黑逍遥散调控p38MAPK/ATF2/COX-2信号通路对阿尔茨海默病大鼠神经炎症的影响

目的 观察黑逍遥散对Aβ_(1-42)所致阿尔茨海默病(AD)大鼠学习记忆能力的影响,并从p38MAPK/ATF2/COX-2信号通路介导的炎症级联反应探讨其作用机制。方法 双侧海马注射1μL Aβ_(1-42)溶液复刻AD大鼠模型。筛选造模成功的大鼠50只,随机分为模型组、盐酸多奈哌齐组(0.5 mg/kg)和黑逍遥散低、中、高剂量组(4.25、8.5、17 g/kg),连续给药42 d。Morris水迷宫实验检测定位航行与空间探索能力,HE染色观察海马神经元病理结构改变,ELISA法检测海马组织Aβ_(1-42)、iNOS、PGE_(2)表达,RT-qPCR法检测海马组织p38、ATF2、COX-2 mRNA表达,Western blot法检测海马组织p-p38、p-ATF2、COX-2蛋白表达。结果 与模型组比较,黑逍遥散中、高剂量组和盐酸多奈哌齐组逃避潜伏期缩短(P<0.01),有效区域运动距离、目标象限滞留时间百分比增加(P<0.01),海马CA1区神经元排列有序,胞体清晰,凋亡细胞减少,海马组织Aβ_(1-42)、iNOS、PGE_(2)水平降低(P<0.05,P<0.01),p38、COX-2 mRNA表达降低(P<0.05,P<0.01),p38、p-p38、p-ATF2、COX-2蛋白表达降低(P<0.01)。结论 黑逍遥散可改善Aβ_(1-42)所致AD大鼠的认知能力,其机制可能与阻断p38MAPK/ATF2/COX-2信号通路传导,进而减轻炎症反应有关。

叶酸通过JNK/p38 MAPK信号通路调节小鼠C2C12成肌细胞分化

目的:观察叶酸(folic acid,FA)对小鼠C2C12成肌细胞增殖和分化的影响并探讨其作用机制。方法:(1)在小鼠C2C12成肌细胞增殖阶段,采用不同浓度(0、2.5、5、10和20μmol/L)的FA处理C2C12细胞,显微镜下观察各组细胞的状态,MTT法检测细胞活力,EdU法检测细胞增殖情况。(2)在小鼠C2C12成肌细胞分化阶段,将细胞分为对照(control,Ctrl)组(0μmol/L FA)和FA组(10μmol/L FA),于分化的第2天和第4天,采用免疫荧光染色和Western blot检测成肌细胞分化相关蛋白成肌细胞决定蛋白1(myoblast determination protein 1,MyoD)、成肌蛋白(myogenin,MyoG)和肌球蛋白重链(myosin heavy chain,MyHC)的表达水平,并统计各组细胞肌管形成情况。(3)在小鼠C2C12成肌细胞分化第4天时,加入FA处理0、1、3和6 h,采用Western blot检测各时点c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)、磷酸化JNK(phosphorylated JNK,p-JNK)、p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)和磷酸化p38 MAPK(phosphorylated p38 MAPK,p-p38 MAPK)蛋白水平。(4)将分化4 d的小鼠C2C12成肌细胞分为Ctrl组、FA组、SP600125(JNK特异性抑制剂)组、SB2035805(p38 MAPK特异性抑制剂)组、FA+SP600125组和FA+SB203580组。C2C12成肌细胞先接受10μmol/L的SP600125或SB203580处理1 h,再经10μmol/L的FA处理24 h,FA组经10μmol/L FA处理24 h,Ctrl组不作处理。采用Western blot检测p-JNK、JNK、p-p38 MAPK、p38 MAPK和MyHC蛋白水平。结果:(1)与0μmol/L FA组相比,其余各浓度组的细胞数量明显增多,细胞活力显著提高(P<0.05),EdU阳性细胞率均显著增加(P<0.05)。(2)与Ctrl组相比,FA组MyoD、MyoG和MyHC的表达水平均显著提高(P<0.05),肌管融合指数显著增加(P<0.05或P<0.01)。(3)与0 h组相比,FA处理1、3和6 h后p-JNK/JNK和p-p38 MAPK/p38 MAPK的比值均显著升高(P<0.05或P<0.01),且随着处理时间的延长,p-JNK/JNK和p-p38 MAPK/p38 MAPK的比值呈现逐渐升高的趋势。(4)与Ctrl组相比,FA组p-JNK、p-p38 MAPK和MyHC蛋白水平显著升高(P<0.01);与FA组相比,FA+SP600125组p-JNK和MyHC蛋白水平显著降低(P<0.05),FA+SB203580组p-p38 MAPK和MyHC蛋白水平显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论:FA可以通过激活JNK/p38 MAPK信号通路促进小鼠C2C12成肌细胞分化。

抗奥合剂通过p38 MAPK/NF-κB信号通路和ACE2/Ang1-7/Mas轴缓解急性肺损伤研究

目的探讨抗奥合剂(KAHJ)治疗小鼠急性肺损伤(ALI)的作用及机制,为其可能作为缓解新型冠状病毒(COVID-19)感染后症状的药物提供依据。方法采用网络药理学方法预测KAHJ治疗ALI的主要活性成分、潜在靶点和相关信号通路。将C57BL/6J小鼠随机分为对照组、LPS组和LPS+KAHJ组。LPS+KAHJ组小鼠灌胃KAHJ(4.76 g·kg^(-1)·d^(-1),8.8 mL·kg^(-1)·d^(-1)),其余组小鼠灌胃生理盐水(8.8 mL·kg^(-1)·d^(-1))。14 d后,腹腔注射LPS(5 mg·kg^(-1))诱导ALI模型。收集小鼠血清和肺组织,通过组织病理学观察肺组织的病理变化。采用Western blot、qPCR、ELISA和IHC等方法评估KAHJ对ALI的改善作用。结果通过网络药理学筛选出疾病和药物共同的70个核心靶基因,并显示与多个信号通路密切相关,如MAPK、NF-κB、Apoptosis、COVID-19和肾素-血管紧张素系统(Ras)信号通路等。此外,通过实验验证发现KAHJ能改善小鼠ALI后的炎症和细胞凋亡,减少肺损伤和肺水肿,抑制肺纤维化。同时,KAHJ的作用机制与p38 MAPK和NF-κB的磷酸化以及ACE2/Ang1-7/Mas轴的调控也有着密切关系。结论KAHJ可能通过抑制p38 MAPK/NF-κB信号通路和调控ACE2/Ang1-7/Mas轴缓解ALI,为缓解COVID-19感染后症状提供了补充和替代药物。

灰树花多糖联合顺铂对肺癌模型小鼠p38 MAPK/ATF2信号通路调控作用的实验研究

目的 观察顺铂联合灰树花多糖对Lewis肺癌小鼠的抑瘤作用,并阐述其抑制p38/ATF2信号通路过表达的作用机制.方法 45 只小鼠随机分为3组,模型对照组(n=15),顺铂组(n=15),顺铂联合灰树花组(n=15).3组小鼠均经左腋下皮下注射Lewis细胞悬液0.2 mL,即每只小鼠接种细胞数为105 个.1 周后观察成瘤情况并开始对顺铂组和顺铂联合灰树花组进行相应药物干预,连续2 周.末次给药后,处死小鼠,测量肿瘤组织重量,以及瘤组织中p38、p-p38、ATF-2的表达水平.结果 与模型对照组比较,顺铂组及顺铂联合灰树花组小鼠肿瘤重量显著减轻,肿瘤组织中p38、p-p38、ATF-2的表达水平显著降低,差异有统计学意义(P<0.01);与顺铂组比较,顺铂联合灰树花组小鼠瘤重显著减轻,瘤组织中p38、p-p38、ATF-2的表达水平显著降低,差异有统计学意义(P<0.01).结论 顺铂与灰树花多糖联合应用,对Lewis种植瘤小鼠模型具有明显的抑瘤作用,其作用机制可能是通过抑制p38/ATF2信号的过度活化而实现的.

前列腺素E2诱导大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化过程中p38MAPK信号通路蛋白的表达

目的:探讨前列腺素E2对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化的影响及其机制。方法:将第3代大鼠BMSCs分为3组,空白组用完全培养基培养,前列腺素E2组用含1×10-5 g/L前列腺素E2的培养液培养,前列腺素E2+抑制剂组用p38MAPK阻断剂SB203580处理30 min后用含1×10^-5 g/L前列腺素E2的培养液培养。干预14 d后,Western blot法检测细胞中p38MAPK和磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)蛋白的表达,检测细胞中碱性磷酸酶(ALP)活性,qRT-PCR法检测细胞中ALP、RunX2、骨桥蛋白(OPN)、骨形态发生蛋白2(BMP-2)和核心结合因子α1(Cbfα1)mRNA的表达。结果:与空白组相比,前列腺素E2组细胞中p-p38MAPK/p38MAPK比值、ALP活性,以及ALP、Runx2、OPN、BMP-2、Cbfα1 mRNA的表达水平均升高(P<0.05);与前列腺E2组比较,前列腺素E2+SB203580组细胞中上述各指标降低(P<0.05)。结论:前列腺素E2可通过激活p38MAPK信号通路诱导大鼠BMSCs成骨分化。

TPX2通过p38 MAPK信号通路诱导直肠癌HR-8348细胞凋亡

目的:研究下调非洲爪蟾驱动蛋白样蛋白2靶蛋白(TPX2)对直肠癌细胞凋亡的影响及机制。方法:用TPX2小干扰RNA(si RNA)转染直肠癌HR-8348细胞,记为TPX2 si RNA组;以不做转染的细胞作为正常对照(control)组;以转染si RNA阴性对照(si RNA-NC)的细胞作为si RNA-NC组;用p38 MAPK抑制剂处理敲减TPX2表达后的直肠癌HR-8348细胞记为TPX2 si RNA+SB203580组。RT-qPCR和Western blot测定TPX2的表达水平,MTT法测定细胞存活率,流式细胞术测定细胞凋亡,Western blot测定细胞中p38 MAPK、p-p38 MAPK、cleaved caspase-3和Bcl-2的蛋白水平。结果:TPX2 si RNA转染后HR-8348细胞中TPX2的m RNA和蛋白表达水平显著下降(P <0. 05),而转染si RNA-NC对HR-8348细胞中TPX2的m RNA和蛋白水平没有影响。敲减TPX2表达后的直肠癌HR-8348细胞存活率降低,凋亡率升高,细胞中的cleaved caspase-3、p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白水平明显升高,Bcl-2水平水平降低,与control组比较,差异有统计学意义(P <0. 05)。与TPX2 si RNA组相比,TPX2 si RNA+SB203580组的HR-8348细胞凋亡率、cleaved caspase-3水平和p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白水平明显降低,存活率明显升高(P <0. 05)。结论:TPX2表达下调可以通过激活p38 MAPK促进直肠癌HR-8348细胞凋亡。

抑制免疫抑制因子COX-2对视网膜神经节细胞凋亡的影响及p38MAPK信号的调控作用

目的:探讨环氧合酶-2(COX-2)抑制剂NS-398对H_2O_2诱导的视网膜神经节RGC-5细胞活力和凋亡及p38MAPK信号通路的调控作用。方法:200、300、400、600、800μmol/L的H_2O_2刺激视网膜神经节RGC-5细胞建立H_2O_2损伤模型,根据半数抑制浓度选择H_2O_2的浓度; COX-2抑制剂NS-398处理H_2O_2诱导的RGC-5细胞7 h,SB203580作为p38MAPK信号通路抑制剂,通过MTT法及流式细胞术分别检测细胞的活力和凋亡率; Western blot检测细胞增殖核抗原(PCNA)、p53、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、p-p38的蛋白表达。结果:不同浓度的H_2O_2均可抑制RGC-5细胞活力,且随H_2O_2浓度升高细胞活力降低,由于400μmol/L的H_2O_2可抑制一半的细胞活力,选择作为研究对象;与空白对照组比较,H_2O_2组细胞活力及PCNA蛋白表达均显著降低,细胞凋亡率及p53和p-p38的蛋白表达均显著升高,与H_2O_2组比较,H_2O_2+NS-398组细胞活力及PCNA蛋白表达均显著升高,细胞凋亡率及p53和p-p38的蛋白表达均显著降低(P<0. 05);与H_2O_2+NS-398组比较,H_2O_2+NS-398+SB203580组细胞活力及PCNA蛋白表达均显著升高,细胞凋亡率及p53和p-p38的蛋白表达均显著降低(P<0. 05)。结论:抑制免疫抑制因子COX-2表达可通过调控p38MAPK信号通路提高视网膜神经节细胞活力和抑制细胞凋亡。

IL-17A通过p38 MAPK/ERK1/2信号通路上调慢性鼻窦炎患者MMP-9的表达

目的:探讨白细胞介素17A(IL-17A)在介导慢性鼻窦炎伴鼻息肉(CRSwNP)中基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达的作用及机制,为临床治疗CRSwNP组织重塑寻找新靶点。方法:收集以CRSwNP为诊断的患者15名,鼻中隔偏曲患者15名。采用ELISA、RT-qPCR和免疫组织化学染色方法检测患者相关组织中IL-17A和MMP-9的表达水平;HE染色法观察患者钩突及鼻息肉组织黏膜的病变;Western blot检测鼻息肉原代细胞和人鼻黏膜上皮细胞(HNEpCs)中MMP-9和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路蛋白的表达;细胞免疫荧光观察HNEpCs中MMP-9的表达变化。结果:CRSwNP患者IL-17A和MMP-9的表达明显增加,其鼻部组织黏膜炎症浸润明显。鼻息肉及IL-17A刺激的HNEpCs中细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)和p38磷酸化表达明显增加,而鼻息肉成纤维细胞或HNEpCs予以ERK1/2或p38抑制剂预处理可降低以上蛋白的表达水平。结论:IL-17A可能在CRSwNP的组织重塑中对MMP-9的调控发挥至关重要的作用,其机制可能与p38 MAPK/ERK1/2信号通路有关。

P38MAPK信号通路在骨形态发生蛋白2诱导骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞中的作用

目的研究P38MAPK信号通路在骨形态发生蛋白2(BMP-2)诱导骨髓间充质干细胞(BMSC)分化为心肌样细胞中的调控作用,探讨BMSC向心肌样细胞分化的可能信号机制。方法 BMSC分离与体外培养;分3组:对照组、BMP-2组(诱导剂组)和BMP-2+SB203580组(阻断剂组)。倒置相差显微镜观察细胞的形态学变化;免疫细胞化学检测诱导后BMSC心肌特异性肌钙蛋白T(cTnT)和连接蛋白43(Cx43)的表达;Western blot检测诱导后细胞内p-P38MAPK/P38MAPK的变化。结果 BMP-2诱导15 min,p-P38MAPK蛋白呈弱表达,30 min达到高峰,60 min逐渐降低;用P38MAPK阻断剂SB203580预处理细胞后,p-P38MAPK表达明显降低;与诱导剂组比较,阻断剂组的p-P38MAPK蛋白表达减弱,差异有统计学意义(P<0.05)。诱导4周后,对照组cTnT、Cx43呈阴性表达;诱导剂组和阻断剂组呈阳性表达,且阻断剂组Cx43阳性细胞数多于诱导剂组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 BMP-2可诱导BMSC分化为心肌样细胞,P38MAPK信号通路在诱导过程中发挥负性调节作用。

四逆汤对慢性肾功能衰竭大鼠尿酸水平及p38 MAPK/ERK1/2信号通路的影响

目的探究四逆汤对慢性肾功能衰竭(CRF)大鼠血尿酸(UA)水平及p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)/细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)信号通路的影响。方法2020年10月—2021年1月于山东第一医科大学附属青岛医院动物实验室进行实验。将72只雄性SD大鼠按随机数字表法分成对照组、模型组、氯沙坦组(9 mg/kg)及四逆汤低、中、高剂量组(2.79、5.58、11.16 g/kg),每组12只。除对照组外,其余各组构建CRF大鼠模型,并给予相应药物处理。测定各组大鼠肾脏指数,血清尿素氮(BUN)、肌酐(SCr)、UA水平,血清炎性因子白介素-6(IL-6)、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,观察肾组织病理学变化、细胞凋亡,比较肾组织p38 MAPK、磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)、ERK1/2、磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)蛋白表达。结果与对照组比较,模型组大鼠肾脏指数、血清BUN、SCr、UA、IL-6、IL-1β、TNF-α水平及肾组织细胞凋亡指数、p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-ERK1/2/ERK1/2蛋白水平均显著升高(P<0.05);与模型组比较,氯沙坦组和四逆汤各剂量组上述指标均显著降低,四逆汤低、中、高剂量组均依次降低(F/P=65.365/0.000、64.573/0.000、100.391/0.000、42.909/0.000、284.425/0.000、108.117/0.000、96.423/0.000、187.402/0.000、67.154/0.000、76.286/0.000)。对照组大鼠肾组织无明显病变;模型组大鼠肾小球结构紊乱、肾小球基底膜增厚、肾小管间质水肿、大量炎性细胞浸润,氯沙坦组和四逆汤各剂量组可明显减轻肾损害和炎性反应,尤其是高剂量组。结论四逆汤可减少CRF大鼠的UA水平,改善肾脏病理变化,可能与抑制p38 MAPK/ERK1/2信号通路活化有关。

p38MAPK在结肠癌细胞凋亡中的作用及与COX-2的关系

目的探讨结肠癌细胞p38MAPK介导celecoxib(COX-2选择性抑制剂)抗肿瘤的作用及与COX-2的关系。方法用MTT法检测celecoxib对人结肠癌HT-29细胞生长的作用,用Western blot法测定各组细胞COX-2和Phosph-p38MAPK蛋白表达量,采用流式细胞术检测celecoxib和SB203580(p38MAPK特异性抑制剂)作用后HT-29细胞凋亡和细胞周期分布。结果p38MAPK和COX-2蛋白表达量与对照组(0.23±0.12)(0.95±0.14)相比,celecoxib可使p38MAPK蛋白表达水平明显升高(0.62±0.11),而使COX-2蛋白表达水平降低(0.44±0.11);SB203580使p38MAPK(0.12±0.05)及COX-2蛋白(0.23±0.13)表达水平均降低;SB203580和celecoxib共同作用后,p38MAPK表达量介于celecoxib和SB203580作用之间(0.43±0.12),COX-2表达量下降最为显著(0.15±0.10)。celecoxib和celecoxib+SB203580均可显著诱导HT-29细胞凋亡(P<0.01和P<0.05),与对照组(4.31%)相比,其凋亡率分别为40.95%、26.24%。结论在HT-29细胞中,celecoxib可通过活化p38MAPK而诱导结肠癌细胞凋亡,p38MAPK是COX-2的上游激酶,COX-2的表达水平受p38MAPK调控,并且COX-2可能对p38MAPK有负反馈调节作用。celecoxib是通过COX-2及其以外的p38MAPK通路诱导肿瘤细胞凋亡而发挥抗肿瘤作用的。

平肺口服液对急性放射性肺损伤大鼠肺损伤及p38MAPK/Nrf2/HO-1信号通路的影响

目的探讨平肺口服液对急性放射性肺损伤大鼠肺损伤的影响及其可能作用机制。方法将18只健康雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组及平肺口服液组,每组6只。模型组及平肺口服液组大鼠给予20 Gy X射线全胸单次照射建立急性放射性肺损伤模型,自造模当日开始,平肺口服液组大鼠灌胃平肺口服液20 g/(kg·d),正常组和模型组大鼠灌胃等量生理盐水,均1次/d,连续28 d。观察并记录各组大鼠一般状况及体重;灌胃28 d结束后处死各组大鼠,摘取全肺,观察肺组织大体形态,计算肺指数,HE染色观察肺组织病理形态,对肺泡炎症进行评分,免疫组化法测定肺组织中血红素氧合酶1(HO-1)、核因子E2相关因子2(Nrf2)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)蛋白表达情况。结果平肺口服液组大鼠一般状况明显好于模型组,大鼠脱毛程度较轻,照射后28 d体重明显高于模型组(P<0.05);肺组织色泽、质地、充血水肿情况较模型组轻,无胸腔积液。模型组大鼠肺指数明显高于正常组(P<0.05),平肺口服液组明显低于模型组(P<0.05)。HE染色显示模型组大鼠肺组织发生广泛炎性改变,肺泡炎评分明显高于正常组(P<0.05);平肺口服液组整体炎性改变程度较模型组轻,肺泡炎评分明显低于模型组(P<0.05)。模型组大鼠肺组织中HO-1和p38MAPK蛋白表达IOD值均明显高于正常组(P均<0.05);平肺口服液组大鼠肺组织中HO-1和Nrf2蛋白表达IOD值均明显高于模型组(P均<0.05),p38MAPK蛋白表达IOD值明显低于模型组(P<0.05)。结论平肺口服液可能通过调控p38MAPK/Nrf2/HO-1信号通路减轻急性放射性肺损伤大鼠的肺泡损伤。

基于p38MAPK/Nrf2/HO-1通路探讨清达颗粒对脂多糖诱导活化的小胶质细胞抗氧化作用研究

目的观察清达颗粒(QDG)对脂多糖(LPS)诱导活化的小胶质细胞抗氧化作用,探讨其与p38MAPK/Nrf2/HO-1抗氧化信号通路的可能联系。方法体外培育BV-2小胶质细胞,采用MTT法筛选合适的药物浓度,之后采用LPS(1μg/mL)诱导炎症模型,将其分为对照组、LPS组、LPS+QDG组,并LPS+QDG组设置31.25μg/mL、62.50μg/mL、125.00μg/mL 3个质量浓度亚组,检测各组细胞活性氧(ROS)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、丙二醛(MDA)以及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的表达情况,Western Blot法检测磷酸化p38MAPK(p-p38)、p38MAPK(p38)、转录因子Nrf2、细胞核内Nrf2、血红素加氧酶-1(HO-1)的蛋白表达情况以及p38抑制剂干预LPS诱导的炎症细胞HO-1蛋白的表达情况。结果LPS+QDG组ROS、TNF-α、MDA的释放抑制受到一定程度上促进GSH-Px的释放,并升高p-p38、细胞核内Nrf2以及HO-1蛋白的表达。p38抑制剂干预后下调了LPS+QDG组HO-1蛋白的表达。结论清达颗粒可有效减轻LPS诱导的BV-2小胶质细胞的氧化应激损伤,这可能与激活p38MAPK/Nrf2/HO-1信号转导通路有关。

丁酸梭菌通过激活p38丝裂原活化蛋白激酶/核因子E2相关因子信号通路减轻猪霍乱沙门氏菌导致的猪小肠上皮细胞氧化损伤

本试验旨在研究丁酸梭菌(CB)缓解猪霍乱沙门氏菌(SC)诱导的猪小肠上皮细胞(IPEC-J2细胞)氧化损伤的分子机制。选用IPEC-J2细胞为模型,采用CCK-8法检测细胞活力,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测细胞培养上清液中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)活性和丙二醛(MDA)含量,从而筛选诱导IPEC-J2细胞氧化损伤的SC适宜剂量。CB预处理细胞后,用SC感染细胞,通过小干扰RNA(siRNA)沉默IPEC-J2细胞中核因子E2相关因子(Nrf2)的表达以及p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)抑制剂处理细胞,用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测细胞中p38 MAPK、SOD1、SOD2、GPX1、GPX2和Nrf2的mRNA相对表达量,蛋白印迹法(Western blotting)检测细胞中p38 MAPK和Nrf2蛋白相对表达量。结果表明,CCK-8法和ELISA法确定1×10^(3)CFU/mL为SC诱导IPEC-J2细胞氧化损伤的适宜剂量。与SC组相比,CB+SC组细胞中p38 MAPK、Nrf2及其下游基因在12 h后的mRNA相对表达量均极显著升高(P<0.01)。与对照组相比,siRNA沉默Nrf2基因后,siRNA组培养上清液GPX活性以及细胞中抗氧化酶基因的mRNA相对表达量均显著降低(P<0.05);与siRNA+SC组相比,NC+CB+SC组和siRNA+CB+SC组细胞中抗氧化酶基因的mRNA相对表达量显著升高(P<0.05)。p38 MAPK被抑制后,与p38+SC组相比,p38+CB+SC组培养上清液GPX活性以及细胞中抗氧化酶基因的mRNA相对表达量均显著或极显著升高(P<0.05或P<0.01)。综上所述,CB通过激活p38 MAPK/Nrf2信号通路抗氧化相关基因的表达,缓解SC造成的IPECJ2细胞氧化损伤。

幽门螺杆菌对人胃癌MKN45细胞p38MAPK信号转导通路激活作用的研究

背景与目的:环氧合酶2(cyclooxygenase-2,COX-2)是花生四烯酸转化为前列腺素(prostaglandins,PGs)代谢中重要的限速酶,幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染诱导胃黏膜COX-2的过度表达是胃癌发生的重要环节,但坳感染胃黏膜细胞COX-2表达的机制尚不清楚。本研究旨在揭示Hp对人胃癌MKN45细胞COX-2表达和p38MAPK信号通路的影响,探讨COX-2表达的可能机制。方法:采用实时荧光定量PCR (real time-PCR)检测Hp标准株NCTC11637感染对人胃癌MKN45细胞COX-2 mRNA转录的影响,Western blot检测Hp COX-2蛋白表达的影响和p38MAPK信号通路的激活及其下游因子ATF-2的表达。结果:Hp感染人胃癌MKN45细胞后,COX-2 mRNA的表达明显上调,Hp感染3、6、9、12 h后COX-2 mRNA的表达量分别为正常值的3倍、7.2倍、5.1倍和4.3倍,各时间组COX-2 mRNA表达均明显高于对照组(P<0.01);Hp与MKN45细胞共培养24 h后,COX-2蛋白的表达亦显著增加(P<0.01)。Hp感染MKN45 20 min后,p38MAPK信号通路被激活,60 min达峰值:p38MAPK下游因子ATF-2的表达也明显增加,2 h达高峰,随着作用时间的延长,表达逐渐下降,24 h仍有表达。结论:np感染能诱导人胃癌MKN45细胞COX-2的表达;激活p38MAPK信号通路,增加其下游因子ATF-2的表达,可能是其诱导COX-2表达的机制。

黄芪后处理对大鼠肝纤维化中的影响及TGF-β_1/Smad2、p38MAPK作用

目的:研究黄芪对CCl4诱导的大鼠肝纤维化肝组织中TGF-β1、Smad2和p38MAPK表达的影响,探讨TGF-β信号通路在黄芪后处理中可能的抗纤维化机制。方法:60只Wistar大鼠被随机分成对照组、模型组、黄芪后处理组及鳖甲软肝片组,其中黄芪后处理组又分为小剂量组、常规剂量组和大剂量组,大鼠背部皮下注射CCl4构建肝纤维化模型,分别用HE和VG染色法染色,肝纤维化程度直接在光学显微镜下观测。同时采用SABC免疫组化方法检测各实验组TGF-β1、Smad2和p38MAPK的表达情况。结果:与对照组比较,模型组TGF-β1、Smad2表达明显增强(P<0.05),而p38MAPK表达显著下降(P<0.05)。与模型组比较,黄芪后处理各组中大鼠肝组织中TGF-β1表达均有减弱(P<0.05),且随着黄芪剂量的增加而减少;随着黄芪剂量增加逐步下调Smad2的表达(P<0.05)、上调p38MAPK的表达(P<0.05)。此外,黄芪组大鼠肝脏病理变化显著改善。结论:黄芪后处理明显影响大鼠肝组织TGF-β1信号表达,且对CCl4诱导的大鼠肝纤维化的作用呈剂量依赖性增强,其可能的机制为负性调节TGF-β1,减少Smad2及增强p38MAPK的表达。

枸杞多糖对P38MAPK介导2型糖尿病大鼠背根神经节细胞凋亡的保护作用

目的探讨枸杞多糖对氧化应激激活P38MAPK信号转导通路诱导2型糖尿病大鼠背根神经元细胞凋亡的保护作用及其机制。方法取SD大鼠高脂高糖喂养8周后,腹腔小剂量注射STZ(35 mg/kg)诱导2型糖尿病大鼠模型后,分为模型组、枸杞多糖小剂量组、大剂量组及α-硫辛酸对照组,治疗10周后通过免疫组化方法检测大鼠背根神经节中pP38MAPK及其诱导的凋亡指标Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白的表达。结果经图像分析处理,枸杞多糖大剂量组对糖尿病大鼠背根神经节中Bcl-2蛋白的表达有上调作用,对pP38MAPK、Bax和Caspase-3蛋白的表达有抑制作用,其平均光密度值与模型对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论枸杞多糖可调节机体内的氧化应激状态,通过抑制P38MAPK途径,上调背根神经元细胞中Bcl-2表达,抑制Bax及Caspase-3的表达,从而保护神经细胞免受氧化应激损伤导致的凋亡,这可能是其保护DPN的作用机制之一。

甲酰肽受体2通过p38 MAPK通路参与复发性流产的发生

目的 探讨甲酰肽受体2(FPR2)在复发性流产患者(RSA)绒毛组织中的表达,及其对滋养细胞增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制。明确FPR2对滋养细胞功能的影响,分析其在复发性流产中的作用,并对机制进行探讨。方法 收集临床样本(正常30例,RSA30例),利用免疫组织化学染色、Real-time PCR和Western blotting等方法,分析FPR2在RSA患者和正常绒毛组织间的定位和表达差异;应用CRISPR/Cas-9技术,对人绒毛膜滋养细胞系HTR-8/Svneo的FPR2进行敲降并验证;采用CCK-8实验、划痕实验、Transwell实验检测FPR2敲降后滋养细胞增殖、迁移和侵袭能力改变;单独或联合使用p38 MAPK抑制剂SB203580后,采用免疫荧光染色和Western blotting分析FPR2敲降后磷酸化的p38 MAPK(p-p38 MAPK)及p38 MAPK的表达水平;采用CCK-8实验、划痕实验、Transwell实验检测滋养细胞增殖、迁移和侵袭能力改变。结果 复发性流产患者绒毛组织FPR2表达增加;FPR2敲低显著提高了HTR-8/Svneo细胞增殖、迁移和侵袭能力。FPR2敲低显著上调p-p38 MAPK表达水平,而加入SB203580抑制p38 MAPK通路后,FPR2敲降对滋养细胞的迁移和侵袭能力增强作用被部分逆转。结论 FPR2在RSA患者绒毛滋养细胞中高表达,并通过p38 MAPK信号通路抑制滋养细胞的迁移、侵袭,可能在复发性流产发生中发挥重要作用。

脊髓灰质后角小胶质细胞p38MAPK通路激活与P2X7受体活化在介导硼替佐米诱导的神经病理性疼痛中的关系

小胶质细胞作为中枢神经系统中的主要胶质细胞在疼痛发生发展过程中具有重要作用。在脊髓灰质后角(SDH)小胶质细胞中表达的P2X7R也与痛觉信息的传递有关。本课题研究了BTZ神经病理性疼痛大鼠SDH小胶质细胞p38MAPK信号通路激活与P2X7R活化之间的关系。

舌下特异性免疫治疗对尘螨所致AR患者Th1/Th2细胞平衡及p38MAPK信号通路的影响

目的研究舌下特异性免疫治疗对尘螨所致变应性鼻炎(AR)患者的Th1/Th2细胞平衡和p38MAPK信号通路的影响。方法选取2020年1月-2022年7月江西省信丰县人民医院收治的尘螨所致AR患者60例展开此次研究。根据随机数字表法分为对照组和观察组,每组各30例患者。对照组应用粉尘螨滴剂进行标准化治疗,观察组在对照组标准化治疗的基础上,运用舌下特异性免疫治疗。所有患者均治疗1年,比较两组的鼻部症状总评分(TNSS)、Th1/Th2细胞因子(IL-2、IL-4、IFN-γ)、血清特异性免疫球蛋白E(sIgE)、特异性免疫球蛋白G4(sIgG4)水平差异和p38MAPK信号通路。结果治疗前,两组的TNSS各部分(鼻塞、流涕、鼻痒、喷嚏)评分和总评分、Th1/Th2细胞因子表达、血清sIgE、sIgG4水平无明显差异(P>0.05);治疗后,两组的TNSS各部分评分和总评分均明显降低,且观察组明显低于对照组(P<0.05),两组Th2细胞因子(IL-4)水平均下降,观察组明显低于对照组,Th1细胞因子(IL-2、IFN-γ)水平均升高,观察组明显高于对照组;两组血清sIgE水平均降低,对照组明显高于观察组,两组血清sIgG4水平均上升,对照组明显低于观察组(P<0.05)。结论舌下特异性免疫治疗可以促进尘螨所致AR患者Th1/Th2平衡,改善机体炎症因子水平,调节p38MAPK信号通路,值得临床推广应用。