Cr(Ⅵ)诱导肝细胞凋亡与氧化损伤、p53和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达的关系

目的 探讨6价铬（Cr（Ⅵ））在不同暴露水平诱导细胞凋亡的途径有无差异。方法 L-02肝细胞暴露于不同浓度Cr（Ⅵ）24h。用琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术检测细胞凋亡；化学比色法检测SOD，CAT活性与GSH含量；RT-PCR检测p53，caspase 3 mRNA表达水平；免疫组化检测p53蛋白含量。结果 Cr（Ⅵ）诱导L-02肝细胞凋亡率浓度依赖性增加（r=0．997），6～12μmol·L^-1Cr（Ⅵ）处理组与对照组比差异有显著性（P〈0．05）；琼脂糖凝胶电泳表现DNA特征性梯形条带；SOD与CAT活性和GSH含量均下降，Cr（Ⅵ）处理组GSH含量与CAT活性水平明显低于对照组（P〈0．05）；3～9μmol·L^-1 Cr（Ⅵ）处理组细胞p53 mRNA，caspase 3 mRNA，p53蛋白表达水平明显高于对照组（P〈0．05）。细胞凋亡率与SOD活性、CAT活性呈负相关（r分别为-0．952和-0．885）；p53 mRNA表达与caspase 3 mRNA表达正相关（r=0．890）；p53蛋白表达与GSH含量呈负相关（r=-0．929）。结论 氧化损伤即细胞内抗氧化系统平衡的破坏在Cr（Ⅵ）诱导肝细胞凋亡中具有重要作用；在低浓度水平Cr（Ⅵ）诱导细胞凋亡具有p53和caspase 3依赖性，但在较高Cr（Ⅵ）处理水平，不排除非p53及caspase 3途径的存在。

P38通路对帕金森病小鼠模型黑质环氧合酶-2、半胱氨酸蛋白酶-3表达的影响

目的研究P38MAPK通路在1-甲基-4-苯基-1,2,3,6四氢吡啶(MPTP)所致亚急性帕金森病(PD)小鼠模型中对黑质环氧合酶-2(COX-2)、半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)表达调控作用。方法采用MPTP制备PD小鼠模型,观察行为学、免疫组化和免疫蛋白印记法观察小鼠黑质酪氨酸羟化酶(TH)、COX-2、caspase-3和磷酸化P38MAPK(p-P38MAPK)的变化,及给予P38MAPK抑制剂SB203580后对上述变化的影响。结果模型7d组小鼠出现典型的PD样症状,黑质区TH阳性神经元和蛋白水平分别下降约65%和75%(P<0.01);模型3d组小鼠黑质区COX-2、p-P38MAPK、caspase-3阳性细胞数及蛋白水平显著增加,TH阳性神经元明显丢失;经P38MAPK抑制剂SB203580处理后,上述变化均显著减轻(P<0.01)。结论在MPTP所致亚急性小鼠PD模型中,P38MAPK通路对黑质区炎症与凋亡可能有重要调控作用,SB203580对PD小鼠具有一定神经保护作用。

P14ARF在子宫内膜癌中的表达及其与半胱氨酸蛋白酶3的相关性研究 陈瑞莲 郑秀 李励军

目的 检测P14ARF和半胱氨酸蛋白酶3（caspase-3）蛋白在子宫内膜腺癌（EC）、子宫内膜不典型增生（EIN）、正常子宫内膜中的表达,探讨P14ARF和caspase-3基因在子宫内膜癌发生、发展过程中的可能作用及相关性.方法 采用免疫组化SP法检测60例EC、30例EIN、30例正常子宫内膜组织中P14ARF、caspase-3蛋白的表达,结合临床病理特征进行分析,并探讨P14ARF与caspase-3的关联性.结果 P14ARF在EC、EIN和正常子宫内膜的阳性表达率分别为56.7％、73.3％、90.0％,caspase-3在EC、EIN和正常子宫内膜中的阳性表达率分别为51.7％、70.0％、86.7％,子宫内膜腺癌P14ARF、caspase-3的阳性表达率显著低于正常子宫内膜组织,差异有统计学意义（P＜0.01）.P14ARRF与caspase-3的阳性表达仅与EC的组织分级相关（P＜0.01）.P14ARF与caspase-3蛋白之间的阳性表达在EC中存在明显正相关性（r=0.433,P＜0.01）.结论 P14ARF、caspase-3蛋白在EC、EIN和正常子宫内膜中的表达逐渐升高.在EC中,随着细胞分化程度由高到低,二者的表达逐渐减少,2个指标之间有明显的正相关性.2个指标的联合检测,对子宫内膜腺癌的早期诊断和判断细胞分化程度具有一定参考价值.

高同型半胱氨酸血症对ApoE^(―/―)鼠心肌酶谱的影响及与P53基因的相关性分析

目的探讨高同型半胱氨酸血症(HHcy)对载脂蛋白E基因敲除鼠(ApoE―/―鼠)心肌酶谱变化的影响及其与P53基因的相关性分析。方法分组:正常对照组(n=12)选择健康5周龄雄性C57BL/6J小鼠(SPF级),饲以正常饮食;另选用SPF级近交系C57BL/6J背景5周龄雄性ApoE―/―小鼠36只,随机分为3组,每组12只:ApoE―/―鼠对照组、高蛋氨酸组、干预组,分别给予正常饮食、正常饮食加1.7%蛋氨酸、正常饮食加1.7%蛋氨酸加0.006%叶酸及0.000 4%维生素B12。喂养14周后,分离血清,用全自动生化分析仪检测血清中同型半胱氨酸和心肌酶谱含量,酶联免疫吸附法检测血清中氧化型低密度脂蛋白含量,实时定量PCR和免疫组织化学法检测心脏P53 mRNA和蛋白表达。结果 ApoE―/―对照组、高蛋氨酸组及干预组中血清同型半胱氨酸均升高,其中以高蛋氨酸组升高最显著(P<0.01);氧化型低密度脂蛋白含量亦平行升高,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。高蛋氨酸组血清乳酸脱氢酶、羟丁酸脱氢酶和肌酸激酶及肌酸激酶同工酶含量较正常对照组明显增高,在添加叶酸及维生素B12的干预组中血清肌酸激酶、肌酸激酶同工酶和羟丁酸脱氢酶含量较高蛋氨酸组降低。实时定量PCR结果显示高蛋氨酸组P53 mRNA表达上调,免疫组织化学法检测P53蛋白的表达与其mRNA表达变化一致。P53表达与血清肌酸激酶含量呈正相关(r=0.7061,P<0.01)。结论 HHcy可引起ApoE―/―鼠心肌酶谱发生改变,其机制可能与同型半胱氨酸导致的氧化应激有关。这种改变与P53的表达呈正相关,P53亦可能参与其病理过程。补充叶酸及维生素B12对于食饵性HHcy具有良好的治疗效用。

同型半胱氨酸诱导血管内皮细胞凋亡及对 p53、 Fas 表达的影响

目的：通过血管内皮细胞的培养，了解同型半胱氨酸(Hcy)对内皮细胞的损伤程度，初步探 讨诱导血管内皮细胞凋亡的可能途径。方法：用不同浓度的 Hcy 处理内皮细胞后，应用透射电子显微镜 技术以及 Annexin V/PI 染色加流式细胞术了解细胞凋亡状态，同时采用流式细胞仪检测细胞 Fas 以及 p53 的表达情况。结果：0． 5 mmol/L 和5 mmol/L 的 Hcy 均能促进细胞凋亡，Hcy 能促进细胞 p53的表达，而 且随着 Hcy 浓度的升高，其表达也逐步增强，不同浓度 Hcy 处理后各组细胞 Fas 蛋白的表达差异无显著 性。结论：Hcy 能诱导血管内皮细胞凋亡，这种作用可能与其促进 p53表达有关。

抑制沉默信息调节因子1/p53通路对同型半胱氨酸诱导的心肌纤维化的影响

目的探讨抑制沉默信息调节因子1(SIRT1)/p53通路对同型半胱氨酸(Hcy)诱导的心肌纤维化的影响。方法体外培养心肌成纤维细胞(CF),分为NC组、Hcy组、EX527+Hcy组进行实验。NC组为正常培养的CF;Hcy组的CF给予0.5 mmol/L的Hcy刺激;EX527+Hcy组的CF在给予0.5 mmol/L的Hcy刺激后加入SIRT1/p53通路抑制剂EX527进行干预。干预结束后,检测各组细胞的增殖率、凋亡率,细胞中纤维化相关因子Ⅰ型胶原α1链(COL1A1)、Ⅲ型胶原α1链(COL3A1)和肌动蛋白α2(Acta2)的mRNA和蛋白表达水平,以及细胞中SIRT1/p53通路相关蛋白SIRT1、乙酰化p53(Ac-p53)的表达水平。结果(1)与NC组比较,Hcy组CF增殖率升高,凋亡率降低(均P<0.05);与Hcy组比较,EX527+Hcy组细胞增殖率降低,而凋亡率升高(均P<0.05)。(2)与NC组比较,Hcy组CF中COL1A1、COL3A1和Acta2的mRNA和蛋白相对表达水平均升高(均P<0.05);与Hcy组比较,EX527+Hcy组CF中COL1A1、COL3A1和Acta2的mRNA和蛋白相对表达水平均降低(均P<0.05)。(3)与NC组比较,Hcy组CF细胞中SIRT1蛋白相对表达水平升高,Ac-p53蛋白相对表达水平降低(均P<0.05);与Hcy组比较,EX527+Hcy组细胞中SIRT1蛋白相对表达水平降低,Ac-p53蛋白相对表达水平升高(均P<0.05)。结论抑制SIRT1/p53信号通路可促进Hcy诱导的CF凋亡,并抑制CF增殖,从而缓解Hcy诱导的心肌纤维化。

血浆叶酸和同型半胱氨酸水平与结直肠癌的关系

目的:研究结直肠癌患者血浆叶酸、同型半胱氨酸和维生素B12水平的变化,及其与肿瘤分期和p53基因表达的关系。方法:比较49例结直肠癌患者和51例非肿瘤患者血浆叶酸、同型半胱氨酸和维生素B12水平,并分析与肿瘤分期和癌组织p53基因表达的关系。结果:结直肠癌患者血浆叶酸和维生素B12水平显著低于非肿瘤对照者,分别为7.08±3.97ng·ml-1对11.07±5.60ng·ml-1和337.92±177.72pg·ml-1对479.67±219.43pg·ml-1(P均<0.001),血浆同型半胱氨酸水平则显著高于非肿瘤对照19.69±10.61μM对14.01±4.17μM(P=0.002),血浆叶酸、同型半胱氨酸和维生素B12水平与肿瘤分期和肿瘤组织p53蛋白表达无显著相关性。结论:叶酸缺乏是结直肠癌发病的危险因子。

5-氨基乙酰丙酸光动力疗法调控P53/Caspase9通路抑制乳腺癌荷瘤裸鼠肿瘤生长的作用观察

目的观察5-氨基乙酰丙酸(5-ALA)光动力疗法调控肿瘤抑制因子(P53)/半胱氨酸蛋白酶9(Caspase9)通路抑制乳腺癌荷瘤裸鼠肿瘤生长的作用。方法取40只裸小鼠,背部接种乳腺癌细胞株MCF-7制作荷瘤鼠模型,建模成功后随机分为5组,模型组(A组)、单纯激光照射组(B组)、低剂量5-ALA+激光照射组(C组)、中剂量5-ALA+激光照射组(D组)、高剂量5-ALA+激光照射组(E组)。C组、D组、E组分别给予瘤内注射10 mg/kg、20 mg/kg、40 mg/kg的5-ALA生理盐水溶液,A组、B组给予瘤内注射无菌生理盐水溶液,2 h后,B组、C组、D组、E组应用半导体激光治疗仪局部照射瘤体治疗。对比各组干预前、干预14 d时肿瘤体积,并比较B组、C组、D组、E组抑瘤率;苏木精-伊红染色法(HE)观察各组肿瘤组织病理学变化;采用原位末端脱氧核苷酸转移酶介导的d UTP缺口末端标记(TUNEL)检测并对比各组肿瘤细胞凋亡率,分别采用实时荧光定量-聚合酶链反应法和蛋白免疫印迹法检测并对比肿瘤组织中P53、Caspase9 mRNA和蛋白表达情况。结果干预前各组肿瘤体积比较,差异均无统计学意义(P>0. 05),干预14 d各组肿瘤体积与干预前比较均显著较高(P <0. 05),干预14 d后肿瘤体积从小至大依次如下,E组、D组、C组、B组、A组,每两组间比较差异均有统计学意义(P <0. 05);抑瘤率从高至低依次如下,E组、D组、C组、B组,每两组间比较差异均有统计学意义(P <0. 05);组织病理学观察发现,A组瘤细胞丰富、排列拥挤呈条索状、血供丰富,细胞大小不一、核大而深染伴有核分裂相,C～E组肿瘤细胞数量较A组明显减少,细胞排列紊乱,且细胞核固缩、染色质淡染,其中E组变化最为明显,B组变化不明显;肿瘤细胞凋亡率、P53、Caspase9 mRNA和蛋白相对表达量从高至低依次如下,E组、D组、C组、B组、A组,每两组间比较差异均有统计学意义(P <0. 05)。结论 5-ALA光动力疗法可显著抑制乳腺癌荷瘤裸鼠肿瘤生长、促进肿瘤细胞凋亡,其中20 mg/kg效果最佳,可能与上调P53、Caspase9 mRNA和蛋白表达、激活P53/Caspase9信号通路有关。

阿魏酸钠对淀粉样β蛋白片段1～40引起的大鼠海马MAP激酶信号传导通路及凋亡蛋白表达的影响

目的观察阿魏酸钠(SF)是否对淀粉样β蛋白(Aβ)所致的海马损伤具有保护作用及其信号转导机制。方法大鼠灌胃给予SF(50,100和250mg.?-1),连续应用3周,左侧脑室内单次注射Aβ1-40(10μL,1.0mmol.L-1)制备大鼠痴呆动物模型,注射后6h,取海马CA1区。Western印迹观察有丝分裂原活化蛋白p38(p38MAP)激酶、丝裂原激活的蛋白激酶的激酶4(MKK4)、c-Jun氨基末端激酶(JNK1/2)、P53蛋白、FasL和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase3)蛋白表达。应用caspase3活性测定试剂盒分析caspase3活性变化。结果脑室内注射Aβ1-40可引起大鼠海马CA1区磷酸化p38MAP激酶表达明显增加,从正常0.127±0.018增加到0.95±0.12(n=4,P<0.01)。也可使磷酸化MKK4和JNK1/2表达明显增加。这些MAPK信号传导通路改变伴随有促凋亡蛋白P53和FasL表达明显增加,caspase3蛋白表达和活性均明显增加,P53从正常0.053±0.012增加到0.30±0.07(n=4,P<0.01),FasL从正常0.25±0.04增加到0.51±0.05(n=4,P<0.01),caspase3从正常0.036±0.007增加到0.63±0.041(n=4,P<0.01),caspase3活性从正常0.38±0.04增加到0.86±0.09(n=4,P<0.01)。SF(50、100和250mg.kg-1)连续应用3周,能明显抑制Aβ1-40引起的p38MAP激酶、磷酸化MKK4和JNK1/2表达明显增加,同时促凋亡蛋白p53和FasL表达明显增加,降低caspase3的活性。结论SF通过抑制Aβ1-40引起的p38MAP激酶和JNK1/2信号传导通路,产生抗凋亡作用,保护海马免除Aβ1-40引起的神经毒性。

人参皂苷Re对APP/PS转基因痴呆小鼠学习记忆力及海马Caspase-3、P53蛋白的影响

目的探讨人参皂苷Re对阿尔茨海默病(AD)模型小鼠学习记忆影响及其对海马神经元保护作用机制。方法将淀粉样前体蛋白/早老素(APP/PS)转基因小鼠分为五组,分别为对照组、AD组、低-Re组、中-Re组、高-Re组,选择人参皂苷Re中药为干扰药物,选择Morris水迷宫实验观察各种小鼠学习记忆能力,选择甲苯胺蓝染色实验观察各组小鼠海马区神经元形态,选择免疫组织化学技术观察各种小鼠半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3、P53蛋白变化情况。结果与AD组比较,中低-Re组、中-Re组、高-Re组小鼠认知功能得到改善、海马区受损神经元得到修复、海马区神经元Caspase-3、P53蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论人参皂苷Re对AD的影响机制与降低其受损海马神经元凋亡有关。

大鼠外伤性视神经损伤后P53、Bax和Caspase3蛋白的表达

目的:探讨大鼠外伤性视神经损伤后不同时间点的视网膜神经节细胞(RGCs)病理形态学改变,P53、Bax和Caspase3蛋白表达变化及其与视神经损伤发生机制的关系。方法:成年雌性Wistar大鼠72只,随机分9组,每组8只,其中2组分别为正常组和假伤组,其余为实验组。实验组应用液压颅脑损伤仪建立大鼠视神经损伤动物模型,分别于伤后1、3、5、7、9、14、28d各处死8只,病理学观察RGCs的改变,免疫组化方法分析P53、Bax和Caspase3在视网膜中的表达变化。结果:视神经损伤后ldRGCs开始减少,14d内呈快速减少,14d后减少速度减慢,28d后趋于稳定;P53、Bax、Caspase3伤后表达较正常组和假伤组明显增加。结论:视神经损伤后RGCs数目减少是其视功能下降的重要病理基础,凋亡是RGCs的死亡机制之一,P53、Bax和Caspase3在RGCs凋亡发生中起重要作用。

蛋白酶体抑制剂MG132诱导caspase-8依赖的骨肉瘤细胞凋亡机制研究

目的:探讨蛋白酶体抑制剂Z-LLL-CHO(MG132)对人骨肉瘤细胞MG-63的作用以及可能作用机制。方法:将不同浓度的MG132作用于骨肉瘤细胞MG-63,采用显微镜观察形态改变、电镜观察细胞超微结构、MTT检测细胞增殖活力、琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡、流式细胞仪分析细胞凋亡率以及细胞周期改变、RT-PCR检测基因转录、Western blotting检测蛋白表达水平。结果:MG132能有效诱导人骨肉瘤细胞系MG-63细胞周期在G2-M期的停滞,并引起MG-63的凋亡,出现凋亡的典型形态学改变,同时出现p27kip1蛋白的积累,caspase-8活化蛋白表达增加,Bax∶Bcl-2蛋白含量比例的增高,而对正常的人二倍体成纤维细胞,MG132并未表现诱导其凋亡的活性。结论:MG132引起的人骨肉瘤细胞MG-63的凋亡也许是与caspase-8、p27kip1和Bcl-2蛋白相关的。

离子辐射通过caspase途径而非p53途径诱导Jurkat细胞凋亡(英文)

目的:研究离子辐射诱导Jurkat细胞凋亡的动态趋势及其机制。方法:分别以5、10、20Gy的辐射量照射Jurkat细胞,其中一份样本在照射前加入zVAD.fmk,在照射后培养6、12、24、36和48h收获细胞,应用AnVPI双染和呈现subG1峰技术,在流式细胞仪上定量测定凋亡细胞。采用WesternBlot技术检测p53蛋白的表达。结果:细胞受照射后,凋亡细胞数随培养时间的延长和辐射量的加大而增加。在6h,只有20Gy才诱导细胞显著凋亡(P<0.005),5Gy的照射要到24h才出现明显的凋亡(P<0.05)。在48h,20Gy照射诱导的凋亡细胞数是所有时间点和剂量强度中最高的(P<0.001)。加有zVAD.fmk的细胞,尽管都是10Gy照射,比未加zVAD.fmk的细胞表现出凋亡细胞明显减少(P<0.005),但与未加zVAD.fmk、照射量是5Gy的细胞相比,凋亡细胞数仍显著增加(P<0.005)。Jurkat细胞在照射前后都没有p53表达。结论:离子辐射诱导细胞凋亡呈现出时间和剂量效应关系;capase抑制剂zVAD.fmk部分抑制离子辐射诱导细胞凋亡;离子辐射诱导细胞凋亡的机制独立于肿瘤抑制基因p53,caspase可能在其中起重要作用。

Survivin和p53蛋白在上皮性卵巢癌中的表达及临床意义

【目的】探讨Survivin、p53蛋白在上皮性卵巢癌中的表达及与临床分期、病理类型、组织学类型的关系。【方法】应用免疫组织化学染色SABC法及半定量分析的方法,检测30例正常卵巢组织标本和62例恶性卵巢肿瘤中Survivin和p53蛋白的表达,分析与卵巢癌组织学分类、临床分期、病理类型的关系。【结果】在卵巢癌组织中p53蛋白阳性表达率为54.84%(34/62),与正常对照组比较有显著差异(P<0.01);在卵巢癌组织Survivin蛋白阳性表达率为43.55%(27/62),与正常对照组比较有显著差异(P<0.05);p53和Sur-vivin蛋白的表达与上皮性卵巢癌组织学分型无关(P>0.05),与分化程度、临床分期有关(P<0.05);上皮性卵巢癌组织中Survivin蛋白的表达与p53蛋白表达呈正相关(P<0.05)。【结论】①卵巢癌Survivin和p53蛋白表达与卵巢癌临床分期、病理分级存在一定内在联系;②Survivin和p53蛋白是卵巢癌临床重要生物学指标,参与卵巢癌的发生和发展,检测p53和Survivin蛋白表达对判断卵巢癌的恶性程度及预测预后有重要参考价值。

红花黄色素B对肝癌细胞中miR-34a和p53/Caspase凋亡途径的影响

目的:研究就红花黄色素B(Safflower Yellow B,SYB)对肝癌细胞HepG2中miR-34a的表达及p53/半胱氨酸蛋白酶(Caspase,CASP)凋亡途径的影响进行了探讨。方法:通过细胞计数试剂(Cell Counting Kit-8,CCK-8)法检测细胞的存活情况,通过Annexin V检测细胞凋亡情况,通过聚合酶链式反应检测miR-34a表达,通过蛋白质免疫印迹法检测B细胞淋巴瘤2(BCL2 Apoptosis Regulator,BCL2)、CASP3(剪切后)、CASP8、CASP9、p53的表达情况。结果:在本研究发现SYB可以抑制HepG2细胞生长、增殖活性,诱导肿瘤细胞凋亡,同时促进miR-34a、CASP3(剪切后)、CASP8、CASP9和p53的表达,而对Bcl-2的表达产生抑制作用。结论:miR-34a在对SYB抗HepG2细胞的作用机制中起着很重要的作用。

半胱氨酸蛋白酶-8和P53在慢性砷中毒大鼠肾近端小管表达的研究

目的探讨慢性砷中毒大鼠肾近端小管细胞半胱氨酸蛋白酶-8（caspase-8）和P53表达致肾脏损伤的分子机制。方法60只SD大鼠分为对照组，低、高剂量组，每组20只，高、低剂量组分别给予三氧化二砷（As2O3）10．0、0．4mg／kg水溶液自由饮用，对照组自由饮用蒸馏水。分笼4个月，测定血砷、尿砷，取肾脏标本，组织学技术HE染色，免疫组织化学（SABC）法检测大鼠肾小管上皮细胞caspase-8、P53免疫阳性细胞，并进行计数和图像分析研究。结果对照组，低、高剂量组肾近端小管上皮caspase-8阳性细胞计数[（3．33±1．32）、（31．14±8．02）、（46．50±7．20）个／视野]依次增加（P均〈0．05），平均灰度值（151．34±6．40、133．58±4．63、128．34±16．28）依次降低（P均〈0．05），P53阳性细胞计数[（3．17±1．59）、（26．29±4．23）、（47．00±6．22）个／视野]依次增加（P均〈0．05），平均灰度值（142．54±8．06、121．48±5．68、101．89±6．35）依次降低（P均〈0．05）。结论caspase-8、P53阳性细胞增多是砷中毒致肾脏损伤的分子机制之一。

Shc相关磷酸化酪氨酸适配蛋白在大鼠血管衰老中的调控作用

目的探讨Shc相关磷酸化酪氨酸适配蛋白p66^shc 在血管衰老表达的变化，对阐明血管衰老对动脉粥样硬化的诊治具有重要意义。方法将Wistar大鼠分为4、10、16、24月龄组，测定各组血浆丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）水平，同时采用恒速注入流体方法测定大鼠颈动脉血管的顺应性，并利用蛋白免疫印迹法分析各组p66^shc、半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶-3水平。结果随增龄，大鼠主动脉管壁增厚，纤维化程度增高，MDA浓度明显升高（与4月龄和10月龄相比，均P〈0．01），SOD浓度明显降低（与4月龄相比，均P〈0．01；与10月龄相比，均P〈0．05），颈动脉血管的顺应性增高、弹性速率和弹性面积的差异有统计学意义（与4月龄相比，均P〈0．01；与10月龄相比，均P〈0．05），p66^shc、Caspase．3蛋白表达呈时间依赖性上调。结论血管衰老性重塑的分子机制之一可能与上调p66^shc、Caspase-3蛋白的表达有关，进一步阐明其调控机制可为延缓血管衰老、防治动脉硬化提供理论依据。

骨桥蛋白、caspase-3及突变型P53在胶质瘤中的表达研究

目的研究胶质瘤中骨桥蛋白(OPN)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)和突变型P53(mt-P53)蛋白的表达意义和相关性。方法选取脑胶质瘤(胶质瘤组)患者的标本70例,非脑胶质瘤脑组织10例作为对照组。应用免疫组织化学SP法检测2组OPN、caspase-3及mt-P53蛋白的阳性表达率。蛋白免疫印迹法检测脑胶质瘤中OPN、caspase-3和mt-P53蛋白表达与脑胶质瘤级别的关系。Spearman等级相关分析OPN、caspase-3和mt-P53表达阳性的关系。结果脑胶质瘤组OPN、mt-P53阳性表达率(64.29%和60%)均高于对照组(无阳性表达),caspase-3阳性率低于对照组(47.14%vs.90%),差异有统计学意义(均P<0.05)。OPN、caspase-3和mt-P53在脑胶质瘤不同性别、年龄、肿瘤大小及肿瘤部位组间的阳性表达率差异无统计学意义(P>0.05)。胶质瘤分级越高,OPN和mt-P53的阳性表达率越高,而caspase-3的阳性表达率越低(均P<0.001)。随着脑胶质瘤级别的增加,OPN和mt-P53蛋白表达水平上调,而caspase-3的蛋白表达水平下降。OPN与caspase-3阳性表达呈负相关,与mt-P53表达呈正相关(rs分别为-0.720和0.722,P<0.05),caspase-3和mt-P53表达呈负相关(rs=-0.556,P<0.05)。结论胶质瘤分级越高,OPN和mt-P53的阳性表达率越高,而caspase-3的阳性表达率越低;三者与胶质瘤发生、发展均密切相关,联合检测有助于对胶质瘤生物学行为的判断。

基于P53、Bax、Caspase-3基因表达探讨竹节参水提取物对宫颈癌细胞增殖、凋亡的影响

目的基于P53、B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3基因表达探讨竹节参水提取物对宫颈癌细胞增殖、凋亡的影响。方法以宫颈癌HeLa细胞为研究对象,给予不同浓度竹节参水提取物(0、50、100、150μg/ml)进行培养(分别为A、B、C、D组),MTT法检测HeLa细胞增殖抑制情况;TUNEL法对比HeLa细胞凋亡率;流式术观察HeLa细胞周期;苏木素-伊红(HE)染色观察细胞形态;RT-PCR法测定P53、Bax、Caspase-3 mRNA表达水平。结果与A组相比,B组宫颈癌细胞增殖活力明显减弱(P<0.05);与B组相比,C组宫颈癌细胞增殖活力明显减弱(P<0.05);与C组相比,D组宫颈癌细胞增殖活力减弱。与A组相比,B组宫颈癌细胞凋亡率明显增加(P<0.05);与B组相比,C组宫颈癌细胞凋亡率明显增加(P<0.05);与C组相比,D组宫颈癌细胞凋亡率明显增加(P<0.05)。HeLa细胞周期在竹节参水提取物的作用下G0/G1期上升,S期下降。A组未添加竹节参水提取物,HeLa细胞细胞核形态为卵圆状,染色也较为均匀;B组添加竹节参水提取物后,部分HeLa细胞细胞核形态改变,出现缩小和浓缩现象,荧光现象也增强;C、D组细胞因提取物浓度增加,细胞核形态改变加剧,荧光亮度攀升,细胞核边缘破碎。宫颈癌Hela细胞中P53、Bax、Caspase-3 mRNA表达随竹节参水提取物浓度的增加而增加。结论竹节参水提取物可以降低体外宫颈癌细胞的增殖活力,并诱导其自噬和凋亡,这可能是通过竹节参水提取物调控P53、Bax、Caspase-3基因表达来实现的。

Survivin、p53蛋白在上皮性卵巢癌组织中的表达及意义

[目的]探讨Survivin和p53蛋白在上皮性卵巢癌中的表达及意义.[方法]应用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结（S-P）法,检测68例上皮性卵巢癌及正常组织中Survivin和p53蛋白的表达,比较Survivin和p53阳性与组织学分型、分化程度、临床分期和淋巴结转移的相关性及化疗效果.[结果]上皮性卵巢癌组织中Survivin阳性表达45例（66.18% ,45/68）, p53蛋白阳性表达47例（69.12% ,47/68）;Survivin和p53蛋白表达与上皮性卵巢癌组织学分型无关（ P 〉0.05） ,与分化程度、临床分期和淋巴结转移有关（ P 〈0.05）;Survivin和p53表达阳性患者化疗效果低于阴性患者（ P 〈0.05）;Survivin和p53在上皮性卵巢癌中表达呈显著正相关,相关系数r=0.737（ P 〈0.01）.[结论]Survivin、p53蛋白在卵巢癌的发生、发展中起着重要的作用,是临床判断卵巢癌病变程度及预测预后的重要参考指标.