肠道病毒A71型结构蛋白和非结构蛋白对p85表达及p38途径活化的影响

目的探讨肠道病毒A71型(EV-A71)结构蛋白和非结构蛋白对p85表达和p38途径活化的影响。方法通过RT-PCR扩增EV-A71的12个基因片段,经酶切反应和连接反应将目的片段连接到pcDNA3.1(+)/myc-His A真核表达载体,制备去内毒素的重组质粒;使用SuperFect转染试剂将2μg重组真核质粒转染至HEK293细胞24h后,免疫印迹检测p85表达和p38的磷酸化。结果正确构建12个EV-A71结构蛋白和非结构蛋白的真核重组质粒;与未转染细胞相比,EV-A71 P1区结构蛋白(VP1、VP3和VP4)、P2区非结构蛋白(2A、2B、2C和2BC)和P3区非结构蛋白(3A、3C、3D和3AB)均能不同程度的改变p85的表达和p38的磷酸化水平;EV-A71结构蛋白VP2虽不能显著提升p85的表达,但能提升p38的磷酸化水平。结论EV-A71的12个亚单位蛋白可与宿主细胞发生互作,进而调控宿主细胞的生物学过程。

ERK和P38信号转导途径对慢性髓系白血病细胞周期的调控作用

本研究探讨ERK和P38信号转导途径对慢性髓系白血病(CML)细胞周期的调控作用。以RT-PCR、Western blot和FCM方法分别检测CML患者白血病细胞和K562细胞中ERK、p38、cyclin D2、cyclin E、p27的mRNA表达及蛋白表达(其中ERK和P38为磷酸化ERK和磷酸化P38)及细胞周期分布,并分析其相关关系。结果表明:CML患者白血病细胞和K562细胞中ERK、P38、cyclin D2、cyclin E的mRNA表达和蛋白表达增高,P27的表达降低,且cyclin D2蛋白表达与cyclin E、ERK和P38蛋白表达呈正相关(P<0.01),与P27蛋白表达呈负相关(P<0.01)。G0/G1期细胞减少,S期细胞增多,与对照组相比有显著性差异。结论:CML中P38、ERK mRNA表达和活性增加,激活下游的cyclin D2、cyclin E和P27等细胞周期调控因子,致使G0/G1期缩短,细胞快速通过G1/S转换点进入S期,加速细胞周期进程和细胞增殖,导致CML的发生。

落新妇苷通过激活PI3K/AKT信号通路和抑制P38MAPK信号通路减轻H2O2诱导的PC12细胞损伤

目的研究落新妇苷对H 2O 2诱导的氧化应激损伤的PC12细胞影响。方法将PC12细胞分为5组:对照组、H 2O 2组及不同浓度(1μmol/L、10μmol/L、20μmol/L)落新妇苷组。采用CCK8实验检测各组细胞的活力;Annexin V-FITC/PI细胞凋亡实验检测各组细胞凋亡率;Western blot检测PI3K、AKT、Caspase3和P38蛋白及其磷酸化激活蛋白的表达水平。结果与H 2O 2组相比,落新妇苷组细胞的活力显著提高,细胞凋亡率明显降低,活化的凋亡相关蛋白Cleaved Caspase3表达水平降低,PI3K/AKT途径相关蛋白p-PI3K和p-AKT的表达水平升高,P38 MAPK途径重要蛋白p-P38的表达水平降低。结论落新妇苷对H 2O 2诱导的氧化应激损伤的PC12细胞有明显保护作用;这种保护作用可能是通过激活PI3K/AKT信号通路及抑制P38MAPK信号通路实现的。

糖尿病仓鼠视网膜p38MAPK和TGFβ_2的表达

目的探讨p38MAPK、TGFβ2在糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)发生发展中的作用及其机制。方法用链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱导仓鼠糖尿病(DM)模型,提取视网膜中总RNA,半定量RT-PCR观察视网膜中p38MAPK、TGFβ2 mRNA表达情况,Western blotting检测DM仓鼠p38MAPK、TGFβ2蛋白情况。结果DM仓鼠视网膜中p38MAPK、TGFβ2 mRNA表达呈显著升高,蛋白表达增多。结论p38MAPK信号途径参与DR的发病机,制阻断p38MAPK的活性可能有助于阻断DR的发生和发展。

丝裂原活化蛋白激酶途径与肝细胞癌研究进展

肝细胞癌(HCC)是世界第五大常见肿瘤,也是肝脏最常见的恶性肿瘤。丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)是一类广泛存在于细胞内的高度保守的丝氨酸和苏氨酸蛋白激酶,是细胞内重要的信号转导系统,参与细胞的生长、发育、分化和凋亡等一系列病理生理过程。它是目前研究的热点,参与了包括肝癌在内的多种肿瘤的发生发展过程。

肿瘤放、化疗引发造血干细胞衰老的机制

放、化疗治疗恶性肿瘤存在许多不良反应,其中骨髓损伤最为常见。急性骨髓损伤通过治疗可以恢复;潜在骨髓损伤随着时间或治疗的逐渐加重可导致严重的血液疾病。造血干细胞衰老是放、化疗诱导的潜在骨髓损伤的机制,本文将对放、化疗造成造血干细胞衰老的机制做一综述,着重探讨ROS的介导作用,以及信号通路如p38 MAPK、p53-21等的作用,为临床治疗提供可能的靶点或思路。

LOX-1在D-葡萄糖诱导人肾小球系膜细胞表达TGF-β1中的作用

目的探讨血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1(LOX-1)在D-葡萄糖诱导人肾小球系膜细胞表达转化生长因子β1(TGF-β1)中的作用。方法在体外培养人肾小球系膜细胞,在不同时间加入不同浓度的D-葡萄及LOX-1特异性阻滞剂JTX92,用半定量RT-PCR法检测LOX-1和TGF-β1基因表达的相对含量,用Western blot法检测p38 MAPK蛋白质的相对含量,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养液中TGF-β1浓度。结果D-葡萄糖以时间和浓度依赖的方式增加细胞内LOX-1和TGF-β1 mRNA表达和培养液中TGF-β1浓度,同时也以时间和浓度依赖的方式增加p38 MAPK的表达,JTX92可以明显抑制LOX-1、TGF-β1和p38 MAPK的表达。结论高浓度D-葡萄糖可能通过上调LOX-1的表达,激活细胞内的p38 MAPK信号传递途径,促使人肾小球系膜细胞合成并分泌大量TGF-β1,参与糖尿病肾病的发生发展。

细菌脂多糖经p38丝裂原激活蛋白激酶通路调节claudin-11基因的表达

目的阐明细菌内毒素细菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)是否影响紧密连接蛋白claudin-11的表达及其分子机制。方法表达claudin-11基因的原代培养人皮肤成纤维细胞,加入纯化的LPS或核转录因子κB(NF-κB)特异性抑制剂MG132或p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)抑制剂SB203580后,利用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹方法检测claudin-11基因mRNA和蛋白质表达水平变化,利用细胞免疫荧光染色法检测NF-κB核转移。结果LPS细胞膜受体TLR4在人皮肤成纤维细胞表达;2μg/ml LPS能提高claudin-11基因mRNA和蛋白质的表达水平。进一步研究发现:虽然LPS能使NF-κB从细胞质转移到细胞核,但LPS引起claudin-11基因表达增加不能被NF-κB特异性抑制剂MG132抑制,而能被p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)抑制剂SB203580明显抑制。结论细菌内毒素LPS影响claudin-11基因的表达可能是通过p38 MAPK通路来调节的。

小檗碱抗人结直肠腺癌的作用及其机制

目的探讨黄连的主要药用成分小檗碱的抗结直肠腺癌的机制。方法不同浓度的小檗碱作用于人结直肠腺癌(HCT-15)细胞后,用显微镜观察人结直肠腺癌细胞的形态学改变;细胞染色方法观察细胞凋亡和自噬;细胞计数分析(CCK-8)检测小檗碱对细胞增殖的影响;免疫印迹法检测小檗碱对人结直肠癌细胞自噬和凋亡相关指标的影响;裸鼠移植瘤模型观察小檗碱的体内抑制肿瘤生长活性。结果显微镜观察结果显示小檗碱作用HCT-15细胞后细胞数量减少、间距增大、皱缩。小檗碱能够抑制HCT-15细胞增殖,对HCT-15细胞增殖的半数抑制浓度(IC_(50))为50μmol/L。免疫荧光和印迹法显示0、50、100μmol/L的小檗碱处理细胞不同时间后,细胞凋亡和自噬对应的标志物明显上升。免疫印迹结果显示小檗碱诱导HCT-15细胞自噬和凋亡从而抑制细胞的增殖。小檗碱诱导细胞自噬和凋亡主要通过激活p38途径。裸鼠实验结果表明小檗碱能够有效缩小体内肿瘤体积,0、10、20 mg/kg的小檗碱的抑瘤率分别为0、32%、74%。结论小檗碱在体外对HCT-15细胞增殖具有明显抑制作用,其机制主要是通过激活p38信号通路促进肿瘤细胞自噬和凋亡,并能有效抑制体内肿瘤的生长。

有氧运动对衰老大鼠肾脏纤维化的影响

目的观察规律有氧运动对衰老大鼠肾脏纤维化的影响并探讨其作用机制。方法采用随机数字表法将30只雄性SD大鼠分为青年对照组(YC组)、老年对照组(OC组)及老年运动组(OE组),每组10只大鼠。YC组及OC组大鼠均置于鼠笼内安静饲养,OE组大鼠则给予8周中等强度跑台有氧运动。于实验结束后检测各组大鼠24 h尿蛋白、血尿素氮(BUN)及血清肌酐(SCr)含量,采用Masson染色检测肾脏纤维化程度,采用Western Blot技术检测转化生长因子β1(TGF-β1)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)、E-粘钙素及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达水平。结果与YC组比较,OC组大鼠24 h尿蛋白、BUN及SCr明显升高(P<0.05),肾脏纤维化程度增加(P<0.05),TGF-β1、p-p38MAPK和α-SMA蛋白表达上调(P<0.05),E-粘钙素表达下调(P<0.05);与OC组比较,OE组大鼠24 h尿蛋白、BUN及SCr明显降低(P<0.05),肾脏纤维化程度减轻(P<0.05),TGF-β1、p-p38MAPK和α-SMA蛋白表达下调(P<0.05),E-粘钙素表达增加(P<0.05)。结论有氧运动能缓解衰老大鼠肾脏纤维化,其作用机制可能与抑制TGF-β1/p38MAPK信号通路及上皮-间质转变有关。