龙血素B通过P38MAPK信号通路调控MC3T3-E1成骨分化和骨形成的机制

目的:探究龙血素B对小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1细胞)成骨分化和骨形成的影响以及其通过P38MAPK信号通路调控成骨分化和骨形成的机制。方法:培养MC3T3-E1细胞,加入不同浓度(0、15、30、60、90、120μmol/L)龙血素B,采用CCK8法和流式细胞术(FCM)检测不同时间(24h、48h、72h)MC3T3-E1细胞增殖能力和凋亡情况,确定龙血素B促MC3T3-E1细胞成骨最佳的药物浓度及作用时间。培养MC3T3-E1细胞并分为空白组(不作干预),龙血素B组(加入龙血素B共培养),龙血素B+阻断剂组(加入龙血素B和P38抑制剂SB203580共培养),进行干预实验;采用碱性磷酸酶(ALP)活性检测试剂盒测定各组细胞ALP活性,qRT-PCR法检测各组细胞骨桥蛋白(OPN)基因、骨钙素(OCN)基因、骨唾液蛋白(BSP)基因表达水平,茜素红染色法观察各组细胞骨形成能力。结果:龙血素B可促进MC3T3-E1细胞增殖并抑制其凋亡,效果与浓度和干预时间相关,在90μmol/L浓度下干预48h促MC3T3-E1细胞生长作用最强;干预结束后第1、3、5天,龙血素B组细胞ALP活性较空白组升高,龙血素B+阻断剂组细胞ALP活性较龙血素B组降低(P<0.05);龙血素B组细胞OPN、OCN、BSP基因表达水平较空白组升高,龙血素B+阻断剂组细胞OPN、OCN、BSP基因表达水平较龙血素B组降低(P<0.05);干预结束后第21天,龙血素B组细胞钙化结节区域面积较空白组增大,龙血素B+阻断剂组细胞钙化结节区域面积较龙血素B组减小(P<0.05)。结论:龙血素B可提高MC3T3-E1细胞增殖活性,并通过激活P38MAPK信号通路促进MC3T3-E1细胞成骨分化和骨形成。

肺纤方提取物对肺间质纤维化大鼠VEGFR1介导的p38MAPK/PI3K信号通路表达的影响

目的:探讨肺纤方提取物对肺间质纤维化大鼠血管新生的影响。方法:将大鼠分为假手术组、模型组、泼尼松组、氯沙坦组、肺纤方大、中、小剂量组7组,除假手术组外,采用气管插管灌注博莱霉素3mg/kg进行大鼠肺间质纤维化造模;造模第2天予以药物灌胃干预。于14d及28d分两批进行动物处理,免疫组化SP法检测VEGFR1、p38MAPK、PI3K蛋白表达。结果:肺纤方大剂量组均减轻VEGFR1、p38MAPK、PI3K蛋白表达,较模型组差异显著(P<0.05)。结论:肺纤方通过减少肺泡炎及纤维化修复时异常血管新生介导的胶原沉积而具有抗肺间质纤维化作用。

TPPU通过抑制p38 MAPK/NF-κB p65信号通路对阿尔茨海默病细胞模型的抗神经炎症作用

目的在Aβ25-35诱导的阿尔茨海默病(AD)小胶质细胞(BV2细胞)模型中,采用对BV2细胞进行干预,探讨1-三氟甲氧基苯基-3-(1-丙酰哌啶-4-基)脲(TPPU),TPPU是否具有抗神经炎症作用及其可能的抗炎机制。方法利用Aβ25-35作用BV2细胞构建AD细胞模型,CCK8法分别检测不同浓度Aβ25-35和TPPU处理对BV2细胞活性的影响,最终选择20μM Aβ25-35诱导BV2细胞48 h作为造模组,0.1μM TPPU预处理BV2细胞3h,20μM Aβ25-35诱导BV2细胞48 h作为治疗组进行后续实验。利用ELISA法检测丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,倒置荧光显微镜检测活性氧(ROS)产生,real-time PCR检测小胶质细胞M1表型促炎因子肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素-1β(IL-1β)基因mRNA表达水平和检测M2表型抗炎因子IL-10及标志物Arg1基因mRNA表达水平。通过Western blot法检测细胞中炎症因子TNF-α蛋白及p38 MAPK/NF-κB p65信号通路相关蛋白表达水平。结果与对照组相比,模型组BV2细胞活力降低(P<0.05),ROS显著升高(P<0.05),MDA含量显著增多(P<0.05),SOD活性显著下降(P<0.05),TNF mRNA、IL-1βmRNA表达水平明显上调(P<0.05),IL-10 mRNA、Arg1 mRNA表达水平明显下调(P<0.05),TNF-α蛋白及p-p38 MAPK、p-NF-κB p65蛋白表达明显上调(P<0.05)。与模型组相比,经TPPU预处理后,BV2细胞活力明显升高(P<0.05),ROS显著降低(P<0.05),MDA含量显著下降(P<0.05),SOD活性显著提高(P<0.05),TNF mRNA、IL-1βmRNA表达水平明显下调(P<0.05),IL-10 mRNA、Arg1 mRNA表达水平明显上调(P<0.05),TNF-α蛋白及p-p38 MAPK、p-NF-κB p65蛋白表达明显下调(P<0.05)。结论TPPU抑制Aβ25-35诱导的BV2细胞炎症反应,促进BV2细胞由M1表型向M2表型极化,其机制可能与抑制p38MAPK/NF-κB p65信号通路激活有关。

熊果酸(UA)对大鼠活化型肝星状细胞(HSC)的NADPH氧化酶(NOX)亚基及PI3K/Akt、P38MAPK信号通路活化的影响

目的观察熊果酸(ursolic acid,UA)对大鼠活化型肝星状细胞-6(hepatic stellate cell T6,HSC-T6)NADPH氧化酶(NAPDH oxidase,NOX)亚基及其调控的磷脂酰肌醇-3-羟激酶/蛋白激酶(phosphatidyl inosit013-kinase/Akt,PBK/Akt)、P38丝裂原活化蛋白激酶(P38 mitogen-activated protein kinase,P38MAPK)信号通路及其对基质金属蛋白酶组织抑制剂-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)、基质金属蛋白酶-1(metalmatrix proteinase-1,MMP-1)蛋白表达的影响,并探讨其机制。方法取对数生长期的HSC-T6细胞,随机分成6组:空白对照组、瘦素组(100 ng/mL)、UA干预组(UA 50μmol/L+瘦素)、NOX抑制剂DPI干预组(DPI 20μmol/L+瘦素)、P38MAPK抑制剂SB203580干预组(SB203580 10μmol/L+瘦素)及PI3K抑制剂LY294002干预组(LY294002 10μmol/L+瘦素)。采用Western blot法分别检测NOX亚基gp91^(phox)、p22^(phox)、p67^(phox)、Rac1蛋白表达;信号通路PI3K、Akt、P38MAPK的活化及TIMP-1、MMP-1蛋白表达。结果 UA能显著抑制瘦素诱导的gp91^(phox)、p22^(phox)、p67p^(phox)、Rac1蛋白表达(P均<0.01),但UA对gp91^(phox)、p67^(phox)蛋白表达的抑制作用不及DPI和LY294002。UA能抑制瘦素诱导的PI3K蛋白表达及Akt、P38MAPK蛋白磷酸化(P均<0.01),与DPI及LY294002作用的差异无统计学意义。UA能抑制瘦素诱导的TIMP-1蛋白表达,同时促进MMP-1蛋白表达(P均<0.01)。结论 UA能抑制瘦素诱导的大鼠HSC-T6细胞NOX亚基gp91p^(phox)、p22ph^(phox)、p67p^(phox)、Rac1表达及PI3K/Akt、P38MAPK信号通路的活化;其下调TIMP-1蛋白及上调MMP-1蛋白表达的机制可能与UA抑制NOX调控的PI3K/Akt及P38MAPK信号通路有关。

P38MAPK和PI3K/Akt信号通路在大鼠糖尿病神经病理性疼痛中的交互作用

目的观察p38MAPK和PI3K/Akt信号通路在大鼠糖尿病神经病理性疼痛中的交互作用。方法 Wistar大鼠腹腔单次注射链脲菌素65mg/kg制作糖尿病神经病理痛模型。4周后用vonfrey纤维测双后足机械痛阈,痛阈明显下降为糖尿病神经病理性疼痛造模成功。将96只成模大鼠随机均分为三组:糖尿病神经病理痛组(D组),PI3K抑制药组(E组)和p38MAPK抑制药组(F组)。另取同窝大鼠32只作为对照组(C组)。成模后的每周周一,E组和F组大鼠分别静脉注射PI3K抑制药Wortmannin0.5mg/kg和p38MAPK抑制药SB2035801mg/kg,直至处死大鼠。于给药前(T1)和给药后第2周末(T2)、第4周末(T3)、第6周末(T4)分别随机取8只大鼠,检测机械缩足反应阈值(MWT)、神经传导速度(NCV)、脊髓和背根神经节(DRG)磷酸化Akt(p-Akt)水平和磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)水平。结果与C组比较,D、E和F组在T1～T4时MWT下降,NCV减慢,p-Akt和p-p38MAPK水平升高(P<0.05);与D组比较,E和F组在T2～T4时MWT升高,NCV增快,E和F组p-Akt明显下降,F组p-p38MAPK水平明显下降(P<0.05)。结论 P38MAPK通过激活其下游的PI3K/Akt信号通路参与了糖尿病大鼠神经病理痛的形成和维持。

补肾活血方对人成骨细胞的增殖和分化中p38MAPK及PI3K/Akt信号转导通路的影响

目的通过观察补肾活血方含药血清对人成骨细胞的增殖分化的影响,研究补肾活血方对p38 MAPK和PI3K/Akt信号转导通路的活性相互关联及影响,以探讨补肾活血方临床防治骨质疏松症的作用机制。方法将人成骨细胞株分为空白组(Control组)、补肾活血方含药血清组(Z组)、含药血清+p38 MAPK通路抑制剂SB203580组(SB组),含药血清+PI3K/Akt通路抑制剂LY294002组(LY组)、含药血清+SB203580+LY294002组(SB+LY组),通过四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测成骨细胞的增殖情况,生化方法分析检测成骨细胞碱性磷酸酶(ALP)的活性,采用Western blot法检测p38 MAPK通路磷酸化p38(p-p38)和PI3K/Akt通路磷酸化AKT(p AKT)的表达水平。结果补肾活血方含药血清能促进成骨细胞的增殖,使成骨细胞的分化增强,与Control组比较差异均有统计学意义(P<0.01);阻断p38 MAPK通路后,对成骨细胞的增殖无明显抑制(P>0.05),而阻断PI3K/Akt通路后细胞增殖下降(P<0.01);两条通路对成骨细胞的分化功能均有显著抑制作用(P<0.01);Western blot结果显示,补肾活血方含药血清能刺激p-p38和p Akt表达,阻断p38 MAPK和PI3K/Akt信号转导通路后,p-p38含量和p Akt明显减少(P<0.01);补肾活血方激活的两条通路之间存在一定的关联性,可互相影响。结论补肾活血方通过PI3K/AKT信号通路调控成骨细胞的增殖,通过同时激活p38 MAPK和PI3K/AKT两条信号通路介导成骨细胞的分化,这可能是补肾活血方临床治疗OP的作用机制之一。

高良姜素通过PI3K/Akt及p38-MAPK信号通路增强胃癌SGC-7901细胞对阿帕替尼的敏感性

目的探讨高良姜素对阿帕替尼抗胃癌作用的影响及可能机制。方法体外培养胃癌SGC-7901细胞,3-( 4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(M TT)法筛选出高良姜素和阿帕替尼抑制胃癌细胞增殖的合适浓度。将胃癌细胞分为4组:空白对照组、高良姜素组、阿帕替尼组和高良姜素+阿帕替尼组。MTT法检测细胞增殖活力;流式细胞术检测细胞凋亡率;细胞划痕实验和Transwell小室实验分别检测细胞迁移和侵袭能力;Westernblot检测细胞凋亡及PI3K/Akt及p38-MAPK信号通路相关蛋白表达。结果阿帕替尼和高良姜素均显著抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖,并呈浓度依赖性(P<0 .05), 20mg/L阿帕替尼和300mg/L高良姜素是最佳的干预浓度。与20mg/L阿帕替尼组相比,高良姜素+阿帕替尼组可以明显抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖、迁移和侵袭(P<0.05)。流式细胞术结果显示,高良姜素+阿帕替尼组对胃癌SGC-7901细胞促凋亡作用明显优于20mg/L阿帕替尼组(P<0.05)。Westernblot结果显示,高良姜素+阿帕替尼组Bcl-2相关X蛋白(Bax)、磷酸化蛋白激酶B( p-Akt)、磷酸化丝裂原活化蛋白激酶(p-p38)蛋白表达明显高于20mg/L阿帕替尼组,B淋巴细胞瘤-2( Bcl-2)蛋白明显低于20mg/L阿帕替尼组(P<0 .05)。结论高良姜素可能通过抑制PI3K/Akt和激活p38-MAPK信号通路增强阿帕替尼抗胃癌SGC-7901细胞的作用。

落新妇苷通过激活PI3K/AKT信号通路和抑制P38MAPK信号通路减轻H2O2诱导的PC12细胞损伤

目的研究落新妇苷对H 2O 2诱导的氧化应激损伤的PC12细胞影响。方法将PC12细胞分为5组:对照组、H 2O 2组及不同浓度(1μmol/L、10μmol/L、20μmol/L)落新妇苷组。采用CCK8实验检测各组细胞的活力;Annexin V-FITC/PI细胞凋亡实验检测各组细胞凋亡率;Western blot检测PI3K、AKT、Caspase3和P38蛋白及其磷酸化激活蛋白的表达水平。结果与H 2O 2组相比,落新妇苷组细胞的活力显著提高,细胞凋亡率明显降低,活化的凋亡相关蛋白Cleaved Caspase3表达水平降低,PI3K/AKT途径相关蛋白p-PI3K和p-AKT的表达水平升高,P38 MAPK途径重要蛋白p-P38的表达水平降低。结论落新妇苷对H 2O 2诱导的氧化应激损伤的PC12细胞有明显保护作用;这种保护作用可能是通过激活PI3K/AKT信号通路及抑制P38MAPK信号通路实现的。

基于PI3K/Akt/p53信号通路探讨白花蛇舌草乙酸乙酯萃取物诱导急性髓系白血病细胞凋亡的作用

目的通过评估白花蛇舌草乙酸乙酯萃取物(EAEHDW)对磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/p53信号通路传导调节作用,探讨其抑制急性髓系白血病M2型(AML-M2)细胞株Kasumi-1增殖及诱导凋亡的机制。方法利用乙酸乙酯从白花蛇舌草中萃取制备得到EAEHDW,高效液相色谱串联质谱装置检测样品纯度。设置空白组,将浓度分别为0.02 mg/mL、0.04 mg/mL、0.06 mg/mL、0.08 mg/mL、0.10 mg/mL的EAEHDW加入对数生长期的Kasumi-1细胞株,采用MTT法检测不同浓度EAEHDW作用不同时间后Kasumi-1细胞存活率,采用Annexin V/PI流式细胞术检测不同浓度EAEHDW作用24 h后Kasumi-1细胞凋亡情况,采用Western blot法检测不同浓度EAEHDW(0.02 mg/mL、0.04 mg/mL、0.06 mg/mL)作用24 h后Kasumi-1细胞中含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)家族蛋白及PI3K/Akt/p53信号传导通路蛋白表达情况。结果不同浓度的EAEHDW干预后,细胞存活率较空白组明显降低,细胞凋亡率较空白组明显升高,且细胞存活率随着作用时间的延长和药物浓度的增加而下降越明显,细胞凋亡率随着药物浓度的增加而升高越明显,差异均有统计学意义(P均<0.05);不同浓度的EAEHDW作用于Kasumi-1细胞后,细胞中多聚ADP核糖聚合酶(PARP)、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、细胞色素C(Cyto-C)、p53蛋白相对表达量均明显升高(P均<0.05),Akt、磷酸化Akt(p-Akt)、鼠双微染色体2(MDM2)、磷酸化MDM2(p-MDM2)蛋白相对表达量均明显降低(P均<0.05)。结论EAEHDW可明显抑制髓系白血病Kasumi-1细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与影响Caspase家族蛋白表达和抑制PI3K/Akt/p53信号通路导致p53激活有关。

迷迭香酸衍生物RAD-9通过PI3K/Akt和p38 MAPK信号通路诱导胃癌MGC-803细胞凋亡

目的研究迷迭香酸衍生物RAD-9诱导胃癌MGC-803细胞凋亡的作用及其机制。方法 MTT法观察RAD-9对胃癌MGC-803细胞增殖的抑制作用;流式细胞术检测细胞的凋亡;Hoechst 33258染色法观察RAD-9对MGC-803细胞核凋亡形态学的影响;Western blot检测RAD-9干预MGC-803细胞36 h后,对Akt、p-Akt、p38 MAPK、p-p38 MAPK蛋白及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、caspase-3的影响。结果MTT结果显示,RAD-9呈时间、浓度依赖性抑制胃癌MGC-803细胞增殖;流式细胞术结果显示,RAD-9对胃癌MGC-803细胞有明显的促凋亡作用(P<0.01);Hoechst 33258染色实验结果显示,RAD-9干预胃癌MGC-803细胞36 h后,细胞核呈现典型凋亡形态学改变;Western blot结果显示,RAD-9干预胃癌MGC-803细胞36 h后,Bcl-2蛋白表达水平明显降低,Bax、caspase-3蛋白表达水平明显提高,Akt、p-Akt蛋白表达水平明显下调,p38 MAPK、p-p38 MAPK蛋白表达水平明显上调(P<0.01)。结论 RAD-9能抑制胃癌MGC-803细胞生长,且能诱导其凋亡,其机制可能与抑制PI3K/Akt和激活p38 MAPK信号通路相关。

lncRNA SNHG12靶向抑制miR-495-3p进而调控PI3K/Akt信号通路对前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探究长链非编码RNA(lncRNA)核仁小分子RNA宿主基因12(SNHG12)靶向抑制miR-495-3p/磷脂肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路对前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测前列腺癌组织和细胞(LNCaP、C4-2、DU145)中SNHG12、miR-495-3p相对表达水平(将其中的DU145细胞分为si-NC组、si-SNHG12组、si-SNHG12+anti-miR-NC组、si-SNHG12+anti-miR-495-3p组,4组检测);双荧光素酶报告实验检测SNHG12与miR-495-3p靶向关系;MTT法检测细胞增殖;Transwell检测细胞迁移和侵袭;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测增殖细胞核抗原(PCNA)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)蛋白相对表达水平。结果 在前列腺癌组织和细胞(LNCaP、C4-2、DU145)中SNHG12相对表达水平明显升高,miR-495-3p相对表达水平明显降低(P<0.05);敲低SNHG12可降低DU145细胞活性、PCNA、N-cadherin蛋白相对表达水平,减少迁移及侵袭细胞数,增加E-cadherin蛋白相对表达水平(P<0.05);SNHG12可靶向负调控miR-495-3p,下调miR-495-3p可逆转敲低SNHG12对前列腺癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响。与si-NC组相比,si-SNHG12组p-PI3K、p-Akt蛋白相对表达水平明显降低(P<0.05);与si-SNHG12+anti-miR-NC组相比,si-SNHG12+anti-miR-495-3p组p-PI3K、p-Akt蛋白相对表达水平明显增加(P<0.05)。结论 lncRNA SNHG12可能通过靶向抑制miR-495-3p/PI3K/Akt信号通路促进前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭。

尿毒清颗粒对糖尿病肾病大鼠肾脏抗炎抗氧化保护作用及对TGF-β_1/p38MAPK信号通路影响的研究

目的探讨尿毒清胶囊对糖尿病肾病大鼠的抗炎、抗氧化作用及对糖尿病肾病大鼠肾组织TGF-β_1/p38MAPK信号通路的影响。方法 70只雄性SD大鼠,随机分为10只正常组,60只模型组。模型组大鼠腹腔注射45 mg·kg^(-1)链脲佐菌素(STZ)造模,取造模成功的60只大鼠随机分为12只模型组,12只厄贝沙坦阳性组,12只尿毒清颗粒低剂量组(0.04 mg·kg^(-1)),12只尿毒清颗粒中剂量组(0.08 mg·kg^(-1)),12只尿毒清颗粒高剂量(0.16 mg·kg^(-1)),灌胃给药12周,模型组和空白组给予生理盐水。每周称量体质量,每周检测24 h尿蛋白量。给药治疗12周后,取血检测血尿素氮(BUN)、血清肌酐(SCr)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)、甘油三酯(TG)、超氧化物歧化酶(SOD)含量;麻醉处死大鼠,各取8只对肾组织行HE染色,观察肾组织的病理形态;并取肾组织进行RT-PCR和免疫组化观察TGF-β_1/p38MAPK信号转导等转化因子的mRNA及蛋白表达。结果与正常组比较,模型组大鼠尿蛋白及血清BUN、SCr、TG、MDA含量显著增高(P<0.05),NO、SOD含量显著降低(P<0.01),肾组织胞浆中TGF-β_1、p38MAPK、Caspase-3 mRNA及蛋白表达显著升高(P<0.05);通过治疗后,与模型组对比,尿毒清颗粒高剂量组和阳性组肾脏病理损害明显减轻,尿蛋白及血清BUN、SCr、TG、MDA含量显著降低(P<0.05),NO、SOD含量明显增高(P<0.05),肾组织内TGF-β_1、p38MAPK、Caspase-3 m RNA及蛋白表达明显减少(P<0.05)。结论尿毒清颗粒能降低24 h尿蛋白量,降低TG和MDA含量及升高NO、SOD含量,通过调控TGF-β_1/p38MAPK从而治疗糖尿病肾病的肾组织受损部位,改善肾功能和减轻病理损伤,能有效地保护糖尿病肾病组织。

SDF-1通过PI3K/Akt和MAPK/Erk信号通路对人微血管内皮细胞功能产生影响

目的 :观察基质细胞衍生因子-1(stromal cell derived factor-1,SDF-1)对人微血管内皮细胞(human microvascular endothelial cell line-1,HMEC-1)功能的影响,并对相关机制进行初步探讨,从而明确SDF-1在糖尿病血管病变中的作用。方法:体外培养HMEC-1,分别在培养基中加入不同浓度的SDF-1(0、25、50、100μg/L),Western blot检测HMEC-1中PI3K/Akt和MAPK/Erk信号通路的活化情况,MTT和流式细胞分析检测HMEC-1增殖和凋亡能力的变化情况,划痕愈合实验检测HMEC-1迁移能力的变化情况。采用PI3K/Akt和MAPK/Erk信号通路抑制剂LY294002和U0126阻断HMEC-1中PI3K/Akt和MAPK/Erk信号通路后,再以SDF-1处理HMEC-1,MTT和流式细胞分析检测HMEC-1增殖和凋亡能力的变化情况;划痕愈合实验检测HMEC-1迁移能力的变化情况。结果:Western blot结果显示,25μg/L的SDF-1处理即可显著活化HMEC-1中的PI3K/Akt和MAPK/Erk信号通路,且随着SDF-1处理浓度的升高,PI3K/Akt和MAPK/Erk信号通路活化水平逐渐升高。同0μg/L的SDF-1处理组相比,25、50、100μg/L的SDF-1均可显著加强HMEC-1的增殖和迁移能力(P<0.01),并抑制HMEC-1的凋亡水平(P<0.01),且这种作用具有剂量依赖性。当采用LY294002和U0126阻断HMEC-1中的PI3K/Akt和MAPK/Erk信号通路后,SDF-1促HMEC-1增殖和迁移能力及抑制HMEC-1凋亡的能力均显著降低(P<0.01)。结论:SDF-1可通过活化PI3K/Akt和MAPK/Erk信号通路,进而促进HMEC-1的增殖和迁移,并抑制HMEC-1的凋亡水平,从而在糖尿病血管病变中发挥一定的作用。

金纳多注射液对肾缺血再灌注损伤诱导的PI3K/AKT及ASK1/p38信号通路的影响

目的研究银杏叶提取物金纳多(Ginaton)注射液防治肾脏缺血再灌注损伤及其分子机制。方法 SD大鼠随机分成假手术组、缺血再灌注组(肾I/R组)和药物组3个组。药物组术前连续3 d腹腔注射金纳多注射液(50 mg.kg-)1。采用双侧夹闭大鼠肾蒂的方法制备动物模型。观察肾功能、肾组织丙二醛(MDA)水平和肾脏病理改变。TUNEL及流式细胞术检测肾细胞凋亡。Western blot分析磷脂酰肌醇(-3)激酶(PI3K/AKT),凋亡信号调节激酶1(ASK1);p38丝裂原活化蛋白激酶(p38)的激活与表达。结果 (1)与假手术组相比,缺血再灌注组AKT、ASK1及p38MAPK的活性均明显增强,凋亡的细胞数量增加。(2)与缺血再灌注组相比,金纳多组大鼠的血清Scr、BUN、肾组织MDA水平、细胞凋亡百分率及凋亡细胞的数量均降低,差异有统计学意义(P<0.05);金纳多组AKT的活性显著增强,ASK1、p38的活性明显低于缺血再灌注组(P<0.05)。结论金纳多能抑制肾缺血再灌注损伤诱导的细胞凋亡,减轻肾组织病理及脂质过氧化损伤,改善缺血再灌注损伤。其作用机制与上调抗凋亡信号通路(PI3K)/AKT通路的激活,负调凋亡信号通路ASK1/p38通路的激活有密切关系。

Ras/MAPK与PI3K/Akt信号转导通路及其相互作用

Ras/MAPK通路和PI3K/Akt通路是膜受体信号向细胞内转导的重要途径,它们调节着细胞凋亡、生长以及一些重要基因的表达。在不同的细胞类型、不同的细胞分化时期、不同的实验条件下,PI3K/Akt通路和Ras/MAPK通路之间的相互作用都会十分明显地表现在这两条通路的不同阶段,这些为白血病和其他肿瘤的新治疗方案提供了重要的理论依据。现将PI3K/Akt和Ras/MAPK通路及其相互作用综述如下。

miR-146b-3p通过RAF1/p38MAPK/COX-2信号通路影响糖尿病发生脑梗死的机制研究

目的探讨miR-146b-3p通过RAF1/p38MAPK/环氧化酶-2(COX-2)信号通路影响糖尿病脑梗死的发生机制。方法选取我院2015年4月—2017年12月210例糖尿病病人为研究对象,通过随访研究调查病人发生血栓情况,有15例患有脑梗死,作为伴有糖尿病的脑梗死(DMCI)组,另选取15例无脑梗死病人为对照组。采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定两组病人白介素-6(IL-6)、COX-2含量;采用聚合酶链式反应(PCR)及免疫印迹方法检测相关基因的mRNA及蛋白表达。结果两组一般资料及相关指标比较差异无统计学意义(P>0.05);与对照组相比,DMCI组血中IL-6和COX-2表达升高,但存在一定的局限性;IL-6诱导外周血单核细胞2 h后,COX-2的mRNA和蛋白表达明显增加,COX-2表达受IL-6调控;与对照组相比,miR-146b-3p mRNA在DMCI组表达低于正常组(0.16±0.07与1.12±0.16,P<0.001);与对照组相比,DMCI组RAF1 mRNA的表达增加(P<0.01),且其蛋白表达也增加;DMCI组中COX-2、p-p38MAPK表达增加,p38MAPK蛋白表达减少,说明DMCI病人激活了p38MAPK的信号通路;当用10 ng/mL的IL-6处理外周血单核细胞(PBMC)时,可激活STAT3磷酸化,且当IL-6处理PBMC 1 h后,miR-146b-3p mRNA表达下降,当IL-6处理12 h后,发现miR-146b-3p mRNA在IL-6处理12 h时(0.20±0.12)表达低于对照组(1.02±0.15,P<0.05),还发现IL-6处理中COX-2的mRNA(4.98±0.69)和蛋白质表达高于对照组;DMCI组中miR-146a mRNA表达降低,与miR-146b的表达趋势一致。结论miR-146b-3p的表达通过介导RAF/p38MAPK/COX-2信号通路与糖尿病病人脑梗死的发展密切相关,miR-146b-3p可作为糖尿病脑梗死病人检测和干预的新靶点。

柴胡三参胶囊通过调控PI3K/Akt和p38MAPK通路抑制阿霉素诱导的心脏毒性

目的研究柴胡三参胶囊对新生大鼠心肌细胞损伤和小鼠心力衰竭模型中磷脂酰肌醇3激酶(phosphoinositide3-kinase,PI3K)/Akt和丝裂原激活的蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)通路相关蛋白表达的影响,探讨其拮抗阿霉素诱导的心脏毒性的作用机制。方法用阿霉素诱导生成新生大鼠心肌细胞(neonatal rat ventricular myocyte,NRVM)损伤模型和小鼠心力衰竭模型,随机分为对照(no treatment,NT)组、模型(Model)组、柴胡三参胶囊预处理(CHSSC)组。末次给药后次日处死小鼠,处死前进行超声心动图检测,采用CCK-8法检测细胞活力,TUNEL法检测细胞凋亡,试剂盒检测血清肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)含量,Western blot法检测裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(c-Caspase 3)和磷酸化丝裂原激活的蛋白激酶(p-p38MAPK)、磷酸化磷脂酰肌醇3激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶(p-Akt)蛋白表达情况。结果与NT组比较,Model组以阿霉素剂量依赖性方式降低NRVM细胞活力,诱发细胞凋亡(P<0.01);氧化应激指标CK、LDH、MDA明显增加(P<0.01);左室EF值下降(P<0.01),LVIDS、LVIDd、LVESV、LVEDV水平增加(P<0.05);p-p38MAPK、c-Caspase 3和p-PI3K蛋白表达水平升高(P<0.01)。与Model组比较,CHSSC组增加细胞活力、减轻细胞凋亡,差异有明显统计学意义(P<0.01);氧化应激指标CK、LDH、MDA降低(P<0.01);EF增加(P<0.05),LVIDS、LVIDd、LVESV、LVEDV下降(P<0.05);p-p38MAPK、c-Caspase 3和p-PI3K蛋白表达水平降低(P<0.01)。结论柴胡三参胶囊可改善阿霉素诱导的心脏毒性,可能与其通过调控PI3K/Akt和p38MAPK通路抑制氧化应激和细胞凋亡相关。

通过p38 MAPK信号通路探讨仙灵骨葆胶囊对MC3T3-E1成骨分化的影响

目的探讨仙灵骨葆胶囊含药血清对小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1)增殖分化的影响及与p38 MAPK信号通路的关系。方法用仙灵骨葆胶囊含药血清干预MC3T3-E1,CCK8法筛选最佳干预时间及浓度,试剂盒检测各组细胞ALP活性。将细胞分为A、B、C、D 4组,分别加入10%含药血清、10%空白血清、10%含药血清+SB203580、10%空白血清+SB203580,利用免疫印迹法(Western blot)检测p38丝裂原活化蛋白激酶(p38)、磷酸化p38(p-p38)、成骨相关转录因子2(Runx2)、骨形态发生蛋白2(BMP-2)的蛋白表达量,荧光定量PCR检测p38、Runx2和BMP-2 mRNA的表达水平。结果与空白血清组相比,不同浓度的仙灵骨葆胶囊含药血清均能促进MC3T3-E1的增殖分化,提高ALP的活性,其中10%含药血清干预36 h的作用最为明显(P<0.05);与B组比较,A组p38、p-p38、Runx2、BMP-2蛋白及p38、Runx2、BMP-2 mRNA的表达明显增高(P<0.05);加入信号通路阻断剂SB203580后,C组与D组上述指标的表达明显降低(P<0.05);与C组相比,D组p38、p-p38、Runx2、BMP-2蛋白及p38、Runx2、BMP-2 mRNA表达更低(P<0.05)。结论仙灵骨葆胶囊含药血清能促进MC3T3-E1的分化生长,其作用机制可能与激活p38 MAPK信号通路、上调成骨相关因子Runx2、BMP-2的表达有关。

水溶性番茄浓缩物Fruitflow通过调控血小板PI3K/Akt和MAPKs信号通路抑制其活化、聚集及血栓形成

[目的]血小板过度活化可促进血栓以及心血管疾病的发生发展,水溶性番茄浓缩物Fruitflow作为膳食补充剂在预防心血管疾病中发挥重要作用,但机制未明,且尚无Fruitflow对血栓形成影响的研究.本研究拟探讨Fruitflow对健康人血小板聚集、活化及血栓形成的影响,并探索其可能的作用机制.[方法]用不同浓度(0、20、40、80 mg/L)的Fruitflow与健康成人血小板在体外共孵育,使用血小板聚集仪测定血小板聚集率;用流式细胞仪测定血小板表面αIIbβ3活化及纤维蛋白原结合率;用体视荧光显微镜观察FeCl3诱导的小鼠肠系膜动脉血栓模型中血栓的形成;通过小鼠剪尾实验测定出血时间;用Westernblot检测血小板Akt、Erk1/2、JNK总蛋白表达及其磷酸化水平.[结果]在ADP诱导下,20、40、80 mg/L的Fruitflow均可有效降低血小板聚集率,且效应呈剂量依赖性,其中80 mg/L的Fruitflow干预组血小板聚集率从对照组的(43.75±5.91)%降到了(8.25±4.57)%(P<0.001);与对照组(79.36±6.26)相比,Fruitflow明显抑制血小板αIIbβ3的活化,其中80 mg/L剂量组降至(65.79±5.73,P<0.01);与对照组(69.34±6.63)相比,仅80 mg/L Fruitflow可明显降低血小板Fibrinogen binding百分比(56.70±8.68,P<0.05);Fruitflow可抑制FeCl3诱导的肠系膜动脉血栓形成,80 mg/L Fruitflow干预后血管堵塞时间由对照组的(22.50±4.86)延长至(39.20±4.61,P<0.01),同时与对照组(5.95±0.69)相比,80 mg/L Fruitflow干预组的出血时间(5.74±0.76)无明显变化(P>0.05);Fruitflow下调血小板Akt、Erk1/2和JNK蛋白的磷酸化水平,与对照组相比,80 mg/L Fruitflow干预后P-Akt/Akt由0.97±0.07降至0.33±0.13(P<0.001),P-Erk1/2/Erk1/2由0.89±0.09降至0.24±0.02(P<0.01),P-JNK/JNK由0.97±0.12降至0.45±0.04(P<0.01).[结论]抑制血小板PI3K/Akt和MAPKs信号可能是Fruitflow抑制血小板聚集活化和血栓形成的机制之一.

丹皮酚通过上调miR-424-3p和抑制PI3K/AKT信号通路影响肝癌细胞的生长和迁移

目的:探讨丹皮酚对肝癌细胞活力和迁移能力的影响和分子机制。方法:分别采用不同浓度(50、100、200和400 mg/L)的丹皮酚干预人肝细胞癌Hep3B细胞。CCK-8法检测细胞活力,确定药物浓度。将Hep3B细胞分为正常对照组、丹皮酚组、miR-NC组、miR-424-3p组、丹皮酚+anti-miR-NC和丹皮酚+anti-miR-424-3p组。RT-qPCR法检测miR-424-3p表达水平;CCK-8法检测细胞活力;Transwell实验检测细胞的迁移能力;Western blot检测细胞周期素D1(cyclin D1)、基质金属蛋白酶2(MMP2)、MMP9及PI3K/AKT信号通路相关蛋白的水平。结果:丹皮酚干预可抑制Hep3B细胞的活力(P<0.05),并呈一定的浓度依赖性。选择200 mg/L的丹皮酚进行后续研究。丹皮酚干预可抑制Hep3B细胞MMP2和MMP9蛋白表达,抑制细胞迁移(P<0.05)。丹皮酚干预可促进Hep3B细胞miR-424-3p的表达(P<0.05)。过表达miR-424-3p可抑制Hep3B细胞cyclin D1、MMP2和MMP9的表达,抑制细胞的活力和迁移能力(P<0.05)。抑制miR-424-3p表达可逆转丹皮酚对Hep3B细胞活力和迁移能力的影响(P<0.05)。丹皮酚可抑制Hep3B细胞PI3K和AKT的磷酸化,抑制PI3K/AKT信号通路的活化(P<0.05)。抑制miR-424-3p表达可逆转丹皮酚对Hep3B细胞PI3K/AKT信号通路的影响(P<0.05)。结论:丹皮酚可上调miR-424-3p和抑制PI3K/AKT信号通路,进而抑制肝癌细胞的活力和迁移。