和胃反流康对胆汁反流性胃炎大鼠胃黏膜p38MAPK蛋白及COX-2mRNA表达的影响

目的利用分子生物学技术,通过体内实验,观察和胃反流康对实验性胆汁反流性胃炎模型大鼠胃黏膜p38MAPK蛋白及胃黏膜细胞COX-2mRNA表达的影响。方法将60只SPF级大鼠随机分为6组,即空白组、模型组、和胃反流康高、中、低剂量组(54.6 g·kg^(-1),27.3 g·kg^(-1),13.7 g·kg^(-1))、阳性药物(吗丁啉)组,每组10只。配制反流液,除空白组外,其余各组均采用灌胃方式建立胆汁反流性胃炎大鼠模型。分别通过Western blot法及实时荧光定量PCR法,检测大鼠胃窦部胃黏膜组织中p38MAPK蛋白及胃黏膜细胞COX-2mRNA的表达,观察和胃反流康对胆汁反流性胃炎大鼠胃黏膜p38MAPK蛋白及胃黏膜细胞COX-2mRNA表达水平的影响。结果和胃反流康可显著抑制大鼠胃黏膜p38MAPK蛋白及胃黏膜细胞COX-2mRNA的表达水平(P<0.01)。结论和胃反流康可显著抑制胆汁反流性胃炎大鼠胃黏膜p38MAPK蛋白及胃黏膜细胞COX-2mRNA的表达,减轻反流液对胃黏膜的炎性损害,具有防止BRG模型大鼠胃黏膜肠上皮化生及不典型增生等癌前病变发生的作用。

CD20单抗对Burkitt淋巴瘤细胞Bcl-2和p38MAPK蛋白表达的影响

目的研究CD20单抗对Burkitt淋巴瘤细胞Bcl-2和p38MAPK蛋白表达的影响,探讨其抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡的作用机制。方法选用CD20(+)的Raji和Namalwa细胞株,使用不同浓度(12.5、25.0、50.0μmol/L)CD20单抗处理12、24、48和72h后,用MTT法检测细胞增殖抑制率,以选择适当的药物浓度及作用时间;设置实验组(50μmol/LCD20单抗处理48h)及对照组,使用流式细胞术测定Raji和Namalwa细胞株的凋亡率(AnnexinV+和PI-细胞比例),以明确CD20单抗对其凋亡的影响;使用Western blot法检测Raji和Namalwa细胞株中Bcl-2和p38MAPK蛋白表达的变化。结果不同浓度CD20单抗处理Raji细胞株12、24、48和72h后测定细胞增殖抑制率,以50.0μmol/LCD20单抗处理48h后最高,为(71.91±2.05)%;采用此浓度处理48h后,流式细胞术检测显示,Raji细胞株的细胞凋亡率由对照组的(2.03±0.94)%增加至(31.52±2.48)%(P<0.05);Namalwa细胞株的细胞凋亡率由对照组的(1.49±0.87)%增加至(21.84±1.69)%(P<0.05)。在CD20单抗处理后的Raji细胞株中,Bcl-2蛋白表达由(1.48±0.05)下降为(0.42±0.02)(P<0.05);p38MAPK蛋白表达由(1.76±0.08)下降为(0.37±0.05)(P<0.05)。结论CD20单抗能直接抑制淋巴瘤细胞增殖,通过下调Bcl-2和p38MAPK蛋白的表达,诱导CD20(+)的Raji和Namalwa淋巴瘤细胞株凋亡。

补肾活血汤对去势后大鼠腰椎间盘p38MAPK蛋白含量影响的研究

目的:观察补肾活血汤对去势后大鼠腰椎间盘髓核组织结构及病理形态变化以及对椎间盘p38MAPK蛋白表达的影响。方法:选取清洁级12月龄健康雌性SD大鼠60只,随机分为空白对照组、假模型组、模型组、中药组以及阳性药物组,每组12只大鼠。采用绝经后骨质疏松症动物造模方法,空白对照组、假模型组与模型组生理盐水灌胃,中药组予补肾活血汤灌胃。持续给药12周。分别于8周、12周后每组随机抽取6只大鼠处死取材,运用Western Blotting方法检测椎间盘中蛋白表达差异。结果:模型组椎间盘中p38MAPK蛋白含量高于空白对照组、假模型组(P<0.05);中药组p38MAPK蛋白含量低于模型组(P<0.05)。结论:补肾活血汤可抑制去势后大鼠腰椎间盘组织形态学的退变及p38MAPK蛋白表达,对椎间盘退变具有一定的延缓作用。

针刀疗法对兔退变颈椎间盘组织中p38MAPK蛋白与IL-1表达的影响

目的 观察针刀疗法对兔退变颈椎间盘组织中p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)蛋白与白细胞介素-1(IL-1)表达的影响,探讨针刀治疗颈椎间盘退变的作用机制。方法 选用24只普通级的6月龄健康雄性新西兰大白兔,随机分为空白组、模型组与针刀组,每组8只。模型组与针刀组采用自制兔盒制作颈椎间盘退变模型。造模4周后,通过X线与MRI检查评价造模成功与否。造模结束后7 d,空白组与模型组不予任何干预措施;针刀组予以针刀干预,每周1次,共3次。干预结束后7 d,每组随机抽取2只行MRI检查,观察影像学变化。影像学检查结束后行空气栓塞法处死,立即取出椎间盘组织。HE染色观察其组织病理学变化,Western blot法检测p38MAPK的蛋白表达水平,免疫组织化学染色法检测IL-1的表达水平。结果 磁共振成像结果显示空白组见椎间盘高度正常,髓核呈亮白色,未见椎间隙变窄、椎间盘突出,纤维环边缘完整;模型组见椎间盘高度降低,髓核呈灰黑色,椎间隙变窄,C6/7椎间盘向后方突出,纤维环破裂;针刀组椎间盘高度正常,髓核呈灰色,未见椎间隙变窄,C6/7椎间盘向后方轻微突出,纤维环边缘尚完整。HE染色结果见空白组椎间盘组织结构清晰,髓核居中,纤维环排列规则,软骨终板结构完整。模型组髓核组织被纤维组织和成纤维细胞替代,纤维环较空白组粗糙增厚,排列不规则,出现裂隙,软骨终板不完整。针刀组髓核居中,与纤维环界限清晰,软骨终板结构正常。与空白组相比,模型组椎间盘组织p38MAPK蛋白与IL-1表达水平明显升高(P<0.01);与模型组相比,针刀组椎间盘组织p38MAPK蛋白表与IL-1达水平显著降低(P<0.01)。结论 针刀疗法可通过下调p38MAPK与IL-1的表达水平以延缓椎间盘退变。

三七总皂苷通过p38 MAPK通路抑制内毒素诱导的小胶质细胞活化

目的:探讨三七总皂苷(PNS)通过p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)通路对脂多糖(LPS)诱导活化的BV2小胶质细胞中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响。方法:将BV2小胶质细胞分为空白对照组(Control)、LPS激活组和LPS+三七总皂苷干预组(LPS+PNS)。CCK-8法检测BV2小胶质细胞的活力,确定最适合的药物干预浓度。利用Western Blot和免疫荧光检测BV2小胶质细胞中p38 MAPK和TNF-α的表达及p38 MAPK磷酸化水平(p-p38 MAPK)变化。结果:与空白对照组相比,PNS对BV2小胶质细胞的细胞活力无显著差异,最终选定100 mg/L作为药物干预浓度。Western Blot、免疫荧光结果提示,LPS激活后,BV2小胶质细胞中TNF-α的表达显著升高,p38 MAPK磷酸化水平增加(P<0.05);PNS干预后,与LPS激活组相比,TNF-α表达显著下降,p38 MAPK磷酸化水平降低(P<0.05)。使用p38 MAPK通路抑制剂(SB203580)作用后,PNS联合SB203580组(LPS+PNS+SB203580)中,TNF-α表达及p38 MAPK磷酸化水平变化与LPS+PNS组相比无显著差异(P>0.05)。此外,p38 MAPK在各组的变化无显著性差异(P>0.05)。结论:PNS可能通过p38 MAPK通路抑制活化的BV2小胶质细胞分泌的炎性因子TNF-α的表达。

消饮化瘀方调节P38MAPK表达治疗慢性心力衰竭大鼠心肌纤维化

目的 通过调节P38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)的表达,观察消饮化瘀方对慢性心力衰竭(CHF)大鼠心肌纤维化的影响。方法 72只SD大鼠随机分为空白组和A组,A组腹腔注射盐酸阿霉素6 w复制CHF模型。复制成功后将A组随机分为模型组、中药低剂量组(7 g/kg)、中药中剂量组(14 g/kg)、中药高剂量组(28 g/kg)及美托洛尔组(10 mg/kg),分别灌胃给予相应的药物,共干预4 w。苏木素-伊红(HE)染色观察心肌组织的形态学变化,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测心肌组织中羟脯氨酸(Hyp)、Ⅰ型胶原(ColⅠ)、Ⅲ型胶原(ColⅢ)的含量,Western印迹检测心肌组织P38MAPK蛋白表达,实时荧光定量PCR检测心肌组织中P38MAPK mRNA表达水平。结果 与空白组相比,模型组Hyp、ColⅠ、ColⅢ、P38MAPK蛋白及mRNA表达水平明显高于空白组(P<0.01)。治疗后,与模型组相比,各治疗组ColⅠ、P38MAPK蛋白及mRNA表达水平均显著降低(P<0.01,P<0.05);美托洛尔组和中药高剂量组Hyp含量显著降低(P<0.01,P<0.05);美托洛尔组、中药中剂量组及中药高剂量组ColⅢ含量均显著降低(P<0.01)。结论 消饮化瘀方能降低CHF模型大鼠心肌组织P38MAPK蛋白及mRNA表达水平,减少心肌Hyp、ColⅠ、ColⅢ含量,有效改善心肌纤维化。

顺铂导致螺旋神经节细胞凋亡中pp38MAPK和pERK信号蛋白的作用

目的初步探讨丝裂素活化蛋白激酶(mitogen-activated proteins kinase,MAPK)信号转导通路中磷酸化p38MAPK蛋白(pp38MAPK)和磷酸化ERK蛋白(pERK)在顺铂耳毒性中的作用。方法选取20只健康豚鼠随机分为两组,每组10只,实验组腹腔注射顺铂4mg·kg-1·d-1,连续4天,对照组腹腔注射等量生理盐水。最后一次给药后24小时内处死动物、取材,HE染色后光镜下观察内耳螺旋神经节细胞形态学变化;透射电镜下观察螺旋神经节细胞的凋亡情况;免疫组化染色法观察螺旋神经节细胞pp38MAPK和pERK蛋白的表达。结果实验组豚鼠螺旋神经节细胞数目减少、体积减小,排列散乱,出现凋亡改变,而对照组螺旋神经节细胞无明显凋亡改变。pp38MAPK主要分布在螺旋神经节细胞胞浆,对照组表达较弱(平均光密度值为0.12±0.04),实验组表达增强(平均光密度值为0.24±0.07),两组差异有统计学意义(t=4.581,P<0.05)。pERK在螺旋神经节细胞的胞浆有表达,对照组的平均光密度值为0.27±0.08,实验组的平均光密度值为0.25±0.08,两组差异无统计学意义(t=-0.673,P>0.05)。结论 pp38MAPK可能参与了顺铂导致豚鼠螺旋神经节细胞的凋亡。

过表达硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)通过激活p38MAPK通路促进MIN6细胞凋亡

目的研究硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)对MIN6细胞凋亡的影响及其相关机制。方法将处于对数生长期的MIN6细胞,进行TXNIP慢病毒感染,用荧光显微镜和Western blot法检测感染效率。将MIN6细胞分为对照组、空载体(LV-GFP)组、TXNIP过表达(LV-GFP-TXNIP)组。利用CCK-8法检测细胞增殖活性,异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ-FITC/PI)双染色结合流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot法检测TXNIP、硫氧还蛋白(TRX)、Bax、Bcl2、裂解型胱天蛋白酶3(c-caspase-3)、p38丝裂原激活蛋白激酶(p38MAPK)及其磷酸化蛋白激酶(p-p38MAPK)的蛋白水平。用p38MAPK抑制剂SP169316处理上述三组细胞,Western blot法检测其蛋白磷酸化水平及Bax、Bcl2、c-caspase-3蛋白水平的变化。结果感染慢病毒72 h后,LV-GFP组、LV-GFP-TXNIP组感染率分别为(87.10±2.30)%、(92.21±0.54)%,说明病毒感染成功。与对照组和LV-GFP组相比较,LV-GFP-TXNIP组的细胞生存率明显降低,细胞凋亡率、Bax/Bcl2比值、c-caspase-3蛋白、p38MAPK蛋白磷酸化水平明显增高。p38MAPK特异性抑制剂作用后,LV-GFP-TXNIP组Bax/Bcl2表达比率及c-caspase-3蛋白表达均显著减少。结论过表达TXNIP通过激活p38MAPK信号通路促进MIN6细胞的凋亡。

p38γMAPK蛋白在结肠癌组织中的表达及临床意义

目的探讨人结肠癌中p38γMAPK蛋白的表达及其临床意义。方法应用免疫组织化学法检测54例结肠癌组织、近癌旁组织、癌周正常组织和15例腺瘤息肉组织中p38γ蛋白的表达情况。结果p38γ蛋白的表达主要定位于胞质中,仅少量在胞核中表达。p38γ蛋白在结肠癌组织、癌旁组织、癌周正常组织中的高表达率分别为75.93%、51.85%、37.04%,在结肠腺瘤息肉组织中高表达率为33.33%。p38γ蛋白在结肠癌中的表达明显高于癌旁组织、癌周正常组织和腺瘤息肉组织,有统计学意义(P<0.01)。p38γ的表达与Duke分期,组织分化程度及有无淋巴结转移有显著差异(P<0.01),p38γ的表达与年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤位置无明显相关(P>0.05)。结论结肠癌组织中p38γ蛋白处于过度表达状态,与结肠癌的发生、发展和转移密切相关。

铒激光与E光联合重组人源Ⅲ型胶原蛋白治疗面部痤疮凹陷性瘢痕的疗效及对p38MAPK通路蛋白的影响

目的:探讨铒激光与E光联合重组人源Ⅲ型胶原蛋白治疗面部痤疮凹陷性瘢痕的疗效及对痤疮瘢痕权重评分(Echelle d'Evaluation Clinique des Cicatrices d'acne,ECCA)、p38丝裂原活化蛋白激酶(P38 mitogen activated protein kinase,p38MAPK)通路蛋白的影响。方法:选取笔者医院2018年1月-2019年12月面部痤疮凹陷性瘢痕患者195例,按照随机数字法分为3组,各65例。对照1组给予E光联合重组人源Ⅲ型胶原蛋白,对照2组给予铒激光联合重组人源Ⅲ型胶原蛋白,研究组给予铒激光与E光联合重组人源Ⅲ型胶原蛋白。比较三组治疗效果、治疗前后温哥华瘢痕量表(Vancouver scar scale,VSS)变化情况、ECCA评分、视觉模拟评分(Visual analogue scale,VAS)、血清p38MAPK通路蛋白(ERK1、ERK2、MEK1、MEK2)、炎性因子[肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)、C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)]及患者满意度。结果:研究组总有效率(95.38%)高于对照1组(81.54%)、对照2组(84.62%),差异有统计学意义(P<0.05)。治疗结束后三组瘢痕厚度、血管分布、色泽、柔软度评分、ECCA、VAS评分低于治疗前,研究组低于对照1组、对照2组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗结束后三组血清MEK1、MEK2、ERK1、ERK2、TNF-α、IL-6、CRP低于治疗前,研究组低于对照1组、对照2组,差异有统计学意义(P<0.05)。研究组患者满意度(93.85%)高于对照1组(80.00%)、对照2组(80.00%),差异有统计学意义(P<0.05)。结论:联合采取铒激光、E光、重组人源Ⅲ型胶原蛋白治疗面部痤疮凹陷性瘢痕效果显著,且患者满意度较高。

蛋白酶激活受体2/P38MAPK信号通路在缺血后处理对抗老年糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用

目的:研究蛋白酶激活受体2/P38MAPK(PAR-2/P38MAPK)信号通路在缺血后处理(IPost)对抗老年糖尿病大鼠心肌缺血再灌注(I/R)损伤中的作用。方法:22-24月龄雄性Wistar大鼠32只,随机选取24只采用链脲佐菌素(STZ)腹腔注射制备老年糖尿病模型。成模大鼠随机分成3组(每组8只):I/R组、IPost组、PAR-2抑制剂组(PAR-2组),PAR-2组大鼠于缺血处理前1h尾静脉注射PAR-2抑制剂FSLLRY-NH2,其余处理同IPost组;未造模的8只大鼠作为对照组(SC组)。采用黄嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥比色法分别测定血清超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)浓度,TUNEL法检测心肌细胞凋亡率,Western Blotting测定PAR-2及P38MAPK、P-P38MAPK蛋白表达水平。结果:I/R组MDA浓度、心肌细胞凋亡率及P-P38MAPK水平均较SC组显著增加(P<0.05或P<0.01),SOD活性、PAR-2蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。IPost组SOD活性及PAR-2水平较I/R组显著增加(P<0.05),P-P38MAPK水平、MDA浓度及心肌细胞凋亡率均下降(P<0.01)。PAR-2抑制剂则可抑制IPost作用,使P-P38MAPK蛋白表达水平上调、心肌细胞凋亡率增加、MDA浓度升高、SOD活性降低(P<0.05或P<0.01)。结论:IPost对老年糖尿病大鼠心肌I/R损伤有保护作用,其机制与PAR-2/P38MAPK信号通路的调节有关。

基于p38MAPK/NF-κB信号通路探讨针刺调控线粒体自噬促进大鼠功能性消化不良发生发展的机制

目的基于p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/核因子(NF)-κB信号通路探讨针刺调控线粒体自噬促进大鼠功能性消化不良发生发展的机制。方法选取SPF级SD大鼠50只,10只为对照组,其余40只建立功能性消化不良模型,其中30只随机分为模型组、药物对照组、针刺组各10只。对照组、模型组不接受治疗,药物对照组采用莫沙必利治疗,针刺组选取大鼠太冲穴、足三里穴针刺治疗。观察各组大鼠一般情况、病理组织学、饮水量、进食量、胃肠动力、炎症因子、线粒体自噬、线粒体膜电位变化比例、三磷酸腺苷(ATP)、活性氧(ROS)、p38 MAPK/NF-κB通路情况。结果与对照组相比,模型组、药物对照组、针刺组饮水量、进食量、ATP明显下降,白细胞介素(IL)-6、IL-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α、细胞色素(CYT)-C、微管结合蛋白1A/1B-轻链(LC3)B、线粒体膜电位变化比例、ROS、p38MAPK、NF-κB表达量明显升高(P<0.05);与模型组相比,药物对照组、针刺组饮水量、进食量、ATP增加,IL-6、IL-1β、TNF-α、CYT-C、LC3B、线粒体膜电位变化比例、ROS、p38MAPK、NF-κB表达量明显下降(P<0.05);与药物对照组相比,针刺组饮水量、进食量、ATP明显增加,IL-6、IL-1β、TNF-α、CYT-C、LC3B、线粒体膜电位变化比例、ROS、p38MAPK、NF-κB表达量明显下降(P<0.05)。结论采用针刺对功能性消化不良大鼠进行干预,可介导线粒体自噬,使体内胃肠动力增加,改善大鼠症状,其作用机制可能与调控p38MAPK/NF-κB信号通路有关。

基于ERK/P38MAPK信号通路研究苗药金乌健骨方防治奥沙利铂诱导的神经病理性疼痛的作用机制

目的基于细胞外调节蛋白激酶/丝裂原活化蛋白激酶p38(extracellular regulated kinase/p38 mitogen-activated kinaseERK/p38MAPK)信号通路探究苗药金乌健骨方防治奥沙利铂(oxaliplatin,OXA)诱导的神经病理性疼痛(chemotherapy-induced neuropathic pain,CINP)的作用机制。方法SPF级雌性SD大鼠40只,随机分为对照组、模型组、西药组、金乌健骨方组,每组10只。除对照组外,其余大鼠腹腔注射OXA 2 mg·kg^(-1)·d^(-1),连续给药5 d,建模慢性CINP模型。建模的同时,金乌健骨方组灌胃给药金乌健骨方24 g·kg^(-1)·d^(-1),西药组灌胃给药度洛西汀6.45 mg·kg^(-1)·d^(-1),对照组与模型组给予等量的生理盐水,连续给药15 d。分别于给药0、3、6、9、12、15 d检测大鼠机械痛阈值、热痛阈值,治疗结束后检测血清肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α),白细胞介素^(-1)β(interleukin^(-1)β,IL^(-1)β),白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)水平,并对脊髓L4-L5膨大神经组织进行病理检测,比较大鼠脊髓L4-L5背根神经节组织p-ERK1/2、p38MAPK、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal ki-nase,JNK)、细胞癌基因fos(Cellular oncogene fos,c-Fos)、环磷酸腺苷反应原件结合蛋白(cAMP response element binding protein,CREB)、核蛋白因子-κB(nucleoprotein factor-κB,Nf-κB)蛋白表达情况。结果对照组0~15 d机械痛阈值变化差异无统计学意义(P>0.05),第3天后,模型组械痛阈值开始下降,第9天后,模型组与金乌健骨方组、西药组机械痛阈值差异有统计学意义,金乌健骨方组、西药组机械痛阈值高于模型组,西药组高于金乌健骨方组(P<0.05);对照组0~15 d热痛阈值变化差异无统计学意义(P>0.05),模型组热痛阈值下降,第0天后,模型组与金乌健骨方组、西药组热痛阈值差异有统计学意义,金乌健骨方组、西药组热痛阈值高于模型组,西药组高于金乌健骨方组(P<0.05)。与对照组比较,模型组血清IL^(-1)β,IL-6及TNF-α水平升高,p-ERK1/2、p38MAPK、JNK、c-Fos、CREB、Nf-κB蛋白表达上调(P<0.05),与模型组比较,金乌健骨方组、西药组血清IL^(-1)β,IL-6及TNF-α水平降低,p-ERK1/2、p38MAPK、JNK、c-Fos、CREB、Nf-κB蛋白表达下调(P<0.05),与金乌健骨方组比较,西药组血清IL^(-1)β,IL-6及TNF-α水平降低,p-ERK1/2、p38MAPK、JNK、c-Fos、CREB、Nf-κB蛋白表达下调(P<0.05)。结论苗药金乌健骨方能够改善OXA诱导的神经病理性疼痛,其机制可能与调节ERK/p38MAPK通路有关。

姜黄素通过p38 MAPK/NLRP3抑制肠道病毒71型诱导的细胞焦亡

肠道病毒-A71型(EV-A71)重症感染患儿多表现为过激的炎症反应,病毒感染引起的细胞焦亡可能是机体炎症发生的重要原因之一。本文旨在探究姜黄素对EV-A71病毒感染引起的细胞焦亡与细胞损伤的保护作用及可能的机制。首先,观察了姜黄素对EV-A71引起的细胞毒性的影响。CCK8检测结果显示,EV-A71感染降低细胞的增殖活力;LDH测定表明,病毒增加细胞培养上清中LDH的释放,造成了细胞的损伤;DAPI核染色及Dil细胞膜染色后观察到,EV-A71感染引起了细胞的形态变化和数量减少。姜黄素可以逆转病毒引起的上述变化,提示姜黄素对病毒感染的细胞毒性具有保护作用。细胞焦亡发生时,可促进炎症因子IL-1β的成熟、产生和释放。我们观察了EV-A71及姜黄素干预对细胞IL-1β产生的影响。Western印迹结果显示,病毒感染细胞内IL-1β的活化增加。ELISA检测结果显示,EV-A71病毒感染引起细胞上清中IL-1β的分泌水平增加;qPCR测定结果显示,EV-A71病毒感染细胞中IL-1β的转录水平上调;而姜黄素干预可抑制染毒细胞IL-1β的活化和分泌。Western印迹检测细胞内焦亡相关分子的变化。结果显示,EV-A71感染可诱导细胞发生焦亡,并呈时间和剂量依赖性,分子NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、GSDMD、胱天蛋白酶1(caspase-1)参与EV-A71诱导细胞发生的焦亡;姜黄素干预可以有效抑制EV-A71诱导的细胞细胞焦亡。另外,Western印迹检测显示,姜黄素可以减少细胞内EV-A71结构蛋白VP1的水平,通过检测细胞上清中病毒的CCID50发现,姜黄素可以降低细胞上清中病毒的滴度。最后,对姜黄素抗焦亡机制进行了探索,发现EV-A71感染诱导了细胞自噬并激活了p38/NLRP3通路,姜黄素能抑制自噬标志蛋白LC3及自噬底物p62的降解,并抑制p38/NLRP3的激活。总之,本研究明确了姜黄素通过对自噬溶酶体阶段及p38/NLRP3通路的抑制,有效减轻了EV-A71诱导的细胞焦亡,为姜黄素在抗EV-A71感染的临床应用提供参考。

靶向p38MAPK的siRNA通过干扰线粒体途径弱化光激发酞菁锌诱导Lovo细胞的凋亡

目的探讨RNAi沉默p38MAPK基因表达对光激发TαPc Zn诱导的人结肠癌Lovo细胞线粒体凋亡途径干扰的机制。方法运用siRNA靶向干扰p38MAPK基因,采用RT-PCR和Western blot法分别检测细胞内p38MAPK的干扰效率,同时用Western blot法检测AIF、Bcl-2、Cyto-c及Caspase-3的表达,JC-I染色检测沉默p38MAPK基因对ΔΨm的影响。结果与对照组比较,光作用下siRNA-p38MAPK转染组中p38MAPK的mRNA和蛋白水平显著下调(P<0.01)。在光激发下,TαPc Zn明显诱导Lovo凋亡,ΔΨm降低,从线粒体释放到细胞质的AIF、Cyto-c增加,Bcl-2表达减少,同时caspase-3发生断裂激活。而在siRNA沉默p38MAPK后,光激发TαPc Zn诱导细胞凋亡的作用减弱,ΔΨm有所增加,细胞质中AIF、Cyto-c释放减少,caspase-3激活减弱,Bcl-2表达增加。结论光激发TαPc Zn作用下,沉默p38MAPK基因可明显干扰线粒体途径,进而减弱光激发TαPc Zn所诱导的细胞凋亡。

p38MAPK及EMT在食管腺癌中的研究进展

p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号途径参与恶性肿瘤的快速增殖、迁移及凋亡过程。研究证实食管腺癌(EAC)的发生、发展与MAPK信号转导通路密切相关〔1〕。上皮间质转化(EMT)在肿瘤侵袭和转移过程中扮演重要角色,可以作为监测肿瘤形成和发展的生物标志物,在食管癌的浸润和转移中发挥重要作用,与患者的预后密切相关。本文对p38MAPK信号通路及EMT在EAC中的研究进展进行综述。

丙酮酸通过抑制p38丝裂原激活蛋白激酶(p38MAPK)磷酸化减轻低氧对PC12细胞的损伤

目的观察丙酮酸对低氧诱导神经细胞损伤的保护作用及机制。方法采用丙酮酸处理PC12细胞,10 m L/L O2的低氧环境暴露12、24、48 h。MTT法观察细胞增殖情况,检测胱天蛋白酶3(caspase-3)活性观察细胞凋亡情况,ELISA检测白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平,Western blot法检测p38丝裂原激活蛋白激酶(p38MAPK)、磷酸化的p38MAPK(p-p38MAPK)蛋白水平。结果低氧暴露24、48 h,抑制PC12细胞增殖,caspase-3活性增强,IL-1β、IL-6、TNF-α和p-p38MAPK水平增高;丙酮酸处理可显著增加PC12细胞增殖,减少细胞凋亡,降低IL-1β、IL-6、TNF-α水平,抑制p38MAPK的磷酸化水平。结论丙酮酸通过抑制p38MAPK的磷酸化而抑制低氧暴露引起PC12细胞炎症因子的表达,对低氧暴露导致的神经元损伤起保护作用。

胰岛素联合硒抑制糖尿病心肌病大鼠p38MAPK/CBP通路减少心肌细胞凋亡

目的观察胰岛素联合硒对糖尿病心肌病大鼠p38丝裂原激活蛋白激酶/CREB结合蛋白(p38MAPK/CBP)通路的影响。方法 50只SD大鼠随机分为空白对照组、糖尿病心肌病组、糖尿病心肌病胰岛素治疗组、糖尿病心肌病硒治疗组、糖尿病心肌病胰岛素联合硒治疗组。流式细胞术检测细胞周期;末端脱氧核糖核苷酸转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)法观察心肌细胞凋亡;Western blot法检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、cyclin E、Bax、Bcl-2、p38MAPK/磷酸化p38丝裂原激活蛋白激酶(p-p38MAPK)、CBP及Ku70的水平;免疫共沉淀法检测Ku70的乙酰化。结果胰岛素联合硒明显抑制心肌细胞凋亡,增加Bcl-2表达,降低Bax、cyclin D1、cyclin E、p38MAPK/p-p38MAPK、CBP、Ku70和乙酰化Ku70的表达水平。结论胰岛素联合硒通过抑制p38MAPK/CBP通路抑制心肌细胞凋亡。

p38MAPK在百草枯中毒致大鼠急性肺损伤中的作用研究

目的 探讨p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）在百草枯致大鼠急性肺损伤中作用的研究.方法 96只SD大鼠以数字随机法随机分为生理盐水组（NS）、PQ中毒组（PQ组）、抑制剂干预对照组（PQ＋SB组）和抑制剂对照组（NS＋SB组）,每组各24只,通过比较肺组织的干湿比（W/D）、肺组织病理学变化、肺泡灌洗液中炎症因子IL-1β和TNF-α变化,用Westernblot检测各组大鼠肺组织中p38MAPK、p-p38MAPK的变化表达量,并用p38MAPK的特异性抑制剂SB203580干预,阻断p38MAPK磷酸化过程,进一步确定p38MAPK与肺组织炎症反应等的相关性.结果 PQ组p-p38MAPK表达量明显高于NS组,PQ＋SB组较PQ组表达量有所下降,PQ＋SB组肺W/D在1、3、5 d均低于PQ组（P〈0.01）,在7 d两组比较差异无统计学意义（P〉0.05）;PQ＋SB组肺组织中TNF-α、IL-1β水平明显低于PQ组（P〈0.01）,肺组织病理学变化也较PQ组有所改善.结论 p38MAPK信号通路参与介导了百草枯致大鼠急性肺损伤的炎症反应过程,用p38MAPK抑制剂SB203580干预后可改善肺组织的炎症反应.

熊果酸(UA)对大鼠活化型肝星状细胞(HSC)的NADPH氧化酶(NOX)亚基及PI3K/Akt、P38MAPK信号通路活化的影响

目的观察熊果酸(ursolic acid,UA)对大鼠活化型肝星状细胞-6(hepatic stellate cell T6,HSC-T6)NADPH氧化酶(NAPDH oxidase,NOX)亚基及其调控的磷脂酰肌醇-3-羟激酶/蛋白激酶(phosphatidyl inosit013-kinase/Akt,PBK/Akt)、P38丝裂原活化蛋白激酶(P38 mitogen-activated protein kinase,P38MAPK)信号通路及其对基质金属蛋白酶组织抑制剂-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)、基质金属蛋白酶-1(metalmatrix proteinase-1,MMP-1)蛋白表达的影响,并探讨其机制。方法取对数生长期的HSC-T6细胞,随机分成6组:空白对照组、瘦素组(100 ng/mL)、UA干预组(UA 50μmol/L+瘦素)、NOX抑制剂DPI干预组(DPI 20μmol/L+瘦素)、P38MAPK抑制剂SB203580干预组(SB203580 10μmol/L+瘦素)及PI3K抑制剂LY294002干预组(LY294002 10μmol/L+瘦素)。采用Western blot法分别检测NOX亚基gp91^(phox)、p22^(phox)、p67^(phox)、Rac1蛋白表达;信号通路PI3K、Akt、P38MAPK的活化及TIMP-1、MMP-1蛋白表达。结果 UA能显著抑制瘦素诱导的gp91^(phox)、p22^(phox)、p67p^(phox)、Rac1蛋白表达(P均<0.01),但UA对gp91^(phox)、p67^(phox)蛋白表达的抑制作用不及DPI和LY294002。UA能抑制瘦素诱导的PI3K蛋白表达及Akt、P38MAPK蛋白磷酸化(P均<0.01),与DPI及LY294002作用的差异无统计学意义。UA能抑制瘦素诱导的TIMP-1蛋白表达,同时促进MMP-1蛋白表达(P均<0.01)。结论 UA能抑制瘦素诱导的大鼠HSC-T6细胞NOX亚基gp91p^(phox)、p22ph^(phox)、p67p^(phox)、Rac1表达及PI3K/Akt、P38MAPK信号通路的活化;其下调TIMP-1蛋白及上调MMP-1蛋白表达的机制可能与UA抑制NOX调控的PI3K/Akt及P38MAPK信号通路有关。