基于p38MAPK/Nrf2/HO-1通路探讨清达颗粒对脂多糖诱导活化的小胶质细胞抗氧化作用研究

目的观察清达颗粒(QDG)对脂多糖(LPS)诱导活化的小胶质细胞抗氧化作用,探讨其与p38MAPK/Nrf2/HO-1抗氧化信号通路的可能联系。方法体外培育BV-2小胶质细胞,采用MTT法筛选合适的药物浓度,之后采用LPS(1μg/mL)诱导炎症模型,将其分为对照组、LPS组、LPS+QDG组,并LPS+QDG组设置31.25μg/mL、62.50μg/mL、125.00μg/mL 3个质量浓度亚组,检测各组细胞活性氧(ROS)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、丙二醛(MDA)以及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的表达情况,Western Blot法检测磷酸化p38MAPK(p-p38)、p38MAPK(p38)、转录因子Nrf2、细胞核内Nrf2、血红素加氧酶-1(HO-1)的蛋白表达情况以及p38抑制剂干预LPS诱导的炎症细胞HO-1蛋白的表达情况。结果LPS+QDG组ROS、TNF-α、MDA的释放抑制受到一定程度上促进GSH-Px的释放,并升高p-p38、细胞核内Nrf2以及HO-1蛋白的表达。p38抑制剂干预后下调了LPS+QDG组HO-1蛋白的表达。结论清达颗粒可有效减轻LPS诱导的BV-2小胶质细胞的氧化应激损伤,这可能与激活p38MAPK/Nrf2/HO-1信号转导通路有关。

P38MAPK-Nrf2-HO-1信号通路在大鼠机械通气所致肺损伤中作用的研究

目的研究P38MAPK-Nrf2-HO-1信号通路在机械通气肺损伤中各因子的表达情况,明确该通路在抗氧化应激中的相关作用及机制。方法50只大鼠分成5组,A组正常对照组、B组为大潮气量通气组(High Tidal Volume,HTV)、C组大潮气量通气+P38MAPK抑制剂组、D组大潮气量通气+P38MAPK抑制剂+Nrf2抑制剂组、E组大潮气量通气+P38MAPK抑制剂+锌原卟啉组。A组正常对照;B组行大潮气量机械通气2 h;C、D、E三组在实验前2 h应用特异性抑制剂预处理再行大潮气量机械通气2 h。实验结束后取肺组织光镜观察肺组织病理学改变并进行弥漫性肺泡损伤系统(diffuse alveolar damage,DAD)评分;测定髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)活性;计算肺湿/干质量比(W/D);酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肺泡灌洗液中肿瘤坏死因子(TNF-α)的水平;Western Blot检测P38MAPK和H0-1表达情况。结果P38MAPK抑制剂组和大潮气量通气组、P38MAPK抑制剂组+Nrf2抑制剂组、大潮气量通气+P38MAPK抑制剂+锌原卟啉组分别比较DAD评分、W/D、MPO及TNF-α差异均具有统计学意义(P<0.05);大潮气量通气组、P38MAPK抑制剂组+Nrf2抑制剂组、大潮气量通气+P38MAPK抑制剂+锌原卟啉组之间相互比较DAD评分、W/D、MPO及TNF-α差异均无统计学意义(P>0.05);HO-1的表达量在P38MAPK抑制剂组中最高,与其他各组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论使用P38MAPK抑制剂可以显著减少大鼠机械通气相关肺损伤,其机制是通过上调体内Nrf2表达,进而启动内源性抗氧化途径,然后激活下游HO-1的表达来降低肺毛细血管通透性,抑制炎症因子、炎症细胞的趋化,抑制细胞凋亡。

平肺口服液对急性放射性肺损伤大鼠肺损伤及p38MAPK/Nrf2/HO-1信号通路的影响

目的探讨平肺口服液对急性放射性肺损伤大鼠肺损伤的影响及其可能作用机制。方法将18只健康雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组及平肺口服液组,每组6只。模型组及平肺口服液组大鼠给予20 Gy X射线全胸单次照射建立急性放射性肺损伤模型,自造模当日开始,平肺口服液组大鼠灌胃平肺口服液20 g/(kg·d),正常组和模型组大鼠灌胃等量生理盐水,均1次/d,连续28 d。观察并记录各组大鼠一般状况及体重;灌胃28 d结束后处死各组大鼠,摘取全肺,观察肺组织大体形态,计算肺指数,HE染色观察肺组织病理形态,对肺泡炎症进行评分,免疫组化法测定肺组织中血红素氧合酶1(HO-1)、核因子E2相关因子2(Nrf2)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)蛋白表达情况。结果平肺口服液组大鼠一般状况明显好于模型组,大鼠脱毛程度较轻,照射后28 d体重明显高于模型组(P<0.05);肺组织色泽、质地、充血水肿情况较模型组轻,无胸腔积液。模型组大鼠肺指数明显高于正常组(P<0.05),平肺口服液组明显低于模型组(P<0.05)。HE染色显示模型组大鼠肺组织发生广泛炎性改变,肺泡炎评分明显高于正常组(P<0.05);平肺口服液组整体炎性改变程度较模型组轻,肺泡炎评分明显低于模型组(P<0.05)。模型组大鼠肺组织中HO-1和p38MAPK蛋白表达IOD值均明显高于正常组(P均<0.05);平肺口服液组大鼠肺组织中HO-1和Nrf2蛋白表达IOD值均明显高于模型组(P均<0.05),p38MAPK蛋白表达IOD值明显低于模型组(P<0.05)。结论平肺口服液可能通过调控p38MAPK/Nrf2/HO-1信号通路减轻急性放射性肺损伤大鼠的肺泡损伤。

虎杖苷通过p38 MAPK/Nrf2/HO-1通路减轻小鼠哮喘模型气道炎症

目的 研究虎杖苷能否减轻小鼠哮喘模型气道炎症,并探究其作用是否与p38 MAPK/Nrf2/HO-1通路有关。方法 建立OVA诱导的小鼠哮喘模型,腹腔注射30、45 mg·kg^(-1)的虎杖苷进行治疗,对照组用生理盐水代替。HE、PAS、Masson染色观察肺组织病理学变化;Diff-Quick染色分类及计数支气管肺泡灌洗液(BALF)中的炎性细胞总数;ELISA法检测小鼠BALF中Ig E的表达水平;双氢罗丹明(DHR)-123方法检测小鼠BALF细胞中ROS含量;试剂盒检测小鼠BALF中抗氧化酶SOD、CAT活性及MDA含量;免疫组化检测肺组织中HO-1的表达;Western blot法检测小鼠肺组织中p-p38 MAPK的表达;Western blot及real-time PCR检测小鼠肺组织中Nrf2、HO-1的蛋白和mRNA表达。结果 虎杖苷治疗明显降低小鼠肺组织中的炎性细胞浸润、黏液分泌和杯状细胞的增生以及胶原沉积;减少BALF中炎症细胞数量,降低BALF中总Ig E及ROS的表达水平;提高SOD、CAT等抗氧化酶的水平,并降低MDA水平;虎杖苷降低小鼠肺组织中p38 MAPK的磷酸化,提高Nrf2、HO-1 mRNA及蛋白的表达,并促进Nrf2的核转移。结论 在OVA诱导的哮喘小鼠模型中,虎杖苷通过抗氧化途径发挥抗炎作用,其作用机制可能是通过p38 MAPK/Nrf2/HO-1通路实现的。

MAPK信号通路及STAT3、STAT5A/B在银屑病皮损中表达增高

目的检测寻常型银屑病患者皮损中p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)、细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、丝氨酸/苏氨酸激酶(Akt)、蛋白S6激酶1(p70S6k)、核因子-кB(NF-кB)、信号传导及转录激活因子3(STAT3)、信号传导及转录激活因子5(STAT5A/B)、钙反应元件结合蛋白(CREB)的蛋白表达情况,探讨这些因子在银屑病中的作用。方法收集27例寻常型银屑病患者皮损(银屑病组)及19例健康者皮肤组织(对照组),应用高灵敏MILLIPLEX MAP试剂及Luminex仪检测并定量9种因子的蛋白表达,比较两组之间的表达水平。结果 p38、ERK1/2、JNK、STAT3、STAT5A/B在银屑病组的表达量高于对照组,差异均有统计学意义(均P <0.05);STAT5A/B与p38、ERK1/2、JNK、STAT3呈正相关(均P <0.05)。结论 JNK、p38、ERK1/2、STAT3、STAT5A/B在寻常型银屑病中表达增高,且STAT5A/B与p38、ERK1/2、JNK、STAT3有正相关性,表明STAT5A/B与MAPK因子互相作用,可能共同参与银屑病发病机制。