三七总皂苷通过p38 MAPK通路抑制内毒素诱导的小胶质细胞活化

目的:探讨三七总皂苷(PNS)通过p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)通路对脂多糖(LPS)诱导活化的BV2小胶质细胞中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响。方法:将BV2小胶质细胞分为空白对照组(Control)、LPS激活组和LPS+三七总皂苷干预组(LPS+PNS)。CCK-8法检测BV2小胶质细胞的活力,确定最适合的药物干预浓度。利用Western Blot和免疫荧光检测BV2小胶质细胞中p38 MAPK和TNF-α的表达及p38 MAPK磷酸化水平(p-p38 MAPK)变化。结果:与空白对照组相比,PNS对BV2小胶质细胞的细胞活力无显著差异,最终选定100 mg/L作为药物干预浓度。Western Blot、免疫荧光结果提示,LPS激活后,BV2小胶质细胞中TNF-α的表达显著升高,p38 MAPK磷酸化水平增加(P<0.05);PNS干预后,与LPS激活组相比,TNF-α表达显著下降,p38 MAPK磷酸化水平降低(P<0.05)。使用p38 MAPK通路抑制剂(SB203580)作用后,PNS联合SB203580组(LPS+PNS+SB203580)中,TNF-α表达及p38 MAPK磷酸化水平变化与LPS+PNS组相比无显著差异(P>0.05)。此外,p38 MAPK在各组的变化无显著性差异(P>0.05)。结论:PNS可能通过p38 MAPK通路抑制活化的BV2小胶质细胞分泌的炎性因子TNF-α的表达。

健脾解毒方介导p38MAPK/ATF-2信号通路抑制幽门螺杆菌诱导的人胃癌细胞COX-2表达

目的探讨健脾解毒方对幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染人胃癌MKN45细胞环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)表达及其p38MAPK信号通路的调控机制。方法采用实时荧光定量PCR(RFQ-PCR)和Westernblot检测Hp标准株NCTC11637感染对人胃癌MKN45细胞COX-2 mRNA和蛋白表达的影响及健脾解毒方药物血清的调控作用;运用p38MAPK特异性抑制剂SB203580阻断p38MAPK信号通路,观察Hp对MKN45细胞COX-2 mRNA和蛋白表达的影响;观察健脾解毒方对Hp感染激活的p38MAPK信号通路及其下游活化转录调控因子2(activating transcription factor2,ATF-2)表达的影响。结果 Hp感染人胃癌MKN45细胞后,COX-2 mRNA和蛋白表达均明显高于空白对照组(P<0·01)。阻断p38MAPK信号通路后,Hp诱导的MKN45细胞COX-2 mRNA和蛋白表达均明显下调(P<0·01);健脾解毒方药物血清以剂量依赖的方式下调Hp诱导的MKN45细胞COX-2 mRNA和蛋白表达,并能够抑制Hp诱导的p38MAPK信号通路的活化,且对p38MAPK下游转录因子ATF-2的活性有明显的抑制作用。结论 Hp感染通过p38MAPK信号通路诱导胃癌细胞COX-2表达。健脾解毒方通过调控p38MAPK/ATF-2信号转导通路,抑制Hp诱导的COX-2表达,可能是其防治Hp诱发胃癌的机制之一。

AMPK、p38 MAPK信号通路参与调控电刺激诱导骨骼肌细胞PGC-1α基因表达

目的采用急性电刺激(acute electrical stimulation)C2C12成熟肌管细胞模型,结合使用相关信号激酶通路特异性抑制剂,探究急性电刺激所诱发的细胞内信号激酶对PGC-1α基因表达的调控作用。旨在从细胞水平揭示肌肉收缩刺激调控PGC-1α基因表达的分子机制。方法体外培养小鼠成肌细胞系C2C12细胞,采用脂质体法分别转染含小鼠PGC-1α启动子DNA全序列的质粒(p2533)及装载有能够与PGC-1α全长基因序列相结合GAL4DNA结合区域的p Bind载体,细胞在转染后分化5-6 d形成成熟肌管,5 Hz,10 V强度急性电刺激2 h后即刻收集各组细胞,进行总蛋白或双荧光素酶检测。抑制剂处理组分别采用40μM Compound C(CC,AMPK抑制剂)与10μM BIRB796(BIRB,p38抑制剂)处理细胞。结果与对照组(CON)相比,电刺激组(STIM)细胞PGC-1α启动子活性显著增高52%(P<0.05),PGC-1α辅激活转录活性显著增高35%(P<0.05),同时伴随PGC-1α蛋白由细胞质向细胞核迁移的现象。此外,与CON组相比,STIM组细胞AMPK、p38信号激酶通路磷酸化水平显著上调(P<0.05),在分别采用AMPK、p38抑制剂处理后,其磷酸化水平显著受到抑制(P<0.01)。结论急性电刺激可诱导骨骼肌细胞PGC-1α转录水平以及翻译后蛋白水平活性上调,这一作用部分是通过AMPK或p38信号通路实现的。

经后增殖方含药血清对超排卵大鼠卵巢颗粒细胞GDF9表达及凋亡的调控机制

【目的】观察益气血法经后增殖方含药血清对超排卵大鼠卵巢颗粒细胞生长分化因子9(GDF9)表达及凋亡的调控机制。【方法】制备超排卵大鼠血清(空白血清)和经后增殖方灌胃的超排卵大鼠血清(含药血清)。建立控制性超排卵(COH)大鼠模型,收集卵巢颗粒细胞。实验分为5组:空白血清组,含药血清组,含药血清+SB203580[p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)抑制剂]组,含药血清+PDTC[核转录因子κB(NF-κB)抑制剂]组,含药血清+SB203580+PDTC组。采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测p38MAPK、酪蛋白激酶2(CK2)、核转录因子κB抑制因子α(IκBα)、NF-κB、GDF9 mRNA表达水平,蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测GDF9蛋白表达水平,脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测卵巢颗粒细胞凋亡。【结果】经后增殖方含药血清降低COH大鼠卵巢颗粒细胞的p38MAPK和NF-κB mRNA表达,升高CK2和IκBαmRNA表达,提高GDF9 mRNA和蛋白的表达水平,降低卵巢颗粒细胞的凋亡率。单独添加p38MAPK抑制剂SB203580与单独添加NF-κB抑制剂PDTC均能促进GDF9 mRNA和蛋白表达、降低卵巢颗粒细胞凋亡率。【结论】益气血法经后增殖方含药血清可促进超排卵大鼠卵巢颗粒细胞GDF9表达,抑制卵巢颗粒细胞凋亡,其机制可能与调控p38MAPK和NF-κB双信号通路基因表达有关。

抑制p38 MAPK对小鼠釉质发育相关基因表达的影响

目的研究p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen activated protein kinase,p38 MAPK)对成釉上皮中釉质发育相关基因表达的影响,为釉质发育分子机制的研究提供基础。方法在体外小鼠下颌磨牙牙胚的培养基中加入以DMSO溶解的p38 MAPK特异性抑制剂SB203580为实验组,以培养基中加入等量DMSO处理的牙胚为对照组,利用Western blot检测成釉上皮中磷酸化p38(pp38)的蛋白表达水平,实时定量PCR检测成釉上皮中Runt相关转录因子2(runtrelated transcription factor 2,Runx2)、成骨细胞特异性转录因子(osterix,Osx)以及成釉细胞标志物牙成釉细胞相关蛋白(odontogenic ameloblast associated protein,ODAM)、釉成熟蛋白(amelotin,AMTN)、基质金属蛋白酶20(matrix metalloproteinase 20,MMP20)和激肽释放酶4(kallikrein 4,KLK4)的mRNA表达水平。结果Western blot结果显示,在抑制剂SB203580的作用下,小鼠成釉上皮中p38 MAPK的磷酸化水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。实时定量PCR结果表明,SB203580组的转录因子Runx2和Osx以及成釉细胞标志物ODAM、AMTN、MMP20、KLK4的表达均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论p38 MAPK信号通路可能通过调控转录因子Runx2、Osx及成釉细胞标志物ODAM、AMTN、MMP20和KLK4的表达介导釉质发育。

吡格列酮对脂多糖引起的大鼠海马有丝分裂原激活蛋白激酶p38信号传导通路的影响

吡格列酮（pioglitazone，Pio）能抑制脂多糖诱导的原代培养的星形胶质细胞炎症因子的释放，对抗谷氨酸诱导的神经细胞损伤，也有研究显示Pio通过抑制p38MAPK信号传导通路抑制LPS诱导的小胶质细胞炎症反应。但关于Pio对大鼠脑内炎症反应的抑制作用是否与p38MAPK信号传导通路有关目前尚未见报道，本研究通过大鼠脑室内注射LPS建立炎症反应动物模型，应用Western blot方法研究Pio对LPS引起的p38MAPK信号传导通路的影响。

基于p38 MAPK/NF-κB信号通路探讨淫羊藿多糖对运动性疲劳小鼠的影响及作用机制

目的:研究淫羊藿多糖对运动性疲劳小鼠的影响并探讨其可能的作用机制。方法:将游泳训练筛选后的ICR雄性小鼠随机分为正常组、模型组、维生素C组和淫羊藿多糖低、中、高剂量组,每组8只。除正常组外各组通过负重游泳训练建立运动性疲劳模型。负重游泳2周后,淫羊藿多糖低、中、高剂量组分别给予100、200、400 mg·kg^(-1)淫羊藿多糖灌胃,维生素C组给予200 mg·kg^(-1)维生素C灌胃,正常组和模型组灌服等量的生理盐水,连续2周。实验结束后,纪录各组小鼠体质量、末次力竭游泳时间;试剂盒检测各组小鼠血清尿素氮(BUN)、乳酸(LA)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、过氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平,骨骼肌中肌糖原(MG)、肝脏中肝糖原(HG)含量,苏木素-伊红(HE)染色法观察肌组织病理形态变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肌组织中p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)、磷酸化(p)-p38 MAPK、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、核转录因子-κB(NF-κB)、p-NF-κB、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)的蛋白表达;免疫荧光法(IF)检测各组小鼠骨骼肌组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠体质量下降、游泳力竭时间降低(P<0.01),血清中疲劳代谢产物LA、LDH、BUN和脂质过氧化产物MDA含量显著升高(P<0.01),MG、HG、SOD、GSH-Px水平下降(P<0.01),骨骼肌组织p-p38 MAPK、ERK1/2、p-NF-κB、IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,淫羊藿多糖低、中、高剂量组和维生素C组小鼠体质量、游泳力竭时间增加(P<0.05,P<0.01),LA、LDH、BUN、MDA含量明显下降(P<0.05,P<0.01),MG、HG、SOD、GSH-Px水平升高(P<0.05,P<0.01),骨骼肌组织p-p38 MAPK、ERK、p-NF-κB、IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白表达水平降低(P<0.05,P<0.01)。结论:淫羊藿多糖可通过抑制p38 MARK/NF-κB信号通路,从而减少代谢产物的堆积、提高抗氧化酶活性、增加机体糖原含量、减轻骨骼肌炎症,起到缓解运动性疲劳的作用。

基于p38MAPK/NF-kB信号通路探讨柴胡加龙骨牡蛎汤干预广泛性焦虑模型大鼠的作用机制

目的:研究柴胡加龙骨牡蛎汤是否可以通过调控抑制p38丝裂原活化蛋白激酶/核转录因子-κB(p38 MAPK/NF-κB)信号通路抑制广泛性焦虑(GAD)大鼠下丘脑区炎症反应,改善GAD大鼠的焦虑样行为,缓解GAD大鼠的焦虑症状。方法:74只Wistar大鼠随机选择12只作为空白组,剩余大鼠采用慢性束缚应激法制造GAD模型大鼠,造模14 d后进行旷场实验(OFT)和高架十字迷宫实验(PMT)检测各组大鼠焦虑样行为,筛选造模成功的大鼠60只,随机分为模型组、柴胡加龙骨牡蛎汤低、中、高剂量组(6、12、24 g·kg^(-1))和地西泮组(1 mg·kg^(-1)),每组12只,连续14 d灌胃相应剂量柴胡加龙骨牡蛎汤和地西泮,给药14 d后继续通过旷场和十字迷宫实验观察大鼠焦虑样行为的变化;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠下丘脑和血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素IL-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(Realtime PCR)检测p38 MAPK、NF-κB p65、NF-κB抑制因子α(IκBα)、钙结合蛋白(Iba-1)mRNA的水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠下丘脑p38 MAPK、磷酸化(p)-p38 MAPK、NF-κB p65、p-NF-κB p65、IκBα蛋白的表达水平;免疫荧光法检测大鼠下丘脑小胶质细胞激活蛋白Iba-1表达情况。结果:与空白组比较,模型组大鼠体质量较轻且皮毛散乱黯黄、易躁易怒、喜在角落蛰伏,OFT边缘运动距离和边缘运动时间显著增加(P<0.01),PMT开臂运动距离、开臂运动时间及进入开臂次数显著减少(P<0.01),下丘脑室旁核小胶质细胞激活标志蛋白Iba-1荧光强度显著升高(P<0.01),血清和下丘脑中IL-1β、IL-6、TNF-α显著增多(P<0.01),下丘脑p38 MAPK、NF-κB p65、p-p38 MAPK、p-NF-κB p65、Iba-1蛋白及mRNA表达明显升高(P<0.05,P<0.01),IκBα蛋白及mRNA表达显著减低(P<0.01)。与模型组比较,柴胡加龙骨牡蛎汤中、高剂量组和地西泮组大鼠体质量较重且皮毛较为光滑、活动较为正常,OFT边缘运动距离和时间明显减少(P<0.05,P<0.01),PMT开臂运动距离及开臂运动时间明显增加(P<0.05,P<0.01),下丘脑小胶质细胞激活标志蛋白Iba-1荧光强度降低(P<0.05,P<0.01),血清和下丘脑组织中IL-1β、IL-6、TNF-α明显降低(P<0.05,P<0.01),下丘脑p38 MAPK、NF-κB p65、p-p38 MAPK、p-NF-κB p65、Iba-1蛋白及mRNA表达明显降低(P<0.05,P<0.01),IκBα蛋白及mRNA表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论:柴胡加龙骨牡蛎汤可通过抑制p38 MAPK/NF-κB信号通路,降低GAD大鼠下丘脑内小胶质细胞活化度、下调促炎因子水平,发挥改善大鼠焦虑样行为、缓解大鼠焦虑状态的作用。

基于TLR2/p38 MAPK/NF-κB信号通路探讨独活寄生汤对类风湿性关节炎大鼠的抗炎作用及机制

目的:探讨独活寄生汤对胶原诱导性关节炎(CIA)模型大鼠的抗炎作用及其对Toll样受体2(TLR2)/p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路的影响。方法:将48只雄性SD大鼠,随机分为以下6组(n=8),正常组、模型组、甲氨蝶呤组、独活寄生汤低、中、高剂量组。采用胶原抗体诱导法于大鼠尾根部注射牛Ⅱ型胶原蛋白建立CIA大鼠模型,模型建立成功后进行灌胃给药。甲氨蝶呤组每次给予2.0 mg·kg^(-1)甲氨蝶呤,每周3次;独活寄生汤低、中、高剂量组每次给予3.8、7.6、15.2 g·kg^(-1)·d^(-1),连续灌胃治疗28 d;正常组和模型组给予等体积生理盐水。通过记录大鼠体质量,观察大鼠足肿胀度,测定关节炎指数、免疫器官指数,微循环检测仪检测大鼠微循环指标变化,苏木素-伊红(HE)染色检测大鼠滑膜组织病理形态的改变及流式细胞术检测滑膜细胞凋亡率以明确独活寄生汤对类风湿性关节炎的治疗作用,采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-17A、γ干扰素(IFN-γ)水平变化,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测TLR2、NF-κB p65、磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)、p38 MAPK、p-p38 MAPK蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠体质量显著降低(P<0.01),足肿胀度、关节炎指数及免疫器官指数显著升高(P<0.01),微血管综合评分及血管阻力显著提高(P<0.01),病理切片可观察到滑膜组织增生明显、炎性细胞大量浸润,血清中TNF-α、IL-1β、IL-17A和IFN-γ表达及滑膜组织TLR2、p-NF-κB p65/NF-κB p65、p-p38 MAPK/p38 MAPK的表达水平均显著升高(P<0.01)。与模型组比较,独活寄生汤低、中、高剂量组大鼠体质量显著升高(P<0.01),足肿胀度、关节炎指数及免疫器官指数明显下降(P<0.05,P<0.01),微血管综合评分及血管阻力明显下降(P<0.05,P<0.01),滑膜组织病理学损伤情况明显好转,滑膜细胞凋亡率显著升高(P<0.01),血清中TNF-α、IL-1β、IL-17A和IFN-γ水平明显下降(P<0.05,P<0.01),滑膜组织TLR2、p-NF-κB p65/NF-κB p65、p-p38MAPK/p38 MAPK的表达水平均明显下降(P<0.05,P<0.01)。结论:独活寄生汤可能通过调节TLR2/p38 MAPK/NF-κB信号通路缓解CIA大鼠体内炎症反应,从而发挥其抗类风湿性关节炎作用。

基于p38 MAPK/NF-κB炎症通路探讨逍遥散联合吡非尼酮对特发性肺纤维化合并抑郁大鼠的调节作用

目的:观察慢性心理应激加重特发性肺纤维化大鼠病情机制及逍遥散的调节作用。方法:60只SD大鼠适应性饲养1周,随机分为假手术组、肺纤维化组、肺纤维化联合抑郁模型组、吡非尼酮组和吡非尼酮+逍遥散组,每组12只。肺纤维化组采用气管滴注博来霉素(5 mg·kg^(-1))制备大鼠模型,同时灌胃0.9%氯化钠溶液;模型组采用气管滴注博来霉素(5 mg·kg^(-1))联合慢性不可预知温和应激制备特发性肺纤维化联合抑郁大鼠模型,同时灌胃0.9%氯化钠溶液;在制备肺纤维化联合抑郁模型同时,吡非尼酮组灌胃吡非尼酮水溶液(50 mg·kg^(-1)),吡非尼酮+逍遥散组每天灌胃吡非尼酮水溶液(50 mg·kg^(-1))和逍遥散水煎液(19.27 g·kg^(-1))。实验持续4周。比较各组大鼠体质量、摄食量、糖水消耗率、旷场行为、肺功能、肺系数、肺组织病理改变及羟脯氨酸(HYP)含量;酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定血清皮质醇(CORT)、促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)、促肾上腺皮质激素(ACTH)含量,血清及海马组织5-羟色胺(5-HT)含量,血清及肺组织白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肺组织IL-1β、TNF-α、IL-6、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)、核转录因子-κB p65(NF-κB p65)mRNA表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测p38 MAPK/NF-κB信号通路相关蛋白表达。结果:与正常组比较,肺纤维化联合抑郁模型组动物体质量增长缓慢,摄食量及糖水消耗率减少,旷场移动总距离及移动平均速度减少,肺功能减弱,肺系数增加(P<0.01),肺组织苏木素-伊红(HE)染色见大量炎性细胞浸润,马松(Masson)染色见条索状蓝染胶原纤维沉积,HYP含量增加(P<0.01),血清CORT、CRH、ACTH水平升高(P<0.05,P<0.01),血清与肺组织IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白及mRNA水平升高,血清及海马组织5-HT水平降低,肺组织p-p38 MAPK、p-NF-κB p65蛋白相对表达升高(P<0.01)。与肺纤维化联合抑郁模型组比较,吡非尼酮+逍遥散组大鼠抑郁和肺纤维化得到有效改善,表现为体质量增长速度加快,摄食量及糖水消耗率增加,旷场移动总距离及移动平均速度增加,肺功能增强,肺系数减少(P<0.01),肺组织HE染色可见炎性细胞减少,Masson染色可见胶原纤维沉积减少,HYP含量减少(P<0.01),血清CORT、CRH、ACTH水平降低(P<0.05,P<0.01),血清与肺组织中IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白及mRNA水平降低(P<0.05,P<0.01),血清及海马组织5-HT水平升高(P<0.05,P<0.01),肺组织p-p38 MAPK、p-NF-κB p65蛋白相对表达降低(P<0.05,P<0.01),逍遥散合吡非尼酮用药效果更为明显。结论:慢性不可预知应激加重了IPF大鼠病情进展,逍遥散联合吡非尼酮用药在改善模型大鼠抑郁样行为同时肺纤维化病情也得到缓解,其机制可能与调节p38 MAPK/NF-κB信号通路,抑制炎症因子表达过多相关。

Maresin-1对急性胰腺炎小鼠炎症因子及组织病理损伤的影响

目的基于p38丝裂原活化蛋白激酶/核转录因子-κB(p38 MAPK/NF-κB)信号通路,探究Maresin-1对急性胰腺炎(AP)小鼠的影响。方法随机将50只小鼠分为假手术组(sham组)、急性胰腺炎组(AP组)、Maresin-1低剂量组(Mar-1 L组)、Maresin-1高剂量组(Mar-1 H组)和p38 MAPK信号通路抑制剂组(SB203580组),每组各10只。除sham组外,其余各组小鼠均采用腹腔注射雨蛙素联合脂多糖(LPS)建立AP模型;sham组注射等量0.9%氯化钠溶液。Mar-1 L组、Mar-1 H组和SB203580组分别在注射Maresin-1和SB203580雨蛙素3 h后,第1次腹腔注射Maresin-1(25、50 ng/kg)和SB203580溶液(5 mg/kg),12 h后进行第2次腹腔注射;sham组和AP组注射等量0.9%氯化钠溶液。采用苏木精-伊红(HE)染色观察小鼠胰腺组织病理损伤;酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测血清淀粉酶、脂肪酶、炎性因子水平;试剂盒测定胰腺组织髓过氧化物酶(MPO)活性;免疫组化法检测胰腺组织中CD68表达;RT-qPCR检测胰腺组织炎性因子及p38 MAPK、NF-κB p65 mRNA的表达;蛋白免疫印迹法(Western-blot)检测胰腺组织p38 MAPK、NF-κB p65蛋白表达。结果sham组小鼠胰腺组织结构完整,无细胞坏死和出血;与sham组比较,AP组可见胰腺组织结构紊乱,腺泡细胞水肿、坏死,胰腺组织病理评分、MPO活性、血清淀粉酶和脂肪酶浓度升高,血清和胰腺组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平升高,IL-4、IL-10水平降低,巨噬细胞数增多(P均<0.05);胰腺组织p38 MAPK、NF-κB p65 mRNA和蛋白水平升高(P<0.05)。与AP组比较,Mar-1 L组、Mar-1 H组、SB203580组胰腺损伤明显减轻,仅见腺泡细胞少量坏死与出血,胰腺组织病理评分、MPO活性、血清淀粉酶和脂肪酶浓度降低,血清和胰腺组织TNF-α、IL-6、IL-1β水平降低,IL-4、IL-10水平升高,胰腺组织p38 MAPK、NF-κB p65 mRNA和蛋白水平降低,巨噬细胞数减少(均P<0.05)。结论Maresin-1能够缓解AP小鼠胰腺组织病理损伤,减轻胰腺组织中性粒细胞和巨噬细胞浸润,降低胰腺及全身炎症反应,其可能通过抑制p38 MAPK/NF-κB信号通路发挥作用。

基于MAPK/NF-κB信号通路探讨甘麦大枣汤对乳腺癌相关抑郁症的治疗作用及机制

目的:观察甘麦大枣汤对乳腺癌相关抑郁的抗抑郁作用,并从丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/核转录因子-κB(NF-κB)通路探讨其调控免疫炎症及神经递质的作用机制。方法:BALB/c小鼠随机分为正常组、模型组、氟西汀组(氟西汀5 mg·kg^(-1)·d^(-1))、甘麦大枣汤低(20 g·kg^(-1))、高(40 g·kg^(-1))剂量组,每组10只。建立小鼠乳腺癌4T1原位移植瘤诱导小鼠抑郁样行为模型,通过悬尾实验和强迫游泳实验评价小鼠抑郁样行为;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测大脑皮层中白细胞介素(IL)-17A、叉头框蛋白P3(FoxP3)、IL-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA表达;流式细胞术检测脾和胸腺免疫细胞亚群比例;液相色谱-质谱联用技术(HPLC-MS)/MS检测大脑皮层内神经递质含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测MAPK和NF-κB通路活化。结果:与模型组比较,甘麦大枣汤40 g·kg^(-1)连续给药4周能明显降低乳腺癌荷瘤动物悬尾和强迫游泳不动时间(P<0.05);IL-1β、IL-17A、TNF-αmRNA表达水平明显降低(P<0.05);T细胞、CD4^(+)T细胞、B细胞、辅助性T细胞17(Th17)、调节性T细胞(Treg)比例升高,CD8^(+)T细胞比例下降(P<0.05);5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)、犬尿氨酸(Kyn)含量与犬尿氨酸/色氨酸(Kyn/Trp)明显下降(P<0.05),5-羟色胺(5-HT)含量增加;磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)、磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)、磷酸化NF-κB p65亚基(p-NF-κB p65)蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论:甘麦大枣汤能够有效治疗肿瘤相关抑郁,其治疗机制与抑制大脑皮层p38 MAPK和ERK,MAPK途径介导的NF-κB信号通路的激活,抑制脑内IL-1β、IL-17A、TNF-α等炎性因子表达,调节脑内5-HT代谢和Kyn/Trp平衡,增加脑内5-HT含量,改善神经炎症有关。

基于“心受气于脾”探讨心痛泰调控p38 MAPK/AP-1对动脉粥样硬化兔的中医证候和VSMC胶原纤维的影响

目的:基于"心受气于脾"探讨心痛泰调控p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)/转录激活因子-1(AP-1)对动脉粥样硬化兔的中医证候积分和血管平滑肌细胞(VSMC)胶原纤维的影响。方法:120只清洁级兔随机分为假手术组,痰瘀互结模型组,心痛泰低剂量组、中剂量组、高剂量组和瑞舒伐他汀组。采用高脂喂养+球囊损伤法,造成痰瘀互结病证结合动脉粥样硬化兔模型,造模后予以相应药物灌胃8周(心痛泰低、中、高剂量组和瑞舒伐他汀组的给药量分别为2.3,4.6,9.2 g·kg^(-1)和0.55 mg·kg^(-1))。给药周期结束时取腹主动脉,苏木素-伊红(HE)染色观察易损斑块的情况;免疫组化法(IHC)测定基质金属蛋白酶-9(MMP-9),组织基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1);马松(Masson)染色观察平滑肌细胞胶原纤维分解情况;蛋白免疫印迹法(Western blot)测定主动脉组织p38 MAPK,AP-1蛋白的表达;采用中医证候评分表评价痰瘀互结证中医证候积分。结果:与模型组比较,心痛泰各剂量组、瑞舒伐他汀组MMP-9含量显著降低,TIMP-1含量显著升高,p38 MAPK蛋白的表达,AP-1的核转位显著降低(P<0.01);与心痛泰低剂量组比较,心痛泰中、高剂量组,瑞舒伐他汀组MMP-9明显降低,TIMP-1明显升高,p38 MAPK蛋白的表达,AP-1的核转位明显降低(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,心痛泰各剂量组、瑞舒伐他汀组的中医证候积分均明显改善(P<0.05,P<0.01);与心痛泰低剂量组比较,心痛泰中、高剂量组,瑞舒伐他汀组的中医证候积分均显著改善(P<0.01)。Masson染色显示,模型组平滑肌纤维排列紊乱,胶原分解增多,纤维帽变薄,斑块易损性增加;与模型组比较,心痛泰各组和瑞舒伐他汀组平滑肌细胞排列较为整齐,胶原纤维分解减少,斑块稳定性增加。结论:心痛泰可下调p38 MAPK,MMP-9的表达,提高TIMP-1的水平,减少AP-1核转位,减少平滑肌细胞胶原纤维的分解,改善痰瘀互结证的中医证候评分。心痛泰可能通过调控p38 MAPK/AP-1信号通路及下游的细胞因子,稳定易损斑块,改善动脉粥样硬化之痰瘀互结证。

健脾解毒方介导p38MAPK信号转导下调幽门螺杆菌诱导的胃癌细胞环氧合酶2启动子活性

目的:探讨幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)对人胃癌MKN45细胞环氧合酶2(Cyclooxygenase-2,COX-2)启动子荧光素酶报告基因重组质粒(pGL3-Basic-COX-2-promoter)活性的影响和健脾解毒方对其的调控作用及可能的机制。方法:将构建的pGL3-Basic-COX-2-promoter转染MKN45细胞,观察H.pylori对其活性的影响。运用p38MAPK特异性抑制剂SB203580阻断p38MAPK信号通路,观察H.pylori对MKN45细胞COX-2启动子活性的影响。Western blot法检测健脾解毒方对H.pylori感染的MKN45细胞p38MAPK信号通路及其下游激活转录因子-2(ATF-2)表达的影响。结果:H.pylori可增加COX-2启动子活性;抑制p38MAPK信号通路后,COX-2启动子活性明显下调;健脾解毒方能够抑制H.pylori诱导的p38MAPK及ATF-)的活性。结论:H.pylori通过p38MAPK信号通路上调胃癌细胞COX-2启动子活性;健脾解毒方通过调控p38MAPK/ATF-2信号通路,抑制COX-2启动子活性,是其防治H.pylori诱发胃癌的机制之一。

针药结合治疗肾虚血瘀型反复种植失败不孕的临床疗效及对血清p38MAPK、JAK/STAT蛋白表达的影响

目的:观察针刺联合中药对反复种植失败(RIF)不孕患者妊娠结局及血清p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、Janus激酶(JAK)/信号转导和转录激活因子(STAT)蛋白表达的影响。方法:将62例拟行人工周期冻融胚胎移植的肾虚血瘀型RIF不孕患者随机分为观察组(31例,脱落4例)和对照组(31例,剔除3例)。对照组予人工周期冻融胚胎移植常规方案治疗。在对照组基础上,观察组予针刺联合中药治疗,针刺穴取百会、关元,双侧内关、子宫、归来、足三里、太冲、肾俞、次髎,每次30 min,隔日1次;中药予补肾活血方,每日1剂。于月经第3~5天开始,治疗至移植前1 d。比较两组患者临床妊娠率、胚胎种植率、活产率、生化妊娠率,治疗前及移植前1 d中医症状评分、血小板计数(PLT)、血浆D-二聚体含量。于治疗前及移植前1 d采用Western blot法检测两组患者血清p38MAPK、JAK、STAT蛋白表达。结果:观察组临床妊娠率、胚胎种植率、活产率高于对照组(P<0.05),生化妊娠率低于对照组(P<0.05)。移植前1 d,两组中医症状评分、PLT、血浆D-二聚体含量较治疗前降低(P<0.05),观察组中医症状评分、血浆D-二聚体含量低于对照组(P<0.05)。移植前1 d,两组患者血清p38MAPK、JAK、STAT蛋白表达均少于治疗前(P<0.05),观察组血清p38MAPK蛋白表达少于对照组(P<0.05)。结论:针药结合能提高肾虚血瘀型RIF不孕患者的临床妊娠率、胚胎种植率、活产率,降低生化妊娠率,其作用机制可能与降低血浆D-二聚体含量及下调血清p38MAPK蛋白表达有关。

狼疮肾炎患者尿蛋白通过p38丝裂素活化蛋白激酶信号途径刺激近端肾小管上皮细胞上调表达骨调素

目的探讨p38丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)信号通路在狼疮肾炎(LN)尿蛋白介导近端肾小管上皮细胞(HK-2)表达骨调素(OPN)中的作用。方法收集狼疮肾炎患者24 h的尿液提纯总蛋白,体外刺激HK-2细胞,分别用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和Western印迹法观察应用p38 MAPK特异性阻断剂SB203580对HK-2细胞表达OPN mRNA及蛋白的影响;免疫荧光法检测OPN及其受体CD44在细胞中的表达。结果狼疮肾炎患者尿蛋白可刺激HK-2 细胞OPN mRNA及蛋白上调表达,并呈时间和浓度依赖性,而SB203580可明显抑制这一作用。结论狼疮肾炎尿蛋白可通过p38 MAPK途径刺激HK-2细胞OPN mRNA和蛋白上调表达。

大黄[庶虫]虫丸经p38 MAPK/NF-κB/TGF-β1通路抑制小鼠硅肺纤维化的机制探讨

目的:运用中医经方大黄[庶虫]虫丸干预小鼠硅肺纤维化模型,观察其对小鼠硅肺纤维化的影响并探讨其作用机制。方法:选用SPF级雄性昆明种小鼠36只,分为正常组,模型组,大黄?虫丸高、中、低剂量(1.560,0.780,0.390 g·kg^(-1))组,汉防己甲素组(0.039 mg·kg^(-1)),每组6只。除正常组外,其余组均用静式染毒法连续40 d吸入二氧化硅(SiO2)粉尘复制小鼠硅肺纤维化模型,并用相应药物进行干预28 d后处死小鼠,获得血清和肺组织样品,运用酶联免疫吸附测定(ELISA)方法检测血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-1β(IL^(-1)β),IL-6和羟脯氨酸(HYP)的含量,运用肺组织样本进行病理切片观察,并采用蛋白免疫印迹法(Western blot),实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)方法检测肺组织中p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK),核转录因子-κB(NF-κB),转化生长因子-β1(TGF-β1),α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),Smad2,Smad3,Smad7的蛋白和mRNA的表达水平。结果:与正常组比较,模型组中的TNF-α,IL^(-1)β,IL-6和HYP的含量均明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,大黄[庶虫]虫丸高剂量组能够明显降低小鼠血清中TNF-α,IL-6和HYP的含量(P<0.05,P<0.01),可见大黄[庶虫]虫丸能够减轻硅肺小鼠肺部炎症。同时,与正常组比较,模型组中的p38 MAPK,NF-κB p65,TGF-β1,α-SMA,Smad2和Smad3蛋白和mRNA表达水平均明显升高(P<0.05,P<0.01),Smad7蛋白和mRNA表达水平均显著降低(P<0.01);与模型组比较,大黄?虫丸高剂量组中的p38 MAPK,NF-κB p65,TGF-β1,α-SMA,Smad2和Smad3蛋白和mRNA表达水平均明显降低(P<0.05,P<0.01),Smad7蛋白和mRNA表达水平均明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论:大黄[庶虫]虫丸能改善硅肺小鼠肺泡炎症、细胞外基质沉积的情况,因而起到减轻纤维化的作用,这可能是通过调节p38 MAPK/NF-κB/TGF-β1通路来实现的。

丝裂原活化蛋白激酶在肿瘤坏死因子α诱导滋养层细胞MMP-9基因表达中的作用

目的探讨早孕滋养层细胞有节制地侵入机制,研究肿瘤坏死因子α(TNFα)诱导滋养层细胞基质金属蛋白酶9(MMP9)基因表达的调控机制。方法2004年南方医科大学南方医院将10-4g/LTNFα分别处理滋养层细胞0、5、10、20、30min后,应用细胞ELISA法测定滋养层细胞中蛋白激酶的活性变化;预先给予丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)的特异性抑制剂处理滋养层细胞30min,然后给予10-4g/LTNFα处理滋养层细胞24h,应用反转录聚合酶链反应(RTPCR)检测滋养层细胞MMP9基因表达的变化。结果发现10-4g/LTNFα均能迅速激活滋养层细胞的细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)、cjun氨基末端激酶(JNK)、p38MAPK激酶活性。TNFα刺激滋养层细胞引起MMP9mRNA表达显著增加,其能被ERK或p38MAPK的特异性抑制剂所抑制。结论ERK和p38MAPK可能是TNFα诱导滋养层细胞MMP9基因表达增加的重要调节物质。

PI3K/AKT途径在HGF介导肝干细胞抗凋亡调控中的作用

目的 研究PI3K(磷脂酰肌醇 3激酶 )和MAPK(丝裂原活化蛋白激酶 )途径如何参与肝干细胞的凋亡调控 ;探讨PI3K和MAPK信号途径在HGF介导的抗凋亡信号中的调控。方法 用大鼠肝干细胞系WBF 344细胞进行实验 ;用流式细胞仪检测细胞及DNA凝胶电泳及流式细胞仪检测细胞凋亡 ;用Westernblot方法检测磷酸化MAPK及PI3K蛋白的表达。结果 发现TNF α对ActD致敏的WBF 344细胞能诱导凋亡 ,并且这种细胞凋亡呈现剂量效应关系 ;HGF对ActD TNF α诱导WBF 344细胞凋亡具有保护作用 ,并且这种保护作用呈剂量效应关系 ;Westernblot结果显示 ,在WB细胞 ,HGF确实能够激活ERK、p38MAPK、PI3K AKT信号转导途径 ;进一步用特异的抑制剂阻断ERK及p38MAPK途径后 ,并不能改变HGF对TNF α诱导凋亡的拮抗作用 ,而阻断PI3K AKT途径后 ,HGF的抗凋亡作用被抑制。结论 TNF α能诱导ActD致敏的肝干细胞发生凋亡 ,而HGF则对这种细胞凋亡有明显的拮抗作用 ;ERK1 2和p38MAPK途径的激活并不参与HGF介导的抗凋亡作用 ,HGF的抗凋亡作用是通过PI3K途径转导的。

有氧运动与饮食干预对肥胖小鼠睾丸氧化应激的影响

目的:通过对肥胖小鼠施加有氧运动与饮食干预,探索运动与饮食干预对肥胖小鼠睾丸氧化应激和p38MAPK-NF-κB通路中的作用。方法:随机将17只C57BL/6J小鼠分为正常饮食组(ND),37只分为高脂饮食组(HFD),高脂饮食脂肪占比40%,喂养12周后,HFD组剔除3只肥胖抵抗小鼠,其余34只肥胖造模成功;随后将ND组分为正常饮食对照组(NC,n=8),正常饮食运动组(NE,n=9),肥胖高脂饮食对照组(OC,n=8),肥胖高脂饮食运动组(OE,n=9),肥胖正常饮食组(ONC,n=8),肥胖正常饮食运动组(ONE,n=9),各组继续饲养8周,其中NE、OE和ONE组以速度20 m/min,60 min/d,6 d/week,进行8周跑台运动,末次运动后36~40 h取血和睾丸组织,ELISA检测血清睾酮和睾丸氧化应激(MDA、T-SOD、T-AOC)水平,RT-PCR和Western blot检测睾丸p38MAPK-NF-κB水平。结果:与NC组比较,OC组小鼠体脂参数、睾丸MDA和睾丸p38MAPK-NF-κB mRNA和蛋白水平明显升高(P<0.01),睾丸SOD、睾丸系数和血睾酮明显降低(P<0.01);NE组小鼠体脂参数明显降低(P<0.05),血清睾酮明显升高(P<0.01)。与OC组比较,OE组小鼠体脂参数、睾丸MDA和睾丸p38MAPK-NF-κB mRNA和蛋白水平明显降低(P<0.05或0.01),睾丸SOD和血睾酮水平明显升高(P<0.01);ONC组小鼠体脂参数、睾丸MDA和睾丸p38MAPK-NF-κB mRNA和蛋白水平明显降低(P<0.01),睾丸SOD水平和睾丸系数明显升高(P<0.05);ONE组小鼠体脂参数、睾丸MDA和睾丸p38MAPK-NF-κB mRNA和蛋白水平明显降低(P<0.01),睾丸SOD、睾丸系数和血睾酮水平明显升高(P<0.01)。结论:肥胖引起小鼠睾丸发生氧化应激,上调睾丸p38MAPK-NF-κB水平,并降低血睾酮水平;运动、饮食和运动×饮食干预均能通过降低体脂,改善睾丸氧化应激,下调睾丸p38MAPK-NF-κB水平。