药物和治疗模式是目前阶段研究的重点方向。我国中医中药具有多年历史,凭借其“整体观念、辨证论治、药简便廉”的自身独特优势,在COPD的预防和治疗中积累了相当丰富的临床经验。近年来,国内外对于中医药与p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 Mitogen-activated Protein Kinase,p38MAPK)信号通路的研究络绎不绝,该文通过筛选相关研究与文献,从中医角度探讨COPD的病因病机、辨证论治、发病机制、p38MAPK信号通路与COPD的关系,基于该通路的中医药对COPD的干预进行系统归纳和整理,研究发现某些单味中药、提取物、中药复方能通过调控p38MAPK信号通路的激活,抑制下游某些促炎因子如肿瘤坏死因子-α(Tumor Necrosis Factor-α,TNF-α)、白细胞介素(Interleukin,IL)-6、IL-1β等炎症因子的释放,减轻气道炎症、抑制气道重塑,从而改善COPD患者呼吸道的通气功能。这些研究均为推动中医药的现代化和治疗COPD提供了一定的理论基础和诊疗思路。

达格列净通过p38丝裂原活化蛋白激酶抑制高糖诱导的人肾小球足细胞损伤

目的探讨达格列净通过p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路对D-葡萄糖诱导的人肾小球足细胞凋亡、自噬、炎症反应及氧化损伤的影响。方法体外培养人肾小球足细胞(HGPCs),分为对照组(5 mmol/L D-葡萄糖)、D-葡萄糖组(30 mmol/L D-葡萄糖)、达格列净组(30 mmol/L D-葡萄糖+50μmol/L达格列净)、抑制剂组(30 mmol/L D-葡萄糖+10μmol/L p38 MAPK通路抑制剂SB 203580)、达格列净+抑制剂组(30 mmol/L D-葡萄糖+50μmol/L达格列净+10μmol/L SB 203580)和达格列净+激活剂组(30 mmol/L D-葡萄糖+50μmol/L达格列净+10μmol/L p38 MAPK通路激活剂C16-PAF)。对照组与D-葡萄糖组用D-葡萄糖干预24 h;其他组D-葡萄糖干预24 h后相应药物继续干预24 h。采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测细胞活力;采用Hoechst 33258染色法检测细胞凋亡率;采用ELISA检测白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、丙二醇(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)的表达水平;采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测酵母ATG6同源物(Beclin-1)、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)mRNA表达水平;采用Western印迹法检测Beclin-1、LC3Ⅱ、p53、p38 MAPK及p-p38 MAPK蛋白表达。结果与对照组相比,D-葡萄糖组细胞活力降低(P<0.05),达格列净组细胞活力升高(P<0.05),细胞凋亡率,IL-1β、IL-6、TNF-α、MDA、Beclin-1、LC3ⅡmRNA和蛋白、p53和p-p38 MAPK蛋白水平升高(P<0.05),SOD水平降低(P<0.05)。与D-葡萄糖组相比,达格列净组和抑制剂组细胞凋亡率、IL-1β、IL-6、TNF-α、MDA、Beclin-1、LC3ⅡmRNA和蛋白、p53和p-p38 MAPK蛋白水平降低(P<0.05),SOD水平升高(P<0.05)。与达格列净组相比,达格列净+抑制剂组细胞凋亡率、IL-1β、IL-6、TNF-α、MDA、Beclin-1、LC3ⅡmRNA和蛋白、p53和p-p38 MAPK蛋白水平进一步降低(P<0.05),SOD水平进一步升高(P<0.05);达格列净+激活剂组与达格列净+抑制剂组变化趋势相反,与达格列净组差异有统计学意义(P<0.05)。结论达格列净可抑制高糖诱导的人HGPCs的凋亡、自噬、炎症反应及氧化损伤,其作用机制可能与抑制p38 MAPK通路信号转导相关。

p38丝裂原活化蛋白激酶信号途径调节骨骼肌生长发育的机理

p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号途径是成肌细胞分化过程中重要的调节途径。p38 M APK蛋白在成肌细胞分化过程中受上游丝裂原活化蛋白激酶激酶3(M KK3)、丝裂原活化蛋白激酶激酶6(MKK6)的激活而活化其下游成肌分化蛋白(MyoD)、肌生成素5(Myf5)、肌形成蛋白(myogenin)、肌肉调节因子4(MRF4)等肌肉调节因子。p38 MAPK信号途径的活化可以进一步增加骨骼肌纤维细胞蛋白含量,增加肌纤维长度和横截面直径,使骨骼肌纤维在数量不变的前提下质量大幅度提高,本文就p38 MAPK信号途径调节骨骼肌生长发育的机理进行综述。

牙髓卟啉单胞菌脂多糖对成骨细胞p38丝裂原活化蛋白激酶和细胞外信号调节激酶1、2表达的影响

目的:探讨牙髓卟啉单胞菌(P.e)脂多糖(LPS)对小鼠成骨细胞株MC3T3-E1细胞ERK1/2和p38表达的影响。方法:用10μg/mL的P.e-LPS分别作用于成骨细胞0、5、15、30、60、180 min,应用蛋白质印迹技术检测成骨细胞内磷酸化ERK1/2和p38表达水平的变化。采用SPSS11.0软件包对结果进行单因素方差分析和Dunnett t检验。结果:10μg/mL的P.e-LPS刺激后,成骨细胞内p38迅速被活化,5～30 min为激活高峰(P<0.01),60 min后基本恢复至正常水平;ERK1/2磷酸化水平在P.e-LPS刺激5 min后明显增加,15 min后磷酸化水平最高(P<0.01),30 min后磷酸化水平下降。结论:P.e-LPS可诱导成骨细胞MC3T3-E1的p38和ERK1/2蛋白表达增强,Pe-LPS可能通过p38和ERK1/2对成骨细胞发挥作用。

紫草素对肺炎链球菌引起的肺炎小鼠细胞外信号调节激酶/p38丝裂素活化蛋白激酶/核苷酸结合寡聚化结构域样蛋白3信号通路及肺血管通透性的影响

目的探究紫草素对肺炎链球菌引起的肺炎小鼠细胞外信号调节激酶/p38丝裂素活化蛋白激酶/核苷酸结合寡聚化结构域样蛋白3(ERK/p38/NLRP3)信号通路及肺血管通透性的影响。方法采用肺炎链球菌悬液50 L滴加BALB/c小鼠破损鼻黏膜建立肺炎链球菌性肺炎模型,成模小鼠采用随机数字表法分为模型组、紫草素低、中、高浓度组及头孢呋辛酯组,另取鼻腔滴加50 L生理盐水BALB/c小鼠为对照组,每组10只,紫草素低、中、高浓度组分别给予紫草素12.5 mg/kg、25.0 mg/kg、50.0 mg/kg,头孢呋辛酯组给予头孢呋辛酯50.0 mg/kg,对照组、模型组给予等量生理盐水,每天1次,连续灌胃7 d。末次给药12 h后处死小鼠,检测各组小鼠左肺湿/干重比值(W/D),每组采用随机数字表法选取4只小鼠进行1%伊文氏蓝5 mL/kg尾静脉注射检测肺血管通透性,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肺组织白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达量,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)及蛋白质印迹法(WB)分别检测肺组织ERK、p38、NLRP3 mRNA及蛋白表达。结果与对照组比较,模型组小鼠肺组织W/D比值[(4.49±0.27)%比(3.02±0.15)%]、肺血管通透性[(0.091±0.009)g/mg比(0.034±0.004)g/mg]、IL-1β[(567.29±14.65)pg/mL比(102.46±6.73)pg/mL]、TNF-α[(417.16±12.89)pg/mL比(83.59±6.28)pg/mL]、ERK、p38、NLRP3 mRNA及蛋白表达水平均显著增加(P<0.05);与模型组比较,紫草素低、中、高浓度组小鼠肺组织W/D比值、肺血管通透性、IL-1β、TNF-α表达量、ERK、p38、NLRP3 mRNA及蛋白表达水平均依次降低(P<0.05),紫草素高剂量组均低于头孢呋辛酯组(P<0.05)。结论紫草素可减轻肺炎链球菌性肺炎小鼠肺组织损伤、炎症反应及肺血管通透性,可能与抑制ERK/p38/NL‐RP3信号通路有关。

血管生成素-1，2经p38丝裂原活化蛋白激酶调节失血性休克血管低反应性

目的观察p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）在血管生成素-1（Ang-1）、血管生成素-2（Ang-2）调节失血性休克大鼠血管反应性双相变化中的作用。方法观察失血性休克后不同时问点肠系膜上动脉（SMA）中p38MAPK蛋白表达和磷酸化变化，p38MAPK抑制剂对Ang-1和Ang-2调节缺氧早期和晚期血管反应性作用的影响，以及给予Ang-1、Ang-2和Tie-1抑制剂后缺氧血管内皮细胞（VEC）和血管平滑肌细胞（VSMC）混合细胞中p38MAPK蛋白表达和磷酸化变化。结果失血性休克后p38MAPK磷酸化水平显著增高；p38MAPK抑制剂可显著改善缺氧4h血管低反应性并拮抗Ang-2进一步降低缺氧4h血管低反应性的作用；Ang-1和Tie-2抑制剂可显著抑制缺氧4h的p38MAPK磷酸化增高（P〈0，01）。结论p38MAPK参与了Ang-t和Ang-2对休克晚期血管低反应性的调节，但不是休克早期血管高反应性的主要调节分子。

p38调节活化蛋白激酶绿色荧光蛋白融合载体的构建及表达

目的构建在哺乳动物细胞中表达的PRAK绿色荧光蛋白融合表达载体。方法将克隆在pET-14b上的PRAK亚克隆到绿色荧光蛋白载体pEGFP-C2上,随后转染Hela细胞,并在荧光显微镜下观察。结果重组质粒经酶切、PCR和测序鉴定正确无误,并在Hela细胞中得到高量表达。融合蛋白发出的绿色荧光表明EGFP-PRAK主要分布在细胞核中。结论成功构建了PRAK绿色荧光蛋白融合载体,该载体能在哺乳动物细胞中进行表达,为研究PRAK的细胞内定位和移位提供了一个重要的工具。

外源性p38调节活化蛋白激酶细胞内定位研究

目的研究外源性调节活化蛋白激酶(PRAK)在细胞内的定位。方法将克隆在pET-14b上的PRAK亚克隆到绿色荧光蛋白载体pEGFP-C2上,随后转染Hela细胞,并通过荧光显微镜观察外源性PRAK导入真核细胞后在细胞内的分布。结果重组质粒经酶切、PCR和测序鉴定正确无误,并在Hela细胞中得到高量表达。融合蛋白发出的绿色荧光表明EGFP-PRAK主要分布在细胞核中。结论成功构建了PRAK绿色荧光蛋白融合载体,该载体能在哺乳动物细胞中进行表达,通过荧光显微镜观察外源性PRAK主要分布在细胞核内。