p53基因敲除小鼠的饲养繁殖及鉴定

目的为了繁育和鉴定p53基因敲除小鼠,将引进的杂合子小鼠进行饲养繁殖,杂合子用于继续保种。方法对其幼鼠剪尾提取基因组DNA,采用PCR方法进行基因型鉴定。结果对引进小鼠已成功饲养和繁殖,并得到纯合基因缺失型小鼠。结论正确的饲养、繁殖及基因鉴定方法对于基因敲除小鼠的获得和保种具有重要的意义。

p53^＋/-基因敲除小鼠尿烷致癌性初步验证试验

目的:观察自主建立的p53^(+/-)敲除小鼠(命名为B6-Trp53tm1/NIFDC)模型,在给予尿烷后的体重、脏器重量、血液学及血生化指标变化,为该模型将来用于临床前药物短期致癌性试验的替代试验提供背景数据。方法:共设计3个组:阴性对照组(野生型小鼠,给予生理盐水)、尿烷组1(B6-Trp53tm1/NIFDC小鼠,给予1000 mg·kg^(-1)尿烷)、尿烷组2(野生型小鼠,给予1000 mg·kg^(-1)尿烷),各组动物数量均为20只,雌雄各半。试验期间及试验结束测定各组动物的体重、脏器重量和相对脏器重量、血液学及血生化指标,并进行统计分析。结果与结论:与阴性对照组相比,尿烷给药第2、3、11及21周尿烷组1和尿烷组2动物的体重显著下降;尿烷组1动物肺脏和脾脏绝对重量显著升高;尿烷组1和尿烷组2动物肺脏相对重量显著升高;尿烷组1动物NEU、RDW%、CHDW%以及尿烷组2动物LYM%、BASO%显著升高;尿烷组1及尿烷组2动物的血生化指标无明显改变。

p53+/-基因敲除小鼠的脏器质量及血液学参数测定

目的测定自主建立的p53+/-基因敲除小鼠的脏器及血液生理生化指标,并比较周龄、性别对各项指标的影响。方法选取4周龄和8周龄的p53+/-基因敲除小鼠各20只,雌雄各半,测定其主要脏器质量及血液生理指标。结果不同周龄和性别的p53+/-基因敲除小鼠部分脏器质量和血生理生化有差异性。4周龄和8周龄小鼠在体质量等这21项指标上都有差异显著性(P<0.01),且在左肾上腺等8项指标上差异存在统计学意义(P<0.05)。4周龄的雌、雄小鼠在RDW、总胆固醇(CHO)这2项指标上差异存在显著性(P<0.01),仅肺这1项指标上差异有统计学意义(P<0.05),其余指标之间无明显差异;而8周龄雌雄小鼠在体质量等16项指标上雌雄间都有显著性差异(P<0.01),在HCT等9项指标上存在差异(P<0.05)。结论本文测定并比较了不同周龄及性别的p53+/-基因敲除小鼠的脏器及血液生理生化指标,为该模型的合理利用及商业化供应提供了背景数据。

大蒜素对apoE^-/-小鼠动脉粥样硬化易损斑块细胞凋亡及P53蛋白表达的影响

目的探讨大蒜素对载脂蛋白E基因敲除(apoE^(-/-))小鼠动脉粥样硬化易损斑块的作用及其机制。方法以高脂饲料喂养apoE~(^(-/-))小鼠8周造模,并随机分为模型组、低剂量大蒜素组和高剂量大蒜素组,每组8只。模型组小鼠给予0.50mL生理盐水灌胃,低剂量大蒜素组给予0.25mL生理盐水+0.25mL大蒜素溶液灌胃,高剂量大蒜素组给予0.50mL大蒜素溶液灌胃,每天1次,连续8周。然后取主动脉根部,采用TUNEL染色检测斑块凋亡阳性面积,采用免疫组化方法检测斑块内凋亡巨噬细胞、血管平滑肌细胞含量及凋亡相关蛋白P53的表达。结果大蒜素灌胃处理后斑块凋亡阳性面积均减小,其中低剂量大蒜素组减小具有统计学意义(F=42.32,P<0.05),高剂量大蒜素组减小差异无统计学意义(P>0.05)。低剂量大蒜素组斑块内凋亡巨噬细胞含量较模型组和高剂量大蒜素组降低,差异具有统计学意义(F=28.13,P<0.05);各组斑块内凋亡血管平滑肌细胞含量比较差异无统计学意义(P>0.05)。低剂量大蒜素组和高剂量大蒜素组斑块内P53蛋白表达均显著低于模型组,差异有统计学意义(F=22.11,P<0.05)。结论大蒜素可通过下调P53蛋白的表达、抑制细胞凋亡,发挥稳定晚期不稳定斑块的作用。

p53基因敲除小鼠生长发育和繁殖性能的调查

目的观察p53基因敲除小鼠与BALB/c小鼠在生长发育和繁殖性能方面的差异。方法 p53基因敲除小鼠和BALB/c小鼠各34只,雌雄各半,观察其2周龄至12周龄的体质量和体长,并随机选取30笼一雌一雄所产第2胎仔鼠进行幼仔个数的统计。结果在生长发育方面,3周龄时p53基因敲除小鼠与BALB/c小鼠体质量无明显差异,P=0.846>0.05;6周龄时p53基因敲除小鼠体质量明显低于BALB/c小鼠,P=0.000<0.05;体长在3周龄和6周龄时p53基因敲除小鼠体长明显低于BALB/c小鼠,P=0.000<0.05。在繁殖性能方面,p53基因敲除小鼠同样明显低于BALB/c小鼠,P=0.000<0.05。结论初步研究了p53基因敲除对小鼠的繁殖与发育的影响,与BALB/c小鼠比较均有显著差异。

B6-Trp53^(tm1)/NIFDC小鼠在MNU给药后的体质量、脏器质量、血液学及血生化指标的测定

目的测定自主建立的p53+/-基因敲除小鼠(B6-Trp53^(tm1)/NIFDC)在N-甲基-N-亚硝基脲(N-Methyl-Nnitrosourea,MNU)给药后体质量、脏器质量、血液学及血生化指标,为临床前药物安全评价致癌性实验短期体内替代试验候选遗传修饰动物模型提供背景性数据。方法共设计4个组:阴性对照组(野生型小鼠)给予生理盐水、溶媒对照组(B6-Trp53^(tm1)/NIFDC小鼠)给予枸橼酸缓冲液、MNU组1(B6-Trp53^(tm1)/NIFDC小鼠)给予75 mg/kg MNU、MNU组2(野生型小鼠)给予75 mg/kg MNU,阴性对照组和MNU组2每组野生型小鼠各20只,雌雄各半,溶媒对照组和MNU组1每组B6-Trp53^(tm1)/NIFDC小鼠各20只,雌雄各半,测定其体质量、主要脏器质量、相对脏器质量、血液学及血生化指标,并进行统计分析。结果 MNU组1、MNU组2动物体质量降低与阴性对照组、溶媒对照组相比都存在显著性统计学差异(P<0.05)。MNU组1、MNU组2动物心脏、肝脏、脾脏、肺脏、胸腺和颌下腺的绝对质量与阴性对照组、溶媒对照组相比有显著性统计学差异(P<0.05)。MNU组1和MNU组2动物心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、脑、胸腺和颌下腺的相对质量与阴性对照组、溶媒对照组相比有显著性统计学差异(P<0.05)。MNU组1和MNU组2动物均发现NEU、LYM%、LUC%、RBC、HGB、HCT、MCV、MCHC、RDW、HDW、CHCM、CHDW、PDW、MPV及PLT等15个指标与阴性对照组和溶媒对照组相比有显著性统计学差异(P<0.05)。另外,MNU组1和MNU组2均发现TP、ALB、CREA、UREA、TCHO、TG、CA等7个指标与阴性对照组和溶媒对照组有显著性统计学差异(P<0.05),MNU组2的AST与阴性对照组和溶媒对照组有显著性升高(P<0.05),但MNU组1和MNU组2组间没有显著性统计学差异。结论本文测定并分析了自主建立的p53+/-基因敲除小鼠(B6-Trp53^(tm1)/NIFDC)和野生型小鼠分别给予MNU及枸橼酸缓冲液后的体质量、脏器质量、血液学及血生化指标,该模型有望将来用于临床前药物安全评价致癌性实验短期体内替代试验。

p53凋亡刺激蛋白2基因肝脏条件性敲除小鼠的构建和鉴定

目的采用Cre-LoxP系统构建p53凋亡刺激蛋白2(ASPP2)基因肝脏条件性敲除小鼠。方法利用自行设计的sgRNA序列,在ASPP2基因两端插入LoxP序列,构建ASPP2-flox小鼠。采用PCR法和测序法对F0代和F1代小鼠进行基因型鉴定。将ASPP2-flox F1小鼠与特异性表达Alb-Cre的工具鼠交配,获得肝脏敲除ASPP2基因小鼠。采用PCR法进行基因型鉴定。采用Westernblot和免疫组化法检测ASPP2基因肝脏敲除小鼠肝脏ASPP2蛋白表达。结果对F0代和F1代动物基因行PCR和测序结果表明,构建ASPP2-flox小鼠成功;F1代杂合子的基因型为ASPP2^(fl/-);将F1代杂合子与Alb-Cre小鼠进行杂交后,回交ASPP2^(fl/-)小鼠,其基因型为ASPP2^(fl/fl) Cre^(T),即为ASPP2肝脏条件性敲除小鼠;经Western blot和免疫组化法检测显示ASPP2^(fl/fl) Cre^(T)小鼠肝脏ASPP2蛋白表达显著减少。结论基于Cre-LoxP系统成功构建ASPP2基因肝脏条件性敲除小鼠,为后续实验作了良好的基础。